Gli1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化和胶原合成的影响

目的 探讨锌指转录因子1(Gli1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞间质转分化和胶原合成的影响.方法 培养肾小管上皮细胞NRK-52E,分为Control、TGF-β1(TGF-β1诱导)、sh-NC+TGF-β1(转染阴性对照shRNA,TGF-β1处理)和sh-Gli1+TGF-β1(转染G...     

游离脂肪酸对肾小管上皮细胞TIMP-1、PAI-1表达及细胞外基质分泌的影响

目的探讨游离脂肪酸（Free fatty acids，FFAs）对人肾小管上皮细胞（renal tubular epithelial cells，RTECs）细胞外基质降解酶抑制剂[tissue inhibitor of metalloproteinase 1（TIMP-1）、plasminogen activator inhibitor 1（PAI-1）]表达及细胞外基质[纤维连接蛋（fibronectin，FN）、胶原]分泌的影响。方法用去脂牛血清白蛋白（defatty bovine serum albumin，d-BsA）为油酸（Oil acids，OA）载体，用不同浓度OA刺激培养RTECs，以不加d-BSA及只加普通培养液的细胞作对照组，应用反转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测RTECs TIMP-1mRNA、PAI-1mRNA的表达水平，酶联免疫吸附法（FLISA法）、羟脯氨酸消化法分别检测培养上清FN、胶原的蛋白水平。结果d-BSA组与空白对照组RTECs的细胞外基质降解酶抑制剂（TIMP-1mRNA、PAI-1mRNA）表达及细胞外基质蛋白（FN、胶原）分泌比较差异无显著性（P＞0．05），而不同浓度OA组与空白对照组比较差异有显著性（P＜0．05）；且随着OA浓度增加，对RTECs TIMP-1mRNA、PAI-1mRNA表达以及对FN、胶原蛋白分泌的促进作用有增强趋势。结论FFAs通过促进细胞外基质（FN、胶原）的生成及抑制其降解，使其沉积在肾间质，进而在肾小管间质纤维化发生发展中起着重要的作用。     

不同方式透析前、后尿毒症血清对肾小管上皮细胞TGF-β1表达的影响

目的探讨不同方式透析前、后尿毒血清对肾小管上皮细胞TGF-β1表达的影响。方法24例尿毒症透析患者随机分为血液透析（HD）、高通量血液透析（HFHD）、血液透析滤过（HDF）三组,分别于透析前后取患者血清,二乙酰一肟法测定透析前后尿素比值,评价三种透析方式的充分性;用透析前后患者血清刺激体外培养的肾小管上皮细胞株（HK-2细胞）,然后用RT-PCR法检测HK-2细胞TGF-β1 mRNA表达,ELISA法检测HK-2细胞培养上清TGF-β1水平。结果三种透析方式的Kt/V值均大于1.2,达到充分透析的要求;HDF组透析后尿毒血清较透析前血清促HK-2细胞表达和分泌TGF-β1的作用减弱（P〈0.05）;而HD和HFHD组透析后与透析前比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论HDF能更有效地清除尿毒血清中致前纤维化细胞因子表达的毒素,由此推测HDF可能更有效地延缓尿毒症患者肾间质纤维化的进展。     

TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞血小板反应蛋白1的表达

目的探讨在TGF-β1诱导下人肾小管上皮细胞(HKCs)血小板反应蛋白1(thrombospondin1,TSP-1)的表达变化。方法实验分二组:对照组(C组)用无血清培养基(FSM)培养人肾小管上皮细胞;TGF-β1组(T组):用含TGF-β120ng/ml的FSM培养HKCs。各组观察24、72和120h3个时相点,分别为C1、C2、C3和T1、T2、T3亚组。用免疫细胞化学及逆转录酶链反应(RT-PCR)方法检测TSP-1及其mRNA的表达的变化。结果T1组比C1组TSP-1表达无显著差异(P>0.05),T2、T3组与C组相应时相点比较TSP-1表达显著增高(P<0.01),T组组内比较随时间延长,TSP-1表达逐渐增高。结论TGF-β1能诱导HKCs表达TSP-1,呈时间依赖性。     

肾小管上皮细胞分泌因了和脂多糖对肾间质成纤维细胞…

在本实验中，我们观察了用脂多糖刺激肾小管上皮细胞后，其培养上清对肾间质成纤维细胞增殖和分泌细胞外基质的影响，并与脂多糖直接刺激成纤维细胞的结果进行了比较。结果发现，经脂多糖后的肾小管上皮细胞培养上甭对肾间质成纤维细胞增殖分必纤维连接蛋白、层粘连蛋白有明显的促进作用，其机制可能与肾小管上皮细胞分泌的细胞因子增加有关。     

草酸钙晶体对大鼠肾小管上皮细胞骨桥蛋白表达的影响

目的探讨一水草酸钙(calcium oxalate monohydrate,COM)晶体对大鼠肾小管上皮细胞中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响。方法选用SD大鼠的肾皮质原代培养出肾小管上皮细胞并制成爬片,将爬片的肾小管上皮细胞随机分为A、B、C、D、E5组。A组不加COM(11例);B组1 mmol/L浓度COM(17例);C组3 mmol/L浓度COM(18例);D组5 mmol/L浓度COM(18例);E组10 mmol/L浓度COM(17例)。采用免疫组织化学法(SABC)检测各组肾小管上皮细胞中OPN的表达,并进行阳性细胞计数和各组间比较。结果 OPN的表达主要定位于细胞质,呈棕褐色。各组OPN阳性表达率:A组54.5%;B组64.7%;C组77.8%;D组88.9%;E组76.5%。随着COM浓度增加,OPN表达逐渐增强,到5 mmol/L浓度COM时OPN表达最强(P0.01),而10 mmol/L浓度COM时OPN表达反而下降,接近3 mmol/L浓度COM水平(P0.05)。结论大鼠肾小管上皮细胞受COM刺激后OPN表达增强,但高浓度COM使OPN表达减弱,提示高浓度COM通过损伤肾小管上皮细胞使OPN表达下降,进而形成结石。     

辛伐他汀对高糖培养肾小管上皮细胞RANTES和TGF-β1表达的影响

目的:探讨高糖环境中人近端肾小管上皮细胞(HK-2)RANTES(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达变化及辛伐他汀(Sim)的干预作用.方法:原代培养HK-2分为正常糖对照组(NG)、甘露醇组(MG)、高糖组(HG)、HG+ Sim 2 μmol/L干预组(HG+Sim2)、HG+Sim 4μmol/L干预组(HG+Sim4),RT-PCR法测定细胞RANTES和TGF-β1 mRNA表达,ELISA法检测细胞上清液中RANTES、TGF-β1蛋白含量.结果:RANTES、TGF-β1的mRNA和蛋白在NG及MG仅有少量表达,而在HG则明显升高(P＜0.05);加入Sim后,上述表达均较前下降(P＜0.05),具有浓度依赖性.各组HK-2表达的RANTES和TGF-β1无论是mRNA还是蛋白之间均存在显著正相关(P＜0.01).结论:高糖促进HK-2 RANTES、TGF-β1的表达,而Sim明显抑制高糖环境中上述因子的过度表达,发挥肾脏保护作用.     

缬沙坦对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化生长因子β1与结缔组织生长因子表达的影响

目的:研究缬沙坦对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化生长因子β1与结缔组织生长因子表达的影响。方法:将60只W istar大鼠随机分为对照组(n=20)和糖尿病模型组(n=40),糖尿病模型组给予一次腹腔注射链脲佐菌素制造糖尿病模型,模型成功后随机分为糖尿病组(n=20)和缬沙坦组(n=20);缬沙坦组每日给予缬沙坦30 m g/kg的剂量灌胃;第8周测定各组大鼠尿蛋白,处死大鼠取肾组织石蜡包埋切片,免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞转化生长因子β1与结缔组织生长因子表达并进行半定量分析。结果:糖尿病大鼠尿蛋白排泄显著高于对照组(P<0.01),肾间质损害明显,糖尿病组大鼠肾小管上皮细胞转化生长因子β1与结缔组织生长因子阳性表达相对面积分别为0.2209±0.0405和0.1835±0.0611,与对照组比较均显著上调(P<0.01);缬沙坦组大鼠尿蛋白排泄较糖尿病组显著下降,其肾小管上皮细胞转化生长因子β1与结缔组织生长因子阳性表达相对面积分别为0.1435±0.0322和0.1183±0.0376,较糖尿病组显著下调(P<0.01)。结论:缬沙坦能显著下调糖尿病大鼠肾小管上细胞转化生长因子β1与结缔组织生长因子表达。     

高糖环境下脂联素对人肾小管上皮细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的：探讨脂联素（ADPN）对体外高糖培养的人肾小管上皮细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响,以揭示ADPN对高糖环境中的肾小管上皮细胞的可能保护作用机制。方法：人肾小管上皮细胞分别培养于不同的培养基中,在高糖环境中加入脂联素,分别培育48h后采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞上清液中TGF—β1的含量。结果：TGF—β1在高糖组表达较高,加入中等浓度（ADPN浓度为10．0,15．0,20．0ug／mL）TGF—β1的表达减少,和高糖组相比,两者的差异有统计学意义。结论：中等浓度ADPN可以抑制TGF—β1在人肾小管上皮细胞的表达。     

高糖诱导肾小管上皮细胞转化的作用

目的观察高糖诱导肾小管上皮的转化,以及转化生长因子13,（TGF-β1）和信号转导蛋白（Smad）受体激活锚定蛋白（SARA）的变化。方法建立高糖诱导肾小管上皮细胞（HKC）转化模型,高糖处理HKC0、12、24、48h后提取总蛋白,Westernblot法检测波形蛋白、钙黏附蛋白、TGF—β1、SARA和Smad2蛋白的表达。结果Westernblot法检测高糖处理HKC0、12、24、48h后,钙黏附蛋白的相对表达量分别为1．13±0．31、0．74±0．1g、0．63±0．18、0．32±0．12,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;波形蛋白相对表达量分别为0．23±0．09、0．34±0．04、0．83±0．15、1．02±0．22,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;TGF—B1蛋白的相对表达量分别为0．25±O．08、0．44±O．12、0．72±0．21、0．92±0．28,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;SARA蛋白的相对表达量分别为0．83±0．21、0．54±0．13、0．42±0．09、0．35±0．12,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;Smad2蛋白的相对表达量分别为1．14±0．22、0．82±0．15、0.61±0．17、0．30±0．13,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论高糖可诱导HKC转化,TGF—β1通路的激活可能是其主要的作用机制,SARA蛋白的下调和继发的Smad2蛋白降解协同了TGF—β1通路的致纤维化作用。     

尿毒症毒素对人肾小管上皮细胞外基质的影响及临床意义

目的 探讨尿毒症毒素对人肾小管上皮细胞外基质的影响及临床意义。方法 无菌收集40份尿毒症患者血清和20例正常人血清,培养及鉴定人肾小管上皮细胞株（HK-2）,采用消化法检测羟脯氨酸含量,ELISA方法检测纤连蛋白（FN）、金属蛋白酶-1（MMP-1）、金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的蛋白分泌量,RT-PCR方法检测MMP-1、TIMP-1 mRNA的表达。结果 5％-20％浓度尿毒血清组胶原蛋白、FN分泌量均较正常对照组增高（P〈0．01）,且随着尿毒血清浓度的升高而增高,以分子量〉10000ku的组分增高最为显著（P〈0．01）。各浓度尿毒血清组MMP-1／TIMP-1基因表达和蛋白分泌的比值均较正常对照组降低（P〈0．01）,且随着尿毒血清浓度的增高而降低,以分子量〉10000ku尿毒血清组降低最为显著,而分子量〈5000ku尿毒血清组较正常对照组增高（P〈0．01）。结论 慢性肾衰竭患者体内蓄积的尿毒症毒素可能通过促进人肾小管上皮细胞外基质的分泌,减少其降解,加速肾小管．间质纤维化的进展,其中以分子量〉10000ku的尿毒症毒素作用最为显著。     

转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化及大黄素干预中的作用

目的:大黄素对白细胞介素1β诱导NRK52E细胞转分化有显著抑制作用。实验拟进一步观察转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及大黄素抑制作用中的意义。方法:实验于2006-10/2007-05在泸州医学院附属医院免疫实验室完成。⑴实验材料及分组:以培养的大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为观察对象,按如下分组分别添加不同处理因素:①对照组:仅加入体积分数为0.05小牛血清的高糖DMEM培养基。②白细胞介素1β诱导组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L的高糖DMEM培养基。③SB431542阻断组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及SB431542终浓度为10μmol/L的高糖DMEM培养基。④白细胞介素1β 大黄素组:同时加分别含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及大黄素终浓度为25mg/L的高糖DMEM培养基。⑵实验评估:培养48h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色法检测肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1的表达。结果:①白细胞介素1β可诱导部分细胞由卵圆形转变为梭形,且肌酸激酶表达减弱(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1表达显著增强(P<0.01)。②SB431542特异性抑制转化生长因子β1作用后,白细胞介素1β诱导的细胞形态改变受抑,同时肌酸激酶表达增强(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白表达减弱(P<0.01),但转化生长因子β1的表达却无明显变化。③大黄素对白细胞介素1β诱导的细胞形态改变及肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白的表达有明显抑制作用,其抑制作用与SB431542的作用相比无显著差异;同时,大黄素对白细胞介素1β诱导的转化生长因子β1的表达也有明显抑制作用(P<0.01)。结论:转化生长因子β1可能介导了白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,并参与了大黄素抑制白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。     

心肺复苏后大鼠肾小管上皮细胞凋亡的实验研究

目的研究心肺复苏后大鼠肾小管上皮细胞的凋亡情况及其可能机制。方法Sprague Dawley雄性大鼠48只,随机分为6组:对照组(假手术组)以及复苏后3、6、12、24、48h组,每组各8只。采用窒息合并冰氯化钾(0·5mol/L)停跳液致大鼠心搏骤停-心肺复苏模型,心搏骤停5min后开始心肺复苏。采用TUNEL法观察复苏后肾小管上皮细胞的凋亡情况,采用免疫组化的方法观察大鼠肾小管上皮细胞Bcl-2、Fas蛋白的表达情况。结果复苏后3h大鼠肾小管上皮细胞就有明显凋亡,之后表达持续增加,至24h达高峰,平均灰度值为(19·75±4·04)%。复苏后3h肾小管上皮细胞Bcl-2有少量表达,其后表达呈上升趋势,48h达到高峰。而Fas复苏后3h呈高表达,与对照组比较(P<0·01),平均灰度值为(47·78±2·18)%,随后持续高表达,至24h达高峰。结论心肺复苏后大鼠存在肾小管上皮细胞凋亡,其中Fas的高表达介导了肾小管上皮细胞凋亡。     

彩超照射对中孕胎鼠肾小管上皮细胞凋亡及超微结构的影响

目的　应用彩色多普勒超声照射中孕期大鼠 ,观察胎鼠肾小管上皮细胞凋亡及超微结构的变化。方法　 32只孕 14 d SD大鼠按彩超照射时间不同随机等分为 4组 , 组 (对照组 )、 组 (照射 10 min组 )、 组 (照射 2 0 min组 )、 组 (照射 30 min组 ) ,仪器采用 Acuson公司 Sequoia- 5 12型彩色电脑声像仪 ,照射条件 :4 V1探头 ,二维频率 3.0 MHz,彩色频率 CD=3.0 MHz,Tis=1.8,MIcd=1.6。照射后 2 4 h取胎鼠肾脏标本 ,HE染色光镜观察组织结构 ;TUNEL法检测凋亡细胞 ,采用 L eica Q5 0 0 MC型图像分析仪进行图像分析 ;透射电镜观察超微结构变化。结果　各组光镜下观察肾脏组织结构均未见异常 ;Tunel法检测 ,各组胎鼠肾小管上皮内均可见散在的棕黄色淡染的 Tunel阳性表达 ,图像分析统计结果显示 : 组、 组胎鼠肾小管上皮 Tunel阳性表达强度与 组无显著差异 (P>0 .0 5 ) ; 组表达强度与 组有显著差异 (P<0 .0 5 )。照射 30 min组胎鼠肾脏电镜检查发现染色质浓缩边集、线粒体肿胀等超微结构变化。结论　彩色多普勒超声照射中孕期大鼠超过 30 min可引起胎鼠肾小管上皮细胞凋亡增多 ,超微结构发生轻微改变。     

肾康注射液联合缬沙坦治疗2型糖尿病肾病的疗效评价

目的 研究肾康注射液联合缬沙坦治疗2型糖尿病肾病(DKD)患者的临床疗效.方法 选取2018年6月至2020年6月郑州市第七人民医院70例2型DKD患者的临床资料,根据治疗方案不同分为对照组和观察组,每组35例,在常规治疗基础上,对照组采用缬沙坦治疗,观察组采用肾康注射液联合缬沙坦治疗.比较两组临床疗效、肾功能指标[2...     

肾康注射液对慢性肾脏病患者肾功能及睡眠质量的影响

目的:研究肾康注射液对慢性肾脏病患者肾功能及睡眠质量的影响.方法:选取2018年3月至2020年3月唐山市丰南区医院肾内科收治的慢性肾脏病患者112例作为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组56例.对照组采用常规治疗,观察组在此基础上加用肾康注射液治疗.比较2组患者治疗后肾功能指标血肌酐、血尿素氮及蛋白尿的变化;同时...     

肾康注射液治疗狼疮性肾炎的临床观察

选取2013年3月-2014年11月我院接诊的81例狼疮性肾炎患者,按照入院的先后顺序分为两组,试验组41例和对照组40例,试验组给予肾康注射液治疗,对照组给予口服泼尼松治疗,观察两组患者的治疗效果。结果试验组患者的治疗总好转率、不良反应的发生率明显优于对照组,差异显著,有统计学意义（P〈0.05）;治疗后两组患者的尿液检测指标、血液检测指标明显优于治疗前,差异显著,有统计学意义（P〈0.05）;并且试验组优于对照组,差异显著,有统计学意义（P〈0.05）。肾康注射液治疗狼疮性肾炎的效果显著,可以有效提高患者的治疗好转率,降低并发症的发生率,值得临床推广。     

姜黄素和万古霉素对大鼠肾小管上皮细胞乳酸脱氢酶释放百分率及丙二醛的影响

目的探讨姜黄素和万古霉素对大鼠肾小管上皮细胞乳酸脱氢酶释放百分率及丙二醛的影响。方法将健康SD大鼠的肾小管上皮细胞经分离后原代培养,根据细胞培养液中所含药物不同,分为空白对照组、姜黄素+万古霉素试验组、姜黄素试验组和万古霉素试验组,4 h后测定乳酸脱氢酶(LDH)释放百分率,同时考察各组在0 h、6 h、12 h、24 h、30 h、36 h、48h的丙二醛(MDA)含量变化。结果 LDH释放百分率为万古霉素试验组>姜黄素+万古霉素试验组>姜黄素试验组,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞培养上清液MDA含量在姜黄素+万古霉素试验组与万古霉素试验组中的含量均随着时间延长而增高,且从24 h开始,在相同时间里,万古霉素试验组中的MDA含量增高更显著(P<0.05)。结论万古霉素对大鼠肾小管上皮细胞可能具有肾损伤作用,而姜黄素对其肾损伤具有改善作用,其机制可能与降低氧化应激反应有关。