抗鼠上皮细胞单克隆抗体的制备及其导致肾损伤的作用

为了探讨膜性肾病的发病机理,作者试图用杂交瘤技术获得针对肾小球上皮细胞的McAb。以大鼠肾小球为抗原,加完全福氏佐剂,免疫BALB/c小鼠。采用对数生长的P3u1与免疫后的脾细胞融合及进行克隆筛选,获得3株针对肾小球上皮细胞的杂交瘤。利用抗原交叉试验(ELISA方法)、McAb亚类鉴定、放射免疫沉淀McAb纯度鉴定、McAb效价测定等方法对杂交瘤细胞进行了鉴定,同时使用免疫电镜的方法,并制备了McAB介导的肾炎模型。结果为:(1)以     

大鼠-小鼠淋巴细胞杂交瘤细胞株的建立

<正> 在建立针对小鼠共有抗原的单克隆抗体(McAb)的淋巴细胞杂交瘤细胞株时,若仍以小鼠(同种)作致敏淋巴细胞的供者,很难使小鼠对这类抗原致敏,因此有必要免疫异种动物以解决这问题。本文报道产生针对小鼠 IgE 决定簇的 McAb 的大鼠-小鼠淋巴细胞杂交瘤的建株。作者用小鼠抗天花粉蛋白的 IgE McAb TE-1(见顾华、叶敏,第三     

人体实质性肿瘤的单克隆抗体及其临床应用(文献综述)

<正> 自杂交瘤技术问世以来,现已迅速运用单克隆抗体(McAb)试图解决肿瘤抗原及肿瘤的诊断、治疗等一系列问题。本文主要介绍人体实质性肿瘤McAb的研制近况及探讨用于临床诊断和治疗的可能性。 一、人体实质性肿瘤McAb的研制: (一)已建立的杂交瘤及其McAb的特性:目前制得肿瘤McAb大部分是小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾脏细胞融合的杂交     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用

本文报告将自制的人甲胎蛋白(AFP)抗原免疫小鼠,采用常规杂交瘤技木融合小鼠的脾细胞和SP2/0细胞。经有限稀释法克隆出九株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。分别用血凝抑制试验、琼脂双扩散、ELISA和放射免疫分析等方法鉴定了McAb对抗原的表位特异性、亲和力及其稳定性和小鼠Ig亚类属性。实验结果表明几种McAb分别作用于AFP抗原上相同或不同的抗原表位。其中大多数McAb具有较高的亲和力。抗原表位特异性不同的McAb在免疫沉淀反应中有协同作用。本文报告的AFP McAb双位点夹心ELISA,对一些临床标本的检测结果与AFP放射免疫试剂盒的结果有着良好的相关性。     

抗人IgA单克隆抗体的特性分析和初步应用

用常规免疫法和脾内直接注射抗原(SIgA)法免疫小鼠,平行作细胞融合实验,建立4株分泌抗人IgA McAb杂交瘤细胞株,所得McAb对人IgA有较高特异性和抗体效价,经免疫印染法表明对α重链呈特异性。用抗原竞争抑制ELISA和ELISA添加试验分析McAb的抗原结合位点,均表明McAb A4与A1b、A3b、A9针对不同的抗原位点。用于检测EB病毒VCA和EA的IgA抗体,显示满意的特异性和敏感性,这将为有关试剂的生产提供稳定的抗体来源。     

乙型肝炎病毒e抗源单克隆抗体研制及临床初步应用

基因工程菌生产的HBeAg,用十二烷基磺酸钠(SDS)和2-巯基乙醇(2-ME)处理后作为抗原免疫雌牲BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,共获约3000个杂交瘤细胞克隆。经二种不同的ELISA筛选,得到16个分泌抗HBe McAb的杂交瘤细胞系。其中以94.127二株杂交瘤细胞分泌的抗HBe McAb效价较高(ELISA效价均为10~(-6),与HBeAg作琼脂糖双向扩散时还可出现肉眼所见沉淀线)。染色体检查证实为杂交瘤     

天津地区抗霍乱弧菌单克隆抗体(McAb)细胞系的建立及其应用的研究

应用天津市防病中心保存的EL-Tor霍乱弧菌小川型和稻叶型菌体抗原,混合免疫BALB/c小鼠,小鼠免疫脾细胞与骨髓瘤细胞Sp 2/0-Ag 14融合,采用ELISA法筛选抗霍乱弧菌McAb阳性孔,细胞融合率为328/384(85.2％);经过三次克隆化后筛选出9株分泌抗霍乱弧菌菌体抗原的McAb杂交瘤细胞系。取其中两株细胞进行分析研究;培养上清抗体效价在     

持久稳定分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

杂交瘤技术创立以来,在生物、医学各领域已广泛应用,各地陆续报导建立了分泌抗白细胞抗原、肿瘤抗原和微生物抗原的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。但在内分泌免疫病方面,有关报导还不多。内分泌免疫病是免疫介导性疾病中尤为复杂的一组疾病,单克隆抗体技术为诊断和深入细致研究其发病机制提供了有力工具。我们选择了     

妊娠相关血浆蛋白-A单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备娠相关血浆蛋白-A（PAPP-A）单克隆抗体（McAb）。方法利用PAPP-A抗原免疫Balb／c小鼠，应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0）融合，间接ELISA方法对细胞培养上清检测、筛选，建立分泌PAPP—A单克隆抗体的杂交瘤细胞株，扩人培养后，Balb／c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞株，产生腹水后，对腹水进行收集、纯化、签定．结果筛选出稳定分泌PAPP—AMcAb的杂交瘤细胞株，Western—blot分析证实McAb与PAPP—A有较高的特异性及敏感性。结论本实验成功制备了抗PAPP—A特异性的McAb，可用于PAPP—A免疫检测方法的建立。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp)单克隆抗体（McAb),并对其特异性进行鉴定。用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA,Westen blotting试验分析其特异性。结果,制备出2A5和1H10两株能稳定分泌抗LDHpMcAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1：512和1：256,腹水效价分别为1：25600和1：12800,两株单抗与间日疟,红细胞,弓形虫,日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

分泌高效价抗碱性磷酸酶McAb杂交瘤系的建立及其在APAAP免疫组化研究中的应用

用碱性磷酸酶长程多途径免疫BALB/C小鼠,采用反向间接ELISA法筛选融合孔上清,获得2株稳定分泌抗碱性磷酸酶McAb杂交瘤细胞株,腹水效价比国外报道高15～30倍,在APAAP免疫组化检测CD抗原、病毒抗原、肿瘤抗原以及细菌菌毛抗原等研究中均获得满意结果。     

抗慢性B淋巴细胞白血病患者IgM单抗相对亲和力的分析

本文采用间接ELISA法检测了11株抗B-CLL患者IgM腹水和杂交瘤上清McAb的相对亲和力。结果提示,各株McAb结合抗原的相对亲和力不同。根据50％最大结合浓度分为两组。其中4株杂交瘤上清McAb与纯化腹水McAb测得结果基本吻合。实验结果为合理地选用这些单抗提供了重要依据。     

抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。     

空肠弯曲菌共同抗原单克隆抗体的研制及其在细菌检验中应用的研究

应用B-淋巴细胞杂交瘤技术,建立了5株稳定分泌抗空肠弯曲菌共同抗原(CA)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。其中4株的McAb针对CA中的耐热抗原成分,1株的McAb针对CA中的不耐热抗原成分。应用32种其它细菌对这些McAb的特异性检查表明,除与幽门弯曲菌发生交叉反应外,与其它细菌均为阴性反应。应用不同地区、不同来源的516株空弯菌对这些Mc-Ab与空弯菌的反应性进行了检查,结果均为阳性反应。应用BA-ELISA对人(140)、     

抗人IgM重链单克隆抗体的特性分析

本文报道取正常人混合血清纯化 IgM,经断链后获得(Fo)_5μ片段作为免疫原免疫动物,应用杂交瘤技术获得16株分泌抗人IgM McAb的细胞株。用琼脂双扩散、免疫电泳、ELISA等方法证实所分泌的 McAb对人 IgM 呈高特异性。杂交瘤细胞诱生腹水的抗体效价在双扩散试验中可达1:256,在ELISA 中可达10~(-7)。用被动血凝抑制试验及ELISA试验比较了其中4种McAb(M_5、M_(12)、M_(23)、M_(25))的抗原结合力大小,表明M_(12)有较高亲和力。用ELISA固相竞争试验分析,证明该4种McAb针对同一抗原的不同决定簇。该 16种McAb除 M_(22)为 IgA外,余均属 IgG1亚类。     

诱导细胞凋亡的抗hDR5单抗的研究

目的 研制能诱导肿瘤细胞凋亡的抗人DR5单克隆抗体（McAb）。方法 以可溶性人死亡受体（death receptor，DR）5胞外段免疫小鼠，采用杂交瘤技术制备抗人DR5的McAb；MTT方法筛选分泌有细胞毒活性McAb的杂交瘤细胞；亲和层析方法纯化McAb；夹心ELISA法测定McAb亚型；Western blot和斑点ELISA法检测McAb的抗原表位类型；间接ELISA法检测McAb的特异性；流式细胞仪检测FITC-annexinⅤ／PI双色标记的Jurkat细胞的凋亡率；DNA琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞的DNA片段化。结果 获得1株杂交瘤细胞，其分泌的McAb命名为mDRA-6，为IgG1；其抗原表位类型为构象表位；其特异性识别hDR5，与hFas、hDR4等无交叉反应。mDRA-6对Jurkat细胞具有细胞毒作用；经McAb mDRA-6处理后，Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂，并导致Jurkat细胞中的DNA片段化。结论 mDRA-6是一个具有诱导细胞凋亡活性的新的抗人DR5功能性抗体，在以TRAIL／DR5系统进行肿瘤治疗和探讨DR5的功能结构域研究方面具有广泛应用前景。     

抗人IgM重链单克隆抗体的特性分析

本文报道取正常人混合血清纯化IgG,经断链后获得(Fc)5μ片段作为免疫原免疫动物,应用杂交瘤技术获得16株分泌抗人IgG McAb的细胞株。用琼脂双扩散、免疫电泳、ELISA等方法证实所分泌的McAb对人IgM呈高特异性。杂交瘤细胞诱生腹水的抗体效价在双扩散试验中可达1:256,在ELISA中可达10_(-7)。用被动血凝抑制试验及ELISA试验比较了其中4种McAb(M_5)、M_(1 2)、M_(2 3)、M_(2 5))的抗原结合力大小,表明M_(1 2)有较高亲和力。用ELISA固相竞争试验分析。证明该4种McAb针对同一抗原的不同决定簇。该16种McAb除M_(2 2)为IgA外,其余均属IgG1亚类。     

单克隆抗体亲和力的测定及其意义

随着单克隆抗体杂交瘤技术日益广泛的应用,需要对获得的单克隆抗体(McAb)进行系统地分析鉴定,以确定其在各种免疫学试验中的价值。除了对McAb的免疫球蛋白链理化性质、结合抗原的特异性、以及检测抗原时的敏感度进行分析外,测定McAb对特定抗原的结合亲和力(affinity),对选择合适的McAb用于某一特定目的十分重要。     

O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗O1群小川型霍乱弧菌(VibriocholeraeO1serotypeOgawa)特异性单克隆抗体(McAb),为霍乱的早期快速诊断提供有力的抗体工具。方法以灭活的O1群小川型霍乱弧菌免疫Balbc小鼠,通过杂交瘤技术制备针对O1群小川型霍乱弧菌的McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行筛选,分析其亚类,检测其效价及相对亲和力,以间接ELISA和Westernblot鉴定McAb特异性,并进行McAb结合表位分析。结果融合了602株能分泌抗O1群小川型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,最后得到5株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其抗体亚类分别为3株IgG1,1株IgG2b,1株IgG3;腹水效价均达1×10-6;亲和常数在1×108～1×109之间。间接ELISA法及Westernblot证实所获的McAb可与O1群小川型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示除有2株McAb识别相同的抗原表位外,其余均识别不同的抗原表位。结论获得霍乱弧菌O1群小川型特异性McAb,为O1群小川型霍乱早期快速诊断和发病机理的研究提供基础。     

杂交瘤技术中的体外免疫法

杂交瘤技术中的免疫方法有许多不同的免疫程序。常规的免疫方法即体内免疫法(immunisation in vivo),对于那些免疫原性强、来源充分的抗原是适用的,而对于免疫原性弱或能引起动物机体发生免疫抑制的抗原则不适用了。另外常规免疫方法几乎不可能使人或大动物的McAb生产实现。