三氧化二砷对人恶性黑素瘤A375细胞抑制机制的探讨

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑素瘤A375细胞的生长抑制作用,以及对Caspase-3活性表达以及肿瘤细胞凋亡的影响,为临床治疗恶性黑素瘤提供理论和实验依据。方法:将不同浓度的As2O3作用于人恶性黑素瘤A375细胞,荧光染色观察A375细胞的凋亡变化,流式细胞术检测A375细胞的凋亡率;用免疫组织化学染色法检测不同浓度As2O3作用于A375细胞后Caspase-3蛋白的表达;半定量RT-PCR法检测Survivin蛋白的表达。结果:荧光染色后镜下可见As2O3可致A375细胞的细胞核呈致密浓染的不规则黄绿色颗粒状或块状荧光的凋亡现象;As2O3能诱导A375细胞的凋亡,用5、10、20μmol/L的As2O3诱导A375细胞24 h:检测其细胞的凋亡率依次为7.07%、38.66%和4.34%,可诱导Caspase-3蛋白的表达,抑制Survivin蛋白的表达。结论:As2O3能致A375细胞形态改变,诱导细胞凋亡;As2O3可诱导A375细胞表达Caspase-3蛋白,抑制Survivin蛋白的表达。     

NF-κB抑制剂PDTC对人黑素瘤A375细胞增殖的影响

目的研究核转录因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲盐酸(PDTC)对人黑素瘤A375细胞的生长抑制作用。方法不同浓度的PDTC作用于A375细胞不同时间后,MTT法测定其对A375细胞增殖的抑制率,免疫细胞化学方法检测PDTC作用下A375细胞增生细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.05,P<0.01),呈时间和剂量依赖性;与对照组相比,PDTC作用后A375细胞PCNA表达降低(P<0.01),且呈明显的剂量依赖关系。结论 PDTC具有显著抑制人黑素瘤A375细胞生长及PCNA表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

孕酮通过NF-κB调控脑损伤后大鼠海马神经元COX-2和Caspase-3的表达

目的研究NF-κB对脑损伤大鼠海马神经元环氧合酶-2(COX-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达调控作用,探讨孕酮(progesterone,PROG)对脑损伤(TBI)后大鼠海马神经元保护作用及其可能机制。方法雄性SD大鼠45只按抛硬币法分为假手术组、损伤组和PROG组,按照改良的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠脑损伤模型,用Nissl染色法、免疫组织化学法及免疫蛋白印记法,观察大鼠伤侧海马CA1区NF-κB、COX-2以及Caspase-3的表达变化和孕酮对上述指标变化的影响。结果损伤组大鼠海马CA1区NF-κB(24.0±2.5)、COX-2(35.9±2.7)、Caspase-3(25.1±2.7)阳性神经元的数量较假手术组NF-κB(1.9±0.9)、COX-2(1.5±0.7)、Caspase-3(1.8±0.8)显著增加(P<0.05);PROG组与损伤组比较,海马CA1区NF-κB(14.2±1.8)、COX-2(16.6±2.7)、Caspase-3(11.2±2.4)阳性神经元的数量明显减少(P<0.05)。结论NF-κB对脑损伤后大鼠海马神经元COX-2和C...     

NF-κB信号转导通路与胰岛素抵抗

核因子-κB(NF-κB)信号转导通路包括NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκB)和IκB激酶(IKK).其中,NF-κB是一种重要的核转录因子,参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡及物质代谢等多种生物进程.IKK具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性,能使多种蛋白的丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化.NF-κB信号转导通路的活化与胰岛素抵抗的发生密切相关.文章就NF-κB在胰岛素抵抗发生中作用作一综述.     

NF-κB信号转导通路与胰岛素抵抗

核因子-κB（NF—κB）信号转导通路包括NF—κB、NF—κB抑制蛋白（IκB）和IκB激酶（IKK）。其中,NF—κB是一种重要的核转录因子,参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡及物质代谢等多种生物进程。IKK具有丝氨酸／苏氨酸激酶活性,能使多种蛋白的丝氨酸／苏氨酸残基磷酸化。NF—κB信号转导通路的活化与胰岛素抵抗的发生密切相关。文章就NF—κB在胰岛素抵抗发生中作用作一综述。     

大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及caspase-3、AIF的表达

目的 研究大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及caspase-3、凋亡诱导因子(AIF)的表达.方法 将78只成年健康Sprague-Dawley(SD)鼠按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8、T9)急性压迫损伤模型,HE染色观察脊髓组织病理学变化,免疫组化测定各时间点AIF和caapase-3的表达变化,原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平.结果 免疫组化结果显示正常及假手术组大鼠脊髓神经细胞caspase-3,AIF,TUNEL阳性细胞较少,脊髓损伤后1 d,AIF阳性细胞数明显增多(P<0.05),5 d表达减弱.caspase-3阳性细胞数在脊髓损伤后8 h明显增多,3 d迭高峰(P<0.01),7 d表达减弱.TUNEL阳性细胞数也在8 h明显增多,3 d达高峰(P<0.01),7 d表达减弱.结论 脊髓损伤后存在广泛的细胞凋亡现象,caspase-3、AIF均参与了细胞凋亡的调节.     

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用.方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的三氧化二砷诱导A375细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率.结果:As2O3浓度分别为5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L时,A375细胞的早期凋亡率分别为9.75%、50.9%和43.7%,晚期凋亡率分别为2.10%、4.61%和11.2%,总凋亡率分别为11.85%、55.51%和54.9%.结论:As2O3可诱导A375细胞早期凋亡和晚期凋亡,10 μmol/L和20μmol/L的As2O3可明显增加A375细胞总凋亡率.     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞NF-κB的激活及其机制的探讨

目的探讨同型半胱氨酸（HCY）对血管内皮细胞核因子-κB（NF-κB）的激活及其机制，以明确HCY在动脉粥样硬化发病过程中的作用。方法从人脐静脉分离血管内皮细胞；用电泳迁移率和免疫荧光方法检测NF-κB的活性；用免疫印迹实验检测κB抑制蛋白（IκB-α）的磷酸化。结果电泳迁移率变动实验（EMSA）证明HCY可以时间依赖性和浓度依赖性地激活血管内皮细胞NF-κB；免疫荧光共聚焦显微镜可见在HCY刺激后的血管内皮细胞，大量的NF-κB-P65蛋白从细胞质转移入细胞核内，故NF-κB-P65蛋白染色在细胞核内呈强阳性，而细胞质内染色较弱；Western blot证明HCY能明显地诱导血管内皮细胞IκB-α的磷酸化。结论HCY可能通过增强IκB-α的磷酸化，抑制血管内皮细胞IκB-α的活性，从而激活NF-κB，在转录水平对下游的趋化因子和黏附因子产生调节作用，促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

与A20结合的核因子-κB抑制蛋白1的研究进展

与A20结合的核因子κB抑制蛋白1（A20 binding inhibitor of NF-κB activation ,ABIN1）是近年来研究发现的一个新泛素结合蛋白。最初的研究表明,ABIN1通过结合锌指结构蛋白A20在NF-κB信号通路中发挥重要的调节作用。目前发现,ABIN1在过表达的条件下能抑制肿瘤坏死因子、白细胞介素1、脂多糖、表皮生长因子等诱导的NF-κB的活性,从而发挥抗炎和免疫调节作用。因此,以ABIN1为新靶点调节NF-κB活性的研究日益受到关注。本文就ABIN1蛋白结构、功能及其研究进展做一综述。     

塞来希布抑制人肝癌HepG2细胞生长及COX-2、NF-κB表达

目的:观察塞来希布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞生长及COX-2和NF-κB表达的影响,探讨celecoxib抗肿瘤作用的机制。方法:用不同浓度的celecoxib作用于HepG2细胞,检测其对HepG2细胞增殖和凋亡以及COX-2、NF-κB表达的影响。结果:celecoxib呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡;celecoxib处理组HepG2细胞COX-2和NF-κB蛋白表达明显减弱(P<0.05),COX-2蛋白表达和NF-κB蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论:celecoxib明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制COX-2和NF-κB的蛋白表达有关。     

益肾活血胶囊对同型半胱氨酸致兔动脉粥样硬化MCP-1mRNA表达及NF-κB活化的影响

目的探讨益肾活血胶囊对同型半胱氨酸（Hcy）致兔动脉粥样硬化（AS）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）基因表达及核因子-κB（NF-κB）活化的影响。方法将40只新西兰兔随机分为正常组、模型组、益肾活血胶囊小剂量组、益肾活血胶囊大剂量组及西药（叶酸、维生素B₆、维生素B₁₂）组，除正常组外，其他组建立高Hcy血症及AS动物模型，然后分别给予相应的药物治疗。采用高效液相色谱技术检测血浆Hcy浓度、HE染色观察血管形态学变化、实时定量PCR检测动脉壁MCP-1基因表达、Western blot分析核因子-κB抑制因子α（IκBα）蛋白含量。结果益肾活血胶囊和叶酸等维生素均可明显降低血浆Hcy水平（P＜0.01），抑制血管内膜增厚，下调腹主动脉MCP-1基因表达（P＜0.01），增加IκBα蛋白含量（P＜0.01）。益肾活血胶囊大剂量组疗效明显优于小剂量组和西药组（P＜0.05）。结论益肾活血胶囊可明显降低血浆Hcy水平，抑制Hcy诱导的动脉粥样硬化的形成，其机制可能与下调MCP-1基因表达，抑制NF-κB活化有关。     

三氧化二砷对哮喘豚鼠肺内核因子-κB表达的影响

目的：研究Ａｓ２Ｏ３对哮喘豚鼠肺内核因子－κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ－ｋａｐｐａＢ，ＮＦ－κＢ）表达的影响及其作用机制。方法：豚鼠３０只随机分为３组，即对照组、哮喘组和Ａｓ２Ｏ３（２ｍｇ／ｋｇ）治疗组。采用免疫组织化学染色技术，即小鼠抗大鼠ｐ６５单克隆抗体（Ｆ－６）、生物素化马抗小鼠ＩｇＧ、二氨基联苯胺（ＤＡＢ）显色检测豚鼠气道壁ＮＦ－κＢ；计算机图像分析技术对气道壁ＮＦ－κＢ表达进行定量检测。结果：对照组豚鼠整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个ＮＦ－κＢ阳性（ＮＦ－κＢ＋）细胞网络，其中支气管壁胞核ＮＦ－κＢ＋细胞密度为（２２０±７２）／ｍｍ２上皮面积；与对照组相比，哮喘组豚鼠气道壁胞核ＮＦ－κＢ＋细胞密度显著增加（Ｐ＜０．０１）；哮喘豚鼠经Ａｓ２Ｏ３处理后，气道壁胞核ＮＦ－κＢ＋细胞密度显著下降（Ｐ＜０．０１），但与对照组相比仍较高（Ｐ０．０１８）。结论：ＮＦ－κＢ激活增加是支气管哮喘重要的发病机制之一；下调肺内ＮＦ－κＢ激活细胞数量可能是Ａｓ２Ｏ３治疗哮喘的一个重要机制。     

转录因子NF-κB生物特性及应用前景

核因子κB(NF-κB)是能调节多种炎症和免疫基因表达的一种重要的转录调节因子,能与多种细胞基因启动子或增强子序列特定位点发生特异性结合而促进转录和表达,与免疫应答以及细胞的增生、转化和凋亡等重要的病理生理过程密切相关。它与抑制性蛋白IκB结合而为非活性状态。针对NF-κB活性的激活与抑制,从不同环节去寻找药物用于治疗与预防与NF-κB有关的疾病,现已成为新的研究方向。     

NF-κB及其活化的研究进展

核因子-κB/Rel蛋白(NF-κB)是一种分布和作用均十分广泛的真核细胞转录因子，因首先发现于B细胞Igκ轻链转录调控而得名。NF-κB可双向调控一系列基因的表达，这些基因的表达产物主要是参与调控机体的免疫反应和炎症反应。     

吡柔比星对HL-60细胞NF-κB p65活性及细胞凋亡的影响

目的研究吡柔比星(perarubicin,THP)对髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡与核因子-κB p65(nucle-ar factor kappa B p65,NF-κB p65)活性的影响。方法指数生长期HL-60细胞置于96孔培养板内RPMI 1640培养液培养2 h后,分为两部分,第1部分又分为A、B 2组。A组加PBS液继续培养12 h,B组分别加1、10、100μmol/L(终浓度)的THP继续培养12 h;用DNA梯状凝胶电泳法(DNA ladder electrophoresis)和流式细胞检测技术(flow cy-tometry,FCM)分别检测HL-60细胞的凋亡率。第2部分也分为A、B 2组,A组加PBS液继续培养3 h,B组分别加1、101、00μmol/L(终浓度)的THP继续培养3 h;用FCM检测NF-κB p65活化率。结果1、10、100μmol/L的THP诱导HL-60细胞的凋亡率分别为(31.78±4.31)%(、47.25±5.27)%(、56.49±1.59)%,组间及与对照组(6.46±1.45)%比较差异有统计学意义(P<0.05);诱导的HL-60细胞NF-κB p65活化率分别为(16.21±1.20)%、(23.98±3.21)%(、32.44±2.89)%,组间及与对照组(8.44±2.20)%比较差异有统计学意义(P<0.05)。DNA梯状凝胶电泳Ladder出现从多到少的顺序为:100μmol/L THP1、0μmol/L THP、1μmol/L THP、对照组。结论THP在促进HL-60细胞凋亡的同时有诱导其NF-κB p65活化的作用,均存在剂量依赖。     

环孢素A诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡以及对NF-κB p65表达的影响

目的研究环孢素A(CsA)诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡作用以及对NF-κB p65表达的影响。方法倒置显微镜观察CsA高剂量(5、10、15、20μmol/L)组与CsA低剂量(1、2、4、8μmol/L)组处理MGC80-3细胞24 h后细胞形态变化;MTT比色法分别检测两剂量组处理24 h对MGC80-3细胞增殖的抑制作用,以细胞生长抑制率≤5%评价CsA的非毒性剂量;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测CsA高、低剂量组处理后的细胞凋亡率;Western blot法检测CsA高、低剂量组细胞内NF-κB p65的表达。结果 CsA低剂量组处理MGC80-3细胞24 h后显微镜下见细胞生长状况良好,CsA高剂量组见多数细胞生长贴壁不牢、皱缩变圆及坏死脱落的现象。CsA高剂量组对MGC80-3细胞增殖有抑制作用,而CsA低剂量组显示在4μmol/L浓度范围以下对细胞增殖无明显抑制作用。FCM检测表明CsA低剂量组诱导细胞凋亡率与空白组相比差异无显著性,随药物作用剂量增加CsA高剂量组诱导细胞凋亡作用增强。Western blot法表明CsA高剂量组作用后NF-κB p65表达逐渐降低(P<0.05,P<0.01),而CsA低剂量组NF-κB p65的表达基本不变。结论 CsA诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡作用与药物作用浓度呈剂量效应关系,CsA可能通过抑制NF-κB信号通路诱导MGC80-3细胞凋亡。     

健脾补土方对脑缺血/再灌注损伤大鼠NF-κB和IκBα蛋白表达水平的影响

目的通过观察健脾补土方对脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠脑组织核因子-κB(NF-κB)和NF-κB抑制蛋白α(Iκ-Bα)表达的影响,探讨健脾补土方对脑保护作用的部分机制。方法将120只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组,健脾补土方小、中、大剂量组,每组20只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,治疗7 d,治疗前后行神经功能缺损评分,应用HE染色观察大脑皮质区细胞的形态学改变;采用Western blot法检测大脑皮质内NF-κB和IκBα蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分、NF-κB/p65蛋白的表达显著增加(P<0.01);IκBα蛋白的表达明显减少(P<0.01);与模型组比较,健脾补土方治疗组神经功能缺损评分、NF-κB/p65蛋白的表达均明显减少(P<0.05或P<0.01),IκBα蛋白的表达均明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论健脾补土方可能通过抑制脑组织NF-κB的表达,促进IκBα的表达,从而改善I/R损伤大鼠神经功能缺损,对I/R损伤起保护作用。     

注射Aβ25-35后大鼠海马超微结构及caspase-3表达的改变

目的：探讨大鼠双侧海马注射Aβ25-35后海马组织形态、超微结构及caspase-3表达的改变.方法：采用Aβ25-35双侧海马注射的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型,光镜及透射电镜观察海马组织结构,免疫组化法观察caspase-3蛋白的表达.结果：苏木素伊红（HE）染色显示,模型组大鼠海马CA1-CA4区及齿状回神经元数量较对照组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩;透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强;海马区Caspase-3蛋白的表达明显增加.结论：Aβ25-35可在体内诱导大鼠海马神经元凋亡.     

核因子-κB及MMP-2在皮肤鳞状细胞癌中的表达

目的为了探讨皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）中核因子-κB（Nuclear factor kappaB,NF-κB）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达及其与肿瘤分化程度和淋巴结转移的关系。方法用ABC免疫组化技术观察50例皮肤鳞癌（高分化鳞癌34例,低分化鳞癌16例,其中14例淋巴结转移）。结果NF-κB与MMP-2表达于瘤细胞和癌旁间质细胞、内皮细胞质中。NF-κB表达阳性率为80％,在低分化鳞癌中的表达明显高于高分化者（P=0．007）,且表达越高淋巴结转移率越高（P=0.004）。MMP-2表达阳性率为76％,在低分化鳞癌中的表达明显高于高分化者（P=0．021）,且表达越高淋巴结转移率越高（P=0．003）。结论皮肤鳞癌中NF-κB和MMP-2表达与其分化程度及淋巴结转移有关。     

全反式维甲酸对恶性黑素瘤A375细胞VEGF表达的影响

目的研究全反式维甲酸（ATRA）对体外培养恶性黑素瘤A375细胞VEGF表达影响。方法应用Real-time PCR检测A375细胞VEGF-B在基因水平的表达。应用ELISA法检测A375细胞上清中VEGF蛋白水平的表达。结果ATRA可降低A375细胞培养上清的VEGF的mRNA表达和血清浓度,与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）。结论ATRA可在mRNA和蛋白水平下调A375细胞VEGF的表达,且这种抑制作用呈时间剂量依赖关系。