弓形虫感染者血清IgM和IgG抗体免疫印迹谱分析

目的探索近期和慢性弓形虫感染的免疫诊断标志物。方法采用无毒灵敏的TMB为底物的酶联免疫印迹技术,分析弓形虫感染者IgM或IgG抗体阳性血清与弓形虫速殖子可溶性抗原的免疫反应谱。结果IgM抗体对p35、p38和p22的识别比例达80%以上,且反应带出现率较其它抗原组分高,而p32、p30与IgG抗体的反应带出现率和识别比例也分别高达40%和80%以上。其中,反应最强烈最具代表性的分别属p35(出现率81.5%,P<0.0001)和p32(出现率57.1%,P<0.0001)。结论p35、p38、p22可能为近期弓形虫感染的诊断标志物,p32和p30则可能是慢性弓形虫感染的诊断标志物。     

用免疫印迹技术检测狂犬病特异性抗体

狂犬疫苗接种是降低狂犬病发病率最根本的措施。目前主要采用检查抗体方法来观察疫苗接种是否有效。经典小鼠中和试验费时、费物。快速荧光聚焦抑制试验(RFFIT)需要一定细胞培养条件,国内难以普及。斑点酶结合技术(DIA)虽然简便、快速,但不能区分糖蛋白抗体(G蛋白抗体)和核衣壳蛋白抗体(N蛋白抗体),而且非特异性也较强。本文采用免疫印迹技术研制出硝酸纤维试剂膜检查血清抗体,具有快速、简便、特异性强、灵敏度高、能区分G蛋白抗体和N蛋白抗体等特点。     

检测弓形虫IgM抗体的3种试剂盒的比较分析

目的 评价用于检测弓形虫IgM抗体的3种市售的试剂盒。方法 用3种试剂盒检测125份孕妇的血清,比较各试剂盒的阳性检出率、敏感性、特异性和试验效率等。结果 125份血清经Bi、Di和So试剂盒检测,分别有12．8％、15．2％和12．0％阳性,3种试剂盒检测血清的阳性率之间无显著性差异（P＞0．05）。Bi、Di和So试剂的敏感性和特异性分别为88．9％与100％、100％与99．1％和83．3％与100％,试验效率分别为98．4％、99．2％和97．6％。用WHO国际生物标准化实验室的抗号形虫血清标准品定量测得3种试剂盒的灵敏度都是0．31IU／ml。Bi试剂盒与Di试剂盒的总符合率为97．6％;Di试剂盒与So试剂盒的总符合率为96．8％;Bi试剂盒与So试剂盒的总符合率为97．6％。结论 这3种试剂盒都能用于弓形虫IgM抗体的常规普筛和血清学诊断。     

5种市售弓形虫抗体检测试剂盒的评价

目的　评价国内公司研制的 5种弓形虫抗体检测试剂盒。方法　以敏感性、特异性、符合率和Youden指数作分析指标 ,比较 5种试剂盒对国外进口的 2种弓形虫抗体试剂盒筛选出的弓形虫IgG或IgM阳性血清和正常人血清的检测结果。结果　A、B、C 3种IgM试剂盒的检测敏感性和特异性分别为 0和 92 1%、6 7%和 10 0 %、以及 13 3%和 85 7% ,Youden指数分别为 - 0 0 8、0 0 7和 - 0 0 1,基本无诊断价值。A’、B’ 2种IgG试剂盒的检测敏感性分别为 96 4 %和 32 1% ,特异性为 98 4 %和 96 8% ,Youden指数为 0 95和 0 2 9。A’试剂盒与进口IgG试剂盒的符合率达到 97 8% ,诊断价值较大 ,而B’试剂盒与进口试剂盒的符合率仅为 76 9% ,A’、B’ 2种试剂盒之间的符合率也只有 76 9%。结论　国内研制的市售弓形虫试剂盒的检测效果与质量存在一定的问题 ,尤以IgM试剂盒为甚。     

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹技术分析弓形虫蛋白质与抗原的研究

本研究应用聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹技术，对我们分别引进或从畸胎中分离所得的弓形虫株－RH株、Z－2株、CN株和SH1、2、3、4、5、8株的蛋白质和抗原成份进行分析，结果表明，在蛋白质的主要区带方面，9株弓形虫比较接近，而在部分区带上有所不同；用高滴度的针对RH株的抗弓形虫抗体分析9株弓形虫抗原成份，可见有一些共同的抗原成份。     

HIV免疫印迹试剂盒有效期延长的探讨

HIV 抗体检测一般多用 ELISA初筛,阳性者再用免疫印迹法(Western Blot,WB)验证。国内尚无免疫印迹试剂盒供应,进口试剂盒价格昂贵,有效期短,常造成过期失效而浪费,如能延长有效期,将有利于推广应用,及时进行 HIV 抗体判定。 一、材料 HIV-Ⅰ型免疫印迹试剂盒为 Bio-RadNavapath 产品。本文检查两盒:第一盒批号 AA 90397,失效期为 1989年5月29日;第二盒批号 AA 10803,失效期为 1992年4月10日。两盒均为每10条抗原膜为     

几种弓形虫ELISA试剂盒初步检测结果比较

本文选用 5种国内弓形虫 EL ISA试剂盒检测已知同样样品 ,并且用国外试剂盒核查由该 5种试剂盒提供的阳性样品 ,作试剂盒质量比较。结果　 Ig G- EL ISA试剂 A、B盒阳性检出率 (敏感性 )均为 6 0 % ,A、B盒之间的符合率仅为5 0 % ,其特异性分别为 35 %和 90 % ;C、D、E阳性检出率 (敏感性 )分别为 30 %、6 0 %、70 % ,特异性分别为 75 %、5 4%、87%。核查 A、B、D、E盒提供的样品结果 :Ig G符合率较好 ,均在 90 %以上。 Ig M符合率均为 6 0 %。鉴于目前国内 EL ISA试剂盒的现状 ,本文分析后建议 ,除改进质量外 ,宜选择多种试剂盒联合应用 ,避免漏检和误诊。临床诊断孕妇弓形虫病应谨慎从事     

免疫印迹法检测结核抗体的临床应用体会

结核病的临床诊断，无论是结素试验、痰菌或X线检查都存在一定的局限性。近年来，结核病血清学诊断日益受到人们的重视。随着包被用抗原种类，提纯技术以及检测方法不断改进完善，使血清学在结核病的诊断中具有重要的临床意义。今我们采用北京宜安泰医疗技术开发有限公司研制的“免疫印迹法结核抗体检测试剂盒”对肺结核患和健康人对照血清进行了检测，现报告结果如下。[第一段]     

弓形虫表膜主要分子抗原的免疫印迹分析

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(immunoblotting)和A蛋白酶联免疫吸附试验(SPA-ELISA)对弓形虫RH株速殖子表膜进行了免疫化学研究,结果见到,膜组分较其他组分抗原用于血清学诊断具有更高的敏感性。分子量分别为30KD和6.5KD的膜蛋白为速殖子表膜主要抗原。它们在膜组分中含量甚微,但具有很强的免疫反应性,其中6.5KD抗原仅见于膜组分而未见于分泌排泄抗原中。     

免疫组织化学在弓形虫和弓形虫病研究中的应用

弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ）是一种细胞内寄生原虫。成人感染多呈无症状带虫状态,但先天感染的幼儿及免疫力低下人群的感染后常常是严重的,甚至是致死性的。Ｃｏｏｌ等［２］１９４２年创立的免疫组织化学技术,其基本原理是标记物或显色物标记的抗体或抗原,通过抗原抗体反应来检测组织或细胞内的抗原成份,用于疾病的诊断或研究。该技术的优点在于将结构与功能及代谢结合起来,从微观原位确定组织和细胞结构的化学成份,并可做到定性、定位及定量,在生物学和医学各个领域得到了广泛应用［３,４］。这一技术在近２０多…     

鼠疫抗体放免测定盒的研制

鼠疫抗体放免测定盒为我所首先试制成功,已在吉林省和全国使用了5年,共检测各种疫源动物血清30余万份。经实验观察和各地的使用反映证明,其性能稳定,敏感性及特异性均显著优于目前通用的鼠疫间接血凝试验。使用该测定盒能及早获得鼠疫动物病流行的信息,从而提高鼠疫监测水平。     

人体囊虫病诊断试剂盒的效果评价

目的评价囊虫IgG抗体检测试剂盒的诊断效果,为临床应用提供参考。方法按照囊虫IgG抗体检测试剂盒说明书,采用ELISA法检测囊虫病、包虫病、带绦虫病及健康人血清。结果在30例活动期脑囊虫病病人中,28例呈囊虫IgG抗体阳性,敏感性为93.33%。100份健康人血清均无阳性反应。在42例带绦虫感染者,2例囊虫抗体阳性,阳性率为4.76%。在60份包虫病血清中,阳性41份,该试剂盒与包虫病的交叉反应率为68.33%。结论所评价试剂盒敏感性较好,但特异性差,与包虫病的交叉反应率高。以上提示国内囊虫病免疫学诊断试剂的质量有待提高。     

混合血清法检测献血员血清抗弓形虫抗体

将徐州市区义务献血员６人一组混合,用斑点免疫金银染色法（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）进行检测,同时对所有血清用同样方法逐份进行检测,以研究混合血清法筛检抗弓形虫抗体的可能性。检测结果显示,混合血清法的敏感性为９２．３１％。特异性为９９．９６％,混合血清法与逐份血清法的一致率为９９．７３％,Ｋａｐｐａ值为０．９４７（Ｐ〈０．０１）。以全国弓形虫平均感染率（４．８６％）进行定量效益分析,用混合血清法筛检献血员,     

弓形虫感染免疫诊断抗原研究进展

诊断抗原历来是弓形虫病免疫诊断研究的重点。随着分子生物学技术的发展,弓形虫诊断抗原由最初的粗抗原发展成为组分抗原以及重组抗原。本文综述了近年来弓形虫病诊断抗原的研究现状与进展。     

抗弓形虫主要外膜蛋白单克隆抗体的分析与鉴定

用杂交瘤技术制备抗弓形虫单克隆抗体，经蛋白印迹试验证实：12A10、12C4杂交瘤株分泌抗弓形虫主要外膜蛋白P30的单克隆抗体。其免疫球蛋白均为IgG类。     

IFN-γ联合TNF-α活化小鼠腹腔巨噬细胞抗不同毒力株弓形虫的作用

目的： 比较ＩＦＮ－γ联合ＴＮＦ－α体外活化的小鼠腹腔巨噬细胞（ＭΦ） 对强毒株ＲＨ株及弱毒株Ｆｕｋａｙａ株的抗虫作用。方法： 体外以ＩＦＮ－γ与ＴＮＦ－α联合活化昆明系小鼠腹腔ＭΦ,观察其对入侵的ＲＨ株及Ｆｕｋａｙａ株速殖子的抗虫作用, 测定培养上清中ＮＯ的水平。结果： 在以ＩＦＮ－γ１００Ｕ＋ ＴＮＦ－α１００Ｕ 活化的ＭΦ中, 入侵２４ｈ 后的ＲＨ株弓形虫速殖子被完全杀灭, 而Ｆｕｋａｙａ 株速殖子则缓慢增殖, 且前者培养上清中ＮＯ水平显著高于后者。结论：ＩＦＮ－γ活化的ＭΦ对入侵的ＲＨ 株和Ｆｕｋａｙａ株速殖子的抗虫作用存在差异,这可能与ＮＯ的水平有关。     

Identification and characterization of a Fc Receptor activity on the Toxoplasma gondii tachyzoite

The Immunoglobulin (Ig) binding capacity of Toxoplasma gondii tachyzoites was investigated using fluorescence flow-cytometry analysis. Polyclonal mouse, human and rat immunoglobulins without specific anti- Toxoplasma activity bound to parasites in a concentration-dependent manner, saturating them at circulating serum concentrations. The immunoglobulin class and subclass specificity of binding was investigated using irrelevant monoclonal antibodies. IgM, IgA and IgG reacted with the parasite membrane. The attachment of mouse IgM to the parasite surface was hampered by mouse IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG3. The binding of mouse IgG was proportionally reduced with increasing concentrations of mouse monoclonal IgM. The binding of murine immunoglobulin was diminished when in presence of human IgG. Purified Fc- but not Fab portions of immunoglobulins, fixed to parasites. Using labelled calibrated beads, the Ig binding capacity of parasites was estimated to be 6900 ± 500 sites per tachyzoite. The Kd of the T. gondii Fc Receptor (FcR) activity was determined at 1.4 ± 0.1 μM (mean ± SEM). Such FcR activity was reduced by phospholipase C, trypsin and pronase treatment of the parasites. These data show a low affinity FcR activity on T. gondii tachyzoites which recognizes Ig of different species and isotypes and is likely supported by a glycosyl-phosphatidylinositol (GPI)-anchored surface protein of the parasite .     

弓形虫感染的影响因素与防治策略

作为一种分布广泛的人兽共患病,弓形虫病在孕妇及免疫缺陷的宿主中可产生严重的后果。许多因素包括的社会-人口、生物-生理、生活方式等都可以影响弓形虫的感染,采取控制传染源,切断传染途径,宣传教育易感人群等措施可以有效预防弓形虫感染,这对消除弓形虫感染,特别是对孕妇及胎儿群体的的健康危害具有积极意义。     

弓形虫感染与精子膜功能完整性的研究

目的　探讨弓形虫感染对精子膜功能的影响。方法　将 1 79例弓形虫检测的不育男性分为抗弓形虫抗体(ATAb)阳性组 (53例 )和阴性组 (1 2 6例 ) ,对其精液做低渗膨胀试验 ,进行对照分析。结果　ATAb阳性组的精子总膨胀率(44 50± 8 69)明显低于ATAb阴性组 (58 2 5± 9 48,P <0 0 1 ) ;ATAb阳性组 g型精子总膨胀率 (1 0 75± 3 2 2 )明显低于ATAb阴性组 (1 6 0 2± 6 2 8,P <0 0 1 )。结论　弓形虫感染对精子膜功能有明显影响 ,是弓形虫引起男性不育的原因之一