睾酮对血管内皮细胞衰老的干预作用

目的 观察睾酮对过氧化氢(H2O2)诱导衰老的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响,初步探讨其作用机制.方法 分别用MTT还原法和SA-β-gal细胞化学检测法观察不同浓度睾酮及雄激素受体拮抗剂Flutimide、雌激素受体拮抗剂ICI182,780对HUVECs衰老的干预作用.结果 睾酮在3.0×10-9、3.0×10-8和3.0×10-7 mol/L 3种浓度下均具有延缓H2O2诱导的HUVECs的细胞增殖率降低和SA-β-gal阳性率明显增加的趋势.与3.0×10-8 mol/L睾酮干预组相比,予1.0×10-6 mol/L ICI182,780预处理, HUVECs的细胞增殖率明显降低,SA-β-gal阳性率明显增加.结论 睾酮对H2O2诱导的HUVECs衰老的影响与其剂量有关,生理浓度睾酮对其具有一定的延缓作用,而且这种生物学效应是部分通过转化为雌激素后,作用于雌激素受体实现的.     

睾酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其与雄激素受体水平变化的关系

目的　探讨睾酮及其拮抗剂对雄性大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其与雄激素受体水平变化的关系。方法　采用贴块法培养雄性Sprague Dawley大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,分别用3 [H]胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法和MTT还原法观察不同浓度睾酮及其拮抗剂氟他胺对血管平滑肌细胞增殖的影响 ,用免疫印迹分析 (Westernblot)法检测细胞中雄激素受体水平。结果　 10 -5mol/L、10 -7mol/L、10 -8mol/L睾酮刺激可促进大鼠血管平滑肌细胞增殖 (3 [H]胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定分别为 137 6 3± 9 6 9、133 72± 8 81及 198 89± 13 2 9;MTT还原法测定分别为 14 0 5 4± 13 95、14 1 89± 2 0 86及 2 18 92± 11 2 4 ,与对照组相比 ,P <0 0 1) ;10 -7mol/L睾酮 +10 -5mol/L氟他胺能进一步促进血管平滑肌细胞增殖 (3 [H]胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定为 14 7 91± 11 5 5 ,MTT还原法测定为 175 6 8± 2 6 6 5 ,与对照组相比 ,P <0 0 1;与 10 -7mol/L睾酮相比 ,P <0 0 5 )。 10 -9mol/L～ 10 -5mol/L睾酮刺激组雄激素受体蛋白条带吸光度分别为 14 6 8± 7 6、4 30 9± 2 9 3、184 4± 6 6、14 9 7± 9 3、391 3± 6 0 ;10 -7mol/L睾酮 +10 -5mol/L氟他胺刺激组雄激素受体蛋白条带吸光度为 30 9 6± 2 2 4 ;单     

睾酮通过减少氧化应激干预血管内皮细胞衰老

目的观察睾酮对过氧化氢(H_2O_2)诱导衰老的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响。方法用SA-βgal细胞化学检测法观察不同浓度睾酮及雄激素受体拮抗剂、雌激素受体拮抗剂对H_2O_2诱导的HUVECs衰老的干预作用,用2,7二氯氢化荧光素二酯(H2DCF-DA)染色检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,用免疫印迹分析(Western印迹)法检测细胞中去磷酸化Rb蛋白水平。结果睾酮在3.0×10~(-9)、3.0×10~(-8)、3.0×10~(-7)mol/L等3种浓度下均具有延缓H_2O_2诱导的HUVECs的SA-βgal阳性率明显增加的趋势;与3.0×10~(-8)mol/L睾酮干预组相比,予10~(-6)mol/L ICI182,780预处理,HUVECs的SA-βgal阳性率明显增加,ROS水平增加,去磷酸化Rb蛋白水平明显增加。结论睾酮对H_2O_2诱导的HUVECs衰老的影响与其剂量有关;生理浓度睾酮具有延缓H_2O_2诱导的HUVECs衰老的趋势,其作用可能是通过转化为雌激素,作用于雌激素受体,减少氧化应激和调节去磷酸化Rb蛋白产生。     

过氧化氢上调白细胞介素1β诱导人肺上皮细胞表达环氧合酶2

目的探讨过氧化氢(H2O2)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导人肺上皮细胞(HPEC)环氧合酶2(COX-2)表达的影响.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法和酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定IL-1β、H2O2或二者联合干预后HPEC COX-2 mRNA表达量及前列腺素E2(PGE2)释放量的变化, 以不加任何试剂的细胞为对照组.结果 (1)COX-2 mRNA表达量1、5、10 mg/L 的IL-1β处理组COX-2 mRNA表达量分别为(143.1±7.2)%、(179.9±9.0)%、(190.0±9.5)%,对照组为(32.9±1.7)%,1、5、10 mg/L 的IL-1β处理组与对照组比较差异有显著性(P均<0.05); (2)培养基上清液PGE2浓度5、10 mg/L 的IL-1β处理组培养基上清液PGE2浓度分别为 (20.86±5.23)×10-6 g/L、(31.16±2.64)×10-6 g/L,对照组为(10.49±0.36)×10-6 g/L, 5、10 mg/L 的IL-1β处理组与对照组比较差异有显著性(P<0.05);(3) COX-2 mRNA表达量 0.10、0.25、0.50 mmol/L 的H2O2和IL-1β共处理组COX-2 mRNA表达量分别为 (149.2±7.5)%、(189.6±9.5)%、(239.1±12.0)%, IL-1β单独处理组为(66.1±3.7)%, 对照组为(41.6±2.1)%, 0.10、0.25、0.50 mmol/L 的H2O2和IL-1β共处理组与IL-1β单独处理组比较,差异有显著性 (P<0.05); (4)培养基上清液PGE2浓度0.10、0.25、0.50 mmol/L的H2O2和IL-1β共处理组,培养基上清液PGE2浓度分别为 (27.01±5.16)×10-6 g/L、(32.79±3.01)×10-6 g/L、(41.13±3.41)×10-6 g/L,对照组为(10.49±0.36)×10-6 g/L,0.10、0.25、0.50 mmol/L的H2O2和IL-1β共处理组与对照组比较差异有显著性(P<0.05).0.25、0.50 mmol/L的 H2O2和IL-1β共处理组PGE2浓度均与IL-1β单独处理组[(20.86±5.23)×10-6 g/L]比较差异有显著性 (P<0.05). 结论过氧化氢上调IL-1β对HPEC COX-2的诱导表达,其调节机制可能发生在转录水平.     

整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中的变化

目的观察整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老中的变化。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组。以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力;利用Western印迹法分析AngⅡ诱导HUVECs 0、12、24、36、48 h的整合素αvβ3表达的时间效应关系。结果与对照组相比,10-6 mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(81.80±0.92)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0～G1,证实细胞衰老;AngⅡ呈时间依赖性上调整合素αvβ3表达。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与上调衰老细胞整合素αvβ3表达有关。     

雌二醇对去卵巢小鼠脾细胞雌激素受体表达和辅助性T细胞1和2平衡的影响

目的研究不同浓度雌二醇(E_2)对去卵巢小鼠脾细胞雌激素受体(ER)及辅助性T细胞1(Th1)和辅助性T细胞2(Th2)之间平衡的影响。方法将小鼠脾细胞分为7组:青年组、假手术组、去卵巢对照组及去卵巢+E_2(10~(-11)mol/L、10~(-10)mol/L、10~(-9)mol/L、10~(-8)mol/L)组。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ERα、ERβmRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)水平,以了解Th1与Th2的平衡关系。结果去卵巢对照组ERα、ERβmRNA水平分别为0．68±0．15和0．70±0．17,较青年组(0．95±0．21和0．93±0．1 9)及假手术组(0．98±0．28和0．94±0．20)下降(P＜0．05和P＜0．01);去卵巢+E_2(10~(10)mol/L)组ERα、ERβ的表达分别为0．95±0．19和0．90±0．29,较去卵巢对照组升高(P＜0．05和P＜0．01)。去卵巢对照组IFN-γ、IL-2分别为(360．36±8．64)ng/L和(1485．49±5．01)ng/L,较青年组[(93．46±4．81)ng/L和(704．37±5．32)ng/L]及假手术组[(92．47±2．95)ng/ L和(716．84±1 6．48)ng/L]升高(均为P＜0．01);而去卵巢对照组IL-4水平[(258．11±6．00)ng/L]低于青年组[(269．77±8．44)ng/L]和假手术组[(270．18±10．34)ng/L](均为P＜0．05)。去卵巢+ E_2(10~(10)mol/L)组的IFN-γ、IL-2分别为(94．05±7．17)ng/L和(712．15±13．84)ng/L,低于去卵巢对照组(均为P＜0．01),IL-4为(269．76±2．05)ng/L,高于去卵巢对照组(P＜0．05)。结论不同浓度E_2对去卵巢小鼠脾细胞ERα、ERβ基因表达起不同的调节作用:在生理范围内为正向调节,超生理范围为负向调节。小鼠去卵巢后影响脾细胞Th1和Th2的平衡,表现为Th1漂移。生理浓度的E_2能部分逆转Th1漂移,部分恢复Th1和Th2的平衡。     

高血压小鼠动脉血管平滑肌细胞PI3K/Akt/SREBP1信号活化及表型转化研究

目的 研究固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）在血管紧张素II（Ang II）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）表型转化中的作用。方法 将C57BL/6J小鼠分为对照组、处理组1（150 ng/kg/min Ang II）、处理组2（300 ng/kg/min Ang II）、处理组3（600 ng/kg/min Ang II）和缬沙坦组（600 ng/kg/min Ang II+40 mg/kg/d 缬沙坦）处理28 d。观测小鼠血压和动脉血管变化。实时荧光定量PCR和免疫印迹检测血管SREBP1的表达。将VSMC分为正常组、处理组1 （0.1×10-6 mol/L Ang II）、处理组2（0.5×10-6 mol/L Ang II）、处理组3（1×10-6 mol/L Ang II）、缬沙坦组（1×10-6 mol/L Ang II+1×10-6 mol/L 缬沙坦）、LY294002组（1×10-6 mol/L Ang II+10 ng/mL LY294002）、沉默对照组（1×10-6 mol/L Ang II+scramble siRNA）、沉默组（1×10-6 mol/L Ang II+SREBP1 siRNA）处理,免疫印迹检测细胞SREBP1、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、骨桥蛋白（OPN）的表达。 结果 与对照组比较,Ang II处理组小鼠收缩压和舒张压明显升高,缬沙坦组与处理组比较血压降低。相比于对照组,处理组小鼠血管壁增厚、管腔增大,缬沙坦处理则抑制血管重塑。Ang II处理组小鼠主动脉血管SREBP1 mRNA和蛋白表达水平高于对照组和缬沙坦组。SREBP1、磷酸化Akt、OPN在处理组VSMC细胞中表达水平高于正常组,而在缬沙坦组、LY294002组和沉默组中低于处理组;α-SMA在处理组中表达降低,而在缬沙坦组、LY294002组和沉默组中升高。 结论 Ang II通过活化PI3K/Akt/SREBP1通路调控VSMC表型转化、诱导小鼠动脉血管重塑。     

睾酮对脂多糖损伤的血管内皮细胞功能的影响

目的探讨睾酮对脂多糖损害的血管内皮细胞功能的影响。方法将培养3代的人脐静脉内皮细胞分为7组,对照组细胞不处理;脂多糖组加脂多糖10 mg/L刺激;5个不同浓度睾酮组,在脂多糖刺激同时,分别加入3×10~(10)、3×10~(-9)、3×10~(-8)、3×10~(-6),3×10~(-5)mol/L浓度睾酮(依次为A、B、C、D、E组)。硝酸还原酶法检测NO含量,RT-PCR检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)与单核细胞趋化因子-1(MCP-1)mRNA水平;ELISA法检测MCP-1蛋白。结果与脂多糖组比较,B组、C组及D组NO含量和eNOS mRNA均显著增加(P<0.05,P<0.01);与对照组MCP-1蛋白(374.16±10.2)ng/L比较,A组明显增加[(424.50±11.3)ng/L,P<0.05];随睾酮浓度增加,MCP-1蛋白逐渐减少,E组MCP-1蛋白显著减少[(292.29±12.6)ng/L,P<0.01]。与对照组MCP-1mRNA比较,B组、D组、E组明显减低(P<0.05.P<0.01)。结论生理浓度睾酮通过促进NO合成,减少MCP-1表达、改善脂多糖损害的血管内皮细胞功能而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

睾酮对心肌成纤维细胞表型转化的干预研究

目的 观察氧化应激对心肌成纤维细胞(CF)表型转化的影响以及睾酮的干预作用,初步探讨睾酮抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制.方法 差速贴壁法培养雄性昆明白乳鼠心肌成纤维细胞, 用β-半乳糖苷酶瓤色检测细胞的衰老,MTT法检测细胞增殖能力,采用免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞的典型标记-α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA).结果 H2O2刺激下β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例增加,心肌成纤维细胞增殖率降低,α-SMA免疫化学染色出现明显强阳性;睾酮在3.0×10-9、3.0×10-8和3.0×10-7mol/L 3种浓度下均具有延缓H2O2诱导的以上效应,氟他胺(Flu)能部分阻断睾酮的各种保护作用.结论 睾酮通过受体机制可以逆转H2O2诱导的心脏成纤维细胞表型的转化,这可能是睾酮抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制之一.     

血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移与胞浆蛋白酪氨酸激酶的激活

目的　探讨血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSMCs)迁移与胞浆蛋白酪氨酸激酶 (proteintyrosinekinase,PTK)活性变化的关系。方法　用不同浓度的血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ ,AngⅡ )刺激培养的VSMCs,利用γ 3 2 P同位素参入法测定细胞胞浆PTK活性变化 ;自制改良的BoydenChamber检测VSMCs迁移。结果　基础状态下可观测到很少量的VSMCs迁移。AngⅡ浓度为 1× 10 - 1 0 、1× 10 - 9、1× 10 - 8、1× 10 - 7和 1× 10 - 6mol L时细胞迁移数分别比对照组升高了3 7、4 6、5 9、6 6和 6 3倍 ,存在组间差异 ,峰值浓度为 1× 10 - 7mol L。AngⅡ浓度为 1× 10 - 1 0 ,1× 10 - 9,1× 10 - 8,1× 10 - 7和 1× 10 - 6mol L时胞浆PTK活性分别增高了 1 0、1 7、2 4、3 2和 2 4倍 ,峰值浓度为 1× 10 - 7mol L。统计分析显示AngⅡ诱导的VSMCs迁移与胞浆PTK激活效应显著正相关 (r=0 96 ,P <0 0 1)。 2 5 μmol L、40 μmol L的PTK抑制剂Genistein均可显著地减少AngⅡ诱导的VSMCs迁移 (与单纯 1× 10 - 7mol LAngⅡ组比较 ,P <0 0 1)。结论　激活酪氨酸激酶信号链可能是AngⅡ诱导VSMCs迁移的胞内信号转导机制之一。     

性激素水平及平衡对大鼠血管内皮细胞增殖的调节作用及意义

目的　探讨雌、雄及孕激素分别对雌、雄性大鼠肺血管内皮细胞 (VEC)增殖的影响。方法　采用组织贴块法培养大鼠肺血管内皮细胞 ,应用噻唑蓝 (MTT)比色法检测大鼠VEC的增殖情况。结果　 (1) 3× 10 -8mol/L、3×10 -7mol/L 17 β雌二醇 (E2 )可促进雌鼠肺VEC的增殖 (P <0 .0 1) ;3× 10 -9mol/L、3× 10 -8mol/L、3× 10 -7mol/L 17 βE2 均能促进雄鼠VEC的增殖 (P<0 .0 5 ) ,各组间无明显差异。雌激素受体拮抗剂他莫昔芬可阻断 17 βE2 上述促增殖作用。 (2 ) 3× 10 -8mol/L、3× 10 -7mol/L睾酮 (T)均可明显促进雄鼠VEC的增殖(P <0 .0 5 ) ,但对雌鼠VEC增殖无促进作用。 (3)E2 /孕激素 (P) =3/ 10时能促进雌鼠VEC的增殖 (P<0 .0 5 )。(4)E2 /T =1亦可促进雌鼠VEC增殖 (P<0 .0 5 )。结论　雌激素可促进雌、雄性大鼠VEC的增殖 ,其促增殖作用无性别差异 ,且通过雌激素受体 (ER)介导。雄激素仅可促进雄性大鼠VEC增殖 ,单纯孕激素对雌鼠VEC增殖无明显影响。E2 /T、E2 /P比值的平衡对雌鼠VEC的增殖也起重要作用     

睾酮通过芳香化酶途径抑制人血管内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的基因表达

目的 探讨睾酮对脐静脉内皮细胞生成单核细胞趋化蛋白1的影响与机制,分析睾酮与内皮细胞功能及动脉粥样硬化的关系.方法 脂多糖刺激体外培养的脐静脉内皮细胞,培养液中分别加入不同浓度睾酮(3×10-10、3×10-9、3×10-8、3×10-6 mol/L和3×10-4 mol/L),ELISA实验方法检测细胞上清液单核细胞趋化蛋白1蛋白含量,RT-PCR方法检测单核细胞趋化蛋白1 mRNA相对水平.培养液中加入雄激素受体拮抗剂或芳香化酶抑制剂,重复上述实验.结果 与空白对照组(374.16±10.2)比较,3×10-10 mol/L睾酮组上清液单核细胞趋化蛋白1蛋白含量明显增}Jn(424.50±11.3,P＜0.05),随着睾酮浓度增加,单核细胞趋化蛋白1逐渐减少,3×10-5 mol/L组差异具有统计学意义(292.29±12.6,P＜0.01).与对照组比较,3×10-9,3×10-6,3×10-5 mol/L组单核细胞趋化蛋白1mRNA水平明显降低.雄激素受体拮抗剂可逆转3×10-10mol/L睾酮对单核细胞趋化蛋白1对蛋白生成的影响,芳香化酶抑制剂可削弱睾酮对内皮细胞单核细胞趋化蛋白1基因表达与蛋白合成的抑制作用.结论 睾酮浓度降低,可促进血管内皮细胞发生炎症反应;睾酮达到生理浓度抑制内皮细胞发生炎症反应,这种作用是睾酮通过细胞内芳香化酶转化为雌激素实现的.     

缬沙坦对不同浓度C-反应蛋白诱导的单核细胞白细胞介素-6合成的影响

目的通过研究缬沙坦对C-反应蛋白(CRP)诱导的正常人外周血单核细胞合成白细胞介素-6(IL-6)的影响,观察缬沙坦的抗炎作用。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,应用酶联免疫吸附试验分别观察CRP(15、、10及20 mg/L)刺激单核细胞产生IL-6的时间及剂量效应,其峰值与缬沙坦抑制剂进行比较。结果CRP刺激单核细胞IL-6合成呈时间依赖性和剂量依赖性,20 mg/L CRP与5 mg/L CRP诱导IL-6合成开始的时间是4 h,在24 h达高峰,其峰值分别是(904±77)ng/L和(698±52)ng/L。高浓度缬沙坦(≥10-3mol/L)能抑制20 mg/LCRP诱导的单核细胞IL-6合成,较低浓度缬沙坦(1×10-6mol/L~1×10-3mol/L)能抑制5 mg/L CRP诱导的单核细胞IL-6合成。结论缬沙坦可用于轻度炎症时抗细胞因子治疗。     

辛伐他汀对大鼠血管外膜成纤维细胞增殖迁移和胶原合成的影响

为观察辛伐他汀对血管外膜成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成的影响 ,用组织贴块法培养SD大鼠的血管外膜成纤维细胞 ,以四氮唑蓝比色法测定细胞增殖 ,以Sarkar方法测定血管外膜成纤维细胞迁移距离 ,以3 H 脯氨酸掺入法测定胶原合成。结果发现 ,随着辛伐他汀浓度增高血管外膜成纤维细胞的A4 90值呈递减趋势 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4mol/L组的A4 90值分别为 0 .2 91± 0 .0 11、0 .2 6 5± 0 .0 0 6、0 .2 34± 0 .0 0 8和 0 .2 14± 0 .0 0 6 ,与对照组(0 .335± 0 .0 18)差异显著 (P均 <0 .0 1) ;随着辛伐他汀浓度增高血管外膜成纤维细胞的迁移距离呈递减趋势 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4mol/L组的迁移距离分别为 6 .5± 1.1mm、5 .3± 1.2mm、4 .1± 1.0mm和 2 .9± 0 .9mm ,与对照组 (8.1± 1.8mm)差异显著 (P均 <0 .0 1)。随着辛伐他汀浓度的增高的3 H 脯氨酸掺入率呈递减趋势。 10 -7、10 -6 、10 -5及 10 -4mol/L组血管外膜成纤维细胞的3 H 脯氨酸掺入率分别为 (cpm/ 5 0 0 0细胞 ) 385± 5 1、2 72± 4 8、16 1± 38和 14 1± 36 ,与对照组 (6 5 5± 5 8)差异显著 (P均 <0 .0 1)。此结果提示 ,辛伐他汀可以剂量依赖地抑制血管外膜成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成 ,这可能对改善血管重塑有一     

睾酮对衰老心肌细胞的干预作用及其机制

目的探讨不同剂量睾酮对衰老心肌细胞的干预作用及其可能机制。方法将心肌细胞随机分为正常组、衰老组、1μmol/L睾酮组、100 nmol/L睾酮组、10 nmol/L睾酮组,检测各组心肌细胞周期分布,去磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(RB)表达,细胞内活性氧水平以及细胞线粒体DNA突变率。结果衰老组心肌细胞G_0/G_1期比例较正常组明显升高,而1μmol/L睾酮组、100 nmol/L睾酮组、10 nmol/L睾酮组G_0/G_1期比例较衰老组明显降低(P<0.05)。除10 nmol/L睾酮组对RB表达无明显影响外,睾酮干预可下调去磷酸化RB表达,降低细胞内活性氧水平,降低线粒体DNA突变率(P<0.05,P<0.01)。结论睾酮可抑制小鼠心肌细胞衰老,这一作用部分是通过下调去磷酸化RB表达,降低细胞内活性氧水平,降低线粒体DNA突变率来实现的。     

Amlodipine suppresses Ang-II-induced endothelium dysfunction by diminishing ROCK1 expression

Objective: To investigate the effects and mechanisms of amlodipine therapy on endothelium dysfunction induced by angiotensin-II (Ang-II) stimulation. Methods: Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were used and divided into five groups: Blank control, Ang-II (10^?6?mol/L), levorotatory amlodipine (5?×?10^?6?mol/L)?+?Ang-II (10^?6?mol/L), dextrorotatory amlodipine (5?×?10^?6?mol/L)?+?Ang-II (10^?6?mol/L) and racemic amlodipine (5?×?10^?6?mol/L)?+?Ang-II (10^?6?mol/L) groups. Twenty-four hours later, HUVECs were collected for evaluating endothelial nitric oxide synthase (eNOS), p-eNOS, rho-associated kinase 1 (ROCK1), Bcl-2 and Bax expressions. Nitric oxide (NO) concentration within endothelium was also detected. Flow cytometry was conducted to assess HUVECs apoptosis. Results: With 24 hours of Ang-II stimulation, compared to blank control group, expressions of eNOS and p-eNOS and NO production were significantly reduced in Ang-II group (p?<?0.05), while adding amlodipine-protected HUVECs from dysfunction induced by Ang-II. In contrast, ROCK1 expression was promoted in Ang-II group (p?<?0.05). However, the expression of ROCK1 in each enantiomer of amlodipine group was significantly decreased (p?<?0.05). Compared to levorotatory amlodipine group, the magnitude of ROCK1 diminishment in dextrorotatory amlodipine group was more profound (p?<?0.05). The pro-survival protein (Bcl-2) was significantly upregulated, while the pro-apoptotic protein (Bax) was significantly downregulated in three amlodipine groups compared to Ang-II group. Flow cytometry revealed that amlodipine therapy could protect HUVECs from apoptosis, and no significant difference between three amlodipine groups was observed. Conclusion: Amlodipine could suppress Ang-II-induced endothelial dysfunction and apoptosis through diminishing ROCK1 expression.     

褪黑素对过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤的拮抗作用及其机制

目的:研究不同浓度褪黑素（melatonin,MLT）对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活力的影响,以及对过氧化氢(H2O2)诱导血管内皮细胞损伤的拮抗作用及机制。方法: 分别用不同浓度（125、250、500 μmol/L）的MLT处理体外培养的HUVECs 2 h、4 h和6 h后,用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的MLT对HUVECs存活率的影响。以300 μmol/L的H2O2建立HUVECs损伤模型,用125、250、500 μmol/L的MLT与H2O2（300 μmol/L）共同处理HUVECs 2 h、4 h和6 h后,分别用噻唑蓝（MTT）比色法测细胞的存活率、细胞黏附实验评价细胞黏附能力、酶活性测定法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量和细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活力。用Griess法测定细胞培养液中NO-2的浓度来反映HUVECs的一氧化氮(NO)释放量。结果: 以不同浓度的MLT处理内皮细胞 2 h、4 h和6 h后,内皮细胞的存活率无统计学差异。MLT能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率、黏附能力及细胞内SOD的活力（P<0.01）,增加培养液中NO含量（P<0.01）,降低内皮细胞LDH的释放（P<0.01）。以500 μmol/L的MLT效果最明显。结论: 不同浓度的MLT对HUVECs的存活率均无影响,提示MLT药物浓度的安全范围较大。MLT对H2O2诱导HUVECs损伤的拮抗作用可能与其抗氧化能力和促进内皮细胞合成NO有关。     

Protective effects of trimetazidine against vascular endothelial cell injury induced by oxidation

Objective To explore the protective effects of trimetazidine on vascular endothelial cells injury induced by hydrogen peroxide (H2O2) and its pharmacological mechanisms of anti-oxidation. Methods Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were injured by H2O2. Next, the cells were treated with three different concentrations of trimetazidine (1μmol/L,10μmol/L,100μmol/L, respectively). The viability of cells was detected by methyl thiazoeyl tetrazolium (MTT) assay. In addition, malondialdehyde (MDA) contents, superoxide dismutase (SOD) and secretion of NO were measured. Results Trimetazidine could enhance the viability of the injured HUVECs induced by oxidation, decrease the level of MDA, enhance the SOD activity, and increase the secretion of nitrogen monoxide. These effects were in a certain dose-dependent manner and the difference was significant among the three concentrations (P<0.05). Conclusions Our results suggest that trimetazidine may protect lipid peroxidation and prevent oxidation-induced cellular dysfunction of HUVECs.