胶束电动毛细管色谱法测定西洋参中人参皂苷Rb1,Re的含量

目的 :建立西洋参中人参皂苷Re ,Rb₁的胶束电动毛细管色谱测定方法 ,考察影响分离的各因素 ,确定最佳色谱条件。方法 :测定缓冲液为含 20mmol·L^-1硼酸、2 0mmol·L^-1硼砂、6 0mmol·L^-1胆酸钠和 20%乙腈的混合溶液。电压 20kV ,柱温 25℃ ,检测波长 203nm ,压力进样 5s。结果 :线性范围Re为 0.38～1.65mmol·L^-1,Rb₁为 0.42～ 1.76mmol·L^-1。加样回收率Re为 97.2% ,RSD =1.6% ;Rb1为 97.7% ,RSD =1.9% (n=5 )。结论 :该方法具有样品前处理简单 ,重现性好 ,所得色谱图信息丰富等特点。     

培养条件对西洋参悬浮细胞生物量和 活性成分的影响

目的:研究主要理化因子对西洋参细胞悬浮培养的影响.方法:利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,考察接种量、培养基种类、基质pH和光照条件对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖含量的影响.结果:当接种量为25 g·L~(-1)时,西洋参细胞的干重增殖倍数显著增加;通过考察Ms,SH,B_5 3种培养基对西洋参细胞的影响,结果表明MS培养基最有利于西洋参细胞生长,B_5培养基最有利于人参皂苷和西洋参多糖的合成.3种培养基中西洋参细胞多糖含量均高于栽培西洋参;pH变化对西洋参细胞生长影响不大,pH 6.0时,最有利于人参皂苷Re和西洋参多糖的合成;光照培养显著促进西洋参细胞次生代谢物的合成,但对多糖合成没有太大影响.结论:接种量、培养基种类、基质pH和光照条件对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb_1以及西洋参多糖合成有显著影响.     

LC-MS/MS法测定大鼠口服人参皂苷Rg1,Re,Rb1和Rd的药动学

 目的建立检测大鼠血浆中人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁和Rd的分析方法,并研究这4种成分在大鼠体内药动学特征。方法采用LC-MS/MS测定4种人参皂苷的血药浓度,用DAS2.0软件对结果进行统计分析。结果质谱采用MRM方式进行检测,人参皂苷Rg1和Rb1的线性范围为2～1000μg·L^-1,相关系数为0.997和0.998,人参皂苷Re的线性范围为1～1000μg·L_-1,相关系数为0.998,人参皂苷Rd的线性范围为1.6～1000μg·L^-1,相关系数为0.9940。这4种成分的最低检测限分别为2,1,2和1.6μg·L^-1,提取回收率为75.69%到98.79%,方法的精密度、准确度和稳定性均符合要求。结论本方法操作简单、专属性强、灵敏度高、准确性好,可用于人参皂苷类成分的体内测定。     

人参皂苷Rb1，Rg1和Re调控Raf-CREB，Akt-CREB，CaMKⅡ-CREB信号转导通路的体外研究

目的：研究人参皂苷中的主要有效单体Rb₁,Rg₁和Re对神经营养因子细胞信号转导通路的影响。方法：建立以0.6 mmol·L^-1的皮质酮作用于SH-SY5Y细胞24 h的损伤模型,加入Rb₁（120,60,20 μmol·L^-1）,Rg₁（120,80,40 μmol·L^-1）和Re（120,80,40 μmol·L^-1）,CCK试剂盒检测Rb₁,Rg₁和Re对皮质酮诱导SH-SY5Y细胞损伤的存活率;利用脂质体转染的方法将含有CREB-Luc报告基因的质粒分别和含有hRaf,hAkt,hcAMP,hCaMK基因的质粒转染入人胚肾细胞（HEK293细胞）,加入有效浓度人参皂苷Rb₁,Rg₁和Re后,用双荧光素酶报告基因系统和Western blotting方法检测CREB的表达情况。结果：CCK的测试结果表明人参皂苷Rb₁（60 μmol·L^-1）,Rg₁（80 μmol·L^-1）和Re（80 μmol·L^-1）对SH-SY5Y细胞具有明显的保护作用;报告基因检测方法显示加入Rb₁和Rg₁调控后Raf-CREB,Akt-CREB通路中CREB报告基因活性明显增强,加入Re调控后Raf-CREB,CaMKⅡ-CREB通路中CREB报告基因活性明显增强。Western blotting结果显示,Rb₁和Rg₁调控后Raf-CREB,Akt-CREB通路中CREB蛋白表达明显增强,Re调控后Raf-CREB,CaMKⅡ-CREB通路中CREB蛋白表达明显增强。结论：人参皂苷中的主要有效单体Rb₁,Rg₁和Re对皮质酮所致SY5Y细胞受损具有明显保护作用,其作用机制可能与调节神经营养因子细胞信号转导通路上游的Raf-CREB,Akt-CREB,CaMKⅡ-CREB通路有关。     

高效液相色谱用于参麦注射液人参皂苷的含量测定和批次一致性考察

 目的用高效液相色谱法测定参麦注射液中人参皂苷R_{g1和Rb1的含量，并用所检测到的指纹图谱考察参麦注射液不同批次产品内在质量的一致性。方法采用汉邦C18(5μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱，流动相A为50 mmol·L^-1KH2PO4溶液，B为乙腈-水(80∶20)，pH=3.5梯度洗脱，流速1 mL·min^-1，检测波长为202 nm，柱温为40℃。结果人参皂苷Rg1和Rb1的加样回收率＞99%，RSD＜1.2%，人参皂苷Rg1和Rb1分别在4.20～42.0和3.30～33.0μg范围内线性关系良好，色谱指纹图谱中分离出30多个峰。结论将指标性成分人参皂苷Rg1和Rb1的含量测定与色谱指纹图谱比较分析相结合，可提高参麦注射液的内在质量控制水平。}     

新疆雪莲细胞悬浮系的建立和黄酮类活性成分的产生

目的:建立新疆雪莲的悬浮培养体系。方法:研究不同培养基、培养基初始pH、碳源、接种量、植物生长物质含量对雪莲细胞生长和黄酮合成的影响。结果:N₆液体培养基在pH5.8、蔗糖含量50g·L^-1、接种量60-80g·L^-1FW时有利于细胞生长和黄酮合成,附加BA0.2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1有利于黄酮合成,而附加BA0.5mg·L^-1+NAA3mg·L^-1则对生长有利。结论:培养条件的优化可有效提高雪莲悬浮细胞的生长和总黄酮的合成。     

液体发酵生产猪苓胞内多糖的条件优化

目的: 优选猪苓液体发酵生产胞内多糖的工艺条件。方法: 采用摇瓶培养法制备猪苓胞内多糖的发酵培养基,以猪苓胞内多糖得率为指标,通过单因素试验考察氮源、碳源和发酵条件,正交试验优选培养基的组成。结果: 液体发酵生产猪苓胞内多糖的最适碳源为蔗糖,最适氮源为黄豆粉,优选的培养基组成为马铃薯10.0%,蔗糖4.0%,黄豆粉0.3%,KH₂PO₄ 0.2%,MgSO₄·7H₂O 0.15%;发酵条件为初始pH 5.2~5.6,振荡速度180~200 r·min^-1,培养温度28℃,培养时间7 d。结论: 液体发酵猪苓胞内多糖具有周期短、产量高的优势,对猪苓多糖工业化生产和降低生产成本具有重要意义。     

乌头碱配伍人参皂苷Rb1对原代培养心肌细胞能量代谢的影响

目的：探讨乌头碱配伍人参皂苷Rb₁对心肌细胞能量代谢的影响。方法：采用胰蛋白酶消化和差速贴壁法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、0.2%乌头碱组、0.1%乌头碱组、人参皂苷Rb₁组、乌头碱配伍人参皂苷Rb₁组（1?1、1?2、2?1）,给药作用1 h,检测心肌细胞的细胞活力和体内糖原、琥珀酸脱氢酶、细胞色素C氧化酶以及细胞乳酸脱氢酶的含量。结果：0.2%乌头碱能够明显降低心肌细胞活力,增加乳酸脱氢酶含量,降低细胞内糖原、琥珀酸脱氢酶、细胞色素C氧化酶含量;1×10^-6 mol·L^-1或2×10^-6 mol·L^-1浓度的人参皂苷Rb1配伍乌头碱,可明显对抗0.2%乌头碱对心肌细胞的毒性。结论：人参皂苷Rb1可降低乌头碱心肌细胞毒性,其作用机制可能与对抗细胞能量代谢有关。     

几种因素对悬浮培养人参细胞生长和皂苷积累的影响

为了完善人参细胞悬浮培养体系,论文研究了人参细胞悬浮培养的动态,探明了培养瓶瓶盖透气滤膜的有无,摇床转速和接种量对人参细胞生长和皂苷积累的影响。结果表明人参细胞悬浮培养过程中,细胞生物量和皂苷产量在培养20 d时达到最大值,因此,可将培养期定为20 d。培养瓶盖上有透气滤膜时有利于人参细胞生长和皂苷合成;悬浮培养时摇床转速影响细胞生长但对皂苷合成无影响,转数为120 r·min^-1时,皂苷生产量最高。每个培养瓶接种6 g鲜重的细胞时,细胞生长和皂苷积累明显好于其他接种量,总皂苷质量分数达12.8 mg·g^-1DW,生产量达146.6 mg·L^-1。     

培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导及牛膝多糖含量的影响

目的:研究培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导形成及牛膝多糖含量的影响。方法:以怀牛膝无菌苗的叶片、茎段为材料,采用正交设计研究基本培养基,碳源,2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)、N-苯基-N′-噻二唑-5-脲(TDZ)、水解酪蛋白(CH)对愈伤组织诱导和多糖含量的影响。结果:诱导叶片愈伤组织形成的适宜培养基为B₅+2mg·L^-12,4-D+0.5mg·L^-16-BA+30g·L^-1葡萄糖+1g·L^-1CH,诱导茎段愈伤组织形成的适宜培养基为B₅+2mg·L^-12,4-D+1mg·L^-16-BA+30g·L^-1葡萄糖+0.5g·L^-1CH;有利于叶片愈伤组织中多糖含量提高的培养基是LS+1mg·L^-16-BA+1mg·L^-1TDZ+30g·L^-1蔗糖,有利于茎段愈伤组织中多糖含量提高的培养基是LS+1mg.L^-12,4-D+0.5mg·L^-16-BA+1mg·L^-1TDZ+30g·L^-1葡萄糖。结论:初步建立了怀牛膝叶片、茎段诱导愈伤组织的适宜培养条件,为通过植物组织细胞培养途径生产牛膝多糖提供了依据。     

不同基质条件下西洋参皂苷提取物的自毒作用

人参皂苷是西洋参Panax quinquefolium中所含的主要次生代谢产物,西洋参生长过程中,植株内的人参皂苷可以通过根系分泌及腐解进入到土壤环境中.研究利用高效液相色谱法(HPLC)测定了土壤中人参皂苷含量,根据西洋参田间的实测数据设计皂苷提取物的系列浓度(0.2 ～125 mg· L-1溶液或0.2 ～ 125 mg·kg-1土壤),通过在溶液及土壤基质中的添加实验,观察环境中的皂苷提取物对西洋参种胚和成株苗生长的作用.结果表明,在北京市怀柔区三至四年生西洋参根际土中,检测到人参皂苷Rb1,Rb2,Rd,总量为0.80 ～ 3.19 mg·kg-,按照田间持水量为20％计算,总皂苷在土壤溶液中的质量浓度为4～ 16 mg·L-1.在溶液基质中,0.2～125 mg·L-1西洋参皂苷提取物对西洋参种胚胚根的抑制作用在6％ ～23％,在125mg·L-1时达到显著水平(P＜0.05);对西洋参胚芽无显著抑制作用.营养液中添加25 mg·L-1皂苷提取物,培养20 d时,三年生西洋参成株苗株高下降28％,地上部的生物量下降50％(P＜0.05);对新生须根生长的抑制作用不显著.在土壤基质中,添加同样浓度的皂苷提取物在灭菌和未灭菌土中对西洋参胚根、胚芽生长均无显著影响.由此推论,西洋参的皂苷成分对自身胚根和成株苗生长有自毒作用,但在田间土壤条件下,这种作用有所下降.     

转基因西洋参冠瘿组织中人参皂苷类成分的分离鉴定

 目的分离鉴定转基因西洋参冠瘿组织中的化学成分。方法以本研究组转导和培养的西洋参冠瘿组织为实验材料,体积分数为70%乙醇超声提取,硅胶柱色谱分离,用MS,¹H-NMR、¹³C-NMR、HMBC等谱学方法确定结构。结果分离得到5个化合物,分别为20(S)-人参皂苷Rh₁(Ⅰ)、20(S)-人参皂苷Rg₃(Ⅱ)、人参皂苷Re(Ⅲ)、20(S)-达玛烷-3β,6α,12β,20,25-五醇-6-O-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)和人参皂苷Rg₁(Ⅴ)。结论上述5个成分均为首次从转基因西洋参冠瘿组织培养物中分离得到,化合物Ⅳ为新天然产物。     

HPLC测定农田土、腐殖土西洋参皂苷含量及对比与分析

目的: 以西洋参皂苷为指标,比较2种土壤环境种植西洋参皂苷的含量。方法: 采用药典方法提取西洋参皂苷,用紫外分光光度计测定总皂苷含量,HPLC测定8种单体皂苷的含量。结果: 2种土壤环境种植西洋参的总皂苷含量均>6%,腐殖土西洋参单体皂苷含量高于农田土西洋参单体皂苷含量。结论: 2种土壤西洋参总皂苷含量无明显差异;各单体皂苷中腐殖土西洋参Rc,Re含量略高于农田土西洋参。     

离体培养条件对人参不定根生长及其活性成分合成的影响

目的:对人参不定根的摇瓶培养条件进行系统的优化。方法:利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,考察了接种量、蔗糖浓度以及无机盐浓度对人参不定根的生长、人参皂苷以及人参多糖合成的影响。结果:每1 L培养基接种的不定根鲜重为20 g时人参不定根的干重增殖倍数达到最大值;随着蔗糖浓度的升高,人参不定根干重增殖倍数呈先升高后降低的趋势,人参多糖含量增长趋势不明显,不同蔗糖浓度时各单体皂苷含量有显著区别,人参总皂苷含量随蔗糖浓度的升高而降低,单位体积培养基中的多糖和皂苷产量均在40 g.L-1蔗糖质量浓度下达到最大值;培养基中的无机盐浓度对不定根的生长以及多糖和皂苷的合成与积累都有较大影响,3/4MS最有利于不定根的生长以及皂苷的合成,而不定根中的多糖含量则随着盐浓度的升高而降低。结论:接种量、蔗糖浓度、无机盐浓度都会显著影响人参不定根的生长以及其活性成分的合成和积累。     

水杨酸对春季全光照下人参光合特性、生理生化及皂苷含量的影响

为了探讨提高人参产量新途径,采用春季全光照并施用不同浓度水杨酸的方法,比较人参叶片的净光合速率(P_n)、抗氧化酶活性、丙二醛(MDA)含量及人参皂苷含量。结果显示,全光照下0.05,0.2 mmol·L^-1水杨酸组可明显提高SOD,CAT,POD的活性,降低MDA含量,净光合速率大幅度提高。阴天条件下净光合速率平均高于传统遮荫的对照组127.8%,155.0%,高于未施水杨酸全光照的空白组13.9%,27.5%;晴天条件下高于传统遮荫的对照组23.5%,30.4%,高于空白组8.6%,14.6%,特别是早晚的差异更加明显,这种差异主要是由于全光照条件下增加外光量子密度及光饱和点增加和补偿点降低造成的。全光照条件下人参苷含量降低,但施水杨酸后,皂苷含量有显著提高。人参皂苷含量0.2 mmol·L^-1水杨酸组Rg₁与Re含量之和、Rb₁含量及6种人参皂苷含量之和远高于对照组、空白组及其他组。在春季短时期内对人参进行全光照并喷施0.2 mmol·L^-1浓度的水杨酸溶液处理,可增强人参抗逆性,可较好的提高人参产量和质量。     

采后晾晒过程中西洋参人参皂苷含量变化规律研究

目的:研究采后晾晒过程中西洋参6种人参皂苷含量变化规律。方法:采用"单株切分"法研究不同干燥方法 (自然晾晒、鼓风干燥和真空冷冻干燥法)和不同自然晾晒方式(整株晾晒和切片晾晒)对西洋参根部脱水速率与人参皂苷类成分含量的影响。动态检测西洋参根含水量,计算脱水速率;利用高效液相色谱法(HPLC)检测西洋参根中人参皂苷(Rg_1、Re、Rb_1、Rd、Rh_1和Rb_2)的含量;运用SPSS 17.0统计软件对实验结果进行单因素方差分析、主成分分析及聚类分析。结果:在"单株切分"法中,自然晾晒过程中西洋参根部脱水速率较慢,所需干燥周期为215.30 h,其人参皂苷类成分含量大幅升高,其中人参皂苷Rb_1、人参皂苷Rd含量均显著高于鼓风干燥法78.98%(P0.05)、85.84%(P0.05),显著高于真空冷冻干燥法30.63%(P0.05)、140.42%(P0.05)。整株晾晒过程中西洋参根部脱水速率缓慢,所需干燥周期为352.79 h,其人参皂苷Rg_1、人参皂苷Re和人参皂苷Rh1含量较切片晾晒显著提高54.97%(P0.05)、17.27%(P0.05)、22.73%(P0.05)。主成分分析及聚类分析结果表明,以人参皂苷Rg_1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb_1作为主成分因子评价采后干燥处理对西洋参根中人参皂苷类成分积累的影响,真空冷冻干燥、整株晾晒和自然晾晒法聚为一类,鼓风干燥和切片晾晒法聚为一类。结论:在采后晾晒过程中,整株自然晾晒方式有利于提高西洋参根中人参皂苷类成分的含量。     

黑龙江省引种西洋参药材质量的评价

本文对黑龙江省引种西洋参的药材性状、构造和主要化学成分做了鉴定和分析。与美国产野生品比较,除在性状和构造上略有差异,及总皂甙、人参皂甙Rb₁和Re的含量较低外,与进口同类商品比较则完全一致或相近。     

西洋参总皂苷的分离纯化工艺

目的:研究大孔吸附树脂法纯化西洋参总皂苷的工艺条件及参数.方法:以西洋参总皂苷含量为指标,考察上样液质量浓度、洗脱溶媒及其用量、除杂溶媒及其用量等条件,优选大孔树脂纯化工艺条件.结果:西洋参总皂苷最佳纯化工艺为0.8 BV上样液(0.5 g·mL-1)通过HPD-300大孔树脂,4 BV水洗,3 BV 10％乙醇洗脱,5 BV 70％乙醇洗脱,收集70％乙醇洗脱液,以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Re计总皂苷纯度为50.83％.结论:采用该优选方法可较好地分离、纯化西洋参总皂苷.     

三七体细胞胚发生及植株再生过程中主要皂苷成分的累积

目的 分析以栽培三七Panax notoginseng根为外植体诱导体细胞胚发生及植株再生过程中总皂苷及3种人参皂苷（人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁）的累积规律。方法 采用分光光度法分析体细胞胚发生发育过程中不同时期的总皂苷累积量;采用高效液相色谱法测定3种人参皂苷（人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁）的累积量。结果 体胚苗中的总皂苷质量分数最高,为7.79 %,占栽培三七根（8.61%）的90.48%,质量分数最低的为胚性愈伤组织,为2.47%。因材料的比生长速率存在差异,总皂苷累积效率的顺序为体胚苗＞前期体胚＞后期体胚＞胚性愈伤。对3种人参皂苷单体物质的分析显示：后期体胚中3种人参皂苷的量总和最大,为7.05 mg/g,胚性愈伤组织的最低,为2.78 mg/g;人参皂苷Rg₁在前期体胚时质量分数达到最高,为2.24 mg/g;人参皂苷Rb₁在后期体胚中的质量分数达到最高,为4.03 mg/g;人参皂苷Re在胚性愈伤组织中的量最高,为1.21 mg/g。3种人参皂苷的总累积效率在前期体胚中达到最大,为5.022 5 mg/(g·周),在体胚苗中最低,为1.947 4 mg/(g·周)。结论 总皂苷质量分数及累计效率均在体胚苗中达到最大值;3种人参皂苷总量及总累计效率分别在后期体胚和前期体胚中达到最大值。     

杠柳细胞悬浮培养体系中蔗糖浓度与氮源的考察

 目的 考察MS培养基中蔗糖浓度和氨态氮与硝态氮的比例（NH⁺₄∶NO^-₃以及初始总氮量对杠柳悬浮细胞生长和杠柳毒苷与4-甲氧基水杨醛积累的影响。方法 以3%蔗糖浓度为对照,设置1%、2%、4%、5%浓度梯度;设置NH⁺₄-NO^-₃分别为0∶1、1∶0、2∶1、1∶1、1∶2共5个处理;总氮含量以MS基本培养基（总氮含量60 mmol·L^-1为对照,实验组总氮含量分别为对照组的1/4、1/2和2倍。结果 4%的蔗糖最有利于杠柳细胞生长,5%的蔗糖有助于杠柳毒苷的合成,3%的蔗糖有利于4-甲氧基水杨醛的合成,4%的蔗糖最有利于杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛产量的提高。NH⁺₄-NO^-₃ 为1∶2有助于细胞生长和杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛的合成。总氮含量为N（60 mmol·L^-1时细胞生长最好;总氮含量为1/2N（30 mmol·L^-1时杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量最高,且产量也最高。结论 蔗糖浓度、氮源中氨态氮与硝态氮比例以及总氮含量的改变均可显著影响杠柳细胞生长和杠柳毒苷与4-甲氧基水杨醛的积累。