喉鳞状细胞癌中脆性组氨酸三联体基因启动子甲基化及其蛋白的表达

目的：探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因启动子甲基化状态及与FHIT蛋白表达的关系。方法：采用PCR-based酶切甲基化及免疫组织化学SP技术,检测41例LSCC及其相对应的喉正常粘膜(NSE)中FHIT基因启动子甲基化状态及其蛋白表达。结果：在NSE组中,无一例出现FHIT基因启动子甲基化,而在LSCC组中,有24．4％(10／41)出现甲基化,且甲基化状态与病理分级及淋巴结转移有关(P＜O．01);NSE组及LSCC组FHIT蛋白阳性率分别为100．0％(41／41)和46．3％(19／41),且与肿瘤TNM分期及淋巴结转移有关(P＜O．05);FHIT基因启动子甲基化与蛋白阳性表达有明显的相关性(P＜O．01)。结论：FHIT基因启动子甲基化是其基因失活的重要机制之一,在LSCC的发生、发展中起重要作用。     

细胞周期蛋白G2在喉癌中的表达

目的探讨细胞周期蛋白G2(Cyclin G2)的表达与喉鳞状细胞癌的关系。方法收集2000年1月～2000年12月共81例喉鳞状细胞癌患者的临床资料和石蜡块,用免疫组化方法检测肿瘤组织、喉癌旁黏膜Cyclin G2表达:并分析Cyclin G2的表达与喉癌患者年龄、性别、临床分期、肿瘤分化程度以及预后等的关系。统计学分析采用SPSS12.0软件。结果Cyclin G2在喉癌中阳性表达率为67.9%,并随分化程度的降低而降低,有、无淋巴结转移者阳性率分别为38.4%和73.5%,差异均具有显著性(P>0.05)。结论Cyclin G2表达强度与喉癌的恶性程度及发展趋势明显负相关,可作为预测喉癌预后的生物学指标之一。     

喉癌中凋亡抑制基因Livin的表达

目的探讨凋亡抑制基因Livin在喉癌组织中的表达及其与喉癌临床病理的相关性。方法采用免疫组织化学染色方法检测了50例喉癌组织,45例癌旁组织,10例喉乳头状瘤及16例声带息肉中Livin蛋白的表达情况。RT-PCR方法检测41喉癌组织,41例癌旁组织和11声带息肉组织中Livin mRNA的表达情况。结果 RT-PCR检测结果显示Livin mRNA在喉癌组织中相对表达量明显高于癌旁组织及声带息肉组织（P〈0.01）。免疫组织化学检测结果显示Livin蛋白在喉癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织、喉乳头状瘤及声带息肉（P〈0.05）。Livin蛋白表达与肿瘤的病理分级有关（P〈0.05）,而与患者年龄、肿瘤部位、临床分期、淋巴结转移无关（P〉0.05）。结论 Livin在喉癌组织中异常高表达,提示在喉癌的发生、发展中可能起重要作用。     

喉癌细胞系中RASSF1A基因启动子去甲基化与基因表达的研究

目的:探讨甲基化转移酶抑制剂[5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)]及组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂[曲古抑菌素A (TSA)]对喉癌细胞系中抑癌基因RASSF1A甲基化水平及基因表达的影响.方法:5-Aza-dC及TSA处理体外培养的Hep-2细胞,应用Realtime PCR方法及甲基化特异性PCR(MSP)方法分别检测药物干预前后细胞中抑癌基因RASSF1A表达及甲基化情况.结果:①在Hep-2细胞中未经药物干预前抑癌基因RASSF1A表现为甲基化,抑癌基因RASSF1A弱表达.②在5-Aza-dC及TSA的作用下,Hep-2细胞系中RASSF1A基因的甲基化状态得到了逆转.其中5-Aza-dC及TSA联合应用效果与单独应用5-Aza-dC效果相似,单独应用TSA无明显效果.③在5-Aza-dC及TSA的作用下,Hep-2细胞系中RASSF1A基因表达上调,其中5-Aza-dC作用较TSA作用强,2种药物联合应用起协同增效作用.结论:喉癌细胞系中抑癌基因RASSF1A启动子甲基化可能是导致其基因失活的主要原因但并不是惟一原因.应用5-Aza-dC及TSA能够通过逆转抑癌基因RASSF1A的DNA甲基化水平和组蛋白去乙酰化水平从而使其表达得到了增强.     

喉癌前病变100例分析

对１００例喉癌前病变进行临床及病理学分析。发现喉癌前病变的发病和过度使用嗓音及长期大量吸烟有密切关系。其病理表现为上皮典型增生及轻、中、重度非典型增生（亦称异型）。扫描电镜观察到随喉粘膜上皮细胞异型程度的增加，细胞表面形状、大小、边缘、细胞间连接等有显著不同。１００例中有２０例转为恶性。其中，慢性肥厚性喉炎的恶变率为１１．６％，喉角化症为１９％，喉乳头状瘤为３６％。临床表现及病理均证明为喉息肉的病例也有恶性变者，故临床上应加以警惕。     

p16蛋白在喉癌前期病变中的表达及意义

目的：通过喉粘膜上皮中p16表达的实验,讨论p19蛋白在喉癌发生过程中的作用。方法：用S－P法检测106例喉癌前期病变标本中p16蛋白的表达,并设30例喉正常上皮和32例喉鳞癌作对照。结果：p16蛋白在喉正常粘膜上皮中阳性率为86．67％;喉癌前期病变中为75．47％,喉鳞癌中为37．5％,两者差异有显著性（P＜0．05）,喉癌前期病变随病变程度加重p16阳性率呈下降趋势,单纯增生组（83．33％）与重度不典型增生组（55．56％）差异有非常显著性（P＜0．01）。结论：p16基因表达的缺失与喉癌的发生有关;p16蛋白的表达可作为判断喉癌前期病变向恶性肿瘤化危险性的一个参考指标。     

X-连锁凋亡抑制蛋白在顺铂诱导的喉癌Hep-2细胞凋亡中的作用

目的 探讨X-连锁凋亡抑制蛋白(x-linked inhibitor of apoptpsis protein,XIAP)在顺铂诱导喉癌Hep-2细胞凋亡中的作用和机制.方法 体外培养的Hep-2细胞,选择不同浓度的顺铂以不同时间作用于培养的细胞.利用结晶紫法、RT-PCR、流式细胞分析技术研究不同时间、浓度下细胞凋亡的发生率和XIAP、mRNA的表达及两者的相互关系.结果 正常状态下,Hep-2细胞为贴壁细胞,凋亡率低.顺铂作用后细胞凋亡率和XIAP表达水平发生明显变化,表现为XIAP表达水平的下降伴Hep-2细胞凋亡率的升高.不同药物浓度及不同时间点间相比较,细胞抑制率、XIAP的表达及凋亡率差异均有显著性意义.RT-PCR终产物分析表明,随着加药浓度的增加及药物作用时间的延长,XIAP的mRNA水平逐渐降低.相关性分析显示细胞抑制率、凋亡率与药物浓度及药物的作用时间成正相关,而XIAP的表达与药物浓度及作用时间呈负相关,XIAP的表达与调亡率呈负相关.结论 顺铂引起细胞死亡的主要方式是细胞凋亡.XIAP及mRNA在喉癌Hep2细胞中的表达与顺铂的作用浓度及作用时间有双相依赖性.通过诱发XIAP表达水平的降低使细胞的凋亡率升高是顺铂杀伤肿瘤的作用机制之一.     

抑癌基因PTEN和血管内皮生长因子在喉癌中的表达及临床意义

目的 探讨抑癌基因PTEN（phosphates and tension homolog deleted on chromosome ten）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在喉鳞状细胞癌（Iaryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测10例远处癌旁组织（距癌组织1.5cm）,20例癌旁组织（距癌组织0.5 cm）和60例LSCC组织中PTEN、VEGF基因的表达情况.结果 PTEN在LSCC、癌旁组织及远处癌旁组织中阳性表达率分别为70.0%、95.0%、100.0%,有显著性差异（P＜0.01）.LSCC组织中PTEN蛋白表达在TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高中分化癌、无转移、生存率＞3年的患者中表达水平较Ⅲ～Ⅳ期、低分化和有转移、生存率＜3年的患者高,有显著性差异（P＜0.05）.VEGF在LSCC、癌旁喉组织及远处癌旁组织中阳性表达率分别为73.3%、55.0%、20.0%,有显著性差异（P＜0.05）.LSCC组织中VEGF蛋白表达在TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高中分化癌、无转移、生存率＞3年的患者中表达水平较Ⅲ～Ⅳ期、低分化和有转移、生存率＜3年的患者低,差异有显著性（P＜0.05）.PTEN、VEGF蛋白表达与年龄、性别、肿瘤部位无关（P＜0.05）.Spearman相关分析发现PTEN与VEGF表达呈负相关（γ=-03948,P=0.0018）结论 PTEN、VEGF的异常表达可能与LSCC的发生、发展和预后有关.     

细胞凋亡在喉鳞状细胞癌发生发展中的变化

目的探讨细胞凋亡在喉鳞状细胞癌(LSCC)发生发展中的变化。方法应用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测了40例LSCC组织,20例喉不典型增生组织(LAH)和20例声带息肉组织中细胞凋亡指数(AI),并用免疫组织化学SP法检测了这些组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果在声带息肉、不典型增生和LSCC标本中,AI分别为12.07±0.21,5.19±0.36和0.32±0.48;PCNA标记指数(P-LI)分别为23.66±1.78,38.19±1.95和67.50±1.33。结论细胞凋亡的抑制与LSCC的发生发展密切相关,AI与P-LI可作为判断LSCC生物学特性和预后的重要指标。     

凋亡抑制蛋白Livin在喉癌中的表达和意义

目的研究凋亡抑制蛋白Livin在喉癌周黏膜、喉不典型增生和喉鳞状细胞癌(简称喉癌)组织中的表达以及与喉癌各临床因素的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测10例喉癌周黏膜,12例喉不典型增生和61例喉癌中Livin蛋白的表达,分析其与喉癌发生、发展及预后的关系。结果Livin在喉癌中阳性表达率为67.21%(41/61);在喉不典型增生中为25% (3/12);在喉癌周黏膜中表达阴性。在喉癌组中Livin高表达与临床分期、T分期、病理分化程度呈显著相关(P<0.05);与年龄、部位、淋巴转移无显著相关(P>0.05),随访发现该蛋白的表达与患者5年生存率无显著相关(P>0.05)。结论凋亡抑制蛋白Livin在喉癌的发生、发展中起着重要作用,尚不能作为判断患者预后的一项指标,该基因有望成为喉癌基因治疗的一个新的有效的靶点。     

CD105标记微血管密度与喉癌临床病理特征相关性

目的探讨喉鳞状细胞癌血管生成与各临床病理特征的关系。方法应用CD105单克隆抗体进行免疫组化SABC法检测54例喉癌组织中微血管密度(intratumormicrovesseldensity,IMVD)。结果54例喉癌组织中IMVD为8.854.50,T3和T4级喉癌组织IMVD(10.734.33)明显高于T1和T2级(6.803.68),其差异有显著性意义(P<0.01)。颈淋巴结转移组IMVD(12.873.39)明显高于非转移组(6.092.73),差异有显著性意义(P<0.01)。术后复发者组IMVD值(11.934.55)高于无复发者组(8.324.32),差别有意义(P<0.05)。结论CD105标记IMVD与喉癌T分级、颈淋巴结转移和肿瘤复发密切相关,可能是喉癌患者的一个独立的预后指标。     

长链非编码RNA与喉癌的相关性

长链非编码RNA (lncRNA)属于非编码RNA中的一种,通过影响染色体的重塑、转录和转录后基因表达水平来调节机体功能.近年研究发现,lncRNA与肿瘤的发生、发展有关,并有多种lncRNA在喉癌中表达异常,其可能在喉癌的发病过程中发挥重要作用.本文就lncRNA在喉癌的发生、进展中的作用及机制研究现状进行综述,对其在喉癌的诊断、治疗以及预后方面的应用前景做一展望.     

脂质体介导p27基因转染对喉癌细胞系Hep-2生长影响的研究

目的探讨p27基因对喉癌Hep-2细胞系生长的抑制作用,为喉癌发生机制的研究和基因治疗提供理论依据。方法采用基因转染技术,将p27cDNA转染到喉癌Hep-2细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响。结果转染p27基因的喉癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约4倍。对细胞周期分析表明,处在G0～G1期的细胞由32.2%增加到66.9%,经Dotblot、Western blot杂交和免疫组化证实,p27mRNA表达有明显差异（P〈0.01）,p27的蛋白表达量有明显差异（P〈0.01）,说明p27蛋白具有生长抑制功能,其作用点为G1～S期。结论提高喉癌细胞中p27的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,导入p27基因是一种治疗喉癌的新途径。     

Survivin、bcl-2和bax在喉鳞状细胞癌中的表达

目的探讨凋亡抑制基因survivin在喉鳞癌中的表达,及其与bcl-2、bax基因表达的相关性。方法应用SP免疫组织化学法检测45例喉鳞状细胞癌及10例正常喉黏膜组织中survivin,bcl-2及bax基因的表达。结果喉鳞状细胞癌组织中,Survivin的表达率为80%,显著高于正常喉黏膜组织的表达率20%(P<0.05)。Survivin蛋白表达与喉鳞状细胞癌的TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。Survivin表达与bcl-2蛋白表达呈正相关(P<0.05),而与bax蛋白表达呈负相关(P<0.05)。结论Survivin在喉鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用,可能成为喉鳞状细胞癌基因治疗的新靶点;Survivin基因可能与凋亡相关基因bcl-2、bax在喉鳞状细胞癌的发展中分别起协同和拮抗作用。