高强度聚焦超声联合健择治疗晚期胰腺癌的临床研究

目的探讨高强度聚焦超声（HIFU）联合健择治疗晚期胰腺癌的有效性。方法将46例不能切除的晚期胰腺癌无黄疸病人随机分为：HIFU联合健择组24例，单用健择组22例。全部病例随访2～18个月。Kaplan-Meier法进行生存分析，计算6个月、12个月生存率和中位生存期；采用LogRank法进行组间比较。两组治疗后的疼痛缓解率采用X^2检验。结果HIFU联合健择组的24例病人中位生存时间为10．56个月，6个月和12个月的生存率分别是75．0％和30．9％；而单用健择组的22例病人中位生存时间为6．71个月，6个月和12个月的生存率分别是36．4％和13．0％。两组比较，HIFU联合健择组优于单用健择组，差异有显著性（P〈O．01）。HIFU联合健择组24例病人的疼痛缓解率（疼痛强度降低或消失，止痛剂减少或停止应用）87．5％；而单用健择组22例病人的缓解率为36．4％。两组比较，HIFU联合健择组明显优于单用健择组（P〈O．01）。结论HIFU联合健择组治疗晚期胰腺癌的疗效明显优于单用健择组，因此本方法有望成为治疗晚期胰腺癌的一种有效手段。     

胰腺癌细胞对5-氟尿嘧啶和健择产生获得性耐药的分子生物学机制初探

目的　探索胰腺癌细胞对 5 氟尿嘧啶 ( 5 FU)和健择产生获得性耐药的机制 ,分析这种耐药与凋亡的调控基因———bcl 2家族之间的关系。方法　 5 FU和健择的细胞毒性作用通过磺酰罗丹明B蛋白染色法 (SRB)来检测 ,应用RNA酶保护分析法来检测化疗药物作用前后bcl 2家族mRNA表达水平。结果　 5 FU和健择对 3株胰腺癌细胞均产生了细胞毒性作用 ,5 FU长期作用后 ,Capan 1细胞 5 0 %抑制浓度 (IC50 )上升了 2 .1倍 (P <0 .0 5 )。健择长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 1.8倍 (P <0 .0 5 )。RNA酶保护分析结果提示 ,bcl xL 和mcl 1上调的细胞产生了获得性耐药。结论　化疗药物长期作用后 ,抑凋亡基因bcl xL 和mcl 1上调 ,胰腺癌细胞产生了获得性耐药。阻断这些抑凋亡基因的表达可能提高胰腺癌细胞对 5 FU和健择的敏感性 ,从而产生治疗作用。     

温热联合丝裂毒素,5—氟脲嘧啶对人胃癌细胞的体外效应

温热联合化疗、放疗及免疫治疗有协同抗癌作用，并能减轻对正常组织的副作用。本实验选择丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）及５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）联合温热体外作用于人胃癌细胞株（ＭＧＣ－８０３），检测其作用后活癌细胞百分计数、克隆形成率及存活分数，以观察温热联合ＭＭＣ或５－Ｆｕ的细胞毒作用。结果表明：温热联合ＭＭＣ有协同抗癌作用，且随温度的升高其作用逐渐增强，与单纯加温组比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１）；而温热联合     

胰腺癌细胞对5-Fu和吉西它滨获得性耐药后bcl-xL和mcl-1表达的变化

目的 :探讨胰腺癌细胞对 5 Fu和吉西它滨的获得性耐药后bcl xL 和mcl 1表达的变化。方法 :应用SRB方法检测 5 Fu和吉西它滨对胰腺癌细胞株Panc 1,Mia Paca 2和Capan 1的细胞毒性作用 ,应用Westernblot法来检测bcl xL 和mcl 1的蛋白表达水平。结果 :5 Fu和吉西它滨对 3株胰腺癌细胞均产生了细胞毒性作用 ,5 Fu长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 2 .1倍 (P <0 .0 5 )。吉西它滨长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 1.5倍 (P <0 .0 5 )。 5 Fu或吉西它滨长期作用后 ,产生了获得性耐药的胰腺癌细胞bcl xL 和mcl 1表达水平上调。结论 :5 Fu或吉西它滨长期作用后 ,产生了获得性耐药 ,这种耐药与bcl xL 和mcl 1的过度表达相关。     

白藜芦醇对胰腺癌细胞的抑制作用

目的检测白藜芦醇(resveratrol,Res)体外单独及联合化疗药物对胰腺癌MIAPaCa-2细胞的抑制作用。方法在体外培养条件下观察Res,5-氟脲嘧啶(5-flurouracil,5-FU)和吉西他滨(Gemcitabine,Gem)分别对胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖的影响,然后根据以上抑制结果,选择对MIAPaCa-2细胞抑制率在15%～30%的5-FU或Gem药物浓度,再与不同浓度的Res联合用药。在联合药物处理MIAPaCa-2细胞48 h后,同样用噻唑蓝(methyl thia-zolyl tetrazolium,MTT)法检测联合用药,检测其对细胞增殖的抑制作用。结果Res,5-FU及Gem体外单独用药均能显著抑制MIAPaCa-2细胞的生长增殖,Res联合384.4μmol/L 5-FU或5.0μmol/L Gem后,对MIAPaCa-2细胞增殖的抑制作用显著提高,与单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外Res能显著抑制人胰腺癌MIAPaCa-2细胞的增殖,Res联合5-FU或Gem能显著提高对MIAPaCa-2细胞增殖的抑制作用。     

5-氟脲嘧啶对胰腺外分泌的影响

目的 探讨5-氟脲嘧啶(5-FU)对人胰腺外分泌功能的影响。方法 通过8例胰十二肠切除术后患者胰管内置管获得的纯胰液观察5-FU对人胰腺外分泌功能的作用。术后第10天开始，静脉缓慢滴注5-FU500mg／d，连续3天。检测5-FU使用前和使用后1d、2d及3d胰液中淀粉酶、pH、HCO3^-、Na^ 、K^ 、Cl^-、Ca^2 及Mg^2 水平，并记录胰液量变化。结果使用5-FU前、后胰液量及胰液中淀粉酶、pH、HCO3^-、Na^ 、K^ 、Cl^—、Ca^2 及Mg^2 水平均无显著变化。结论 短期内使用5—FU对胰腺外分泌功能未见明显影响，5-FU是否通过抑制胰酶的合成治疗急性胰腺炎有待进一步探讨。     

胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药机制的研究

目的探讨胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的可能机制。方法以体外诱导建立的人胰腺癌耐药株SW1990/Fu为模型,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学(ICC)方法测定耐药相关基因在SW1990/Fu产生获得性耐药前后的变化;罗丹明外排实验检测SW1990/Fu细胞膜上的P-gp泵功能。结果RT-PCR结果显示多药耐药基因1(MDR)和肺耐药相关蛋白基因(LRP)在SW1990/Fu中的表达率分别为0.97±0.23和0.95±0.34,而在SW1990中的表达率仅分别为0.67±0.19和0.53±0.16,两者差异有统计学意义(P<0.05);多药耐药相关基因(MRP)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)在2株细胞中的表达水平无明显变化。ICC与RT-PCR的结果一致。在罗丹明浓度为0.5mg/L时,只检测到(11.4±2.5)%的SW1990/Fu细胞内有荧光染科积蓄,在亲本细胞中罗丹明阳性细胞为(57.9±5.4)%,而在P-gp阴性的HL60细胞中,(99.5±3.3)%的细胞内存在罗丹明的积聚。当罗丹明浓度增加时,其在SW1990/Fu细胞内的积聚也明显增加。结论耐药基因MDR1和LRP表达增强可能是胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的主要机制。     

外泌体微小RNAs介导的胰腺癌耐药机制研究进展

近年来,多项研究结果显示：微小RNAs（miRNAs）在胰腺组织、胰腺癌细胞和胰腺癌耐药细胞中具有差异性表达,且miRNAs可通过对下游靶基因的作用改变胰腺癌细胞对化疗药物敏感性。肿瘤的耐药分子机制错综复杂,在胰腺癌耐药中,miRNAs可以通过影响胰腺癌细胞中上皮-间质转化、DNA的损伤和修复、下游信号通路、非编码RN...     

胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3/ADM的建立及耐药机制的初步探讨

目的 构建胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3/ADM,通过动态监测诱导耐药过程,探讨其耐药的可能机制.方法 逐步增加阿霉素浓度对BxPC-3细胞进行诱导,在不同的阿霉素诱导浓度,MTT法检测细胞对多种化疗药物的耐药指数,RT-PCR和Western印迹法检测细胞MDR1和MRP mRNA和蛋白的表达.结果 成功构建多药耐药细胞株BxPC-3/ADM;在0.05 μg/ml至8 μg/ml阿霉素诱导浓度,细胞对5-Fu、MMC和Gem的耐药指数无明显增加;在16 μg/ml浓度3种化疗药物的耐药指数有较明显上升,同时伴有MDR1 mRNA表达的明显增加;至32 μg/ml 5-Fu和Gem的耐药指数未再有继续上升,而MMC的耐药指数则继续上升,同时MDR1 mRNA表达未再增加,而MRP mRNA表达则明显增加.Western印迹实验显示MDR1和MRP蛋白表达变化与mRNA表达变化趋势一致.结论 MDR1基因在诱导早期的耐药中起主导作用,在后期则和MRP基因协同发挥作用.     

人胰腺癌细胞中5-LOX基因的表达及其抑制剂的作用

目的:探讨人胰腺癌细胞中5-LOX的表达及其抑制剂的作用.方法:应用RT-PCR、免疫细胞化学技术和图像分析检测5-LOX在人胰腺癌细胞Capan-2中的表达水平及抑制剂MK886对5-LOX基因表达水平的影响.结果:MK886能有效降低5-LOXmRNA的表达,MK886作用组5-LOX蛋白低表达或不表达,对照组均呈高表达.结论:5-LOX抑制剂能有效阻止5-LOXmRNA的翻译功能,使其蛋白产物表达下调.     

5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷联合吉西他滨对胰腺癌细胞株原钙黏蛋白8基因表达的影响

目的 研究5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-Aza-CdR)对胰腺癌细胞株Capan-2原钙黏蛋白8(protocadherin 8,PCDH8)基因DNA启动子甲基化的转录调控,以及联合吉西他滨对癌细胞生长抑制与凋亡的影响.方法 采用MTT法、流式细胞术检测5-Aza-CdR及联合吉西他滨对Capan-2细胞的抑制率与凋亡率.应用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR和Western blot的方法检测不同浓度5-Aza-CdR处理细胞前后PCDH8基因的甲基化状态、mRNA表达水平和蛋白表达水平.结果 5-Aza-CdR能使胰腺癌细胞Capan-2增长速度减慢,呈浓度依赖性,联合吉西他滨显著抑制细胞生长;5-Aza-CdR联合吉西他滨与单药组、对照组相比,可显著诱导细胞凋亡.不同浓度的5-Aza-CdR可逆转PCDH8基因在胰腺癌细胞Capan-2的甲基化,恢复mRNA表达水平和蛋白表达水平,并呈一定的浓度正相关.结论 5-Aza-CdR可有效逆转PCDH8基因在胰腺癌细胞株Capan-2的高甲基化状态,解除DNA高甲基化导致的基因沉默,重新诱导基因mRNA转录和蛋白表达,同时可抑制胰腺癌细胞生长,与吉西他滨有协同抗肿瘤作用.     

人类胰腺癌Ki—67基因表达的研究

目的 应用原位杂交结合免疫组化分析胰腺癌Ｋｉ－６７基因的ｍＲＮＡ转录和蛋白翻译,研究该基因结构和功能表达的关系。方法 胰腺癌４０例,正常胰腺及良性病变９例;扁桃体组织及Ｈｅｌａ细胞作为阳性对照。通过地高辛标记的Ｋｉ－６７ｃＲＮＡ探针原位杂交和Ｋｉ－６７等效单克隆抗体的免疫组化分析该基因的ｍＲＮＡ转录和蛋白翻译。结果正常胰腺及良性病变Ｋｉ－６７ 指数均小于２０％;胰腺主分化腺癌、低分化腺癌各２０例,     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古菌素A对胰腺癌Panc-1细胞系TFPI-2基因甲基化水平及表达的影响

目的 探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)及组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对胰腺癌Panc-1细胞系中TFPI-2基因甲基化水平及基因表达的影响.方法 单独或联合应用5-Aza-dC及TSA处理Panc-1细胞,应用甲基化特异性聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应及蛋白印迹实验检测药物处理前后Panc-1细胞TFPI-2基因启动子区甲基化状态、mRNA及蛋白表达情况.结果 经5-Aza-dC单独处理或5-Aza-dC及TSA联合处理Panc-1细胞后,TFPI-2基因启动子区高甲基化状态得到逆转,表现为非甲基化,原本不表达的TFPI-2基因mRNA及蛋白重新表达,两组作用效果相似.经TSA单独处理的Panc-1细胞TFPI-2基因启动子区仍为异常高甲基化状态,原本不表达的TFPI-2基因未见重新表达.结论 胰腺癌Panc-1细胞系中TFPI-2基因启动子区高甲基化可能是导致该基因失活的主要原因,5-Aza-dC单独作用或与TSA联合作用均能逆转TFPI-2基因的高甲基化状态,使该基因重新表达,TSA对受抑制的TFPI-2基因重新表达作用不明显.     

抗表皮生长因子受体单链抗体联合放化疗治疗裸鼠移植胰腺癌的研究

目的 针对表皮生长因子受体(EGFR)的腺相关病毒(AAV)介导的靶向治疗作为一种新的治疗方式具有广阔的前景.实验通过对胰腺癌细胞株Aspc-1进行抗EGFR抗体的重组腺相关病毒(rAAV-anti EGFR)治疗及联合放疗、吉西他滨(简称化疗)等综合治疗手段,探索rAAV介导抗EGFR单链抗体对胰腺癌治疗的效果.方法 分别通过单纯化疗、单纯放疗、rAAV-anti EGFR治疗,rAAV-anti EGFR治疗联合化疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗干预胰腺癌细胞株Aspc-1及裸鼠移植瘤,检测细胞或移植瘤的凋亡率以及移植瘤生长情况.结果 体外实验提示,以上处理方式使肿瘤细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗细胞凋亡率要高于rAAV-anti EGFR治疗、单纯放疗或单纯化疗(P＜0.05).体内实验提示,rAAV-anti EGFR治疗后,肿瘤生长明显受到抑制(P＜0.05),且与放疗和化疗均有协同作用;rAAV-anti EGFR治疗后,组织中凋亡相关Caspase-3活性蛋白表达细胞数要显著高于对照组(P＜0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放疗或化疗其凋亡蛋白表达细胞数要多于单纯治疗组(P＜0.05).结论 rAAV-anti EGFR治疗在体内外均有良好的抗胰腺癌效应,其联合放化疗疗效优于单纯放疗或单纯化疗,且该病毒载体与化疗及放疗具有协同作用.     

二氢青蒿素联合吉西他宾治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨二氢青蒿素联合吉西他宾治疗胰腺癌的作用及其机制.方法 培养胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1,通过MTT法检测二氢青蒿素联合吉西他宾对胰腺癌细胞生长的抑制作用;通过Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况;通过EMSA检测NF-κB与DNA结合活性的改变;通过Western blot法检测细胞中NF-κB/P65和NF-κB下游增殖、凋亡相关蛋白的表达情况.裸鼠皮下注射BxPC-3细胞建立胰腺癌裸鼠移植瘤,监测给药后肿瘤体积的变化,TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 二氢青蒿素联合吉西他宾对BxPC-3和Panc-1两株细胞的增殖抑制率可达(81.1±3.9)%和(76.5±3.3)%;凋亡率可达(53.6±3.8)%和(48.3±4.3)%,与吉西他宾组[(24.8±2.9)%和(21.8±3.5)%]相比,差异有统计学意义(P<0.01).在裸鼠体内,各治疗组均可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长;联合组肿瘤的体积和增殖凋亡指数分别为(262±37)mm~3和(50±4)%,与吉西他宾组[(384±56)mm~3和(25±3)%]相比,差异有统计学意义(P<0.05).EMSA和Western blot结果显示,二氢青蒿素能抑制胰腺癌细胞NF-κB与DNA结合活性,联合组较吉西他宾组NF-κB活性有显著的降低;二氢青蒿素下调BxPC-3和Pane-1细胞核P65的表达,联合组较对照组显著下调NF-κB靶基因蛋白Cyclin D1、Bcl-xL、Bel-2的表达,上调Bax的表达,降低Bel-2/Bax的比例,进一步增加Caspase-3的活化.结论 二氢青蒿素抑制吉西他宾所诱导激活的NF-κB的活性,下调NF-κB下游靶基因蛋白的表达可能是其增敏吉西他宾抗胰腺癌作用的分子机制.     

乳香胶联合吉西他滨对人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及机制初探

目的 研究乳香胶联合吉西他滨对体内、外培养的人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及相关机制.方法 四唑氮蓝还原法检测BxPc-3细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡(PI单染色法).Western blot检测不同浓度的乳香胶联合吉西他滨(两药联合组)用药后BxPc-3细胞内测核转录因子-κB(NF-κB) p65亚基以及NF-κB抑制蛋白IkB、凋亡调节蛋白Bcl 2和Bax的表达水平的变化.建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,监测移植瘤体积变化.结果 两药联合组选择乳香胶(40 mg/L)和吉西他滨(10 mg/L)处理72 h后,抑制人胰腺癌细胞株BxPc-3细胞的作用显著优于单独使用(P＜0.01);凋亡比例(45.13±4.01)明显高于乳香胶组或吉西他滨组(P＜0.01)和对照组(5.07±1.37,P＜0.01);乳香胶或两药联合可抑制NF-κB的活性;对人胰腺癌BxPc-3细胞作用48 h后,Bcl-2的蛋白表达明显低于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).而IkB和Bax蛋白的表达显著高于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).与对照组比较,乳香胶或两药联合组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长(P＜0.05).结论 乳香胶可通过抑制NF-κB的活性,增加IkB和Bax蛋白表达、抑制Bcl-2的蛋白表达,发挥抗肿瘤作用,并增强吉西他滨的药效.     

转染人高迁移率族蛋白1反义基因对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨反义高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法　应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达载体pcDNA3 1/anti HMGB1,用脂质体法将其导入人胰腺癌细胞PANC 1中,经G4 18筛选获得可稳定表达反义HMGB1的人胰腺癌细胞克隆,通过逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法和噻唑蓝比色法检测转染4 8h后胰腺癌细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况。结果　获得了pcDNA3 1/anti HMGB1真核表达质粒,pcDNA3 1/anti HMGB1转染可使PANC 1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低(P <0 .0 1)、肿瘤细胞增殖能力明显受到抑制(P <0. 0 1) ,并出现细胞周期G1期阻滞、凋亡细胞百分数增加。结论　反义HMGB1基因的表达能有效抑制胰腺癌细胞的体外增殖并促进细胞凋亡。     

胰腺癌组织中神经激肽3受体的表达及组织学定位

目的研究神经激肽3受体(NK3R)在胰腺癌组织中mRNA和蛋白水平的表达,以及该受体在胰腺癌中的组织学定位。方法应用逆转录聚合酶链反应技术检测正常胰腺和胰腺癌组织中NK3R的mRNA水平,应用Westernblot检测其蛋白的表达水平,应用免疫组织化学技术进行组织学定位。结果与正常胰腺相比,胰腺癌组织中NK3RmRNA过度表达,胰腺癌组织中NK3R蛋白也过度表达,正常胰腺组织NK3R蛋白表达为11±05,胰腺癌组织为146±36,P<001。免疫组织化学检查结果显示正常胰腺中有较弱的NK3R表达,胰腺癌的导管细胞、神经纤维、炎性细胞中均有较强的NK3R表达。结论胰腺癌组织中NK3R的表达水平明显上升。     

胰腺癌患者循环microRNA及吉西他滨耐药的胰腺癌患者特异性microRNA表达谱分析

目的 检测胰腺癌患者血浆中表达差异的microRNA及对吉西他滨耐药的胰腺癌患者血浆中表达差异的microRNA,为寻找新的生物标志物用于胰腺癌的无创性诊断及吉西他滨的疗效预测提供新的思路.方法 采用qPCR方法检测并筛选出胰腺癌患者血浆中相比于健康人表达差异明显的microRNA,以及对吉西他滨耐药的胰腺癌患者血浆中相比于对吉西他滨不耐药的胰腺癌患者表达差异明显的microR-NA.结果 胰腺癌患者相较于健康人存在表达差异的microRNA有28个,对吉西他滨耐药的胰腺癌患者相较于不耐药患者存在表达差异的microRNA有28个.结论 胰腺癌患者血浆中microRNA表达与正常人群有较显著的差异,胰腺癌患者中对吉西他滨耐药和不耐药者血浆microRNA也存在较显著差异,其有可能作为胰腺癌的诊断及疗效预测提供潜在的生物标志物.