阿司匹林对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的保护作用

目的 观察阿司匹林对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡及神经功能恢复的影响。方法选择65只体重为220～250g的Wistar大鼠（雌雄不限），于T10部位置入后路渐进式压迫装置，制作成慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为阿司匹林治疗组（A组，30只）、生理盐水对照组（B组，30只）和假手术组（C组，5只）。应用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记技术，分别于慢性压迫性脊髓损伤后1、3、7、14、28d做行为学评价，并取材对脊髓损伤区进行细胞凋亡检测。结果A、B组均发现细胞凋亡，A组与B组细胞凋亡率相比差异有显著性（P〈0．05），A组与B组行为学评价相比差异有显著性（P〈0．05），神经细胞凋亡情况与运动功能改变具有相关性。结论 阿司匹林对慢性脊髓压迫损伤后所导致的神经细胞凋亡产生抑制作用。     

NGF、BDNF基因修饰嗅鞘细胞脊髓内移植对损伤脊髓细胞的保护作用

目的：观察神经生长因子(nerve growth factor，NGF)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotmphic fac-tor，BDNF)基因修饰的嗅神经鞘细胞(Olfactory ensheathing cells，OECs)移植对损伤脊髓组织的保护作用。方法：将脊髓半横断伤SD大鼠模型，随机分为：NGF、BDNF基因修饰的OECs移植组(A组)、OECs移植组(B组)、损伤对照组(C组)和正常对照组(D组)。24h后每组8只动物取伤段标本，测水离子含量。其余动物第6周和12周每组8只动物爬坡试验，评价下肢运动功能及运动诱发电位(MEP)检测。结果：脊髓损伤(SCI)后组织水肿，Na^ 、Ca^2 离子浓度升高，K^ 、Mg^2 离子浓度降低。NGF、BDNF、基因修饰的OECs脊髓内移植后显著改善这些变化，且使SCI后神经功能有显著恢复。结论：NGF、BDNF基因修饰的OECs脊髓内移植对SCI有保护作用。其机制可能与减少神经细胞离子失衡，改善细胞内环境有关。     

川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型细胞凋亡的影响

川芎嗪是中药川芎的提取物,化学名为四甲基吡嗪,对脑、心、肝、肺、肾等多脏器组织疾病具有抗水肿、抑制细胞凋亡、改善器官功能的作用[1,2].我们以川芎嗪针剂来治疗大鼠急性脊髓损伤(SCI)模型来观察其能否抑制大鼠SCI后神经细胞凋亡,探讨其对SCI后脊髓继发性损害的影响.     

细胞凋亡与脊髓损伤

细胞凋亡是有别于细胞坏死的一种细胞程序性死亡,在脊髓损伤特别是继发性损伤中起着重要的作用。细胞凋亡过程是一个非常复杂的病理过程,有许多因素诱导或参与了细胞凋亡,通过对这些因素的了解,外界可以对这一过程进行阻断,使脊髓原发损伤中幸存的细胞继续存活,从而保留更多的神经功能。     

BDNF在脊髓损伤和神经根损伤中的作用

综述了近年关于脑源性神经营养因子（BDNF）在脊髓损伤和神经根损伤中作用的相关文献,如脊髓损伤中BDNF表达对脊髓运动神经元的影响、BDNF在促进脊髓损伤中轴突再生的作用、BDNF在感觉功能中的作用等。     

胶质细胞源神经生长因子对脊髓损伤后细胞凋亡保护作用的实验研究

目的探讨胶质细胞源神经生长因子(GDNF)对损伤脊髓的修复作用。方法用24只SD大鼠半横断法制作脊髓损伤动物模型；随后随机分为单纯脊髓损伤组(对照组)和脊髓损伤加GDNF组(实验组),应用Hochesst法检测脊髓损伤后细胞凋亡的动态变化并计算凋亡指数；手术后应用行为学(BBB评分)观察损伤脊髓功能恢复情况。结果伤后1、2周实验组凋亡指数(10．86±0．99、14．32±1．27)较对照组(13．85±1．54、16．4l±1．28)降低(P＜0．01)；伤后6周BBB评分实验组(5．30±0．52)明显高于对照组(3．6±0．4),差异有统计学意义(P＜0．01)；伤后6周BBB评分实验组(5．30±0．52)明显高于对照组(3．60±0．41),差异有统计学意义(P＜0．01)。结论GDNF能抑制脊髓损伤后细胞凋亡,对成年大鼠损伤脊髓功能恢复有促进作用。     

红细胞生成素在脊髓损伤中抑制细胞凋亡的作用

红细胞生成素(erythropoietin;EPO)是细胞因子超家族的成员之一,除具有促进祖红细胞的增生、分化和成熟的功能外,还具有抗血管痉挛、抗凋亡和抗炎等多种功能。EPO及其受体不仅存在于造血系统中,还存在于中枢和周围神经系统中,EPO除对多种原因引起的脑损伤具有保护作用外,对急性脊髓损伤及其继发性损伤也具有保护作用。近期研究发现其中最主要的保护机制是抑制细胞的凋亡。目前研究认为,抑制神经元细胞凋亡是EPO短期神经保护作用的基础,而EPO的神经营养作用则具有长期保护效果。但其抑制细胞凋亡的细胞内信号传导途径、对神经细胞的营养作用需要进一步的研究。     

转染SSTR2对胰腺癌细胞的促凋亡作用

目的 通过包含SSTR2基因的重组腺病毒(AdCAG-SSTR2)转染人胰腺癌细胞,观察对胰腺癌细胞肿瘤特性的影响.方法 分别应用空载体、AdCAG-SSTR2转染SSTR2阴性的人胰腺癌细胞株BxPC-3.逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分析检测SSTR2在细胞中的表达.非转染细胞、转染空载体细胞和转染AdCAG.SSTR2细胞直接计数测定细胞生长速度.采用膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭(Annexin V/PI)标记法检测细胞凋亡.RT-PCR检测PCNA、bax和bcl-xl的表达.结果 AdCAG.SSTR2转染胰腺癌细胞后可以检测到SSTR2 mRNA和蛋白的稳定表达,转染AdCAG-SSTR2后细胞生长受到抑制,与对照组差异有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡率较对照组明显升高(P＜0.01);PCNA的表达无明显变化,是对照组的1.04倍;bax的表达明显升高,是对照组的3.18倍;bcl-xl的表达明显降低,是对照组的0.34倍.结论 SSTR2通过诱导胰腺癌细胞凋亡发挥抗肿瘤增殖的作用,其机制与上调bax的表达,下调bcl-xl的表达有关.     

继发性脊髓损伤的细胞凋亡研究现状

细胞凋亡，又称程序性细胞死亡，在继发性脊髓损伤过程中起着关键作用。本文对继发性脊髓损伤细胞凋亡的作用、诱导因素和防治途径作一综述。     

嗅鞘细胞联合VEGF对大鼠损伤脊髓的保护作用

目的探讨嗅球源性嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植联合鞘内重复注射VEGF对损伤脊髓功能恢复的促进作用,以及二者对神经元和神经纤维的协同保护作用。方法取新生2～3 d大鼠嗅球分离纯化培养OECs,于培养9 d用0.25%胰蛋白酶消化后收集细胞。将75只成年雌性Wistar大鼠(体重200～250 g)随机分为5组,A组为假手术组,仅行椎板切除术。B、C、D、E组采用重力打击法制作脊髓损伤模型后,B组术后1 d于脊髓损伤部位分4点共注射DMEM-F12无血清培养基10μL,并每天2次鞘内注射生理盐水10μL,持续1周;C组同上法分别注射DMEM-F12培养基10μL及重组大鼠VEGF165(recombined rat VEGF165,rrVEGF165)25 ng;D组注射含1×105个OECs的DMEM-F12培养基10μL及生理盐水10μL;E组注射含1×105个OECs的DMEM-F12培养基10μL及rrVEGF165 25 ng。术后1 d及术后1～8周每周采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分标准评定大鼠后肢功能恢复情况;术后8周处死实验动物,取材行透射电镜、HE染色观察,并行p75NGF受体(p75 NGF receptor,p75NGFR)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspases-3)、血管性假血友病因子(von Willebrand factor,vWF)免疫组织化学染色,评价损伤脊髓修复情况。结果术后E组大鼠后肢功能恢复较快,8周时BBB评分显著高于其余各组(P<0.05)。透射电镜和HE染色显示:B组有髓神经纤维和神经元受损严重;C、D组损伤轻于B组;E组受损最轻,断端间残存组织较多,有髓神经纤维髓鞘较完整,神经元呈多角形,有少量空泡化的线粒体。免疫组织化学染色示,B、C、D、E组Caspase-3阳性细胞数显著多于A组(P<0.05),B、D组明显多于C、E组(P<0.05),C、E组间差异无统计学意义(P>0.05)。C、E组vWF阳性血管数多于A、B、D组(P<0.05),但C、E组间差异无统计学意义(P>0.05)。D、E组均可见p75NGFR阳性OECs。结论 OECs移植联合鞘内重复注射VEGF可显著促进大鼠脊髓损伤修复,部分恢复损伤神经功能,对受损神经纤维和神经元的变性有保护作用,且二者有协同作用。     

锂剂抑制脊髓损伤后大鼠细胞凋亡的机制研究

目的 :研究锂剂是否通过抑制脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后大鼠神经细胞的凋亡产生神经保护作用。方法:将42只SD雄性大鼠,体重为200~250 g,按随机数字法分成3组:空白对照组(6只)不做手术;生理盐水(NS)组(18只)经腹腔注射NS(40 mg/kg);氯化锂(Licl)组(18只)经腹腔注射Licl(40 mg/kg)。按照Allen法对大鼠建模后,Licl组于脊髓损伤术后15 min内开始腹腔注射Licl溶液(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))2周,NS组在同时间内注入等量的NS作为对照。分别于术后3、7、14 d进行BBB评分,利用免疫组化染色观察Bcl-2和Bax的表达,并采用TUNEL染色观察神经细胞凋亡。结果:BBB评分:空白对照组大鼠为21±0,Licl组与NS组比较,术后7、14 d时Licl组大于NS组(P0.05)。Bcl-2蛋白表达:空白对照组大鼠为0.081±0.003,术后7、14 d两个时间点Bcl-2蛋白表达Licl组分别为0.151±0.003和0.163±0.003,NS组为0.143±0.003和0.154±0.002,Licl组能明显升高其表达(P0.05)。Bax蛋白的表达:空白对照组大鼠为0.071±0.003,术后7、14 d两个时间点Bax蛋白的表达Licl组分别为0.121±0.002和0.106±0.002,NS组为0.126±0.001和0.120±0.002,Licl组可以明显降低其表达(P0.05)。神经细胞凋亡:TUNEL染色显示,空白对照组阳性细胞较少,凋亡指数(AI)为1.98±0.19,术后7、14 d两个时间Licl组分别为13.12±0.69和4.29±1.00,NS组为18.26±0.87和5.48±0.70,Licl组能显著抑制细胞凋亡(P0.05)。结论 :锂剂能够促进SCI后大鼠的神经元细胞内Bcl-2蛋白的表达,抑制神经元内Bax蛋白的表达,从而起到了抑制神经细胞凋亡的作用,这可能是锂剂促进大鼠运动功能恢复的机制之一。     

异丙酚对脊髓缺血再灌注损伤大鼠脊髓细胞凋亡的影响

目的 探讨异丙酚对脊髓缺血再灌注损伤大鼠脊髓细胞凋亡的影响。方法成年雄性清洁级Wiser大鼠60只，体重200～250g，随机分为异丙酚组（A组）和缺血再灌注组（B组），每组30只，采用改进的Zivin等的方法制备脊髓缺血再灌注模型，缺血的同时A组腹腔注射异丙酚100mg/kg，B组注射等量生理盐水。每组分别于再灌注6h、1d、2d、3d、7d时处死6只大鼠。根据Tador评分评价大鼠后肢神经功能损伤情况，电镜下观察脊髓的病理学变化，用免疫组化法测定脊髓cyclinD1阳性细胞表达，原位末端标记法（TUNEL法）检测凋亡细胞，计算凋亡指数。结果A组脊髓损伤及后肢神经功能损伤均较B组轻，A组脊髓神经细胞凋亡指数及cyclinD1表达均低于B组（P〈0．05或0．01）。结论异丙酚对脊髓缺血再灌注损伤有一定的保护作用，其机制与下调脊髓cyclinD1表达，抑制神经细胞亡有关。     

氯化锂对脊髓损伤模型大鼠运动功能的作用和机制

[目的]观察氯化锂对脊髓损伤后BDNF/TrkB信号表达的作用,探讨其对脊髓损伤大鼠肢体运动功能恢复的作用和机制。[方法]36只SD大鼠随机分为假手术组(12例)、对照组(12例)、氯化锂组(12例),假手术组仅行椎板切除术,对照组和氯化锂组采用NYU脊髓打击器建立脊髓损伤模型,术后第1、3、5 d和第7 d行BBB肢体运动功能评分。干预7 d后取材,采用尼氏染色光镜观察神经元形态,免疫荧光定位BDNF阳性细胞,并计数进行半定量分析,Western blot检测BDNF蛋白、TrkB蛋白和p-TrkB蛋白表达。[结果]在脊髓损伤后肢体运动功能方面,自干预后第3 d起,氯化锂组BBB评分高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),至术后第5 d,两组间BBB评分差异更加明显(P<0.01)。尼氏染色提示氯化锂组脊髓损伤后神经元的形态优于对照组。氯化锂组脊髓损伤后脊髓前角运动神经元BDNF阳性细胞数高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);Western blot检测表明氯化锂组的BDNF蛋白和p-TrkB蛋白表达高于对照组,两组间差异有统计学意义(P<0.05),但两组间TrkB蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]氯化锂能促进脊髓损伤对照大鼠肢体运动功能恢复,其机制可能与其促进脊髓损伤后脊髓前角运动神经元分泌BDNF,促进TrkB受体磷酸化,从而上调BDNF/TrkB信号表达,促进脊髓损伤后神经元存活、再生和轴突再生、再髓鞘化有关。     

大鼠脊髓损伤中的细胞凋亡及甲基强的松龙的干预作用

目的：探讨脊髓损伤（SCI）继发损伤机制,研究损伤脊髓细胞的凋亡及其意义,观察甲基强的松龙（MP）对细胞凋亡的影响。方法：使用改良Allen法制作大鼠急性SCI模型,实验分3组,假损伤（脊髓未受打击）,损伤组及MP治疗组,采用HE,荧光Hoechst 33342,TUNEL(末端脱氧核苷转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸生物素缺口末端标记技术）等技术观察SCI后4h,8h,3d,7d,14d,21d及28d时损伤中心及邻近节段脊髓细胞的凋亡,治疗组损伤后30min给予大剂量MP,比较MP治疗组与损伤组脊髓细胞凋亡的变化,同时平行观察大鼠神经学和组织学恢复情况及两组神经丝蛋白（NF）含量的变化。结果：假损伤组各检测方法未见脊髓细胞凋亡,损伤组大鼠急性SCI后1d开始出现脊髓细胞凋亡,3d达高峰,自损伤中心向头尾端递减分布,持续21d,MP治疗组在伤后3d及7d凋亡脊髓细胞较损伤组显著减少,神经学恢复及组织学评分较损伤组有显著性提高,结论：凋亡是SCI后脊髓神经元死亡的一种重要方式,在继发性损伤中起极为重要的作用。MP的治疗作用可能与其干预SCI后细胞凋亡有关。     

脊髓损伤后细胞凋亡基因调控研究进展

脊髓损伤后神经细胞发生凋亡与基因调控密切相关,调控过程有多基因参与,包括半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)家族、血清凋亡相关蛋白Fas及其配体FasL系统、p53基因、细胞凋亡相关基因Bcl-2家族和即刻早基因等,其中caspase家族参与凋亡各个时期,是细胞凋亡途径的核心成分。该文就这些基因在脊髓损伤后神经细胞凋亡调控机制中的作用近期研究进展作一综述。     

虾青素对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的研究虾青素对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法 144只健康成年清洁级SD大鼠按随机数字表法分为实验组、对照组及假手术组3组,每组48只。对照组和实验组采用改良Allen法制作脊髓损伤模型,假手术组仅切开椎板不损伤脊髓。术后即刻实验组给予虾青素(75 mg/kg)灌胃,对照组和假手术组给予等量橄榄油灌胃,每日2次。术后1 d及1、2、3、4周采用BBB评分法评定大鼠运动功能;术后24 h采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;术后6、24、48 h采用TUNEL法检测细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);术后48 h采用干湿重法测定脊髓组织含水量,计算脊髓损伤面积比,透射电镜观察脊髓组织超微结构,并采用Kaptanoglu评分法进行超微结构评分。结果术后各时间点对照组和实验组大鼠BBB评分均显著低于假手术组(P0.05);术后1～4周实验组大鼠BBB评分均显著高于对照组(P0.05)。术后24 h对照组和实验组MDA含量显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P0.05);对照组和实验组SOD活性显著低于假手术组,实验组显著高于对照组(P0.05)。术后各时间点对照组和实验组脊髓组织中AI显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P0.05)。术后48 h,对照组和实验组脊髓组织含水量、脊髓损伤面积比及超微结构评分均显著高于假手术组,实验组均显著低于对照组(P0.05)。结论虾青素能够抑制脊髓损伤后的脂质过氧化,减轻脊髓损伤后细胞凋亡,减轻脊髓水肿,减少脊髓损伤面积,减轻脊髓组织病理学损伤,改善了脊髓损伤大鼠的运动功能,有效地保护了脊髓组织,具有明显的神经保护作用。     

神经营养因子复合剂N6对脊髓损伤神经细胞凋亡的作用

[目的]研究神经营养因子复合剂(N6)对脊髓损伤后神经细胞凋亡的作用。[方法] Wistar大鼠(SPF级) 48只随机分为4组,每组12只。假手术组,只摘除椎板未损伤脊髓;单纯脊髓损伤组(损伤组),采用Allen法经NYU脊髓损伤撞击器制备急性脊髓损伤模型;脊髓损伤+生理盐水治疗组(INS组),制备急性脊髓损伤模型,并给予蛛网膜下腔注射生理盐水治疗;脊髓损伤+N6治疗组(IN6组),制备急性脊髓损伤模型,并给予蛛网膜下腔注射N6治疗。损伤后72 h取材,采用HE染色对脊髓组织进行标记;免疫组化方法检测Caspase 3蛋白的表达;半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定凋亡相关基因Caspase 3、Fas、Bax、Bcl2、P53 mRNA在脊髓组织中的表达变化。[结果]免疫组化结果显示:假手术组脊髓神经细胞很少有Caspase 3表达,假手术组较损伤组和INS组的Caspase 3阳性表达细胞数明显减少(P0.01);与之类似,IN6组较损伤组和INS组Caspase-3阳性表达细胞数也明显减少(P0.01)。RT-PCR检测到Caspase-3、Fas和P53 mRNA水平,IN6组较损伤组和INS组明显降低(P0.05);而Bcl2/Bax值,IN6组较损伤组和INS组明显升高(P0.05)。[结论]神经营养因子复合剂N6能明显抑制脊髓损伤后神经细胞的凋亡。     

脊髓损伤后细胞凋亡的诱导因素研究进展

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)包含脊髓组织原发损伤和一系列组织代谢障碍所致的继发性损伤,其治疗是困扰医学界的难题之一。本文对脊髓损伤细胞凋亡的作用、诱导因素和防治途径作一综述。1细胞凋亡在脊髓损伤中的重要作用脊髓损伤包括原发性脊髓损伤和继发性脊髓损伤,而细胞凋亡是继发性脊髓损伤的重要组成部分。脊髓损伤后出现的脊髓神经细胞死亡不是缘于直接损伤而是细胞凋亡所致[1]。细胞凋亡是一种固有的自然生理过程,它通过清除死亡细胞和代谢产物维持人体各系统组织的稳定,而且这种清除过程不伴有局部炎症是其最大的特点。有研…     

体外转基因成肌细胞移植对大鼠损伤脊髓细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓和腺病毒介导的脑源性神经生长因子（AxCA-BDNF)体外转基因成肌细胞移植对大鼠脊髓细胞凋亡的影响。方法：将动物分为：大鼠脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组（A组）,大鼠脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组（B组）,脊髓半切洞损伤损伤AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（C组）大鼠脊髓半切洞损伤后应用胚胎脊髓和AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（D组）。手术后1、3、7、14、28d应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（TUNEL）以及Bcl-2蛋白表达的测定（免疫组化法）。采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果：A、B、C、D四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞,图像分析发现,各组凋亡细胞核为A＞B＞C＞D;Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D＞C＞B＞A,Bcl-2免疫反应阳性细胞的表达与大鼠后肢功能恢复有同样的变化趋势。结论：大鼠胚胎脊髓和体外转基因成肌细胞移植能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡。     

周细胞在脊髓损伤中的作用

脊髓损伤(SCI)会导致患者自主神经功能、运动和感觉功能丧失,对患者的生活质量产生极大影响[1].SCI的病理变化包括损伤部位缺血、缺氧、神经元受损、瘢痕组织形成和炎性反应等[2].近年来, SCI的病理变化机制研究日趋深入,周细胞作为脊髓微环境的重要组成部位,在SCI的病理过程中发挥着重要作用.SCI发生后神经元轴突遭到破坏,这一过程伴随着血-脊髓屏障的破坏,神经胶质细胞和神经元细胞活化,并分泌多种副产物(包括基质金属蛋白酶、游离氧自由基、趋化因子和细胞因子)[3].各种免疫细胞渗入损伤部位[4],受损区域周围还会产生星形胶质细胞,小胶质细胞同样会被激活[5-6].