不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义

目的:探讨不同类型HBV感染者外周血中CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞的变化及意义.方法:选取15例急性乙型肝炎(Acute Hepatitis B,AHB)患者、40例慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者、40例无症状携带者(Asymptomatic HBV carriers,AsC)及30例健康对照者,分别采用流式细胞术、RT-PCR和ELISA检测外周血CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞百分率、核转录因子foxhead winged-helix box protein 3 (Foxp3)/retinoid-related orphan receptor gamma-t (RORγt) mRNA的表达以及血浆转化生长因子-β1(Transforming growth factor-31,TGF-β1)/IL-17的水平.结果:AHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA及TGF-β1水平与正常对照组相比无明显差异(P＞0.05);而CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγtmRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).CHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA、TGF-31水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平与正常对照组相比均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与正常对照组相比,AsC组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mR-NA、TGF-β1水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平无明显差异(P＞0.05).结论:在不同类型HBV感染者外周血中Treg/Th17细胞失衡,Treg/Th17细胞可能与HBV感染的状态有关.     

非小细胞肺癌患者外周血Foxp3+调节性T细胞和Th17的检测与临床意义

目的 通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血Foxp3+调节性T细胞(TrFoxp3+)、Th17细胞、TrFoxp3+/Th17及相关细胞因子水平,探讨TrFoxp3+、Th17细胞在肺癌发生发展中的相互作用以及是否存在TrFoxp3+/Th17失衡.方法 采用流式细胞术和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测18例健康人、26例NSCLC患者外周血中TrFoxp3+、Th17细胞占CD4+T细胞的比例,以及转化生长因子-β(TGF-β)、IL-17、IL-23的表达水平.结果 NSCLC患者外周血中TrFoxp3+、Th17细胞比例、TrFoxp3+/Th17高于健康对照组(P＜0.05).NSCLC患者外周血TrFoxp3+与Th17细胞成正向直线相关的关系(r=0.81,P＜0.05).不同TNM分期肺癌患者外周血TrFoxp3+/Th17:Ⅳ期肺癌患者高于Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期肺癌患者(P＜0.05).NSCLC患者血清中TGF-β、IL-17、IL-23水平高于健康对照组,TGF-β在晚期组/健康对照组的比值高于早中期组/健康对照组的比值(P＜0.05).结论 NSCLC患者外周血中TrFoxp3+、Th17细胞比例及TrFoxp3+/Th17较健康人升高,且晚期患者TrFoxp3+/Th17明显升高,提示NSCLC患者可能存在TrFoxp3+/Th17比例失衡,导致肿瘤患者免疫抑制,促进肿瘤发生、发展,可能与二者的细胞因子调节有关.     

结核性胸膜炎患者外周血和胸水γδT和Th17细胞的频率变化及其意义

目的通过检测结核性胸膜炎患者抗结核治疗前后胸水和外周血中γδT细胞和Th17细胞的比例,探讨2群细胞在该病的发生及治疗过程中的变化及意义。方法选取结核性胸膜炎患者30例,分别采集患者抗结核治疗前和治疗后(7～10 d)的胸水及外周血,分离单个核细胞,采用流式细胞术检测γδT和Th17细胞的比例,同时设立健康对照组。结果与健康对照组相比,抗结核治疗前结核性胸膜炎患者外周血中CD3+T细胞比例显著降低(P<0.05),而γδT细胞的比例显著升高(P<0.05),表达IFN-γ的CD3+T和γδT细胞比例均显著升高(P<0.01);患者胸水中的CD3+T和γδT细胞比例显著高于患者外周血(P<0.05),胞内IFN-γ水平与2群细胞变化一致。抗结核治疗后患者外周血和胸水中CD3+T细胞比例较治疗前升高而γδT细胞比例下降,胞内IFN-γ的水平较治疗前显著降低(P<0.05)。抗结核治疗前结核性胸膜炎患者外周血中CD4+T细胞比例较健康对照组显著降低(P<0.01)而Th17细胞比例显著升高(P<0.01);患者胸水中CD4+T细胞显著高于外周血(P<0.05)而Th17细胞比例显著降低(P<0.05)。抗结核治疗后患者胸水中CD4+T和Th17细胞比例较治疗前升高但无显著性差异;IL-17+T与Th17细胞之间无显著相关性,而CD4+RORγt+T与Th17细胞之间存在显著相关性(r=0.564,P<0.05)。结论γδT和Th17细胞在抗结核治疗前后具有显著差异提示2群细胞可能在结核性胸膜炎的发病和治疗中发挥重要作用。     

尖锐湿疣患者外周血Thl/Th2及Tc1/Tc2亚群的检测及意义

目的 探讨辅助性T淋巴细胞(Th细胞)和细胞毒性T淋巴细胞(Tc细胞)的极化情况在尖锐湿疣(CA)发病机理中的作用及其与疾病复发的关系.方法 采用三色荧光抗体染色流式细胞术检测细胞内细胞因子的方法 ,检测30例CA患者和20名健康对照者外周血CD3+CD8-/IFN-γ+(Th1)、CD3+CD8-/IL4+(Th2)、CD3+CD8+/IFN-γ+(Tc1)和CD3+CD8+,IL-4+(Tc2)细胞比例.结果 与健康对照组比较,CA患者外周血中Thl细胞含量显著减少(P<0.01),Tc1细胞含量、Th1/Th2比值、Tc1/Tc2比值均减少(P<0.05);其中15例复发CA患者的Th1/Th2比值较正常对照显著减少(P<0.01),而Te1/Te2比值与健康对照组比较差异无统计学意义.结论 CA患者外周血Th1和Tc1细胞数减少,而Th2和Tc2细胞相对占优势,复发的CA患者这种失衡更趋严重.CA患者机体免疫状态可能存在Th1→Th2、Tc1→Tc2方向的漂移,这种漂移可能是人乳头瘤病毒(HPV)不易被有效清除或CA反复发生的一种免疫机制.     

Th1、Th2样细胞因子对CD158+细胞比率的调节作用

目的:观察Th1、Th2样细胞因子对外周血CD158+细胞比率的调节作用,为寻找干细胞移植免疫耐受的方法提供论理依据。方法:将Th1样细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2样细胞因子(IL-4、IL-6),单独或联合与人外周血单个核细胞(PBMC)培养72h,用流式细胞法分析总CD158a+、CD158b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+ CD56+细胞亚群中CD158a+、CD158b+细胞的比率。结果:①细胞因子对CD3+、CD4+、CD8+细胞及CD16+ CD56+细胞的影响:IL-2和IFN-γ均可增加上述细胞的百分率(P<0.05),但IL-2的作用大于IFN-γ(P<0.05)。IL-2+IFN-γ联合处理的效应高于IFN-γ单独处理(P<0.05)。IL-4+IL-6可降低上述细胞的百分率(P<0.05)。IL-2+IL-4对上述细胞百分率的影响,高于IL-4(P<0.05)但低于IL-2(P<0.05)。②细胞因子对CD158a+/b+细胞的影响:IL-2可增加总的CD158a+/b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+ CD56+细胞中的CD158a+/b+细胞的百分比率(P<0.05);IL-2+IFN-γ可增加CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05),但与IL-2单独处理无明显区别,IL-4+IL-6可降低CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05)。IL-2+IL-4可增加总的CD158a+/b+细胞及各亚群中CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05),但低于IL-2单独处理(P<0.05)。结论:IL-2有促进CD158基因表达或使CD158a+、CD158b+     

类风湿关节炎患者Th17和CD161+Th17细胞水平的变化

目的 观察类风湿关节炎(RA)患者和健康对照组外周血中CD4+ IL-17+T细胞(Th17)和CD4+ CD161+ IL-17+T细胞(CD161+Th17)的水平,探讨其在RA发病过程中的意义.方法 采用流式细胞术测定36例RA患者和11例健康对照组外周血中Th17细胞及CD161+ Th17的细胞百分率.结果 RA患者外周血Th17及CD161+ Th17细胞水平明显高于健康对照组(P＜0.01)且与疾病活动指数(DAS28)、血沉和C-反应蛋白水平呈显著正相关(P ＜0.05);RA患者和健康对照组外周血中CD161+ Th17细胞百分率明显高于Th17细胞百分率(P＜0.01);Th17细胞百分率与CD161+ Th17细胞百分率显著正相关(P＜0.01).结论 Th17及CD161+ Th17细胞在RA患者外周血中均增高且与疾病活动度正相关.     

DC-CIK免疫治疗联合化疗对多发性骨髓瘤患者外周血T细胞亚群及Treg细胞的影响

为研究树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)为效应细胞的过继免疫联合化疗治疗多发性骨髓瘤(MM)的临床疗效及对患者外周血T细胞亚群、CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的影响,探讨以上治疗对MM患者的细胞免疫调节功能。将36例MM患者随机分为两组:化疗组18例,给予合适的化疗方案;联合组18例,除接受适合的化疗外,还给予DC/CIK免疫治疗,比较两组患者的临床疗效及外周血T细胞亚群、CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞比例。结果显示,3周期治疗后,联合组患者的生活质量和临床疗效均比化疗组患者显著提高(P<0.05)。联合组CD3+CD8+比例、CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25+FoxP3+/CD4+CD25+比值均明显低于化疗组(P<0.05);CD3+CD4+/CD3+CD8+比值明显高于化疗组(P<0.05),提示联合治疗组对MM具有更有效的免疫调节功能。研究结果表明DC/CIK免疫治疗联合化疗治疗MM有良好的临床疗效和应用价值,可能是通过免疫调节使MM患者Th2向Th1逆转,从而增强机体抗肿瘤效应的。     

溃疡性结肠炎相关性结直肠癌大鼠Th1/Th2漂移与微血管密度的关系

为探讨溃疡性结肠炎相关性结直肠癌(ulcerative colitis-associated colorectal cancer,UC-CRC)大鼠Th1/Th2漂移与微血管密度(microvessel density,MVD)的关系,建立UC-CRC大鼠模型,于第14、16、18周分批处死,观察各组结肠组织病理学变化情况,并比较血清、结肠组织中Th2细胞因子IL-4、Th1细胞因子IFN-γ水平及结肠组织中CD4~+IL-4~+占比、CD4~+IFN-γ~+占比、CD4~+IFN-γ~+/CD4~+IL-4~+、MVD,分析MVD与IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4的相关性。结果显示,模型组大鼠建模后状态逐渐变差,持续2周后好转;模型组结肠细胞有明显的病理学变化;与对照组比较,模型组各时刻血清和组织中IL-4水平、CD4~+IL-4~+占比、MVD较高,IFN-γ水平、CD4~+IFN-γ~+占比、IFN-γ/IL-4、CD4~+IFN-γ~+/CD4~+IL-4~+较低(P0.05);模型组血清和组织中IL-4水平、CD4~+IL-4~+占比、MVD均随时间的延长呈升高趋势(P0.05),IFN-γ水平、CD4~+IFN-γ~+占比、IFN-γ/IL-4、CD4~+IFN-γ~+/CD4~+IL-4~+均随时间的延长呈下降趋势(P0.05),而对照组上述指标变化均不显著(P 0.05);不同时刻MVD与血清及组织中IL-4水平呈正相关(P0.05),与IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4均呈负相关(P0.05)。提示UC-CRC大鼠Th1/Th2平衡向Th2漂移,MVD与Th2细胞因子呈正相关,与Th1细胞因子呈负相关,MVD与Th1/Th2漂移关系密切。     

类风湿性关节炎患者外周血Th17/Treg细胞比率失衡的研究

目的:观察类风湿性关节炎(RA)患者外周血Th17细胞与Foxp3+CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的平衡状态与疾病状态的关系,初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在RA发病机制中的作用和意义。方法:流式细胞术(FCM)检测RA患者和健康人外周血中Th17细胞和Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞的比率。结果:活动期RA患者外周血CD3+CD4+T细胞和Th17细胞的比率均明显高于健康对照组(P均0.05);而Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞的比率明显低于健康对照组(P0.05)。随疾病活动性的增加,Th17细胞表达增高(P0.05);而Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞表达降低,但无统计学意义(P0.05)。结论:RA患者外周血T细胞紊乱以CD4+T细胞的增加为主,Th17细胞比率的增加和Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞比率的降低所致的Th17/Treg细胞比率失衡,可能在RA的发生发展中起重要作用。     

探讨梅毒IL-10、CD4+CD25+表达与预后的关系

目的 探讨梅毒患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞、血清白细胞介素-10(IL-10)的表达变化及其临床意义.方法 以本院皮肤性病科收治的67例确诊梅毒患者作为病例组,30名健康人群作为健康组,采用流式细胞仪技术检测两组研究对象外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞、T淋巴细胞亚群水平,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DABS-ELISA)测定两组研究对象血清IL-10的水平差异.结果 病例组患者的CD4+ CD25+ (12.64 ±3.86)％、CD8+ (28.27±1.86)％,显著的高于健康组(P＜0.05);病例组患者的CD4+ (31.25±6.14)％、CD4+/CD8+ (1.11 ±0.36)％,显著低于健康组患者(P＜0.05).病例组患者的IL-10 4.89±0.41pg/mL显著的高于健康组(P＜0.05).血清固定梅毒患者的CD4+CD25+、CD8+显著的高于Ⅰ期梅毒、Ⅱ期梅毒、潜伏期梅毒患者(P＜0.05),血清固定梅毒患者的CD4+、CD4+/CD8+显著低于Ⅰ期梅毒、Ⅱ期梅毒、潜伏期梅毒患者(P＜0.05).血清固定型患者的血清IL-10 5.02±0.40pg/mL显著的高于Ⅰ期梅毒、Ⅱ期梅毒(P＜0.05).结论 梅毒患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞、IL-10水平显著升高,同时血清固定患者的升高最显著,这可能与患者的免疫抑制具有一定的关系.     

Subpopulation structure of T-regulatory cells and proliferative response of blood lymphocytes in vitro under pulmonary tuberculosis

Subpopulation structure of T-regulatory cells and proliferative activity of blood lymphocytes in vitro in patients with different clinical forms of pulmonary tuberculosis were studied in this work. It has been shown that Trn--natural T-regulatory lymphocytes (CD4+CD25+Foxp3+) play a leading role in formation of immune suppression under infiltrative, disseminated and fibrosis-cavernous pulmonary tuberculosis. Besides, their number is increased in blood of both tuberculin-positive and tuberculin-negative patients. Negative correlation between the number of Trn and proliferative activity of blood lymphocytes (basal, mitogen- and antigen-induced)has been established, which testifies about participation of Trn in suppression of lymphocyte proliferation and Th1- and Th2-immune response.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞/Th17细胞失衡与婴幼儿脓毒症

目的 观察不同免疫状态下婴幼儿脓毒症CD4~+CD25~+Foxp3~(high)岫调节性T细胞(Tr)/Th17细胞的变化,探讨婴幼儿脓毒症适应性免疫紊乱可能的机制.方法 婴幼儿脓毒症48例,健康同龄儿童对照组26例.用流式细胞术榆测CD14~+单核细胞HLA-DR表达率,CD4~+CD25~+Foxp3~(high)Tr 比例及Th17细胞比例;用ELISA法检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β及IL-17A等浓度,计算IL-10/TNF-α比值;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4~+T细胞Foxp3、ROR-γt mRNA表达及IL-17A mRNA表达.以CD14~+单核细胞HLA-DR表达＞或＜30%为阈值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组).结果 DR-L组IL-10/TNF-α比值明显高于DR-H组(P＜0.05)及对照组(P＜0.05).CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞比例及转录因子Foxp3基因表达DR-L组明显高于对照组及DR-H组(P＜O.05).Th17细胞比例、IL-17A血浓度、Th17细胞IL-17A基因表达及转录因子ROR-γt基因表达DR-H组及DR-L组均明显高于对照组(P＜0.05),两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).DR-H组和DR-L组Th17细胞主要分化调控因子IL-6、IL-1β血清浓度明显高于正常对照组(P＜0.05),两组问IL-6、IL-1β浓度差异无统计学意义(P＞0.05),DB-L组CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞主要调节因子TGF-β血浓度明显高于DR-H组及对照组(P＜0.05).结论 Th17持续过度活化可能是导致脓毒症前炎症细胞因子/趋化因子持续增高的原因之一;CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Th17细胞失衡可能参与脓毒症混合性拮抗反应综合征(MARS)的发生发展,婴幼儿脓毒症细胞因子微环境变化可能是导致CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Thl7细胞失衡的原因之一.     

PD-1受体在HBV—ACLF患者外周血CD8^＋T细胞上的表达研究

目的探讨乙型肝炎病毒所致慢加急性肝衰竭（HBV—ACLF）患者外周血中CD8^＋T细胞上PD-1（Programmed death-1）的表达以及对CD8^＋T细胞的影响。方法收集60例HBV—ACLF患者外周血;应用流式细胞仪检测外周血中CD8^＋淋巴细胞上的PD-1、CD95、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、CD107a的表达以及CD14细胞上PD—L1的表达;根据不同病情分期和不同预后比较各分子的表达差异;设15名肝硬化患者及15名健康人为对照组。结果（1）HBV-ACLF患者CD8^＋T细胞上PD-1较肝硬化组和健康组表达上调（P〈0．05）;好转组PD-1表达率低于无效组（P〈0．05）;早、中、晚三期PD-1表达率呈上升趋势（P〈0．05）;（2）PD—L1在好转组及病情早期表达相对最低;（3）PD-1与CD95在死亡组表达明显升高;穿孔素、颗粒酶及CD107a在死亡组表达升高,但PD-1在这三类细胞上表达率非常低。结论PD-1在HBV．ACLF患者外周血CD8^＋T细胞上表达上调,且与病情严重程度呈正比。其上调表达可能促进总CD8^＋T细胞的凋亡,但对于具有杀伤活性的CD8^＋T细胞抑制作用相对较弱。     

类风湿关节炎患者Th17细胞与调节性T细胞失衡的研究

目的观察类风湿性关节炎（RA）患者外周血Th17细胞与CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节性T细胞（Treg）平衡状态与疾病的关系,分析Th17／Treg细胞免疫失衡在RA发病机制中的作用。方法采用流式细胞仪四色荧光抗体标记法分别对47例RA患者和39名健康志愿者（HVs）进行CD3、CD8、IL-17与CD4、CD25、F0xP3标记,测定Th17与调节性T细胞的比例变化及相关细胞因子IL-6、IL-23和IL-17水平。结果RA组患者外周血中,CD3^＋CD8^＋IL-17^＋T细胞占CD3^＋T淋巴细胞的百分比为（1．12±0．38）％,明显高于对照组（0．68±0．29）％（t=1．83,P〈0．05）;CD4’CD25’FoxP3^＋细胞占CD4^＋T淋巴细胞的百分比为（2．74±0．71）％,明显低于对照组（4．69±1．23）％（t=-2．94,P〈0．05）。相关细胞因子测定结果：IL-6水平在RA组为（13．5±3．7）ng／L,正常人为（4．6±0．9）ng／L（t=6．24,P〈0．01）;IL-23水平在RA组为（71±19）ng／L,正常人为（25±6）ng／L（t=14．37,P〈0．01）;IL-17水平在RA组为（122±33）ng／L,正常人为（37±9）ng／L（t=19．01,P〈0．01）;RA患者血清IL-6、IL-23和IL-17水平均明显升高。结论RA患者外周血Th17与CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节性T细胞数量的异常可能是RA发病的重要因素,IL-6和IL-23的升高是引起这些改变的可能原因。     

活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能CD4+和CD8+T淋巴细胞的特征研究

目的 研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征.方法 利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血中结核分枝杆菌抗原特异性(ESAT-6和CFP-10)CD4+Th1和CD8+Tc淋巴细胞表达细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的情况.结果 与肺部感染性/肿瘤疾病组和健康对照组相比:(1)活动性结核病组具有较低比例的分泌TNF-α+的CD4+Th1细胞、较高比例的分泌IFN-γ+和IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD4+Th1细胞;(2)活动性结核病组具有较高比例的分泌IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD8+Tc细胞.结论 实验结果提示活动性结核病患者中表达IFN-γ+TNF-α+IL-2+的多能CD4+Th1及CD8+Tc细胞,可能在区别活动性结核病与肺部感染性/肿瘤疾病方面具有一定的临床参考价值.     

1型糖尿病患儿CD4~+T细胞亚群变化初探

目的 探讨CD4~+细胞亚群[Th1、Th2、CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Tr)及Th17细胞]在1型糖尿病(TIDM)患儿免疫发病机制中的作用.方法 新诊断TIDM患儿20例,同年龄对照组(Ctrl组)20例.用流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Tr及Th17细胞比例.荧光定量PCR(real-time PCR)检测Th1、Th2、Tr、Th17细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3、ROR-γt、IFN-、IL-4、IL-10、IL-17A、CTLA-4、GITR等细胞因子和负性调节因子mRNA表达;应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4、TGF-β、IL-6血浆水平.结果 (1)与正常对照组相比,TIDM患儿Th1细胞比例明显增高(P<0.01),Th2细胞比例明显降低(P<0.01),Tr和Th17细胞比例与正常对照组相比无明显差别(P>0.05).(2)Th1细胞转录因子及细胞因子T-bet、IFN-γ较正常对照组明显升高(P<0.01);Th2细胞转录因子及细胞因子GATA-3、IL-4明显降低(P<0.01);Tr细胞转录因子Foxp3表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),Tr细胞相关细胞因子及负性调节因子IL-10、CTLA-4及GITR基因表达明显低于对照组(P<0.01);Th17细胞转录因子ROR-γt及细胞因子IL-17A基因表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);(3)TIDM患儿外周血IFN-γ浓度明显增高,IL-4明显降低,TGF-β、IL-6浓度无明显改变(P>0.05).结论 TIDM患儿Th1/Th2失衡,加上Tr细胞抑制功能缺陷,可能导致TIDM严重细胞免疫功能紊乱.     

NKT细胞、NK细胞和T细胞亚群在活动性肺结核患者外周血的表达及意义

目的:探讨活动性肺结核病人外周血CD3+T、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Tc、CD3-CD16+56+NK、CD3+CD16+56+NKT、Th/Tc的表达变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术分析45例肺结核病人、16例肺部感染病人及30例健康人外周血CD3+Th、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Tc、CD3-CD16+56+NK、CD3+CD16+56+NKT、Th/Tc的表达和变化情况。结果:初、复治肺结核患者的外周血NKT比例明显高于健康人(P<0.05);Th低于健康人(P<0.05);Tc高于健康人(P<0.05);Th/Tc低于健康人(P<0.05)。初、复治肺结核患者之间T、Th、Tc、NK、NKT、Th/Tc未见明显差异。肺部感染、活动进展Ⅰ期、活动进展Ⅱ期病人NKT阳性细胞数高于健康人和吸收好转期病人且结果有统计学意义(P<0.05);活动进展Ⅱ期组高于肺部感染组且结果有统计学意义(P<0.05)。活动进展Ⅰ期、活动进展Ⅱ期病人Tc阳性细胞数高于健康人组且结果有统计学意义(P<0.05)。Th/Tc吸收好转期、肺部感染、活动进展期、活动进展Ⅱ期均低于健康人组且结果有统计学意义(P<0.05)。轻症、中症、重症患者,重症者Th升高、Tc下降、Th/Tc升高。结论:NKT细胞与肺结核的发展和转归有关。Tc细胞的升高是免疫系统对于结核杆菌的反应,与肺结核病变的发展、范围和程度紧密相关。重点监测外周血NKT细胞和Tc细胞对于掌握活动性肺结核发展和预后有特殊的意义。     

乙型肝炎病毒感染者外周血CD4+T细胞CD25、CD127不同亚群表达的检测及临床意义

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血CD4+T细胞表面CD25、CD127不同亚群的表达情况及临床意义。方法 用荧光抗体CD127-FITC、CD4-PECY5、CD25-PE标记T细胞。用流式细胞仪分别测定53例慢性乙型肝炎患者和53例HBV携带者CD4+T细胞表面CD25、CD127不同亚群的表达情况。对20例HBV-DNA阳性乙型肝炎病毒感染者干扰素治疗进行随访。结果与健康对照组[7.26％(6.15％,8.50％)]比较,慢性乙型肝炎患者[11.23％(9.10％,14.86％)]、HBV携带者[13.34％( 10.73％,18.90％)]CD25-CD 127-均显著升高,差异均有统计学意义(Q=4.559,P＜0.05;Q=6.230,尸＜0.05)。慢性乙型肝炎患者CD25hiCD127low/-[8.78％ (7.62％,10.44％)]显著高于健康对照[6.76％(5.73％,8.23％)]和HBV携带者[6.99％(5.77％,9.34％)],差异均有统计学意义(Q=3.497,P＜0.05;Q=3.103,P＜0.05)。HBV-DNA阳性组CD25-CD127-显著低于阴性组,两者差异有统计学意义[(12.92±5.20)％比(15.78±6.91)％,t=2.290,P=0.024],而CD25+/-CD127+显著高于阴性组,两者差异有统计学意义[(79.27±5.20)％比(76.02±7.04)％,t=2.194,P=0.030]。与治疗前比较,干扰素治疗12周CD25hiCD127low/-显著升高[(9.29±2.51)％比(11.08±2.38)％,t=2.820,P=0.011],而CD4+CD25-CD127-显著降低,两者差异有统计学意义[(13.86±5.72)％比( 10.86±3.60)％,t=2.469,P=0.024]。结论 HBV感染者外周血CD4+T细胞中CD25-CD127-亚群的表达与病毒的感染和清除有关;CD25hiCD 127low/-亚群的表达升高与发病有关。外源性干扰素可升高CD25hiCD127low/-的表达,降低CD25-CD127-的表达,从而抑制免疫反应。     

流式细胞术检测调节性T细胞方法的建立

目的建立流式细胞术（FCM）检测外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Tregs）的方法，并观察紫杉醇联合卡铂治疗对晚期肺癌和乳腺癌患者外周血CD4＋CD25＋Tregs数量的影响。 方法19例晚期肺癌和10例乳腺癌患者均给予紫杉醇联合卡铂方案化疗，于化疗前1d和化疗后第7天采集患者外周血，分别加入鼠抗人CD4-FITC（异硫氰酸荧光素）/CD8-PE（藻红蛋白）/CD3-PerCP（多甲藻叶绿素蛋白）、CD25-FITC/CD127-PE/CD4-PerCP、CD3-FITC/CD（16＋56）-PE/CD45-PerCP单抗，并以分别加入同型鼠抗人IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG1-PerCP抗体作为阴性对照。采用流式细胞术（FCM）检测化疗前后外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞和CD4＋CD25＋Tregs、NK细胞所占比例并进行数据分析。实验重复3次。 结果与化疗前比较，晚期肺癌和乳腺癌患者化疗后外周血CD4＋CD25＋Tregs的比例均明显降低（6.82%±3.11%vs.5.48%±2.13%，P=0.045；6.38%±1.84%vs.3.88%±1.69%，P=0.007）；晚期肺癌患者化疗后外周血CD4＋T细胞的比例升高（48.84%±16.44%vs.56.35%±14.50%，P=0.006），CD8＋T细胞的比例降低（51.18%±16.44%vs.43.65%±14.50%，P=0.006），CD4＋/CD8＋T细胞比值升高（1.12±0.60vs.1.57±0.88，P=0.008），而CD3＋T细胞和NK细胞的比例均无明显变化；乳腺癌患者化疗后外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞、NK细胞的比例和CD4＋/CD8＋T细胞比值均无明显变化。 结论成功建立了FCM检测CD4＋CD25＋Tregs的方法，联合应用CD4、CD25、CD127检测CD4＋CD25＋Tregs简便可行、重复性好，检测结果可靠、准确，比较适用于临床检验。紫杉醇联合卡铂能够降低晚期肺癌和乳腺癌患者外周血CD4＋CD25＋Tregs的数量。     

肺结核患者外周血CD4~+和CD8~+记忆性T细胞亚群、IL-17、IL-27表达的初步探讨

目的:探讨肺结核患者外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞亚群及白细胞介素17(Interleukin-17,IL-17),IL-27的表达。方法:采用流式细胞术检测肺结核患者组外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞,患者组按治疗史分为初治组,复治组;按痰涂片抗酸染色分为痰涂阳性组,痰涂阴性组。初治组8例为凡既往未用过抗结核药物治疗或用药时间少于一个月的新发病例;复治组22例为凡既往应用抗结核药物一个月以上的新发病例、复发病例、初治治疗失败病例等;痰涂阳组9例为痰涂片抗酸染色阳性;痰涂阴组21例为痰涂片抗酸染色阴性。ELISA法检测IL-17,IL-27。结果:①与健康对照组比较:患者组CD4+效应型记忆性T细胞均显著增高(P<0.05),初治组与涂阴组CD8+效应型记忆性T细胞均显著降低(P<0.05),复治组IL-17显著降低(P<0.05),而IL-27显著增高(P<0.05)。②与初治组比较:复治组CD4+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05),而CD8+效应型记忆性T细胞显著增高(P<0.05),IL-17显著降低(P<0.05),IL-27显著增高(P<0.05)。③与涂阴组比较:涂阳组CD4+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05),CD8+效应型记忆性T细胞显著增高(P<0.05),CD8+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05)。④Spearman相关性分析显示:IL-17与IL-27呈正相关(P<0.05),记忆性T细胞亚群与IL-17,IL-27水平无显著相关性(P>0.05)。结论:肺结核患者外周血CD4+效应型记忆性T细胞的表达可望作为TB初步诊断的观察指标,CD4+中央型记忆性T细胞和CD8+效应型记忆性T细胞的表达均可望作为TB患者的临床分组依据,TB外周血IL-17、IL-27水平可望用于判断TB的炎症程度。