牡丹皮对AGEs诱导的系膜细胞增殖及基底膜增厚的影响

目的：探讨牡丹皮对晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs）诱导的系膜细胞增生及基底膜增厚的影响。 方法：建立AGEs诱导的肾小球系膜细胞（MC）损伤模型,设置空白组[牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),200 mg·L^-1],模型组（AGEs,200 mg·L^-1）,氨基胍（aminoguanidine,AG）阳性组（10 mmol·L^-1）,牡丹皮高、中、低剂量组（2×10^-4,1×10^-4,0.5×10^-4 g·mL^-1）。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察牡丹皮对损伤的MC的增殖影响;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定细胞上清液中纤维连接蛋白（fibronectin,FN）和Ⅳ胶原蛋白（type Ⅳ collagen secretion,ColⅣ）的含量;采用Western blotting观察FN的表达;Real-time PCR检测Col Ⅳ的mRNA表达水平。 结果：牡丹皮能抑制AGEs刺激的MC增殖以及FN和Col Ⅳ分泌;Western blotting表明牡丹皮下调MC分泌的FN表达;Real-time PCR结果说明牡丹皮对AGEs刺激下的MC分泌Col Ⅳ的mRNA表达有下调作用。 结论：牡丹皮对AGEs培养条件下的MC具有一定的保护作用,牡丹皮能明显抑制基质中Col Ⅳ及FN的合成与分泌,抑制基底膜增厚,为糖尿病肾病的治疗提供实验依据。     

黄芪注射液对AGEs培养肾小球系膜细胞的影响

目的:观察黄芪注射液对糖化终产物(AGEs)培养大鼠肾小球系膜细胞(GMC)形态学、细胞周期及氧化应激的影响。方法:用含AGEs的培养液配制黄芪注射液、氨基胍,同时设对照。GMC培养48 h后,加混合荧光染液进行染色,并立即进行荧光显微观察。另用流式细胞仪分析GMC的周期。试剂盒测定细胞上清液SOD、MDA和GSH-PX,流式细胞仪检测细胞内ROS含量。结果:形态学显示,正常GMC形态结构正常。而GMC在AGEs的刺激下,细胞数量明显增多,细胞结构不甚清晰,细胞S期延长,G0/G1缩短,细胞内SOD、GSH-PX下调,ROS、MDA上调。在系统中加入黄芪注射液后细胞异常增殖明显减少,细胞形态趋于正常,使S期细胞减少,SOD、GSH-PX活力提高,ROS、MDA含量降低。结论:黄芪注射液能对抗AGEs对GMC的损伤作用。其可能是通过抑制氧化应激来保护GMC免受AGEs的损害,从而达到防治糖尿病肾病的目的     

葛根素对D-半乳糖诱导糖基化大鼠脑损害的干预作用

目的：研究葛根素(puerarin, Pue)对D-半乳糖诱导的糖基化模型大鼠并发脑损害的干预作用。方法：D-半乳糖（150 mg·kg^-1·d^-1,ip）给药8周,诱导糖基化模型大鼠,并于第3周开始给予葛根素高、中、低（300,150,75 mg·kg^-1）剂量处理6周。测定红细胞醛糖还原酶活性、糖化血红蛋白、血清果糖胺和晚期糖基化终末产物(AGEs)含量及脑组织中AGEs含量、脑神经细胞内钙离子水平,并以透射电镜观察脑内海马神经细胞线粒体的变化。结果：葛根素高、中剂量明显降低模型组大鼠红细胞醛糖还细胞酶活性,抑制糖化产物的形成（P<0.01）,降低脑组织中AGEs及脑细胞内钙的含量（P<0.05,P<0.01）,保护海马神经细胞线粒体结构的完整性。结论：葛根素具有抑制D-半乳糖诱导的蛋白糖基化反应,并对糖基化状态并发的脑神经细胞损害具有保护作用。     

肾络通对高糖诱导足细胞产生MMP9的调节作用

目的:探讨肾络通药物血清对高糖诱导足细胞分泌明胶酶、Ⅳ型胶原的影响及可能的作用机制.方法:小鼠足细胞分为高糖组、甘露醇对照组、正常糖对照组和肾络通药物血清组.应用明胶酶谱法观察各组细胞培养液上清明胶酶活性的动态变化,Western印迹法检测上清Ⅳ型胶原α5链蛋白水平.RT-PCR方法检测MMP9 mRNA的改变.结果:高糖组细胞培养上清MMP2的活性没有明显变化;MMP9活性于第2天开始升高,第3天达高峰;高糖组细胞培养上清Ⅳ型胶原α5链蛋白表达自第2天开始下降,第3天达最低水平,细胞培养上清MMP9的活性与Ⅳ型胶原α5链蛋白的表达量呈负相关;高糖刺激足细胞2d MMP9 mRNA水平增加,5d降到基础水平;5%肾络通药物血清组第3天 MMP9 活性无明显升高,MMP2活性无明显变化;5%肾络通药物血清第2天MMP9mRNA水平无明显增加;5%肾络通药物血清组第3天培养上清Ⅳ型胶原α5链蛋白表达无明显下降.结论:肾络通可以抑制高糖诱导足细胞MMP9及Ⅳ型胶原α5链蛋白的异常改变.     

复方糖肾康对AGEs体外诱导HMC细胞凋亡的影响

目的:通过研究复方糖肾康对蛋白质非酶糖基化的调控,探讨其治疗糖尿病肾病的作用机制。方法:糖化牛血清白蛋白高、中、低(AGEs:2、10、50mg/ml)培养HMC细胞24h,给药组加入不同浓度的复方糖肾康(1、0.1、0.01mg/ml);空白对照组不做任何处理;西药对照组加入氨基胍0.1μM。实验结束后,收集细胞和细胞溶液。细胞裂解提取蛋白进行western blot操作。结果:不同浓度的复方糖肾康均明显增加了系膜细胞内Caspase-9、3-NT水平。结论:复方糖肾康可能通过抑制AGEs对肾小球系膜细胞的作用,促进系膜细胞凋亡,抑制系膜细胞增殖,而起到改善或延缓糖尿病时肾脏病变的发生和发展。     

PGG通过激活Nrf2抗氧化通路保护AGEs诱导的系膜细胞损伤

目的:研究五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-penta-O-galloy-β-D-glucose,PGG)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导小鼠肾小球系膜细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:通过AGEs处理小鼠系膜细胞建立系膜细胞损伤模型,将实验分为正常对照组、模型组及不同浓度PGG(5、10、20μM)组;采取DCFH法检测细胞内ROS含量;试剂盒法检测细胞培养上清中SOD活性和MDA含量;Western blot检测全细胞Nrf2、HO-1蛋白表达及胞核、胞质中Nrf2蛋白表达。结果:与模型组相比,PGG显著降低细胞中ROS水平,增加SOD活性,减少MDA含量,增加细胞Nrf2和HO-1蛋白表达,增加胞核Nrf2蛋白表达。结论:PGG对AGEs诱导系膜细胞的保护作用是通过激活Nrf2/HO-1抗氧化信号通路。     

酸味中药复方对糖尿病大鼠心肌组织晚期糖化终产物形成及其受体基因表达的影响

目的以氨基胍（AG）为对照,观察酸味中药复方对2型糖尿病大鼠心肌组织晚期糖化终产物（AGEs）含量及受体（RAGE）基因表达的影响,探讨其防治糖尿病心肌病变的机制。方法采取腹腔注射链脲佐菌素（STZ）配合高热量饮食的方法建立糖尿病动物模型。成模后随机分为模型组、AG组、中药组。给药8周和12周后分别采用荧光法和荧光定量PCR法检测心肌组织AGEs含量和RAGE基因表达量。结果糖尿病大鼠心肌组织AGEs含量和RAGE基因表达量明显高于正常组（P〈0．05）;中药组和AG组AGEs含量和RAGE基因表达量明显低于模型组（P〈0．05）。结论酸味中药复方可能通过抑制大鼠心肌组织AGEs形成和下调RAGE基因表达实现对高糖状态下心肌组织保护作用。     

糖络宁含药血清对高糖环境下RSC96细胞Keap1/Nrf2/Bcl-2途径的作用机制研究

目的针对糖尿病周围神经病变氧化应激的核心发病机制,以Keap1/Nrf2/Bcl-2途径为切入点,观察糖络宁对高糖环境下雪旺细胞的氧化应激和细胞凋亡的影响,探讨糖络宁防治DPN的可能作用机制。方法采用150 mmol/L葡萄糖培养雪旺细胞,随机分为空白对照组(Control)、高糖组(High Glucose)、α-硫辛酸含药血清组(ALA)、糖络宁含药血清组(TLN)。干预36 h后,应用流式细胞仪检测高糖环境下雪旺细胞超氧自由基和细胞凋亡,应用JC-1探针观察高糖环境下雪旺细胞线粒体膜电势(MMP),应用高内涵分析(HCA)法和Western Blot分析高糖环境下雪旺细胞Keap1/Nrf2通路中Keap1、Nrf2、HO-1和γGCS蛋白表达的变化及细胞凋亡调节蛋白Bcl-2、Bax、Cyto C和Caspase-3的蛋白表达的变化。结果高糖干预36 h后,与空白对照组比较,高糖组细胞凋亡、ROS含量增加,MMP降低(P<0.01);与高糖组比较,糖络宁组能够降低细胞凋亡和ROS含量,增加MMP(P<0.05或P<0.01)。HCA和Western Blot分析结果显示,与空白对照组比较,高糖组Keap1、Nrf2、HO-1和γGCS增加(P<0.01或P<0.05);与高糖组比较,糖络宁组能进一步增加Keap1、Nrf2、HO-1和γGCS蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。与空白组比较,高糖组Bcl-2、Bax、Cyto C和Caspase-3蛋白表达增加(P<0.01或P<0.05);与高糖组比较,糖络宁组能够增加Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Cyto C和Caspase-3蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。结论糖络宁能够抑制高糖环境下雪旺细胞的氧化应激和细胞凋亡,与上调Keap1/Nrf2通路的蛋白表达对抗氧化应激,调控Bcl-2相关细胞凋亡通路的蛋白表达从而抑制细胞凋亡有关。     

消癥散结扶正活络方药对TGF-β1诱导的HMCs增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响

目的观察消癥散结、扶正活络方药对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响。方法采用TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原表达作为肾纤维化的细胞模型,实验分为5组:空白组,TGF-β1处理组,消癥散结、扶正活络方药高、中、低剂量(终浓度分别为50 mg/L、100 mg/L和200 mg/L)组。MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖抑制率,ELISA法检测肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原的表达。结果与空白对照组比较,TGF-β1处理组细胞经TGF-β1诱导后,HMCs增殖明显,细胞内ECM物质Ⅳ型胶原含量显著提高,差异均具有统计学意义。与TGF-β1处理组比较,消癥散结、扶正活络方药组可抑制TGF-β1诱导的HMCs的增殖及Ⅳ型胶原的表达,差异均具有统计学意义。结论消癥散结、扶正活络方药对TGF-β1诱导的HMCs的增殖及Ⅳ型胶原的表达具有抑制作用,抑制TGF-β1刺激HMCs分泌细胞外基质可能是其抗纤维化形成的机制之一。     

黄芪对高糖高脂条件下系膜细胞的影响

目的 观察黄芪对高糖高脂条件下对系膜细胞增殖及产生细胞外基质(ECM)的影响.方法 人系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、黄芪组,MTT比色法观察系膜细胞的增殖情况,ELISA法检测细胞上清液Fn、Col IV含量.结果 高糖高脂组系膜细胞增殖较对照组增高,黄芪组的系膜细胞增殖较高糖高脂组减低;高糖高脂组上清液Fn和Cd IV含量较对照组升高,黄苠组的Col IV、Fn含量较高糖高脂组减低.结论 高糖高脂可刺激系膜细胞分泌Fn、Col IV增加,高糖高脂刺激的ECM分泌增加与系膜细胞增殖有关.黄芪可抑制高糖高脂刺激的系膜细胞增殖及Col IV、Fn分泌增加,具有肾脏保护作用.     

山茱萸环烯醚萜总苷对高糖或AGEs培养肾小球系膜细胞增殖和Na+,K+-ATP酶活性的影响

目的:研究山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对高糖或糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Na ,K -ATP酶活性的影响。方法:用含AGEs或高糖的培养液配制ICO、氨基胍,同时设对照。GMC培养48h后MTT法考察GMC的增殖情况,试剂盒测试细胞悬液中细胞蛋白含量,再进行Na ,K -ATP酶测定。结果:于葡萄糖或AGEs中GMC的吸收度值增大,Na ,K -ATP酶活性显著降低,而加入ICO后,则表现为对抗高糖或AGEs对GMC的增殖作用,并能提高Na ,K -ATP酶活性。结论:ICO能抑制高糖或AGEs对GMC的过度增殖,修复高糖或AGEs致GMC的Na ,K -ATP酶活性降低。     

绞股蓝皂苷对晚期糖基化终末产物诱导人肾小球系膜细胞晚期糖基化终末产物受体表达及氧化应激水平的影响

目的观察绞股蓝皂苷(GP)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导下人肾小球系膜细胞(HMCs)中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达及氧化应激水平的影响。方法用含13%FBS的DMEM低糖培养液体外培养HMCs细胞,将细胞分为6组:对照组(DMEM培养液),AGEs组(200 mg/L),GP低、中、高剂量(25、75、150 mg/L)组和阳性对照组(氨基胍0.1 mmol/L)。培养72 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中RAGE m RNA的表达水平,Western blotting法检测RAGE蛋白表达水平。应用试剂盒检测各组细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及细胞内微量还原型谷胱甘肽(GSH)活性。结果 AGEs显著促进HMCs中RAGE m RNA及蛋白表达(P0.01),增强细胞氧化应激水平。GP能有效抑制RAGE m RNA及蛋白表达,增加上清液中SOD和细胞内GSH水平,降低细胞上清液中MDA水平,且呈浓度依赖效应,与AGEs组比较差异显著(P0.01)。结论 GP下调AGEs刺激后HMCs细胞RAGE的异常高表达,同时改善细胞内氧化应激水平,其可能的机制是GP阻断了RAGE介导的AGEs-RAGE-氧化应激信号通路,表现为细胞上清液中MDA水平降低和SOD水平增加及细胞内GSH水平增加。     

黄芪注射液对高糖或AGEs培养肾小球系膜细胞增殖和Na+-K+-ATP酶活性的影响

[目的]观察黄芪注射液对高糖或糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Na -K -ATP酶活性的影响。[方法]用含高糖或AGEs的培养液配制黄芪注射液、氨基胍,同时设对照。GMC培养48h后,四甲基氮唑盐(MTT)法考察GMC的增殖情况,试剂盒测试细胞悬液中细胞蛋白含量,再进行Na -K -ATP酶测定。[结果]葡萄糖或AGEs中GMC的吸收度值增大,Na -K -ATP酶活性显著降低,与正常培养液比较具有显著性差异。而加入黄芪注射液后,则表现为对抗高糖或AGEs对GMC的增殖作用,并能提高Na -K -ATP酶活性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖或AGEs对GMC的过度增殖,修复高糖或AGEs致GMC的Na -K -ATP酶活性降低,起到保护细胞的作用。     

益肾蠲湿合剂对TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的探讨中药复方益肾蠲湿合剂对TGF-β1作用下肾小球系膜细胞(GMC)分泌细胞外基质的影响。方法将含不同剂量益肾蠲湿合剂的药物血清与TGF-β1(终浓度5μg/L)共同培养GMC 24,48,72 h,收集培养上清并用ELISA法检测纤维连结蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)含量。结果益肾蠲湿合剂的药物血清可抑制TGF-β1刺激GMC分泌FN、LN和ColIV,而且随着药物浓度的增加,其对GMC分泌FN、LN和ColIV的抑制率也相应增加。结论益肾蠲湿合剂对TGF-β1诱导的GMC分泌FN、LN和ColIV有明显的抑制作用,提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是本复方治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

益肾蠲湿合剂对TGF-β_1诱导的肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的探讨中药复方益肾蠲湿合剂对TGF-β1作用下肾小球系膜细胞（GMC）分泌细胞外基质的影响。方法将含不同剂量益肾蠲湿合剂的药物血清与TGF-β1（终浓度5μg/L）共同培养GMC 24,48,72 h,收集培养上清并用ELISA法检测纤维连结蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）及Ⅳ型胶原（ColⅣ）含量。结果益肾蠲湿合剂的药物血清可抑制TGF-β1刺激GMC分泌FN、LN和ColIV,而且随着药物浓度的增加,其对GMC分泌FN、LN和ColIV的抑制率也相应增加。结论益肾蠲湿合剂对TGF-β1诱导的GMC分泌FN、LN和ColIV有明显的抑制作用,提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是本复方治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

牡丹皮多糖2b对高糖所致大鼠系膜细胞增生及活性氧产生的影响

目的探讨高糖对大鼠系膜细胞(MC)增生及活性氧产生的影响,以及牡丹皮多糖2b(PSM2b)对其的干预作用。方法采用MTT法和比色法,分别检测不同浓度PSM2b各组体外高糖培养的MC增生和细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的活力和丙二醛(MDA)的水平。结果PSM2b对高糖所致的MC增殖有显著的抑制作用,其抑制作用呈浓度依赖性,并且能够提高上清液中SOD活力,降低MDA含量。结论高糖可导致MC增生和活性氧产生增多,而PSM2b能进行有效的干预。     

Ampelopsin inhibits high glucose‐induced extracellular matrix accumulation and oxidative stress in mesangial cells through activating the Nrf2/HO‐1 pathway

Oxidative stress plays an important role in diabetic nephropathy (DN), which is a diabetic complication. Ampelopsin (AMP) is a natural flavonoid that has been found to possess antidiabetic and antioxidative activities. However, the effect of AMP on DN remains unclear. In this study, we aimed to evaluate the protective effect of AMP on glomerular mesangial cells (MCs) exposed to high glucose (HG). We found that AMP improved HG‐caused cell viability reduction in MCs. AMP significantly suppressed the intracellular ROS production and expression levels of ROS producing enzymes NADPH oxidase 2 (NOX2) and NOX4. Increased of NOX activity in HG‐stimulated MCs was suppressed by AMP. Pretreatment with AMP inhibited extracellular matrix (ECM) accumulation in HG‐stimulated MCs with decreased expression levels of fibronectin (FN) and collagen type IV (Col IV). Furthermore, AMP elevated the expression levels of nuclear Nrf2 and heme oxygenase‐1 (HO‐1), as well as increased the mRNA levels of Nrf2‐driven genes NAD(P)H dehydrogenase quinone‐1 (NQO‐1) and HO‐1 in HG‐treated MCs. Knockdown of Nrf2 reversed the protective effects of AMP against HG‐induced oxidative stress and EMC accumulation in MCs. In conclusion, these findings indicated that AMP protected MCs from HG‐induced oxidative damage and ECM accumulation, which might be mediated by Nrf2/HO‐1 pathway.     

氨基胍对糖尿病大鼠肾脏中AGEs和LPO的影响

目的探讨氨基胍(AG)对糖尿病大鼠肾脏中糖基化终末产物(AGEs)和脂质过氧化物(LPO)的影响。方法将36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组)、模型组(DM组)和AG组,用链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型。AG组给予AG治疗8周。测定各组大鼠肾质量/体质量、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)2、4 h尿蛋白定量、肾小球AGEs(GTE-AGEs)、血清和尿中抗CML-AGEs及LMN-AGEs、肾小球和血清LPO含量,观察肾脏病理改变。结果DM组大鼠血清BUN、SCr、血清AGEs、血清LPO、GTE-AGEs、GTE-LPO、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量均显著高于N组,AG组血清BUN、血清SCr、血清CML-AGEs、血清LPO、GTE-AGEs、GTE-LPO、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量均显著低于N组,尿中AGEs、血清CML-AGE含量显著高于DM组和N组;AG可显著减轻肾脏病理学改变。结论氨基胍可通过减少AGEs在糖尿病大鼠肾脏的蓄积,降低尿蛋白排泄,减少氧化应激水平及其他间接作用,发挥其对糖尿病肾病的防治作用。     

黄芪对高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞相互作用的影响

目的探讨黄芪对高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞间相互作用的影响。方法内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、黄芪组,培养24h后,ELISA法检测各组细胞上清液IV型胶原（colIV）、纤维连接蛋白（Fn）的含量。结果在高糖高脂环境下,共培养和单培养细胞上清液ColIV、Fn含量升高（均P〈0．05）,共培养上清液C01IV、Fn较单培养升高（均P〈0．05）;黄芪组colIV、Fn含量较高糖高脂组下降（均P〈0．05）。结论高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用,这种作用能促进ColIV、Fn产生。黄芪通过抑制高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞间的相互作用,减少ColIV、Fn的含量,发挥肾脏保护作用。     

肾康注射液对系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)、p27~(KIP1)表达的影响

目的观察肾康注射液对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)(p21)、p27~(KIP1)(p27) mRNA及蛋白质表达的影响。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为6组,分别为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加肾康注射液高、中、低剂量组,用[~3H]胸腺嘧啶核苷([~3H]TdR)及[~3H]亮氨酸([~3H] Leu)掺入法反应细胞DNA及蛋白质的合成情况,RT-PCR、Western blot检测p21mRNA及p21、p27蛋白质表达情况。结果高糖培养肾小球系膜细胞蛋白质合成增加,DNA合成减少,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达增加；肾康注射液组与高糖组比较,蛋白质合成减少,DNA合成增加,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达降低。结论肾康注射液可能部分通过降低p21、p27过表达来阻止高糖诱导肾小球系膜细胞的肥大反应。