NS-398调节HepG2细胞组蛋白乙酰化和p21WAF1/CIP1表达

背景与目的:研究非甾体药物NS-398对人肝癌细胞株HepG2细胞组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制p21WAF1/CIP1表达的影响.材料与方法:用不同浓度(100、200、300、400μmol/L)的NS-398处理HepG2细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肿瘤细胞增殖抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,应用NS-398分别作用HepG2细胞4、8、12、24、48 h,非药物作用组作为对照,提取细胞的总RNA和总蛋白,采用RT-PCR技术检测p21WAF1/CIP1 mRNA表达情况,并用免疫印迹技术(Western blot)观察组蛋白H3的乙酰化水平变化及p21WAF1/CIP1蛋白的表达水平.结果:NS-398抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性,并诱导其凋亡.且呈浓度依赖性改变细胞周期的分布,一方面增高G0/G1期细胞比例,另一方面降低S期和G2/M期细胞比例,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).NS-398对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化,可引起组蛋白H3的乙酰化.NS-398对p21WAF1/CIP1 mRNA和p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响呈时间依赖性.结论:NS-398明显上调HepG2细胞组蛋白H3的乙酰化水平,促进细胞周期依赖性激酶抑制剂p21WAF1/CIP1的表达.     

胃癌中p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1、p53表达的相关性

目的探讨p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1(cyclin D1)、p53在胃癌中表达之间的相关性.方法应用原位杂交技术检测p21WAF1/CIP1 mRNA、细胞周期素D1 mRNA及免疫组化技术检测p53蛋白在胃癌中的表达.结果 p21WAF1/CIP1 mRNA在癌组织及癌旁正常粘膜中阳性表达率各为93.15%(68/73)及76.71%(56/73),二者相比具有显著差异(P<0.05).Cyclin D1 mRNA在癌组织及癌旁正常粘膜中阳性表达率各为54.79%(40/73)及30.16%(22/73),二者具有显著差异(P<0.05).p53蛋白在胃癌中的阳性表达率为32.87%(24/73), p53过表达者,其p21WAF1/CIP1 mRNA表达较p53阴性者为低,二者存在显著差异(P<0.05).p21WAF1/CIP1表达与细胞周期素D1表达呈负相关.结论 p21WAF1/CIP1、Cyclin D1、p53的异常表达及它们之间可能存在的相互作用,对于胃癌的发生发展具有重要意义.     

TSA诱导胰腺癌BxPC-3细胞周期阻滞与凋亡的研究

目的观察曲古抑菌素A(tricho-statin A,TSA)对胰腺癌BxPC-3细胞增殖及凋亡的诱导作用,探讨TSA抗胰腺癌的作用机制。方法BxPC-3细胞应用TSA处理后采用流式细胞技术分析其细胞周期分布和细胞凋亡率,免疫组化方法检测细胞乙酰化组蛋白H4表达,Western blot分析p21 WAF1/CIP1蛋白表达。结果TSA对胰腺癌BxPC-3细胞具有生长抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。TSA可将BxPC-3细胞阻滞于G0/G1期,TSA组G0/G1期细胞达(61.8±2.5)%,较空白对照组(42.5±2.2)%和乙醇对照组(47.3±3.4)%明显增多(P=0.004);三组细胞凋亡率分别为25.5%、5.5%和5.1%(P=0.000)。TSA组细胞p21 WAF1/CIP1蛋白表达及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调。结论TSA对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和细胞周期具有影响作用并可诱导细胞凋亡,p21 WAF1/CIP1蛋白及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调可能是其抗胰腺癌作用机制之一。     

姜黄素对人淋巴瘤Raji细胞组蛋白H3乙酰化作用的影响

背景与目的:表观遗传改变是肿瘤发生的一个重要原因,具有表观遗传修饰作用的甲基化转移酶抑制剂和去乙酰化酶抑制剂可以抑制肿瘤增殖诱导凋亡。本研究探讨姜黄素对Raji细胞组蛋白H3的乙酰化作用和细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21WAF1/CIP1基因表达的影响。方法:用25μmol/L姜黄素作用Raji细胞不同时间,Westernblot分析乙酰化组蛋白H3和p21WAF1/CIP1变化;RT-PCR检测p21WAF1/CIP1基因表达;染色质免疫沉淀分析p21WAF1/CIP1的启动子基因位点组蛋白H3乙酰化水平;流式细胞术检测细胞周期变化。结果:姜黄素提高p21WAF1/CIP1的启动子基因位点组蛋白H3乙酰化水平1.9倍;使p21WAF1/CIP1mRNA合成增加和蛋白表达上调,在24h时分别增加了4.2倍和5.1倍;24h阻滞细胞在G2/M期,36h阻滞在G0/G1期。结论:姜黄素通过表观遗传修饰作用,调节p21WAF1/CIP1启动子基因位点组蛋白H3乙酰化水平,促进p21WAF1/CIP1基因转录,阻滞Raji细胞周期进程。     

p21WAF1蛋白的表达与非小细胞肺癌增殖和预后的关系

目的检测人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的p21WAF1/CIP1表达水平,探讨NSCLC中p21WAF1/CIP1的表达与细胞增殖活性和预后的关系.方法采用流式细胞术检测60例NSCLC中p21WAF1/CIP1的表达量及DNA含量;分析p21WAF1/CIP1表达水平与S期细胞比例、预后的关系.结果正常肺组织中未见p21WAF1/CIP1的表达,60例NSCLC组织中p21WAF1/CIP1阳性率为60%(36/60),p21WAF1/CIP1阳性表达者的S期细胞比例(10.87±0.69)%低于阴性表达者(13.30±0.93)%,t=3.232,P= 0.001.p21WAF1/CIP1的表达与患者的术后累积生存月数和5年生存率有关,p21WAF1/CIP1 阳性表达者的术后平均生存月数(40个月)明显高于阴性表达者(25个月),t=2.885,P=0.003;5年生存率(29%)也高于阴性表达者(9%),t=2.712,P=0.004.结论 p21WAF1/CIP1表达是判断NSCLC预后的一个可参考指标.     

丙戊酸钠诱导Siha细胞周期阻滞的实验观察

目的:研究丙戊酸钠对人宫颈癌Siha细胞增殖和细胞周期的影响.方法:MTT检测生长抑制,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法检测p21WAF1/CIP1、p-CDK2和cyclin E蛋白.结果:丙戊酸钠以剂量依赖性方式抑制Siha细胞生长IC20和IC50分别为2.0 mmol/L和8.0 mmol/L;丙戊酸钠上调G0/G1期比例由(74.92±0.60)%升高至(84.475±1.11)%,P=0.001,下调S期(13.19±0.70)%降为(7.72±1.40)%,P=0.004和G2/M(11.89±1.30)%降为(7.81±0.31)%期比例,P=0.006.丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1蛋白,下调cyclin E和p-CDK2蛋白.结论:丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1表达和抑制cyclin E表达,使细胞阻滞于G0/G1期,抑制Siha细胞生长.     

细胞周期蛋白D1和p21WAF1/CIP1在喉癌癌变过程中表达及其意义

目的研究喉癌变过程中细胞周期蛋白(cyclin)D1和p21WAF1/CIP1表达及其临床病理学意义.方法用免疫组化检测20例正常黏膜、40例不典型增生病变和60例喉癌组织中cyclinD1和p21WAF1/CIP1的表达.结果①cyclin D1和p21WAF1/CIP1阳性表达定位于细胞核.②在喉癌癌变过程中,喉正常黏膜、不典型增生病变和喉癌中cyclin D1阳性表达率分别为5.0%(1/20),30,0%(12/40),53.3%(32/60)(P＜0.001);p21WAF1/CIP1阳性表达率分别为95.0%(19/20),75.0%(30/40)和63.3%(38/60)(P＜0.05).③p21WAF1/CIP1在高、中和低分化的喉癌中阳性表达率分别为76.2%(16/21),65.5%(19/29)和30.0%(3/10)(P＜0.05);p21WAF1/CIP1阳性表达与肿瘤细胞的分化有关.④cyclin D1和p21WAF1/CIP1阳性表达显著相关.结论①喉癌癌变过程中cyclin D1阳性表达率呈逐渐升高的趋势,而p21WAF1/CIP1阳性表达率呈呈逐渐降低的趋势.②cyclin D1异常表达是喉癌发生中早期分子事件.③p21WAF1/CIP1表达与喉癌细胞分化程度有关.④cyclin D1和p21WAF1/CIP1阳性表达显著相关.     

重组腺病毒p53影响口腔黏膜异常增生细胞生长的分子机制

[目的]探讨重组腺病毒p53(rAd-p53)影响口腔黏膜异常增生细胞(POE-9n)生长、诱导凋亡的分子机制。[方法]利用RT-PCR及Westernblot技术检测rAd-p53转染POE-9n细胞后p53、p21CIP/WAF及bcl-2mRNA和蛋白的表达变化。[结果]POE-9n细胞经rAd-p53转染后,p53、p21CIP/WAF和bcl-2mRNA和蛋白水平的表达均出现明显变化。转染24h后,p53、p21CIP/WAFmRNA及蛋白表达显著增高(P<0.01),而bcl-2则在转染72h后表达明显降低(P<0.01)。[结论]rAd-p53转染POE-9n细胞后,外源性p53的导入使p21CIP/WAF激活,并抑制bcl-2的表达,从而诱导细胞凋亡。     

反义RNA技术对抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因表达的研究

目的:应用反义RNA技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达,探索采用该技术干预肝癌的可行性。方法:制备人POLD1基因的反义RNA表达质粒,同时建立空白对照组与阴性对照组,由此将实验分为阴性对照组(转染空载体的SMMC-7721细胞)、空白对照组(肝癌细胞SMMC-7721)和实验组(转染人POLD1基因反义RNA表达质粒的肝癌SMMC-7721细胞)3组。MTT实验分析细胞增殖变化,并在转染SMMC-7721细胞48h后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测POLD1基因的表达。结果:MTT实验显示,与空白对照和阴性对照组相比,转染了反义RNA的实验组细胞增殖受到明显抑制。在转染后24～72h,实验组吸光度24h为0.306 7±0.015 4,48h为0.459 2±0.033 2,72h为0.567 1±0.061 1,与空白和阴性对照组相比,P值均<0.05。实时荧光定量PCR实验显示,实验组POLD1的mRNA表达明显下调为0.142 5±0.020 5,阴性对照组为1.017±0.188,空白对照组为1.00±0.00(F=26.5,P<0.05),说明POLD1基因表达受抑制。蛋白质印迹实验显示,POLD1基因蛋白水平(p125)变化趋势与mRNA相同,均为下调,其中实验组为0.222 3±0.009 7,阴性对照组为0.237 9±0.005 9,空白对照组为0.235 4±0.003 4(F=1 365.754,P值均<0.05),说明反义RNA可抑制p125蛋白表达,结论与基因水平趋势一致。结论:针对POLD1基因设计的反义RNA体外抑制了肝癌细胞SMMC-7721的增殖,这与POLD1在基因和蛋白水平的表达下调有关。     

Genistein抑制乳腺癌细胞生长的机制

目的 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制乳腺癌细胞生长的机制。方法 研究主要应用于Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交,质粒转染技术以及细胞凋亡检测法,探讨Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制乳腺癌细胞生长的机制。结果 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可明显抑制不同ＥＲ状态和不同ｐ５３状态的乳腺癌细胞系的生长,同时显著诱导ｐ５３下游基因ｐ２１＾ＷＡＦ／ＣＩＰＩ蛋白和ｍＲＮＡ的表达,而导致ｐ２１＾ＷＡＦＩ／ＣＩＰＩ的表达增强主     

p21WAF1/CIP1过表达对人肝癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响

目的 探讨Ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１过表达对人肝癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响。方法 用带有Ｐ２１的真核表达载体ＰＣＥＰ,经基因转染,使其在有Ｐ５３突变的人肝细胞癌细胞系（ＨＣＣ－９２０４）中表达;通过流式细胞仪、透射电镜和ＤＮＡ电泳确定凋亡的凋亡细胞。结果 转基因后Ｇ１期细胞增加,并且在Ｇ１期前出现一凋亡峰,凋亡细胞占被检细胞总数的２２．５％;电下可见部分细胞体积缩小,胞膜完整,有出芽现象,细胞     

Asiatic Acid Promotes p21WAF1/CIP1 Protein Stability through Attenuation of NDR1/2 Dependent Phosphorylation of p21WAF1/CIP1 in HepG2 Human Hepatoma Cells

Previous studies have suggested anti-tumor effects of asiatic acid in some human cancer cell lines. This agent isreported to increase the levels of p21WAF1/CIP1 in human breast cancer cell lines. However, the molecular mechanismshave not been established. Here we report that asiatic acid up-regulates p21WAF1/CIP1 protein expression but notthe level of p21WAF1/CIP1 mRNA in HepG2 human hepatoma cells. Furthermore, we found that the asiatic acidinduced increase of p21WAF1/CIP1 protein was associated with decreased phosphorylation (ser-146) of p21WAF1/CIP1.Knockdown of NDR1/2 kinase, which directly phosphorylates p21WAF1/CIP1 protein at ser-146 and enhances itsproteasomal degradation, increased the levels of p21WAF1/CIP1 protein and eliminated the regulation of p21WAF1/CIP1 stability by asiatic acid. At the same time, the expression of NDR1/2 kinase decreased during treatment withasiatic acid in HepG2 cells. Moreover, asiatic acid inhibited the proliferation of HepG2 cells, this being attenuatedby knockdown of p21WAF1/CIP1. In conclusion, we propose that asiatic acid inhibits the expression NDR1/2 kinaseand promotes the stability of p21WAF1/CIP1 protein through attenuating NDR1/2 dependent phosphorylation ofp21WAF1/CIP1 in HepG2 cells.     

A cyclin-dependent kinase inhibitor (p21(WAF1/CIP1)) affects thymidine incorporation in human liver cancer cells

p21(WAF1/CIP1) is a universal cyclin-dependent kinase inhibitor. To investigate the role of p21(WAF1/CIP1) in proliferation of human liver cancer cells, we examined the expression of p53, p21(WAF1/CIP1), cdk2 and cdk4 expression in two human liver cancer cell lines (HepG2 and PLC/PRF/5 cells). The effects of p21(WAF1/CIP1) on [(3)H]thymidine incorporation and cdks were also examined in these cells. HepG2 cells expressed all these proteins with lower level of cdk4. PLC/PRF/5 cells expressed the other proteins except p21(WAF1/CIP1). Transfection of p21(WAF1/CIP1) gene inhibited [(3)H]thymidine incorporation of both cells with different extent. Although the transfection of p21(WAF1/CIP1) did not affect cdk2 and cdk4 expression, it did reduce cdk2 kinase activity by 20%. These results suggest that: (a) p21(WAF1/CIP1) involved in DNA synthesis of human liver cancer cells; (b) p21(WAF1/CIP1) could be a target gene for the treatment of human hepatocellular carcinoma.     

Induction of p53 and p21/WAF1/CIP1 expression by nitric oxide and their association with apoptosis in human cancer cells

In this study, human and rat cancer cells were used to investigate the expression of p53 and p21/WAF1/CIP1 and their association with apoptosis after exposure to nitric oxide (NO). It was found that NO induced nuclear accumulation of p53 protein in a dose- and time-dependent manner. The level of p53 protein was elevated by about fivefold compared with that of mock-treated cells 48 h after exposure to 300 ppm NO. The induction of p53 by NO was found by pulse-chase analysis to be mainly regulated by post-translational modification. The correlation between p53 status and apoptosis induced by NO in human cancer cells was also investigated in this study. We found that apoptosis was easily induced in cells containing wild-type p53 (COLO 205 and Hep G2) after exposure to NO. The p21/WAF1/CIP1 protein was induced by NO in cells containing wild-type p53 (Hep G2) but not in cells without p53 (Hep 3B) or with mutated p53 (HT-29). Our results indicate that wild-type p53 and p21/WAF1/CIP1 expression was elevated in human cancer cells by exposure to NO and suggest that this may eventually promote apoptosis. © 1996 Wiley-Liss, Inc.     

子宫内膜癌p21WAF1/CIP1蛋白的表达及其意义

背景与目的:探讨p21WAF1/CIP1蛋白在子宫内膜癌中的表达情况及其意义.材料与方法:应用免疫组织化学SP法检测30例正常子宫内膜,20例单纯性增生性宫内膜,22例不典型增生性宫内膜,57例子宫内膜癌(高分化32例,中分化12例,低分化13例)中p21WAF1/CIP1蛋白的表达. 结果:p21WAF1/CIP1蛋白表达于细胞核,子宫内膜癌中p21WAF1/CIP1蛋白的表达明显低于正常子宫内膜和单纯性增生性子宫内膜(P＜0.01),且p21WAF1/CIP1蛋白的表达与子宫内膜癌组织有无肌层浸润及临床分期明显相关(P均＜0.05).结论:p21WAF1/CIP1蛋白表达降低可能在子宫内膜癌的发生发展及判断预后方面具有重要作用.     

p21^WAF1／CIP1在原发性肺癌中的表达

目的：探讨p21^WAF1/CIP1在肺癌中的生物学功能,方法：用免疫组化法检测62例肺癌和14例正常肺组织石蜡切片p21^WAF1/CIP1的染色强度。结果：1．p21^WAF1/CIP1定位于细胞核或细胞浆。2．小细胞肺癌是与非小细胞肺中核p21^WAF1/CIP1表达存在显著性差异（P＜0．005）,浆p21^WAF1/CIP1则不存在显著性差异（P＜0．005）。核与浆p21^WAF1/CIP1表达的对比在高,低分化肺癌中具有显著性差异P＜0．05）。结论：肺癌细胞p21^WAF1/CIP1的生物学功能可能依其定位、量表达的高低及组织学类型的不同而存在差异。