回心草对脐静脉内皮细胞的保护作用及对分泌一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的:研究回心草水提取液及其含药血清对人脐静脉内皮活细胞数、内皮细胞一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NO合酶)的影响,探讨回心草抗动脉硬化的药理作用机制。方法:采用H₂O₂建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤模型。采用MTT法测定回心草提液对H₂O₂损伤的内皮细胞的吸光度(OD);采用经典Griess Reagent检测各剂量组细胞上清液中NO浓度,采用一氧化氮荧光检测探针DAF-FMDA(3-amino,4-aminomethyl-2′,7′-difluorescein,diacetate)检测细胞内NOS的活性。结果:H₂O₂12.5mmol·L^-1为最合适的细胞刺激浓度;回心草药液与H2O2损伤的血管内皮细胞共同孵育24h后,2.50mg·mL^-1、3.33mg·mL^-1浓度组与模型组比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);回心草水提液作用于内皮细胞,进行NO,NOS含量的测定,其中回心草2.50mg·mL^-1剂量组有显著作用(P<0.05)。结论:12.5mmol·L^-1的H₂O₂作用24h,可成功建立内皮细胞氧化应激损伤模型;回心草水提液直接作用于H₂O₂损伤的内皮细胞,2.50,3.33mg·mL^-1两个浓度组可以减轻内皮细胞的损伤;回心草2.50mg·mL^-1可增加NOS活性,促进NO的分泌。     

As2O3 不同给药方式对 NB4 细胞侵袭力和 MMPs 活性的影响

 目的 对比 As₂O₃ 不同干预方式对白血病细胞株 NB4 的侵袭力和基质金属蛋白酶 2,9(MMP-2 、 MMP-9) 活性的影响。 方法 噻唑蓝（ MTT ）法检测 As₂O₃ 恒定和变化两种体系体外干预对 NB4 细胞的增殖抑制, ELISA 检测 2 种体系中处理的 NB4 细胞的 MMP-2 和 MMP-9 蛋白含量的变化。明胶酶谱法检测 2 种 As₂O₃ 处理前后 NB4 细胞 MMP-2 活性变化, Westen blot 检测活性 MMP-9 蛋白表达, Transwell 小室穿透实验检测两种 As₂O₃ 处理方式对 NB4 细胞穿透力的影响。 结果 ①与平行对照组比较 0.1 μmol·L^-1 As₂O₃ 恒定浓度体系中持续作用 72 h ,对 MMP-2 、 MMP-9 的活性和 NB4 细胞侵袭力影响不显著。 0.5 μmol·L^-1 As₂O₃ 持续作用 24 h 与对照组比较无明显差异, 48 h 以后 MMP-2 、 MMP-9 的活性和 NB4 侵袭力降低,与对照组比较差异显著。 1.0 μmol·L^-1 以上浓度 As₂O₃ 处理 24 h , MMP-2 、 MMP-9 活性和 NB4 细胞侵袭力下降,并呈时间依赖性。② 2.0 μmol·L^-1 As₂O₃ 恒定浓度体系与峰浓度为 5.0 μmol·L^-1 ,终质量浓度为 0 μmol·L^-1 的变化浓度体系比较,前者对 NB4 的侵袭力和 MMPs 活性的抑制程度比后者更显著。 结论 NB4 细胞的侵袭力与其 MMP-2 、 MMP-9 活性有关,促分化有效的低浓度 As₂O₃ 对 NB4 细胞侵袭力和 MMP-2 、 MMP-9 活性抑制作用不明显。在干预时间相同的情况下,促凋亡有效的恒定浓度 As₂O₃ 持续作用,对 NB4 细胞侵袭力和 MMP-2 、 MMP-9 活性的抑制强度大于峰浓度很高但持续时间很短的变化浓度体系 , 这可能是临床上 As₂O₃ 持续缓慢输注法较常规给药法更能有效降低急性早幼粒细胞白血病（ APL ）中枢神经系统浸润和早期的致死性脑出血发生率的机制之一。     

培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导及牛膝多糖含量的影响

目的:研究培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导形成及牛膝多糖含量的影响。方法:以怀牛膝无菌苗的叶片、茎段为材料,采用正交设计研究基本培养基,碳源,2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)、N-苯基-N′-噻二唑-5-脲(TDZ)、水解酪蛋白(CH)对愈伤组织诱导和多糖含量的影响。结果:诱导叶片愈伤组织形成的适宜培养基为B₅+2mg·L^-12,4-D+0.5mg·L^-16-BA+30g·L^-1葡萄糖+1g·L^-1CH,诱导茎段愈伤组织形成的适宜培养基为B₅+2mg·L^-12,4-D+1mg·L^-16-BA+30g·L^-1葡萄糖+0.5g·L^-1CH;有利于叶片愈伤组织中多糖含量提高的培养基是LS+1mg·L^-16-BA+1mg·L^-1TDZ+30g·L^-1蔗糖,有利于茎段愈伤组织中多糖含量提高的培养基是LS+1mg.L^-12,4-D+0.5mg·L^-16-BA+1mg·L^-1TDZ+30g·L^-1葡萄糖。结论:初步建立了怀牛膝叶片、茎段诱导愈伤组织的适宜培养条件,为通过植物组织细胞培养途径生产牛膝多糖提供了依据。     

骨碎补提取物促小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和钙化作用的研究

目的 :探讨中药骨碎补有无促进成骨细胞增殖、分化和钙化的作用。方法 :制备骨碎补的水、醇提取液。小鼠成骨细胞株MC3T3 E1作为药物筛选的细胞模型 ;用MTT法和流式细胞术测定不同浓度的骨碎补水、醇提取液的促细胞增殖作用 ;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察上述药物提取液的促细胞分化作用 ;以Vonkossa钙化染色法了解上述药物提取液的促细胞钙化作用。结果 :0.01,1mg·L^-1骨碎补水提液能促进MC3T3 E1细胞数量增加 (P <0 .0 5 ) ;0.01,1mg·L^-1骨碎补水提液和醇提液能使S期细胞百分率升高、G1期细胞百分率减少 ;1,10 0mg·L^-1骨碎补醇提液能使细胞ALP的活性升高 (P <0.05 ) ;100mg·L^-1骨碎补醇提液能明显促进细胞骨钙素合成和分泌 (P <0 .001) ;1mg·L^-1骨碎补水提液及 0.01mg·L^-1骨碎补醇提液均可促进细胞钙化 (P <0.05 )。结论 :骨碎补水相和醇相提取物中分别存在有较高活性的促成骨细胞增殖、分化和钙化的物质。     

喇叭唇石斛组织培养的研究

目的 :筛选喇叭唇石斛快速繁殖体系的适宜培养基及培养条件。方法 :对基本培养基、光照条件、激素、天然提取物浓度等进行比较研究。进行叶绿素含量、可溶性蛋白含量测定。结果 :N₆培养基是种胚萌发成苗适宜培养基 ,而 1/2 MS +NAA 0.5mg·L^-1易于原球茎膨大增殖。先暗培养 20d再光照培养有利于胚的萌发及苗的生长。 1/ 2MS +NAA 0～ 0 .5mg·L^-1有利于原球茎大量增殖 ,N₆+6 BA 2 .0mg·L^-1+NAA 0 .5mg·L^-1+10 %马铃薯汁是原球茎分化的适宜培养基 ,添加激素和马铃薯汁促进叶绿素和可溶性蛋白含量上升。N₆+NAA 0 .5mg·L^-1+10 %香蕉汁生根壮苗最适宜。结论 :无机盐浓度、氮源形态、光照条件对胚萌发生长影响较大 ;氮源形态对原球茎增殖有影响 ;叶绿素含量、可溶性蛋白含量能反映组培苗的生长状态 ,可作为筛选培养基参考指标。     

红车轴草总黄酮体外抗氧化作用的研究

 目的 探讨红车轴草总黄酮体外抗氧化作用。 方法 采用分光光度法测定 H₂O₂ 诱导红细胞溶血作用,用 2- 硫代巴比妥酸法测定小鼠红细胞膜脂质及肝组织匀浆脂质过氧化产物丙二醛（ MDA ）含量。 结果 红车轴草总黄酮在 0.2~1.6 mg·L^-1 内能抑制 H₂O₂ 诱导红细胞溶血和红细胞膜脂质过氧化作用, IC₅₀ 分别为 0.93 及 0.92 mg·L^-1 ,均呈较好的量效关系;红车轴草总黄酮在 4~32 mg·L^-1 内能抑制肝组织脂质过氧化产物的形成, IC₅₀ 为 17.5 mg·L^-1 。 结论 在一定浓度范围内红车轴草总黄酮体外具有明显的抗氧化作用。     

HPLC同时测定赤芝中4种三萜酸的含量

目的：建立HPLC同时测定赤芝药材中灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D含量的方法。方法：采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液采用梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长252 nm,柱温35 ℃。结果：灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D的线性范围分别为：5.0～50.0 mg·L^-1(r=0.999 9),7.2～72 mg·L^-1(r=0.999 9),11.67～116.7 mg·L^-1(r=0.999 9)和5.32～53.2 mg·L^-1(r=0.999 8);平均回收率(n=3)分别为98.8%(RSD1.5%),99.1%(RSD1.9%),99.5%(RSD1.4%)和98.5%(RSD1.9%)。结论：该方法简便、准确,重复性好,为赤芝药材的质量控制提供了实验依据。     

HPLC同时测定赤芝中4种三萜酸的含量

目的：建立HPLC同时测定赤芝药材中灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D含量的方法。方法：采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液采用梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长252 nm,柱温35 ℃。结果：灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D的线性范围分别为：5.0～50.0 mg·L^-1(r=0.999 9),7.2～72 mg·L^-1(r=0.999 9),11.67～116.7 mg·L^-1(r=0.999 9)和5.32～53.2 mg·L^-1(r=0.999 8);平均回收率(n=3)分别为98.8%(RSD1.5%),99.1%(RSD1.9%),99.5%(RSD1.4%)和98.5%(RSD1.9%)。结论：该方法简便、准确,重复性好,为赤芝药材的质量控制提供了实验依据。     

六月青一种木脂素苷的体外抗氧化活性

目的: 研究六月青一种木脂素苷(6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol的抗氧化活性。 方法: 采用酶标仪微量法和紫外-可见光分光光度法,以维生素C为阳性对照,分别测定(6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol对1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH ·)自由基、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O^-₂·)的清除能力。 结果: (6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol对DPPH·(半数清除率IC₅₀ 8.11 mg·L^-1),·OH(IC₅₀ 21.61 mg·L^-1)和O^-₂·(IC₅₀ 10.30 mg·L^-1)均具有清除作用,且呈明显的量效关系。 结论: (6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol在体外有明显的抗氧化作用。     

蛇葡萄素对大鼠肝星状细胞增殖及胶原蛋白、细胞因子生成的影响

目的：研究蛇葡萄素对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）的增殖及胶原蛋白、细胞因子生成的影响。方法：对HSC-T6增殖的影响：用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液制备成HSC-T6细胞3×10⁴个/mL细胞悬液100 μL/孔接种于96孔培养板。设细胞对照组、秋水仙碱1.0 mg·L^-1组和100.0,75.0,50.0,25.0,12.5 mg·L^-15个不同质量浓度蛇葡萄素组,置37 ℃ 5%CO₂培养48 h。采用MTT法检测蛇葡萄素对大鼠肝细胞HSC-T6增殖的影响。对HSC-T6生成Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白及细胞因子（TGF-β₁,PDGF）含量的影响：取终质量浓度分别为50.0,25.0,12.5 mg·L^-1蛇葡萄素,3×10⁴个/mL细胞悬液100 μL/孔细胞液接种于96孔培养板。阳性组秋水仙碱的质量浓度为1.0 mg·L^-1。置37 ℃ 5%CO₂培养48 h。ELISA法检测HSC-T6细胞生成的胶原蛋白（Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ）、转化生长因子（TGF-β₁）及血小板衍生因子（PDGF）含量。结果：蛇葡萄素100.0,75.0 mg·L^-1对HSC-T6细胞的增殖有明显抑制作用,其无毒浓度为50.0 mg·L^-1。50 mg·L^-1的蛇葡萄素可使HSC-T6细胞生成的Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白,TGF-β₁,PDGF含量明显低于细胞对照组（P<0.05）,25 mg·L^-1的蛇葡萄素也可使HSC-T6细胞生成的Ⅲ型胶原蛋白含量明显低于细胞对照组（P<0.05）。结论：蛇葡萄素能抑制HSC-T6增殖并可使HSC-T6生成的Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白,TGF-β₁,PDGF含量降低。     

黄芪多糖调控多胺介导的Ca~(2+)-RhoA通路促进小肠上皮细胞迁移研究

目的考察黄芪多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及迁移过程细胞内多胺水平、细胞质游离钙离子([Ca2+]cyto)的量、细胞骨架蛋白Rho A表达的影响,探讨黄芪修复胃肠黏膜损伤的疗效机制。方法黄芪药材经水提醇沉、Sevage法去蛋白后得到黄芪粗多糖,运用DEAE纤维素柱分离得到黄芪多糖I、II、III、IV,黄芪多糖I以Sephadex LH-20凝胶柱色谱得到黄芪多糖V。Tips划痕法建立IEC-6细胞损伤迁移模型,柱前衍生高效液相色谱法测定多胺的量,流式细胞仪检测[Ca2+]cyto水平,Western blotting法检测Rho A蛋白表达。考察黄芪多糖对正常IEC-6细胞[未加α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)]和多胺耗竭IEC-6细胞(加入DFMO)迁移、多胺水平、[Ca2+]cyto的量及Rho A蛋白表达的影响。结果黄芪粗多糖、黄芪多糖I、黄芪多糖V(50、100、200 mg/L)均能促进IEC-6细胞迁移(P0.01),并且可逆转多胺合成抑制剂DFMO所致的细胞迁移抑制效果(P0.01);在正常(未加DFMO)或多胺耗竭情况(加DFMO),黄芪多糖V均可提高迁移过程细胞内多胺的量(P0.01);黄芪多糖V可提高细胞迁移过程[Ca2+]cyto水平(P0.01),并且可逆转DFMO所致的[Ca2+]cyto水平下降(P0.01);黄芪多糖V(100、200 mg/L)可明显提高Rho A蛋白表达,同时可逆转DFMO所导致的Rho A蛋白表达抑制作用。结论黄芪多糖可加速胃肠黏膜损伤早期修复过程,其机制可能与增加黏膜上皮细胞多胺的量,提升[Ca2+]cyto,从而提高Rho A蛋白表达,进而促进胃肠黏膜上皮细胞迁移有关。     

Atractylodes macrocephala Koidz promotes intestinal epithelial restitution via the polyamine—Voltage-gated K channel pathway

Ethnopharmacological relevance

Atractylodes macrocephala Koidz (AMK) has been used widely as a digestive and tonic in traditional Chinese medicine. AMK has shown noteworthy promoting effect on intestinal epithelial cell migration, which might represent a promising candidate for the treatment of intestinal mucosa injury. The aim of this study was to investigate the efficacy of AMK on intestinal mucosal restitution and the underlying mechanisms via IEC-6 cell migration model.

Materials and methods

A wounding model of IEC-6 cells was induced by a single-edge razor blade along the diameter of six-well polystyrene plates. The cells were grown in control cultures and in cultures containing spermidine (5 μmol/L, SPD, reference drug), alpha-difluoromethylornithine (2.5 mmol/L, DFMO, polyamine inhibitor), AMK (50, 100, and 200 μg/mL), DFMO plus SPD and DFMO plus AMK for 24 h. The membrane potential (MP) and cytosolic free Ca²⁺ concentration ([Ca²⁺]_cyt) were detected by flow cytometry, and polyamines content was determined via high-performance liquid chromatography (HPLC). The expression of Kv1.1 mRNA and protein levels were assessed by RT-qPCR and Western blot analysis, respectively. Cell migration assay was carried out using the Image-Pro Plus software. All of these indexes were used to evaluate the effectiveness of AMK.

Results

(1) Treatment with AMK caused significant increases in cellular polyamines content, membrane hyperpolarization, an elevation of [Ca²⁺]_cyt and an acceleration of cell migration in IEC-6 cells, as compared to control group. (2) AMK not only reversed the inhibitory effects of DFMO on the polyamines content, MP, and [Ca²⁺]_cyt but also restored IEC-6 cell migration to control levels. (3) The Kv1.1 mRNA and protein expression were significantly increased by AMK treatment in control and polyamine-deficient IEC-6 cells.

Conclusions

The results of our current studies revealed that treatment with AMK significantly stimulates the migration of intestinal epithelial cells through polyamine-Kv1.1 channel signaling pathway, which could promote the healing of intestinal injury. These results suggest the potential usefulness of AMK to cure intestinal disorders characterized by injury and ineffective repair of the intestinal mucosa.     

商陆正丁醇部位醋制前后肠道毒性变化研究

为探索商陆毒性部位炮制前后对肠道毒性变化的影响,提取分离获得了商陆正丁醇毒性部位,在整体动物模型水平,灌胃给药后观察小鼠肠道肿胀程度,测定小鼠肠道不同部位的含水量及粪便的含水量,考察商陆正丁醇部位炮制前后对腹泻及肠道肿胀的影响;在细胞水平,采用MTT法,测定肠细胞HT-29,IEC-6的IC50,比较醋制前后商陆正丁醇部位的毒性变化。结果显示商陆正丁醇部位能够导致肠道肿胀,表现为引起十二指肠、空肠的水肿,且可导致粪便含水量增加引起腹泻,可抑制肠细胞HT-29,IEC-6增殖,表明其具有肠细胞毒性,对HT-29细胞的IC5014.59 mg·L-1,IEC-6 IC5043.77 mg·L-1;经醋制,小鼠肠道肿胀程度显著减弱,肠道和粪便的含水量明显降低,对HT-29和IEC-6的抑制作用减轻,对HT-29细胞的IC5058.51 mg·L-1,IEC-6 IC5084.37 mg·L-1。由此可知,醋制法具有降低商陆正丁醇部位的毒性作用。     

四君子汤含药血清上调c-Myc表达促进小肠上皮细胞迁移和增殖

目的:考察四君子汤含药血清(SJZ)对小肠上皮(IEC-6)细胞损伤后迁移、增殖及c-核蛋白类基因(c-Myc)mRNA和蛋白表达的影响,以探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:采用大鼠制备四君子汤含药血清,Tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤药物血清对细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测c-Myc mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测c-Myc蛋白表达。结果:中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P0.01);细胞损伤后12 h,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%),中(10%),高(20%)体积浓度的四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P0.05,P0.01);进一步研究发现,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可提高与胃肠黏膜损伤修复密切相关的c-Myc mRNA和蛋白表达(P0.01)。结论:四君子汤修复胃肠黏膜屏障损伤,促进溃疡愈合的作用可能与其提高c-Myc mRNA和蛋白表达,促进黏膜上皮细胞的迁移和增殖有关。     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的影响

目的:研究四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的影响。方法:以IEC-6细胞为研究对象,采 用MTT比色法,观察四君子汤总多糖时正常及消炎痛作用下该细胞增殖的影响。结果:四君子汤总多糖不同剂量于不同 的培养时间对IEC-6细胞的生长均有促进作用,当采用消炎痛造成IEC-6细胞生长抑制模型时,四君子汤总多糖可使其 恢复至正常水平。结论:四君子汤总多糖具有促进IEC-6细胞增殖的作用,它可能通过对小肠上皮细胞增殖的影响而发 挥对肠道黏膜吸收和免疫功能的调整作用。     

冬虫夏草繁育品对恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨冬虫夏草Cordyceps sinensis繁育品对恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移能力的影响。方法通过MTT法、平板克隆实验检测冬虫夏草繁育品对B16细胞增殖能力的影响;采用划痕实验、transwell小室实验检测其对B16细胞迁移能力的影响;通过黏附实验检测其对B16细胞黏附能力的影响;采用流式细胞仪检测其对B16细胞周期分布的影响;采用Western blotting法检测其对B16细胞中MMP-2、MMP-9、Bax、Bcl-2、Cyclin D1、CDK2、CDK4、P21及p-Akt蛋白表达的影响。结果冬虫夏草繁育品能够将B16细胞阻滞在G1/S期,从而显著抑制B16细胞的增殖,并显著降低B16细胞的迁移能力。同时可导致B16细胞MMP-9、MMP-2、Bcl-2、Cyclin D1、CDK2、CDK4、p-Akt蛋白表达减少和Bax、P21蛋白表达增加。结论冬虫夏草繁育品能显著抑制B16细胞的增殖及迁移能力,其作用机制可能与调控细胞周期相关蛋白、MMPs家族蛋白及p-Akt蛋白的表达有关。     

藤黄炮制品对大鼠肠道组织病理学研究

目的:观察藤黄各制剂单次大剂量ig给药后大鼠消化系统病变情况,并比较藤黄炮制前后对大鼠肠上皮细胞株IEC-6毒性差异,探讨藤黄炮制减毒机制.方法:单次ig给予藤黄生品(200 mg· kg-1)、清水制藤黄(200 mg· kg-1)和藤黄酸(50 mg· kg-1),观察给药后大鼠的活动情况,于24 h后处死并采集大鼠心、肝、肾、食管、胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠等主要脏器,观察大鼠口服给药后消化系统病变情况.以大鼠肠上皮细胞株IEC-6为研究对象,采用MTT法检测藤黄炮制前后对IEC-6细胞增殖的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态.结果:病理切片结果显示,给药后大鼠的肝脏、肾脏、心脏、胃和食道均未见明显的毒性反应;但十二指肠、空肠有轻度至重度的毒性作用,表现为肠绒毛水肿.3种藤黄制剂均会引起给药大鼠肠道的毒性作用,生品藤黄所致的十二指肠和空肠水肿程度最严重,其次是清水制藤黄和藤黄酸.细胞的毒性结果显示,与空白组相比,藤黄生品及炮制品均可明显降低IEC-6细胞的活性(P＜0.01)与形态,且呈一定的剂量相关性;与藤黄生品组相比,藤黄3种炮制品组对IEC-6细胞的增殖抑制作用(P＜0.01)和形态变差的趋势均显著性降低.结论:藤黄单次大剂量ig给药后大鼠的病理变化及IEC-6细胞的毒性作用结果表明,藤黄经炮制后毒性显著降低.     

大黄对十二烷基硫酸钠损伤的果蝇肠道干细胞活性的影响

目的探究大黄Rheum officinale提取物(ROE)对果蝇肠道干细胞(ISC)活性的影响。方法对照组果蝇食用正常玉米粉-酵母培养基,实验组果蝇食用含有0.05 g/mL或0.1 g/mL ROE的玉米粉-酵母培养基。对果蝇喂食有毒化合物诱导肠道损伤。分别检测分析果蝇的生存率、肠道前体细胞形态数目、ISC的增殖与分化、活性氧自由基(ROS)水平、肠上皮死亡细胞数目以及果蝇的寿命。结果 0.05 g/mL和0.1 g/mL ROE均可以提高肠道损伤后果蝇的生存率,0.1 g/mL ROE可以降低十二烷基硫酸钠(SDS)诱导后ROS的水平,减少死亡细胞的数目,抑制ISC的过度增殖与分化,缓解前体细胞的过度积累,维持肠道内稳态。此外ROE还可以延长果蝇寿命。结论 ROE可以抑制ISC的过度增殖和分化,增强果蝇肠道免疫功能,延长果蝇寿命。     

黄芪注射液通过激活鸟氨酸脱羧酶促进IEC-6细胞分化的研究

目的：观察黄芪注射液（Astragalus injection,AI)对小肠隐窝细胞株（IEC－6）增殖、分化、移行及其对细胞内鸟氨酸脱羧酶（ODC）和多胺含量的影响，探讨其粘膜修复的作用机理。方法：IEC－6细胞接种后24h,加入AI。加药后12h收获细胞，分别检测ODC mRNA水平、ODC蛋白、ODC活性及细胞内腐胺含量；24h观察细胞增殖和细胞分化；细胞接种后72h损伤细胞，并加入AI，加药后24h、48h及72h观察细胞移行。结果：AI能明显抑制IEC－6细胞增殖，促进细胞分化，对细胞移行无明显影响。AI62．5－250μg/ml各剂量组可明显增加ODC mRNA水平，与对照组比较差异有显著性（P<0．05－0．01）。AI各剂量组对ODC蛋白均无明显影响。AI随着剂量增加，逐渐升高IEC－6细胞ODC活性和腐胺含量，具有剂量依赖关系。结论：AI通过诱导IEC－6细胞ODC活性和多胺的生物合成促进细胞分化，而对细胞移行无明显作用。     

洛克米兰醇对肝癌HepG2细胞的抗增殖作用及其机制研究

目的研究传统中药米仔兰Aglaiaodorata中洛克米兰醇对肝癌细胞HepG2增殖的影响及抗肿瘤作用机制。方法 MTT、细胞克隆形成、EdU染色和CFDA染色方法考察洛克米兰醇对HepG2细胞的抗增殖效果;流式细胞仪检测洛克米兰醇对HepG2细胞细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blotting检测洛克米兰醇对细胞周期调控蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响。结果洛克米兰醇可以时间和浓度依赖性抑制HepG2细胞增殖。同等浓度下洛克米兰醇抗HepG2细胞增殖的效果好于阿霉素,而对正常肝细胞(L02)的毒性弱于阿霉素。流式细胞技术检测发现洛克米兰醇给药48 h能够诱导HepG2细胞G₂/M期细胞周期阻滞,但不诱导细胞凋亡。Western blotting研究发现该化合物抑制调控G₂/M周期相关蛋白cdc25C、cdc2和cyclin B1的表达并且激活细胞外调节蛋白激酶(ERK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)。对其机制深入研究发现,ERK抑制剂(U0126)可以部分逆转洛克米兰醇对HepG2的抗增殖和G