南极放线菌XE发酵条件的优化及抑菌物质性质的初步研究

目的 优化南极放线菌XE发酵工艺,提高抑菌活性物质的产量并对菌株产生的活性代谢产物性质进行了初步研究。方法 以发酵液抑菌活性为指标,采用单因素实验和正交实验对放线菌XE发酵培养基和发酵条件进行优化;观察pH值、温度、储藏温度对抑菌物质稳定性的影响;了解抑菌物质的极性及疏水特性。结果 获得了南极放线菌XE的最佳发酵培养基：可溶性淀粉30g/L,黄豆10g/L,海水晶35g/L,KON₃ 1.5g/L;最佳发酵条件：温度28℃,起始pH8,接种量2%,摇床转速110rpm,发酵时间3天;抑菌物质热稳定性好,-20℃储藏活性基本不变,在强碱环境中失活,不耐强碱,活性物质极性较小。结论 通过优化工艺实验,确定了菌株XE最佳发酵培养基和发酵条件,抑菌物质热稳定性好,在-20℃储藏活性基本不变,极性较小,不耐强碱。     

海洋放线菌F1发酵条件优化及抑菌物质性质的初步研究

目的 对筛选出的海洋放线菌F1的发酵培养基及条件进行优化,并对菌株F1分泌的有活性的次级代谢产物的特性进行了初步研究。 方法 采用单因素实验和正交试验的方法对发酵培养基及发酵条件进行优化,观察pH值、温度、光照、紫外线、储藏温度对抑菌物质稳定性的影响,了解抑菌物质的极性及疏水特性。结果 优化的最佳培养基为：可溶性淀粉20.0 g,NaCl 1.0 g,胰蛋白胨 0.5 g,Yeast Extract 2.0 g,K2HPO4 ? 3H2O 0.5 g,MgSO4 ? 7H2O 0.5 g,FeSO4 ? 7H2O 0.01 g,陈海水1000 mL, pH7.4-7.6,固体培养基加1.5%的琼脂粉。摇瓶装量30％,接种量10％,发酵时间168 h时抑菌抑菌圈最大,抑菌物质有较好的热、光、紫外线及储藏温度稳定性,pH值在3～12有活性,在强酸环境中失活,耐碱不耐酸,活性物质溶于石油醚和乙酸乙酯,不溶于正丁醇。结论 通过优化实验确定了菌株F1最优发酵培养基及发酵条件,抑菌物质有较好的稳定性,有较大极性和水溶性。     

海洋放线菌M324抗菌物质的发酵优化与性质的初步研究

M324是从中国连云港沿海海泥中分离到的一株能产生较广谱抗菌活性物质的海洋放线菌。文章报道了对该菌株的初步鉴定、发酵条件的优化和产生抗菌活性物质的部分性质的探索性研究结果结果。发现M324为一株具有耐盐作用的链霉菌属白孢类群白孢亚群类似白长链霉菌的海洋放线菌。在28℃、pH为7．0、培养5d，其产生的抗菌活性物质的活性最强。发酵产物对酸碱稳定，呈现强极性，并呈现广谱抗菌活性。海洋放线菌M324能产生极性大的广谱抗菌活性物质，有较好的研究前景。     

抗肿瘤海洋放线菌ACMA006发酵条件的优化

目的 为提高海洋放线菌ACMA006抗肿瘸活性物质的产量而对其发酵条件进行优化.方法 包括对发酵培养基的组成、种龄、温度、通气量和发酵时间等条件的研究,选择最优的发酵条件.结果 最佳培养基为:大豆粉10g,胰蛋白胨5g,酵母膏10g,可溶性淀粉15g.甘油15g,KH2PO40.5g,陈海水1000mL,pH7.2.最佳培养条件:温度28℃,种龄6d,装液量33%(V/V).发酵时间8d.结论 在此优化条件下,菌株ACMA006的生物量为78.1g·L-1,发酵液稀释4000倍时,对人肝癌细胞HepG2的抑制率为93.7%.     

北极放线菌BF-1发酵条件优化及代谢产物抑菌活性研究

目的优化发酵工艺以提高北极放线菌BF-1发酵液中抑菌活性物质的产量;测定BF-1次级代谢产物的体外抑菌活性。方法以发酵液抑菌活性为指标,采用单因素实验和正交实验对放线菌BF-1发酵培养基和发酵条件进行优化;琼脂稀释法测定BF-1发酵液最低抑菌浓度。结果最佳发酵培养基:淀粉5g.L-1,NH4Cl 5g.L-1,黄豆15g.L-1,MgSO40.25g.L-1,海水晶30g.L-1;最佳发酵条件:28℃,起始pH7,接种量5%;BF-1发酵液对绿脓杆菌的最低抑菌浓度(MIC)为640μg.mL-1。结论北极放线菌BF-1发酵液中次级代谢产物具有显著的体外抑菌活性,优化后BF-1发酵液的抑菌活性与优化前相比提高了约2.6倍。     

海洋细菌B—9987发酵条件的优化及胞外抑菌物质的理化特性

从海泥中分离获得的芽孢杆菌B-9987,其胞外代谢产物对植物病原真菌有很强的拮抗作用。以改良的2216E为基础培养基,通过正交试验,得到B-9987放大培养的最佳配方。胞外抑菌物质在碱性条件下活性大,酸性条件下具有良奶的热稳定性,且水溶性、醇溶性和脂溶性都较大。纸电泳表明此物质呈弱酸性。     

海洋放线菌Streptomyces parvulus OUCMDZ-2554产放线菌素D的发酵条件优化

目的 对海洋放线菌Streptomyces parvulus OUCMDZ-2554产放线菌素D的发酵条件进行优化,提高放线菌素D的产量。方法 对培养基的组成、种龄、接种量、温度、装液量、pH、盐度和发酵时间等条件的研究,通过单因素和正交试验,选择最优发酵条件;并通过波谱分析及其理化性质确定放线菌素D结构。结果 最佳培养基为：K2HPO4 1.5 g、MgSO4 0.5 g、酵母浸膏5 g、可溶性淀粉22.5 g、陈海水1000 mL;最佳发酵条件：装液量150/500 mL（v/v）、种龄4天、接种量5%、盐度3%、起始pH 7.5、发酵温度28℃、摇床（180转每分）发酵12天。结论 以最佳发酵条件发酵,优化后放线菌素D的产量为优化前的3.6倍,达到364 mg/L。     

红霉素发酵培养基优化研究

对红霉素发酵培养基进行了优化，选用A粉和B粉代替原工艺中的淀粉及部分葡萄糖和豆饼粉。采用正交试验设计方法。确定最佳发酵培养基配方，并考察了中间补料方案。经10吨发酵罐连续8批验证，平均发酵效价提高6．11％，产品质量全部合格。原材料消耗成本可降低20％以上。     

海洋放线菌细胞毒抗肿瘤活性物质的初筛

本文以改进的ＭＴＴ法为初筛模型,筛选海洋放线菌产生的细胞毒抗肿瘤活性物质,对４３４株海洋放线菌发酵液的筛选结果发现,约１６％的海洋放线菌发酵液对Ｐ３８８和ＫＢ癌细胞的ＩＤ８０等于或大于３２０,其中最高可达２０４８０。这表明海洋放线菌存在着活性高的细胞毒抗肿瘤活性物质,是潜在的抗癌药源。     

海洋放线菌M326活性代谢产物的初步研究

目的对海洋放线菌M326活性代谢产物进行初步研究。方法以抑菌活性为指标,采用不同的培养基与培养时间研究代谢产物活性与培养条件的关系,用不同温度、pH处理了解活性产物的稳定性,用有机溶剂,大孔树脂对活性物质进行提取分离。结果人工海水、蒸馏水配制的GBP培养基产物活性较强。抗菌物质在pH 2~11时较稳定,强酸性条件下热稳定性好,难以用一般有机溶剂萃取,碱性条件下可被AB-8大孔树脂吸附。结论代谢产物对G 菌有较强的抑菌活性,对G-菌、耐药菌均有不同程度的抑菌活性,且抗菌物质的极性较强。     

海洋弧菌B2817合成抗肿瘤活性物质条件的研究

目的为了提高海洋弧菌B2817抗肿瘤活性物质的产量。方法对其发酵条件进行优化,包括对发酵培养基的组成、初始pH值,培养温度,装液量,种龄和接种量等条件的研究。结果发现其最佳培养基为:葡萄糖15g.L-1、甘油5g.L-1,蛋白胨10g.L-1,黄豆粉5g.L-1,未纯化的日晒海盐30g.L-1,pH6.0~6.5。最佳培养条件:29℃,180r.min-1振荡培养;种子液种龄和接种量分别为24h和5%;装液量为150mL(500mL三角瓶中);培养时间为2d。结论在此优化条件下,B2817的生物量为3.0g.L-1,发酵液在稀释400倍后对人肝癌细胞抑制率可达85%。     

硫酸软骨素裂解酶发酵培养基的获得及发酵条件的优化

目的考察发酵培养基中碳源、氮源及无机盐等因素及各种发酵条件对温和气单孢菌YH311产硫酸软骨素裂解酶的影响,获得硫酸软骨素裂解酶最佳发酵培养基和发酵条件。方法采用单因素实验法、均匀设计法及正交设计法。结果获得的最优培养基配方(g·L-1)为:葡萄糖2 5 ,牛肉膏5 0 0 ,硫酸软骨素10 0 ,尿素0 5 ,MgSO4·7H2 O 9 0 ( pH 7 0 ) ;最适产酶条件为:2 % ( φ)种子液,2 8℃,2 0 0r·min-1,振荡通气培养2 4h。在优化条件下,硫酸软骨素裂解酶的产率可达110 0 0U·L-1。结论通过对发酵培养基及发酵条件的优化可将硫酸软骨素裂解酶的产量提高5倍。     

海洋放线菌KSC2-1次级代谢产物化学成分的分离与鉴定

目的研究海洋放线菌KSC2-1次级代谢产物,以期得到有活性的先导化合物。方法利用硅胶柱色谱,凝胶柱色谱(Sephadex LH-20),制备高效液相色谱(PRE-HPLC)等手段进行分离纯化,通过理化性质和光谱数据对化合物进行了结构鉴定。结果从海洋放线菌KSC2-1的发酵液的正丁醇萃取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为:3-(α-羟丙酰基)-1H-吲哚(3-(α-hydroxypropionyl)-1H-indole,1)、3-乙酰基-1H-吲哚(3-acetyl-1H-indole,2)、1H-吲哚-3-醛(1H-indole-3-carbaldehyde,3)、1H-吲哚-3-羧酸(1H-indole-3-carboxylic acid,4)、2-(1H-吲哚-3-基)乙醇(2-(1H-indol-3-y1)eth-anol,5)、3-乙基-3-羟基-1-甲基吲哚啉-2-酮(3-ethyl-3-hydroxy-1-methylindolin-2-one,6)、2-羟基-1-(4-羟苯基)乙酮(2-hydroxy-1-(4-hydroxyphenyl)ethanone,7)、4-羟基苯乙醇(4-(2-hydroxyethyl)phenol,8)、胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(thymine nucleoside deoxyribose,9)、尿嘧啶核糖核苷(uracil nu-cleoside,10)。结论化合物1-10均为首次从海洋放线菌KSC2-1次级代谢产物中分离得到。     

海洋放线菌Kocuria sp.次级代谢产物的研究

目的 研究海洋放线菌Kocuria sp.的次级代谢产物。方法 菌株摇瓶发酵,采用现代色谱学方法(硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备HPLC),对发酵产物进行分离,利用现代波谱学技术对化合物进行结构鉴定。结果 从海洋放线菌Kocuria sp.发酵液的乙酸乙酯萃取部分分离得到16个单体化合物：环(L-苯丙氨酸-L-脯氨酸)2 (1)、环(L-色氨酸-L-脯氨酸) (2)、环(L-色氨酸-D-脯氨酸) (3)、环(L-苯丙氨酸-D-脯氨酸) (4)、环(L-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸) (5)、环(D-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸) (6)、环(L-羟脯氨酸-L-酪氨酸) (7)、环(L-异亮氨酸-D-脯氨酸) (8)、环(L-亮氨酸-D-脯氨酸) (9)、环(L-亮氨酸-L-脯氨酸) (10)、环(L-苯丙氨酸-L-酪氨酸) (11)、环(L-亮氨酸-D-酪氨酸) (12)、环(L-亮氨酸-L-苯丙氨酸) (13)、环(D-缬氨酸-L-苯丙氨酸) (14)、环(D-亮氨酸-甘氨酸) (15)、环(D-异亮氨酸-甘氨酸) (16)。结论 海洋放线菌Kocuria sp.可产生结构丰富多样的环肽类化合物,所有化合物均首次从Kocuria属放线菌中分离得到。     

海洋放线菌Streptomyces sp.(No.172221)次生代谢产物研究

目的研究一株海洋放线菌Streptomyces sp.(No.172221)的次生代谢产物。方法采用各种色谱方法进行成分分离,综合运用多种波谱学手段确定单体化合物的结构。结果分离到8个化合物,鉴定其结构分别为麦角甾-3β,5α,6β-三醇(1);麦角甾-3β,5α,6β-三醇-3-Ο-β-D葡萄糖苷(2);N-苯甲基氨基甲酸(3);1,3-丙二醇苯乙酸酯(4);环(脯-亮)二肽(5);环(脯-缬)二肽(6);脯氨酸(7)和腺嘌呤核苷(8)。结论化合物1和2为甾体类化合物,其中化合物2为首次从放线菌中分离得到,化合物3、4为新天然产物,化合物5和6为常见的细菌代谢产物环二肽类。     

海绵体上抗肿瘤放线菌的分离筛选及菌株Streptomyces sp.A01059的发酵条件优化

目的分离筛选抗肿瘤活性放线菌,并提高菌株Streptomycessp.A01059抗肿瘤活性物质的产量。方法以抗稻瘟霉,MTT法为筛选模型,对分离自海南岛周边海域海绵样品的放线菌进行筛选,并对菌株Streptomycessp.A01059的发酵培养基组成及培养条件进行优化。结果筛选获得8株抗肿瘤活性较好的菌株,优化出菌株A01059发酵的最佳碳源,氮源,盐度,pH值及接种量等。结论优化条件下,菌株A01059发酵液稀释100倍时,对人肝癌细胞SMMC-7721,小鼠肉瘤细胞S180,人正常肝细胞L-20的抑制率分别为80%,81%,12%。     

海洋放线菌WBF7的鉴定及其抗肿瘤代谢产物的初步研究

目的 对海洋放线菌WBF7进行菌种鉴定，并对其抗肿瘤代谢产物进行初步研究。方法 通过形态学观察、培养特征和生理生化特性检测、细胞壁组分以及16S rDNA基因序列分析，鉴定菌株；将其发酵液PH调至2、7或10后100℃加热处理1h，研究活性物质的稳定性；用石油醚、乙酸乙酯及其水饱和正丁醇对其发酵液依次进行萃取，研究活性物质的极性；通过MTT法对处理后样品进行抗肿瘤活性研究。结果 通过菌种鉴定，将菌株WBF7归属为灰略红链霉菌（Streptomyces griseorubens）；其抗肿瘤活性物质具有较强的酸碱稳定性和热稳定性，并且易于被乙酸乙酯萃取。结论 海洋放线菌WBF7是第一次从海洋中分离得到的灰略红链霉菌，其抗肿瘤代谢产物稳定性好，大部分极性中等，具有较好的开发前景。     

响应面法优化阿卡波糖发酵培养基

目的利用响应面法对阿卡波糖发酵培养基进行优化。方法以HPLC法检测发酵样品中的阿卡波糖峰面积,并以阿卡波糖发酵单位为指标,通过Plackett-Burman(PB)实验,筛选出阿卡波糖发酵的主要影响因素,进而进行最陡爬坡实验,最后通过Box-Behnken设计实验,利用Design-Ex-pert 7.1.6 Trail软件进行回归分析,确定主要影响因素的最佳浓度,得到阿卡波糖优化发酵培养基组成。结果确定了优化发酵培养基组成(g.L-1):麦芽糖80.0、葡萄糖23.0、黄豆饼粉24.7、玉米浆1.5、谷氨酸1.0、磷酸二氢钾1.5、三氯化铁1.0、氯化钙3.0、碳酸钙4.0。验证实验表明在优化培养基条件下阿卡波糖发酵单位为4 015 mg.L-1,与预测值4 047 mg.L-1接近,比优化前提高了14.3%。结论对阿卡波糖发酵培养基采用响应面Box-Behnken设计,可以有效地对发酵培养基进行优化。