LIPF调控MAPK信号通路对胃癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的 阐明胃脂酶(LIPF)在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法 采用GEPIA和Human Protein Altas评估胃癌组织中LIPF的表达。实时定量PCR(qPCR)和蛋白印迹(Western blot)检测LIPF在胃癌细胞SGC-7901中的表达。SGC-7901细胞分为阴性对照组、LIPF过表达组和LIPF过表达+MAPK激活剂组。通过MTT、划痕实验和Transwell实验分析SGC-7901细胞中的细胞活力、迁移和侵袭能力。qPCR和Western blot用于检测细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达。结果 LIPF在胃癌组织和SGC-7901细胞中表达降低(P<0.05)。与阴性对照组相比,LIPF过表达组的细胞增殖活力、划痕愈合率和侵袭细胞数均减少且CDK4、MMP9、p-p38和-JNK水平降低(P<0.05)。此外,与LIPF过表达组相比,LIPF过表达+MAPK激活剂组的细胞增殖活力、...     

乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞MKK3,p38MAPK表达的影响

目的：观察乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞中丝裂原活化蛋白激酶（MKK3）及其下游分子p38丝裂酶原活化的蛋白激酶（p38MAPK）的表达的影响,探讨相关的信号转导机制,及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法：分别将质粒pCDNA3.1及pCDNA3.1-HBx重组质粒经脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,G418筛选培养,并用反转录PCR和Western blot鉴定,获得表达X蛋白的稳定细胞株HepG2-HBx和阴性对照细胞株HepG2-pCDNA3.1,以HepG2细胞株作空白对照。通过RT-PCR和Western blot检测上述三种细胞株中MKK3,p38MAPK在mRNA水平和蛋白水平的表达变化,并用细胞免疫荧光法检查磷酸化p38MAPK蛋白在细胞浆及细胞核中的变化;通过MTT实验检测三种细胞株的增殖情况。采用SPSS 12软件进行统计学分析。结果：MKK3在mRNA和总蛋白水平的表达在HepG2-HBx中均高于其他两组,其他两组无明显差异;p38MAPK在mRNA和总蛋白水平三组无明显差异,而其蛋白磷酸化水平和在核蛋白中的表达在HepG2-HBx中较其他两组升高;HepG2-HBx较其他两组细胞有更强的增殖能力。结论：HBx可以通过上调肝癌细胞中MKK3的表达,促进p38MAPK磷酸化和入核,从而进一步激活下游分子发挥生物活性。p38MAPK通路在HBx促进肝癌细胞的增殖中发挥重要作用。可能是导致HBV相关性肝癌与非HBV相关性肝癌临床特点及肿瘤生物学差异的机制之一。     

乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞MKK3,p38MAPK表达的影响

目的:观察乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MKK3)及其下游分子p38丝裂酶原活化的蛋白激酶(p38MAPK)的表达的影响,探讨相关的信号转导机制,及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:分别将质粒pCDNA3.1及pCDNA3.1-HBx重组质粒经脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,G418筛选培养,并用反转录PCR和Western blot鉴定,获得表达X蛋白的稳定细胞株HepG2-HBx和阴性对照细胞株HepG2-pCDNA3.1,以HepG2细胞株作空白对照。通过RT-PCR和Western blot检测上述三种细胞株中MKK3,p38MAPK在mRNA水平和蛋白水平的表达变化,并用细胞免疫荧光法检查磷酸化p38MAPK蛋白在细胞浆及细胞核中的变化;通过MTT实验检测三种细胞株的增殖情况。采用SPSS 12软件进行统计学分析。结果:MKK3在mRNA和总蛋白水平的表达在HepG2-HBx中均高于其他两组,其他两组无明显差异;p38MAPK在mRNA和总蛋白水平三组无明显差异,而其蛋白磷酸化水平和在核蛋白中的表达在HepG2-HBx中较其他两组升高;HepG2-HBx较其他两组细胞有更强的增殖能力。结论:HBx可以通过上调肝癌细胞中MKK3的表达,促进p38MAPK磷酸化和入核,从而进一步激活下游分子发挥生物活性。p38MAPK通路在HBx促进肝癌细胞的增殖中发挥重要作用。可能是导致HBV相关性肝癌与非HBV相关性肝癌临床特点及肿瘤生物学差异的机制之一。     

MTA1影响子宫内膜癌细胞侵袭迁移的体外研究

  目的  通过siRNA(小干扰RNA)抑制MTA1(metastasis associated gene 1)在子宫内膜癌细胞系HEC-1-A中的表达, 研究MTA1对子宫内膜癌侵袭转移能力的影响, 并探索抑制子宫内膜癌侵袭转移的潜在靶点。  方法  通过脂质体介导方法, 将特异性siRNA表达载体psilencer2.0-MTA1-siRNA转染入人子宫内膜癌细胞系HEC-1-A, 以转染无关序列组psilencer2.0-neg及non-transfected组做对照, 采用RT-PCR以及Western blot检测特异性siRNA对MTA1mRNA及蛋白表达的抑制效果。应用划痕损伤实验及Transwell实验检测MTA1对子宫内膜癌细胞侵袭转移能力的影响, 以及体外实验验证应用RNA干扰技术以MTA1为靶点抑制子宫内膜癌细胞侵袭及转移的可行性。  结果  RT-PCR及Western blot结果显示, siRNA成功抑制子宫内膜癌细胞系HEC-1-A中MTA1的表达。划痕损伤实验显示转染后划痕损伤愈合明显减慢, 迁移率明显降低, Transwell体外侵袭实验结果显示, 转染后穿膜细胞百分率显著降低(P < 0.05)。  结论  体外实验显示, 应用脂质体介导的RNA干扰技术, 可有效抑制MTA1在子宫内膜癌细胞中的表达, 使之生长、侵袭及转移能力均受到抑制, 提示MTA1在子宫内膜癌的侵袭转移过程中发挥重要作用, 可能成为子宫内膜癌基因治疗的潜在靶点。      

CRABP2通过Wnt/β-catenin通路调控子宫内膜样腺癌细胞的增殖与侵袭

目的：探讨细胞视黄酸结合蛋白2(CRABP2)在子宫内膜样腺癌组织和细胞中的表达及其对子宫内膜样腺癌细胞增殖与侵袭的影响与其分子机制。方法：收集2020年6月至2021年4月在衡水市人民医院手术切除的子宫内膜样腺癌组织及配对正常子宫内膜组织,共24对;体外培养人子宫内膜样腺癌细胞An3ca、KLE。采用免疫组化分析及WB法检测子宫内膜样腺癌组织及正常子宫内膜组织中CRABP2的表达情况,采用WB法检测An3ca及KLE细胞中敲低CRABP2表达的效率,并以EDU法及Transwell实验检测敲低CRABP2表达后的An3ca及KLE细胞的增殖及侵袭能力,免疫荧光染色及WB法检测敲低CRABP2表达后的An3ca及KLE细胞中Wnt/β-catenin通路相关关键蛋白（β-catenin、c-Myc、cyclin-D1、MMP7及MMP9）的表达情况。以裸鼠体内成瘤实验观察敲低CRABP2表达对子宫内膜样腺癌细胞移植瘤生长和移植瘤组织中Ki67和β-catenin表达的影响。结果：与正常子宫内膜组织相比,CRABP2在人子宫内膜样腺癌组织中表达上调（P<0.01）。转染靶向CRAB...     

多药耐药对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭活性、耐药机制及丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的:通过化疗药物诱导建立多株人肝癌多药耐药细胞模型,探讨多药耐药获得对细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响,耐药机制及与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路表达的相关性.方法:采用多柔比星( adriamycin,ADM)高浓度冲击和小剂量缓升2种方法诱导建立人肝癌细胞(HepG2、SMMC-7721和BEL-7402)耐药模型.比较耐药细胞株与亲本细胞株间的差异,主要包括采用生物发光法进行药物敏感实验并计算耐药指数;RT’-PCR法和免疫组织化学法检测相关耐药基因(p-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1、肺癌耐药蛋白、乳腺癌耐药蛋白、蛋白激酶C、谷胱甘肽-S-转移酶-π和拓扑异构酶Ⅱ)mRNA及相应蛋白的表达.免疫组织化学法检测与细胞增殖活性相关的Ki-67和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达:FCM法检测细胞周期、细胞凋亡率的改变Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力的改变最后,分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MAPK信号通路中ERK1、ERK2、ERK5、JNK1、JNK2和p38a基因及相应蛋白的表达.结果:共建立6株ADM耐药细胞株;与亲本细胞株相比,耐药细胞株耐药指数均＞5,并对多种化疗药耐受性增强,多药耐药相关基因及蛋白的表达均上调2～10倍,以高浓度冲击法诱导的细胞中蛋白表达上调明显.耐药细胞中Ki-67及PCNA蛋白的表达量均升高20倍以上,细胞周期被阻滞在S期,体外侵袭能力增强1.3～2.5倍;ADM干预后,细胞凋亡率减少60％以上.MAPK信号通路中不同基因和蛋白表达量均有不同比例升高,以ERK1、ERK2升高明显.结论:ADM能够诱导多株人肝癌细胞产生多药耐药,导致细胞增殖活性升高、细胞周期改变、抗凋亡能力及侵袭能力增强.MAPK信号通路中相关蛋白表达的上调与细胞多药耐药有一定关系.     

激活和抑制Stat 3信号途径对胰腺癌细胞侵袭能力的影响

目的:通过激活和阻断人胰腺癌细胞中的Stat3信号转导通路,观察细胞株侵袭能力的变化并探讨其作用机制.方法:采用IL-6处理人胰腺癌细胞Capan-2,AG490处理人胰腺癌细胞SW1990后,MTT法检测细胞的增殖状态,免疫细胞化学法和Western 印迹法检测p-Stat3的表达,实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR, RFQ-PCR)和Western 印迹法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2) mRNA及其蛋白的表达,体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果:IL-6可促进Capan-2细胞的增殖能力提高(P<0.05),p-Stat3的表达增强,VEGF和MMP-2 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),细胞侵袭能力增强.AG490可抑制SW1990细胞株的增殖(P<0.05),p-Stat3的表达下降,VEGF和MMP-2 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05),侵袭能力减弱.结论:Stat3信号转导通路在胰腺癌侵袭过程中起着重要作用,以Stat3信号转导通路为靶点的基因治疗可能为胰腺癌治疗提供新的方向.     

溶血磷脂酸对人卵巢癌细胞生长和侵袭转移能力的影响

目的：探讨溶血磷脂酸（1ysophosphatidi cacid，LPA）对卵巢癌细胞系SKOV3、3AO、CAOV3的生长和侵袭转移能力的影响。方法：LPA干预卵巢癌细胞系SKOV3、3AO、CAOV3，并观察其对细胞增殖生长的影响；Boyden小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力；ELISA方法检测LPA剌激卵巢癌细胞系CAOV3后细胞上清液中转移相关因子的表达情况。结果：LPA体外干预卵巢癌细胞系能明显促进细胞增殖生长，且存在剂量依赖性。Boyden小室体外侵袭实验结果显示，实验组3AO和CAOV3细胞的侵袭指数都高于各自的空白对照组，不同浓度组的比较差异有统计学意义，但2组细胞系之间的比较差异无统计学意义。LPA干预CAOV3后细胞上清液中细胞因子的含量随LPA的浓度变化产生相应的变化。结论：LPA体外干预卵巢癌细胞系能明显促进细胞的增殖生长，且侵袭指数和转移相关因子的表达量均会产生相应的变化，说明UH对卵巢癌的侵袭和转移可能具有重要的生物学意义。     

哈萨克族食管癌患者组织中细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶信号通路的表达

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在哈萨克族食管鳞癌患者组织中的表达变化及意义.方法 采用Western blot技术检测在血清饥饿条件下、U0126梯度浓度处理下,食管癌细胞系EC9706中磷酸化ERK1(p-ERK1)和磷酸化ERK2(p-ERK2)的表达变化.采用实时荧光定量PCR法检测25例哈萨克族食管癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织中总ERK1(t-ERK1)和总ERK2(t-ERK2)mRNA的表达变化.采用Western blot技术检测25例哈萨克族食管癌患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及5例哈萨克族非食管癌者正常食管组织中t-ERK1、t-ERK2、p-ERK1和p-ERK2蛋白的表达变化.采用免疫组化染色法,在126例石蜡包埋标本(正常食管黏膜19例,食管原位癌55例,食管浸润癌52例)中验证p-ERK1和p-ERK2蛋白的表达变化.结果 在食管癌EC9706细胞中,ERK/MAPK信号通路呈高度活化状态.血清瞬时刺激10 min后,p-ERK1和p-ERK2的表达达到峰值.EC9706细胞在50 μmol/L的U0126处理下,p-ERK1和p-ERK2的表达几乎完全被抑制.t-ERK1 mRNA在25例哈萨克族食管癌患者肿瘤组织中的表达量为1.92±3.49,明显低于癌旁组织(3.67±7.47,P<0.05);t-ERK2 mRNA在食管癌组织和癌旁组织中的表达量差异无统计学意义(P>0.05).t-ERK1和t-ERK2蛋白在食管癌组织、相应癌旁组织和正常食管黏膜组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);但p-ERK1和p-ERK2蛋白在食管癌组织中的表达量(分别为0.87±0.14和0.79±0.10)均明显低于癌旁组织(分别为1.10±0.13和1.32±0.12,P<0.05)和正常食管黏膜组织(分别为1.50±0.22和1.64±0.18,P<0.05).免疫组化染色验证的结果 显示,p-ERK1和p-ERK2蛋白在浸润性食管癌组织中的阳性表达率均为7.7%(4/52),在癌旁正常食管黏膜组织中的阳性表达率均为31.6%(6/19),在食管原位癌组织中的阳性表达率均为85.5%(47/55),不同组织间的表达差异有统计学意义(P<0.05).结论 在食管癌细胞中,ERK/MAPK信号通路呈活化状态.ERK/MAPK信号通路活化水平的改变可能参与了哈萨克族食管癌患者肿瘤的早期发生.

Abstract：

Objective To investigate the expression variation and significance of ERK1/2 MAPK signaling transduction pathway in the pathogenesis of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) in Kazakh patients. Methods The expression level of p-ERK1/2 after serum starvation and treatment with U0126 inhibitor was detected in esophageal cancer cell line EC9706 by Western blot assay. The mRNA level of total ERK1/2 (t-ERK1/2) and expression level of t-ERK1/2 and p-ERK1/2 proteins of 25 pairs of ESCC and adjacent normal esophageal mucosal tissues of Kazakh patients were examined and identified by real-time quantitative PCR (qRT-PCR) and Western blotting, respectively. The expression of p-ERK1/2 protein was verified by immunohistochemistry in 126 paraffin-embeded specimens, including 19 normal esophageal mucosa, 55 esophageal carcinomas in situ and 52 invasive carcinomas. Results ERK1/2 MAPK signaling transduction pathway was in an active status in the EC9706 cells. The expression level of p-ERK1/2 in Ec9706 cells reached a peak at 10 min after transient serum stimulation, and p-ERK1/2 expression was totally restrained after the treatment with 50 μmol/L U0126. In the 25 pairs of ESCC and adjacent normal mucosa, the t-ERK1 mRNA level was 1.92±3.49 in the ESCC tissues and 3.67±7.47 in the adjacent normal mucosa. The t-ERK1 mRNA level in ESCC tissues was significantly lower than that in adjacent normal mucosa (P<0.05), whereas there was no significant difference of t-ERK2 mRNA level between them(P>0.05). The expression levels of p-ERK1 and p-ERK2 proteins were 0.87±0.14 and 0.79±0.10 in the ESCC tissues, and 1.10±0.13 and 1.32±0.12 in the adjacent normal mucosae. p-ERK1/2 protein in the ESCC tissues was significantly lower than that in the adjacent normal tissue (P<0.01). However, there was no significant difference between their t-ERK1/2 protein levels (P>0.05). In the 126 cases of paraffin-embeded specimens, positive expressions of both p-ERK1 and p-ERK2 in esophageal cancer tissues were 7.7% (4/52), significantly lower than those in adjacent normal mucosa (31.6%, 6/19) and carcinoma in situ (85.5%, 47/55, P<0.05). Conclusions ERK1/2 MAPK signaling pathway is in an active status in esophageal cancer and adjacent normal mucosa. Our results imply that the activation of p-ERK1/2 MAPK signaling transduction pathway plays a role in the early pathogenesis of ESCC in Kazakh patients.     

SH2-B与结肠癌细胞运动和迁移相关性的研究

目的:分析SH2-B对结肠癌细胞侵袭迁移的影响,探讨结肠癌转移的分子机制。方法:免疫荧光筛选SH2-B低表达结肠癌细胞,用Lipofectamine 2000TM将pcDNA3.1-SH2-B质粒转染至HT-29细胞,细胞划痕实验分析SH2-B对结肠癌细胞HT-29爬行迁移运动的影响,用Boden Chamber分析SH2-B对结肠癌细胞HT-29侵袭运动的影响。结果:HT-29为SH2-B低表达结肠癌系,基因转染后HT-29细胞表达SH2-B显著增高;细胞划痕研究结果表明,SH2-B转染组、空载体转染组和未转染母细胞组迁移细胞数倒置显微镜10个视野分别为867±187、349±121和279±158,SH2-B转染组爬行细胞数显著高于空载体组和未转染细胞组,P均<0.05;Trans-well研究结果显示,转染SH2-B组、空载体转染组和未转染细胞组穿过滤膜细胞数分别为278±107、129±88和112±81,转染SH2-B组透过细胞数显著高于未转染组和空载体转染组,P<0.05。结论:SH2-B可能通过增强结肠癌细胞运动和迁移能力参与结肠癌细胞的侵袭和转移。     

ERK信号转导通路在CXCL12促进子宫内膜癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的:探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR4 (CXCL12/CXCR4)生物学轴通过细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号转导通路发挥促子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的作用.方法:应用外源性CXCL12处理子宫内膜癌Ishikawa细胞株,通过Western blotting检测不同时间位点ERK1/2的磷酸化水平和Survivin蛋白的表达;通过ELISA检测细胞培养上清液中MMP-2的分泌水平.同时分析AMD3100和PD98059对细胞ERK1/2磷酸化水平、Survivin蛋白水平和MMP-2分泌水平的影响.结果:外源性CXCL12刺激后,可迅速上调ERK1/2的磷酸化水平(t=0.887,P＜0.01),促进Survivin蛋白和MMP-2蛋白的表达(t=0.861,P＜0.01;t=0.297,P＜0.01),且三者均呈时间依赖性.PD98059和AMD3100均能明显抑制外源性CXCL12诱导后ERK1/2的磷酸化水平,而且在两者共同作用下,能完全抑制ERK1/2的磷酸化水平,阻断ERK通路的激活,下调Survivin蛋白和MMP-2蛋白的表达.结论:CXCL12/CXCR4生物学轴通过激活ERK通路上调Survivin蛋白和MMP-2蛋白表达,从而引发Ishikawa细胞一系列增殖和侵袭的生物学效应.     

脂联素通过AMPK/mTOR/4EBP1通路对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的影响

背景与目的：脂联素（adiponectin，APN）被认为是一种强有力的抑制肿瘤细胞生长的抗癌因子，但APN调节细胞转移的作用机制尚不清楚。探讨在子宫内膜癌HEC-1B细胞中，APN能否通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）/磷酸化真核启动因子4E结合蛋白1（4E binding protein 1，4EBP1）通路抑制细胞迁移及侵袭。方法：实验设计为4组：① APN组：20 μg/mL APN作用于细胞30 min；② 抑制剂组：10 μmol/L复合物C（AMPK抑制剂）作用于细胞30 min；③ APN+抑制剂组：10 μmol/L复合物C预处理细胞30 min后，加入20 μg/mL APN作用30 min；④ 对照组：仅加入无血清DMEM培养基。实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）技术检测4组细胞中B细胞淋巴瘤-2（B- cell lymphoma 2，Bcl-2）和基质金属蛋白酶9（matrix metallopeptidase 9，MMP-9）的mRNA表达；蛋白质印迹法（Western blot）检测4组细胞中Bcl-2、MMP-9及AMPK信号通路中AMPK、mTOR、4EBP1蛋白水平；Transwell及划痕实验检测4组HEC-1B细胞的迁移能力。结果：Bcl-2和MMP-9 mRNA的表达水平在APN组中分别为0.64±0.08和0.68±0.02，均明显低于APN+抑制剂组（分别为0.98±0.11和0.96±0.08；P=0.02和0.03)。APN组中，HEC-1B细胞Bcl-2、MMP-9蛋白水平分别与对照组、抑制剂组、APN+抑制剂组比较，差异均有统计学意义（P=0.00）。APN组中，HEC-1B细胞AMPK、mTOR、4EBP1蛋白水平分别为1.49±0.02、0.48±0.00、0.19±0.00。与对照组比较，蛋白水平明显升高（P=0.00）。APN组穿膜细胞数为（78.72±10.74）个，APN+抑制剂组为（131.45±9.11）个，对照组为（131.91±12.29）个，APN组与对照组比较，差异有统计学意义（P=0.00），APN+抑制剂组与对照组相比，差异无统计学意义（P=0.12）。APN组中，HEC-1B细胞迁移率为（19.27±1.14）%，与其余3组比较，4组组间差异均有统计学意义（P=0.00），其余3组组间差异无统计学意义（F=2.78，P=0.39）。结论：APN可经AMPK/mTOR/4EBP1信号通路发挥抑制子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的效应，达到抗肿瘤作用。     

硼替佐米体外对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的 探讨不同剂量的硼替佐米对前列腺癌DU145细胞迁移和侵袭的影响及其可能机制。方法 0、10、20 nmol／L硼替佐米处理DU145细胞24 h后,采用Transwell小室检测DU145细胞迁移,Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭能力。采用Western blot技术检测黏附相关蛋白黏着斑激酶（FAK）及其自主磷酸化位点Tyr397的表达水平。结果 10、20 nmol／L硼替佐米作用24 h后,DU145细胞的迁移指数为（69.05±10.56）、（52.55±6.98）个,明显低于未经硼替佐米处理组的（81.55±10.56）个（均P＜0.05）;10、20 nmol／L硼替佐米处理组细胞侵袭指数分别为（39.35±6.45）、（32.05±4.22）个,明显低于未经硼替佐米处理组的（58.75±5.41）个（均P＜0.05）;硼替佐米处理组同时伴有Try397表达水平的下调,但FAK总蛋白的表达不受影响。结论 蛋白酶体通路抑制剂硼替佐米可能通过下调FAK Tyr397的表达,抑制前列腺癌DU145细胞迁移和侵袭能力。     

Pyk2基因对肝癌He p3 B细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的：探讨沉默富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（Pyk2）基因对人肝癌Hep3 B细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法构建Pyk2基因RNA干扰（RNAi）载体,脂质体转染至肝癌Hep3B细胞,实验分3组,Pyk2 RNA干扰组（siRNA组）：转染携带Pyk2基因RNAi的质粒;阴性对照组：转染不携带Pyk2基因RNAi的空载质粒;空白对照组：未转染任何质粒。应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blotting鉴定Pyk2基因和蛋白表达;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）、Transwell侵袭和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移等生物学特性。结果 Pyk2基因干扰后肝癌 Hep3B 细胞 Pyk2 mRNA 的表达（0．16±0．03）较阴性对照组（0．74±0．13）和空白对照组（0．77±0．16）均明显下降,差异均有统计学意义（t＝51．46,P＝0．000;t＝53．21,P＝0．000）。Pyk2基因干扰后肝癌 Hep3B 细胞 Pyk2蛋白的表达（0．24±0．06）较阴性对照组（0．83±0．05）和空白对照组（0．91±0．06）均明显下降,差异均有统计学意义（t＝57．29,P＝0．000;t＝68．53,P＝0．000）。siRNA组48 h细胞增殖抑制率（26．17％±0．28％）较阴性对照组（9．28％±0．22％）和空白对照组（6．47％±0．31％）明显提高,差异均有统计学意义（t ＝31．45,P＝0．004;t＝34．64,P＝0．002）。siRNA组细胞的穿膜细胞数（32．5±8．5）／10 HP明显低于阴性对照组（98．4±12．3）／10 HP和空白对照组（112．6±11．3）／10 HP,差异有统计学意义（t＝95．64,P＝0．000;t＝105．17,P ＝0．000）。siRNA 组的划痕愈合率（28．17％±1．46％）显著低于阴性对照组（77．38％±2．24％）和空白对照组（79．41％±3．17％）,差异有统计学意义（t ＝85．86,P＝0．000;t ＝89．37,P＝0．000）。结论 Pyk2基因参与肝癌Hep3B细胞的增殖、侵袭及迁移,与肿瘤发展、侵袭、转移等密切相关,Pyk2有望成为肝癌诊断和治疗的分子靶标。     

转染CD40L基因对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:本研究通过将CD40L基因转染小鼠结肠癌colon26细胞,观察其对小鼠结肠癌细胞生物学特性的影响,以期探讨CD40L作为结肠癌基因治疗靶点的可行性.方法:经脂质体将CD40L基因转染小鼠结肠癌colon26细胞后,采用半定量RT-PCR法、Western印迹法和激光共聚焦显微镜检测CD40L mRNA及蛋白的表达情况,新型四氮唑盐MTS比色法检测CD40L基因转染对细胞生长的影响,FCM法检测其对细胞表面分子表达的影响,半定量RT-PCR法检测细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)mRNA的表达情况,以及Transwell法检测细胞的侵袭能力变化.结果:RT-PCR检测结果显示,转染CD40L基因的小鼠结肠癌colon26细胞中CD40L mRNA的表达量为1.09±0.12,与转染空质粒细胞和未转染细胞相比,分别上调了59.21%和58.33%,差异有统计学意义(P＜0.05);而基因转染后colon26/CD40L细胞中MMP-2 mRNA水平降低.MTS法检测结果显示,colon26/CD40L细胞的生长速度与未转染细胞无明显变化.FCM法检测结果显示,colon26/CD40L细胞表面共刺激分子CD80和CD86水平升高.同时,Transwell实验结果显示,colon26/CD40L细胞侵袭能力下降(P＜0.05).结论:CD40L基因提高了结肠癌colon26细胞的免疫原性,降低了结肠癌细胞的侵袭能力,抑制了结肠癌细胞的恶性表型.     

子宫内膜癌组织中K-Cl共转运体1的表达及siRNA干扰其表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖的影响

目的:探讨K-Cl共转运体1(K-Cl cotransporter 1,KCC 1)mRNA在子宫内膜癌组织中的表达及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰其表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖能力和细胞周期的影响.方法:应用荧光定量PCR的方法检测正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中KCC 1 mRNA的表达.设计并合成KCC 1特异性的siRNA,转染子宫内膜癌HEC-1B细胞后,应用RT-PCR、Western印迹法、MTT法和FCM法分别检测HEC-1B细胞中KCC 1 mRNA和蛋白的表达、细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化.结果:子宫内膜癌组织中KCC 1 mRNA的表达较正常子宫内膜组织明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).KCC 1特异性siRNA能明显抑制HEC-1B细胞中KCC 1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),且HEC-1B细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);细胞周期分析显示细胞明显阻滞于G0/G1期,与对照组比较,细胞凋亡增加(P<0.05).结论:KCC 1基因与子宫内膜癌有关,参与细胞周期的调节,具有促进细胞增殖的能力.     

ER和MDM2及ERK1/2信号通与卵巢癌耐药关系的研究

目的:探讨ER、MDM2和ERK1/2信号通路在卵巢癌中的相关性及与卵巢癌耐药的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测40例卵巢癌标本中ER、MDM2及P-糖蛋白(P-gp)的表达水平;采用MTT比色分析法检测该40例标本对紫杉醇(PTX)、表柔比星(EADM)、顺铂(DDP)和卡铂(CBP)的药物敏感性;通过酶活性测定,检测ERK1/2酶活性。结果:PTX和EADM耐药者ERK1/2酶活性分别增高1.5倍,P值分别为0.015和0.004;ERK1/2酶活性与PTX和EADM的抑制率负相关,r分别为-0.531和-0.488,P<0.01;ER和MDM2不同表达水平间ERK1/2酶活性差异均有统计学意义,P值分别为0.001和0.034;P-gp阳性组ERK1/2酶活性是阴性组的1.4倍,P=0.022;P-gp阴性组PTX和EADM的抑制率分别是阳性组的1.5和2.0倍,P值分别为0.021和0.004;P-gp与MDM2的表达正相关,r=0.396,P<0.05;MDM2不同表达水平,PTX和EADM抑制率的差异有统计学意义,P值分别为0.024和0.039;ER与MDM2的表达正相关,r=0.671,P<0.01;DDP和CBP在本实验中差异无统计学意义。结论:ER、MDM2及ERK1/2激酶活性之间存在正相关性;ERK1/2激酶活性和MDM2的表达均与P-gp的表达正相关;卵巢癌PTX和EADM耐药的产生与ERK1/2酶活性的升高和P-gp及MDM2表达的增强有关。