腹腔镜胆囊切除术对机体免疫的影响

前瞻性地研究了腹腔镜胆囊切除术（ＬＣ）对机体体液免疫和细胞免疫的影响。１９９６年３￣７月２９例ＬＣ病人于手术前、后１天上午７时检测了周围血ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ（单向扩散法）、ＩｇＥ（酶联免疫法）、Ｔ细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４／ＣＤ８（ＡＰＡＡＰ法及直接免疫荧光法）及ＮＫ细胞活性（酶释放法）。其结果经均数配对ｔ检验，免疫球蛋白、Ｔ细胞亚群及ＮＫ细胞活性均未发现明显差异。初步结果表明ＬＣ     

T淋巴细胞识别自体慢性粒细胞白血病肿瘤细胞抗原的研究

目的：验证慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者体内是否存在细胞毒Ｔ淋巴细胞前体细胞，并鉴定其表型和功能特征。方法：用混合淋巴瘤细胞培养技术，用自体瘤细胞和细胞因子刺激扩增ＣＭＬ患者骨髓和外周血单个核细胞（ＭＮＣ）。结果：ＣＭＬ缓解期和慢性期均存在对自体和异体ＣＭＬ细胞杀伤活性的Ｔ淋巴细胞，这些细胞对自体和异体正常ＭＮＣ没有杀伤活性，对正常ＣＦＵ－ＧＭ无抑制作用。而ＬＡＫ细胞对自体ＣＭＬ细胞无杀伤活性（＜１０％），只对异体ＣＭＬ细胞有杀伤活性。上述Ｔ细胞包括ＣＤ３＋ＣＤ５６＋非主要组织相容性抗原（ＭＨＣ）限制性Ｔ细胞，和ＣＤ３＋ＣＤ６－ＭＨＣ限制性Ｔ细胞。用自体ＣＭＬ细胞刺激可增加Ｔ细胞激活抗原ＣＤ２５和ＨＬＡ－ＤＲ的表达。上述Ｔ细胞对自体ＣＭＬ细胞呈较弱的增殖反应，对异体ＣＭＬ细胞几乎无增殖反应，对载有ＢＣＲ－ＡＢＬ肽的自体缓解期ＥＢ病毒转染Ｂ细胞也无增殖反应。结论：ＣＭＬ细胞可能有共同的肿瘤抗原，后者可以被Ｔ细胞识别，但尚无证据表明是ｐ２１０的融合区序列。     

MTT比色法在LAK和NK细胞毒活性检测中的应用

本文报道ＭＴＴ比色分析法检测了ＬＡＫ和ＮＫ细胞毒活性（简称ＬＡＫ活性，ＮＫ活性）的方法，试验证实效应细胞或靶细胞经ＭＴＴ作用后，细胞数与其产生的甲（Ｆｏｒｍａｚａｎ）产物呈良好的线性正相关，效靶细胞共同孵育４小时再加入ＭＴＴ作用后，用酶联仪对５４０ｎｍ的波长各孔的吸光度，效靶细胞比例在４０：１～４：１之间，其ＬＡＫ，ＮＫ活性随着效靶比例的增高而增强，并存在良好的线性关系。     

人肝肾微粒体1抗原的提取及其抗体的检测

目的　进一步了解自身免疫性肝炎的致病机理。方法　测定肝功能异常患者的肝肾微粒体（ Ｌ Ｋ Ｍ）１ 的自身抗体阳性情况。在重组质粒表达的基础上,用亲和柱层析进一步纯化,采用免疫印迹法检测抗 Ｌ Ｋ Ｍ１ 抗体。结果　在６０５ 例丙氨酸氨基转移酶（ Ａ Ｌ Ｔ） 升高的成人患者组内,检出 Ｌ Ｋ Ｍ１ 自身抗体阳性２４ 例,阳性率为３９７ ％ ,５０ 例 Ａ Ｌ Ｔ升高的小儿患者中检出阳性６ 例,占１２ ％ 。两组比较,差异有非常显著意义（ Ｐ＜ ００１） 。而５０ 名正常人及４０ 例丙型肝炎病毒（ Ｈ Ｃ Ｖ） Ｒ Ｎ Ａ 阳性的丙型肝炎患者中,无一发现 Ｌ Ｋ Ｍ１ 自身抗体阳性。结论　 Ｌ Ｋ Ｍ１ 自身抗体可作为自身免疫性肝炎（ Ａ Ｉ Ｈ）的一项重要检测指标。     

IgH、TCRδ基因重排与急性非淋巴细胞白血病的相关性

目的 探讨初诊急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）患中免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体δ链（ＴＣＲδ）基因重排情况。方法 用聚合酶链反应方法检测ＩｇＨ及ＴＣＲδ基因重排。结果 ３０例患中９例（３０％）发生ＩｇＨ基因重排,５例出现ＴＣＲδ基因重排。结论 ＡＮＬＬ中确定存在系列不保真现象,不仅具有较高的ＩｇＨ重排发生率,还具有ＴＣＲδ重排发生。     

MTT法检测NK和LAK活性的方法学探讨

获取不同来源的脾单个核细胞（人，鼠），用ＭＴＴ法检测了脾细胞的ＮＫ，ＬＡＫ活性，并对实验条件进行了探讨，寻找出了ＭＴＴ法检测ＮＫ，ＬＡＫ活性的最适效靶比（＜５０：１），最佳杀伤时间（ＮＫ２４小时，ＬＡＫ４８小时），探讨了实验的各操作步骤，检测数据的分析，处理，并与同位素法进行了比较，ＭＴＴ法的检测结果与同位素法有良好的一致性，但本方法操作简单，重复性好，且避免了同位素污染，经济，方便，不失为ＮＫ，     

急性髓细胞白血病细胞抗原分化途径的研究

用造血因子体外培养５例正常人和１５例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者的骨髓单个核细胞，同时用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）检测培养０，５，１０天时两组造血干、祖细胞和髓系分化阶段标志抗原（ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ１３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１５）表达的变化，研究ＡＭＬ细胞抗原分化途径和阻滞点。结果显示ＡＭＬ细胞虽然在培养０～５天能沿正常髓系分化途径分化成熟，但培养６～１０天间ＡＭＬ细胞则不能象正常骨髓细胞一样继续分化成熟，表现在ＣＤ３４＋、ＣＤ３８＋、ＣＤ１３＋细胞持续升高。证明ＡＭＬ细胞自身存在独特的调控失常机制     

抗原负载的树突细胞介导的特异性抗慢性粒细胞白血病作用

慢性粒细胞白血病 (ＣＧＬ)来源的树突细胞 (ＤＣ)在体外能较强地激发特异性细胞毒Ｔ细胞产生 ,对自身白血病细胞具有较强的杀伤活性[1 ] 。我们探讨ＣＧＬ细胞冻融抗原(ＣＬＡ)负载的ＤＣ与细胞因子诱导的杀伤细胞 (ＣＩＫ)共同培养能否进一步提高特异性细胞毒Ｔ细胞的杀伤活性。材料和方法1　细胞来源　 12例外周血样本采自ＣＧＬ慢性期初诊患者(ＷＢＣ >5 0× 10 9) ,冻存后作为靶细胞及制备ＣＬＡ。采缓解后患者外周血进行ＤＣ及ＣＩＫ细胞培养。2　主要试剂　ｒｈＩＬ 4 (比活性 13Ｕ ｎｇ)、ｒｈＴＮＦα(比活性 36Ｕ ｎｇ)购自Ｐｒｏ…     

低分子量肝素对大鼠内毒素休克的保护作用

用大鼠内毒素（ＬＰＳ）休克模型，观测其平均动脉压（ＭＡＰ）、血浆肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、组织因子（ＴＦ）、组织因子途径抑制物（ＴＦＰＩ）含量、抗凝血酶Ⅲ（ＡＴⅢ）活性的变化、血白细胞及血小板计数，探讨低分子量肝素（ＬＭＷＨ）对大鼠内毒素休克的作用。结果：ＬＰＳ组大鼠ＭＡＰ呈进行性下降，血浆ＴＮＦ和ＴＦ含量显著升高，ＡＴⅢ活性明显降低，ＴＦＰＩ／ＴＦ比值降低，血白细胞和血小板计数下降，与对照组比较差异显著；而ＬＭＷＨ＋ＬＰＳ组的以上指标变化与对照组比较均无显著性差异。证明ＬＭＷＨ对ＬＰＳ所致的大鼠休克有保护作用     

LAK和CD_3AK细胞的培养上清液对瘤细胞作用观察

ＬＡＫ和ＣＤ_３ＡＫ细胞的培养上清液对瘤细胞作用观察刘军权，陈复兴（江苏省徐州市９７医院检验科，２２１００４）ＬＡＫ细胞在培养扩增时可释放许多细胞因子，ＣＤ３ＡＫ细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂＡｃｔｉｖａｔｅｄＫｉｌｌｅｒＣａｌｌ）的培养上清液中也检测出［１、?..     

蛋白转导结构域介导BCR/ABL对慢性粒细胞白血病患者T细胞的活化作用

目的　研究蛋白转导结构域 (PTD)介导的BCR ABL融合蛋白对慢性粒细胞白血病(CML)患者T细胞的特异性活化作用。方法　利用基因工程技术将PTD基因与CMLb3a2bcr abl基因融合并原核表达 ,纯化的PTD BCR ABL融合蛋白与CML患者外周血单个核细胞 (PBMNC)体外共孵育 ,用流式细胞仪分别检测CD4+ 、CD8+ T细胞的早期活化抗原CD6 9的表达。结果　PTD BCR ABL抗原体外激活CD8+ T细胞的最佳浓度为 10 0 μg ml,时间为 3d。在此刺激条件下 ,15例CML患者中 ,10例表现CD8+ T细胞早期活化 ,CD6 9表达率为 (15 .0 1± 3.75 ) % ;4例表现CD4+ T细胞早期活化 ,CD6 9表达率为 (10 .32± 3.0 8) % ;其中有 3例CD8+ 和CD4+ T细胞同时活化 ;而对照的BCR ABL抗原刺激组无一例表现CD8+ 或CD4 + T细胞活化 ,其CD6 9表达率分别为 (1.36± 0 .31) %和 (1.4 1± 0 .4 3) % ,与PBS空白对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　PTD能将外源性BCR ABL抗原转导入抗原呈递细胞内 ,加工呈递后激活抗原特异性CD8+ 及CD4+ T细胞。     

抗原冲击致敏的树突状细胞介导的特异性体外抗慢性粒细胞白血病细胞作用

为研究慢性粒细胞白血病 (CML)细胞冻融抗原 (CLA)致敏的树突状细胞 (DC)对特异性抗白血病的作用 ,将CML患者外周血单个核细胞来源的DC在体外用CLA致敏 ,再与CML患者的经细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养。应用乳酸脱氢酶释放法观察其对自身CML细胞 ,K5 6 2细胞和Raji细胞的杀伤活性 (CIK +CLA DC组 ) ,与未致敏的DC +CIK(CIK +DC组 ) ,CIK组及CIK +CLA组进行比较。结果表明 ,效靶比为 2 5∶1时细胞杀伤活性最强 ,在该效靶比下 ,4组细胞对自身CML细胞的杀伤活性分别为 (6 8 8± 14 2 ) % ,(5 2 5± 9 4 ) % ,(2 0 7± 7 5 ) %和 (2 4 2± 8 7) %。CIK +CLA DC组杀伤活性最强 ,与其余 3组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;CIK +DC组比CIK组杀伤活性强 (P <0 0 1) ;CIK组与CIK +CLA组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。CIK +CLA DC组在效靶比为 2 5∶1时对自身CML细胞 ,K5 6 2细胞和Raji细胞的杀伤活性分别为 (6 8 8± 14 2 ) % ,(14 6± 6 2 ) %和 (12 7± 10 2 ) % ,与K5 6 2细胞和Raji细胞比较 ,具有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :CIK对CML患者自身细胞具有一定的杀伤活性 ;CIK与CML DC共培养组对自身CML细胞杀伤活性比CIK组强 ;CIK与CLA抗原致敏CML DC共培养组具有最强的杀伤活性。CLA抗原     

人胎盘造血干/祖细胞及淋巴细胞亚群表型的研究

目的　探讨人胎盘组织中是否含有造血干 祖细胞 (HSPC) ,并分析其淋巴细胞亚群的表型特征。方法　将新鲜胎盘制成单个细胞悬液 ,用流式细胞仪分析其有核细胞中HSPC、淋巴细胞及其亚群的表型特征 ,并用流式细胞术 (FCM)或MiniMACS分选胎盘CD34 细胞。结果　胎盘CD34 细胞百分率是脐带血的 8.8倍 ,CD34 CD38- 细胞和CD34 CD38 细胞百分率分别为脐带血的 4 .6倍和 11.9倍 ;FCM分选胎盘CD34 细胞的回收率和纯度分别为 (6 3.0 5± 10 .14 ) %和 (86 .39± 11.2 7) % ;胎盘中的淋巴细胞总数、T细胞 (CD3 CD2 )、B细胞 (CD1 9 )、Th(CD3 CD4 )细胞及Th Ts比值均明显低于脐带血 ,而CD8 CD2 8- T抑制细胞则明显高于脐带血。结论　人胎盘富含HSPC ,在胎儿期具有重要的造血功能 ,可望成为HSPC移植的重要资源。CD8 CD2 8- T抑制细胞可能在胎 母免疫耐受中起重要作用。     

亚高温盆腔区域热疗诱导原位的大鼠浸润性膀胱肿瘤HSP70表达的研究

目的研究亚高温盆腔区域热疗能否诱导原位的大鼠浸润性膀胱肿瘤热休克蛋白70（HSP70）表达增加。方法制备原位的大鼠浸润性膀胱肿瘤动物模型,分为对照组（A组）、单次热疗组（B组）、间隔24h再次热疗组（C组）、间隔72h再次热疗组（D组）。从体外加热大鼠盆腔至41℃,持续1h。用胶体金免疫电镜、免疫组化、蛋白芯片检测肿瘤细胞HSP70表达。结果A组HSP70定位于肿瘤细胞质,B、C、D组HSP70均定位于肿瘤细胞核、线粒体和细胞质。B、C、D组HSP70阳性表达率均高于A组,差异有统计学意义（P〈0．01）,但B、C、D组组间差异无统计学意义（P=0．101）。B、C、D组HSP70表达量高于A组,差异有统计学意义（P〈0．01）;C、D组HSP70表达量均高于B组,差异有统计学意义（P〈0．01）;C组HSP70表达量高于D组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论不同方案的亚高温盆腔区域热疗均能诱导原位的大鼠浸润性膀胱肿瘤发生热休克反应,上调HSP70表达;亚高温盆腔区域热疗是一种温和的加热方法,它不能使全部肿瘤细胞发生热休克反应;HSP70表达率与热疗次数无关,但表达量与热疗次数呈正相关;间隔24h再次热疗的HSP70表达量最高。     

Generation of chronic myelogenous leukemia-specific T cells in cytokine-modified autologous mixed lymphocyte/tumor cell cultures.

Chronic myelogenous leukemia (CML) may be amenable to cell-based adoptive immunotherapy, as suggested by the graft-versus-leukemia effect of bone marrow transplantation and the therapeutic benefit of donor leukocyte infusions. Specific adoptive immunotherapy without bone marrow transplantation might be more effective and less cost-intensive. Professional antigen-presenting cells, the dendritic cells, from patients with CML are derived from the malignant clone and may stimulate antileukemia T-cell responses. Autologous T cells may also be able to recognize tumor antigens on CML cells directly. Here, the authors show that CD4 and CD8 T-cell responses to autologous CML cells can be generated in vitro rapidly and effectively by performing modified autologous mixed lymphocyte/tumor cell cultures (MLTC) in serum-free medium in the presence of cytokines known to support dendritic cell differentiation. MLTC-sensitized T cells secreted large amounts of the type 1 cytokine interferon-gamma, as well as interleukin (IL)-2. However, they also secreted a variety of other cytokines, including the type 2-subtype cytokine IL-13 but not the classic type 2 cytokines IL-4, IL-5, and IL-10. Monoclonal populations of CML-specific CD4 cells could be derived from these lines in limited numbers but showed markedly enhanced reactivity. This suggests that CML-specific T cells are relatively rare in these autologous MTLC-derived sensitized populations, but that their isolation and propagation would yield much more potent antitumor effector cells for use in adoptive immunotherapy without the need for bone marrow transplantation.     

钙离子载体诱导慢性髓系白血病细胞分化为树突状细胞的实验研究

本研究旨在探索钙载体（calcium ionophore,CI）诱导慢性髓性白血病（CML）细胞分化成树突状细胞（DC）的作用,了解诱导产生P210蛋白的情况和刺激自身T细胞产生针对CML细胞的细胞毒作用。用CI和粒－单集落刺激因子（GM—CSF）联合诱导CML病人骨髓来源的单个核细胞,通过倒置显微镜和电子显微镜观察细胞的形态变化和超微结构,用流式细胞仪检测细胞表面分化抗原的变化和变化过程;用Western blot检测CML特异的肿瘤标志物P210蛋白在DC中的表达;通过乳酸脱氢酶（LDH）实验评估CI诱导的CML—DC刺激自身T细胞产生抗CML细胞的细胞毒作用。结果表明：CML细胞经CI和GM—CSF联合诱导96小时后在倒置显微镜和电子显微镜下观察到DC典型的形态结构;流式细胞仪检测显示CD83、CD86、CD80、HLA—DR、CD40等细胞表面分化抗原的表达显著提高;Western blot实验表明,生成的CML—DC有P210蛋白的表达,与未经诱导的CML单个核细胞比较,用CI和GM—CSF联合诱导生成的CML－DC的P210蛋白表达水平降低;LDH实验表明,这些CML—DC刺激的自身T细胞对CML细胞的杀伤率显著高于用CML细胞刺激的自身T细胞。结论：CI和GM—CSF联合能快速诱导CML细胞分化成DC,这些CML—DC表达CML细胞特异的肿瘤标志物P210蛋白,但其表达水平较未经诱导的CML单个核细胞低;CML细胞经诱导生成的CML—DC能够刺激自身T细胞产生抗白血病细胞毒性。     

星形细胞瘤中核因子kB与热休克蛋白的关系

核因子ｋＢ与热休克蛋白７０均是蛋白质，前者活化后进入细胞核调节相关基因表达，后者是根据在体某些应激状态下才合成以维持功能。     

AMLM2a型细胞诱导自体及异体优势增殖TCR Vβ亚家族T细胞的研究

目的：研究急性髓细胞性白血病M2a亚型（AML-M2a）患者外周血白血病细胞反应性T细胞受体V区β链(TCR Vβ)亚家族T细胞体内外优势表达情况及其体外细胞毒性分析。方法：采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养法(MLTC)将AML-M2a细胞与自体或正常人外周血T细胞体外混合培养和扩增,用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)分析MLTC前后患者和正常人T细胞TCR 24个Vβ亚家族的表达情况,同时用四甲基偶氮唑盐(MTT)法对其进行细胞毒性分析。结果：AML-M2a患者和正常人T细胞在MLTC培养后均出现了TCR Vβ亚家族优势表达情况,与淋巴因子激活杀伤细胞(LAK细胞)相比具较高特异性的细胞毒性(P<0.01)。结论：AML-M2a细胞可以诱导自体与异体特异性细胞毒性T细胞(CTL),且其主要为一些优势的TCR Vβ亚家族T细胞。     

从K562细胞中提取热休克蛋白GP96及其对人树突状细胞分化和功能的影响

本研究旨在建立从K5 6 2细胞系中提取热休克蛋白GP96的方法 ,进而研究GP96对人树突状细胞分化和功能的影响。采用蛋白分离提纯技术 ,将K5 6 2细胞裂解 ,经饱和硫酸铵沉淀、亲和层析、离子交换层析后提纯出热休克蛋白GP96 ,用SDS PAGE凝胶电泳和Westernblot方法对其进行鉴定。将提纯的GP96加入从正常人外周血单个核细胞诱导培养的树突状细胞 (dendriticcell,DC)中 ,通过流式细胞术检测DC细胞表型变化 ,用MTT法测定混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)。结果表明 :从 1× 10 1 0 K5 6 2细胞中能提纯出热休克蛋白GP96 6 0 - 80 μg ;加入GP96制备的HSP DC ,其细胞表面标志CD83、CD86和HLA DR的表达率比常规培养DC明显升高 ,CD1a表达率降低 (P <0 .0 5 ) ;HSP DC比常规培养DC具有更强的刺激混合淋巴细胞反应的能力 (P <0 .0 5 )。结论 :从K5 6 2细胞中可以提取出热休克蛋白GP96 ;热休克蛋白GP96可以促进树突状细胞分化成熟 ,使其具有更强的刺激同种异体人T淋巴细胞增殖的能力     

人脐血树突状细胞体外诱导抗白血病细胞毒效应

为了体外观察树突状细胞 (DC)诱导的抗白血病细胞毒效应 ,采用细胞因子组合体外扩增培养脐血单个核细胞 (CBMNC) ,对产生的DC进行形态学观察、免疫表型检测和功能鉴定 ;用DC制备细胞毒T淋巴细胞 (CTL)和51Cr释放法测定CTL的溶靶细胞毒性。结果表明 :CBMNC中T细胞亚群与成人外周血相似 ;CD1a阳性细胞含量极少 ,仅为 (0 .4 1± 0 .0 9) % ;在DC扩增培养过程中 ,DC形态发生明显变化 ,胞体变大 ,形态不规则 ,有的细胞出现毛刺状突起 ,有的细胞出现粗大树根状突起 ;在培养 15天时 ,细胞群中CD1a阳性细胞达 (2 8.4± 3.5 5 ) % ,有 (6 3.6 7± 2 3.33) %的细胞表达CD86 ,(8.7± 1.4 9) %的细胞表达CD83,(32 .5± 1.5 3) %的细胞表达HLA DR ;产生的DC对异基因淋巴细胞具有明显的增殖刺激作用 ;经冻融的HL 6 0全细胞抗原脉冲的DC致敏自体T淋巴细胞产生的CTL对HL 6 0细胞具有特异性细胞毒效应。结论 :本研究中的脐血DC培养体系能产生较高含量的DC ,脐血DC在体外能诱导产生抗白血病细胞毒效应。