牡蛎天然活性肽对人胃腺癌BGC-823细胞周期与基因表达的调控

目的 比较研究牡蛎天然活性肽（BPO）对人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的生物学效应，并进一步探索其对胃癌细胞的作用机制。方法 采用酸抽提、凝胶柱层析等方法，从牡蛎体内分离提取到牡蛎天然活性多肽组分BPO-1，以姜黄素和HMBA处理组为平行对照，流式细胞仪检测细胞周期变化及以免疫细胞化学方法检测相关癌基因、抑癌基因表达变化。结果 BPO-1能有效抑制BGC-823细胞增殖活动，出现亚G1期细胞，细胞进入凋亡现象。BPO-1，姜黄素及其组合均能不同程度地上调BGC-823细胞p16，c-myc，Fas，p2^WAF1/CIP1蛋白表达，下调突变型p53，bcl-2蛋白表达。结论 BPO-1对胃癌细胞具有显著的诱导凋亡作用。其诱导癌细胞凋亡机制与其调节和干预bcl-2，c—myc等癌基因和p53，p16，p21^WAF1/CIP1等抑癌基因的表达有关。     

紫杉醇诱导胃癌BGC-823和SGC-7901细胞凋亡作用的比较

目的研究胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞对紫杉醇诱导凋亡的敏感性。方法用0．1～0．5μmol·L^-1紫杉醇作用于BGC-823和SGC-7901细胞,再用0．3μmol·L^-1紫杉醇对BGC-823和SGC-7901细胞分别作用0、6、12、24、36、48h,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果（1）紫杉醇对两种胃癌细胞均有明显诱导凋亡作用,且均呈时间依赖性及剂量依赖性;（2）中分化的SGC-7901细胞株对紫杉醇的敏感性明显高于低分化的BGC-823细胞株。结论不同分化程度的胃癌细胞株对紫杉醇的敏感性不同。     

冬凌草甲素抑制人胃腺癌细胞生长和诱导凋亡作用研究

目的:研究冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法:采用MTT、透射电镜、流式细胞仪等方法对经冬凌草甲素体外作用的BGC-823细胞进行观察和检测。结果:16、32、64μg·mL-1冬凌草甲素能显著抑制BGC-823细胞的生长,并呈浓度-时间依赖性。64μg·mL-1的冬凌草甲素作用24、48、72h的抑制率分别为68·5%、90·8%、94·7%。32μg·mL-1冬凌草甲素作用2h后,电镜下BGC-823细胞的线粒体和内质网增殖肿胀;作用8h后,线粒体和内质网空泡化,内部结构消失,细胞核染色质边集呈凋亡的典型改变;作用24h后,流式细胞仪检测BGC-823细胞G2/M期阻滞,凋亡率为37·8%。结论:冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,生长抑制可能与G2/M细胞周期阻滞有关,诱导凋亡可能通过线粒体和(或)内质网途径起作用。     

朱砂与石膏体外抗肿瘤作用研究

目的观察朱砂与石膏的体外抗肿瘤作用。方法采用MTT法检测朱砂、石膏对BGC-823胃癌细胞、A549肺腺癌细胞增殖的影响;通过Hoechst 33258荧光染色研究其对BGC-823胃癌细胞凋亡的影响。结果朱砂对BGC-823胃癌细胞生长的半数抑制浓度（IC50）为3.44μg.mL-1,抑制肺腺癌A549细胞的IC50为7.69μg.mL-1;石膏仅在1.5mg.mL-1浓度时对BGC-823胃癌细胞、A549肺腺癌细胞生长有显著的抑制作用。朱砂及石膏作用48h后BGC-823细胞贴壁细胞数量明显减少,细胞中未检测到明显的凋亡小体。结论朱砂体外有明显的抗肿瘤作用。     

Investigation on anti-tumor Effects of Cinnabar and Gypsum in vitro

目的 观察朱砂与石膏的体外抗肿瘤作用.方法 采用MTT法检测朱砂、石膏对BGC-823胃癌细胞、A549肺腺癌细胞增殖的影响;通过Hoechst 33258荧光染色研究其对BGC-823胃癌细胞凋亡的影响.结果 朱砂对BGC-823胃癌细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为3.44μg·mL-1,抑制肺腺癌A549细胞的IC50为7.69μg·mL-1;石膏仅在1.5mg· mL-1浓度时对BGC-823胃癌细胞、A549肺腺癌细胞生长有显著的抑制作用.朱砂及石膏作用48h后BGC-823细胞贴壁细胞数量明显减少,细胞中未检测到明显的凋亡小体.结论 朱砂体外有明显的抗肿瘤作用.     

miR-329通过负性调节KDM1A抑制胃癌细胞增殖及侵袭的机制研究

目的 探讨miR-329通过负性调节KDM1A抑制胃癌细胞增殖及侵袭的机制.方法 人胃腺癌细胞系(BGC-823)分为BGC-823癌细胞组、miR-329 mimics组、miR-329 inhibitor组,MTT测定BGC-823胃腺癌细胞增殖情况,结晶紫染色测定癌细胞单克隆形成数目,流式细胞仪测定胃癌细胞凋亡情...     

金丝桃苷体外抗胃癌作用及其机制研究

目的：研究金丝桃苷（Hyperoside）对胃癌BGC-823细胞的生长、周期及凋亡的作用,并通过检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase 3、caspase 8、caspase 9）的活性探讨金丝桃苷诱导胃癌凋亡的可能机制。方法：采用MTT法检测金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞的增殖影响;流式细胞技术检测金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞周期和凋亡的影响;比色法测定金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞凋亡过程中caspase 3、caspase 8和caspase 9活性影响。结果：金丝桃苷处理BGC-823细胞24h和48h后,细胞生长明显抑制,作用24h和48h时其IC50分别为32.14和22.67μg/mL;金丝桃苷处理组与对照组相比,胃癌BGC-823细胞G0/G1期比例明显增加,凋亡细胞比例明显增加;caspase 3、caspase 8和caspase9活性随药物浓度增加而逐渐升高。结论：金丝桃苷能够通过阻断细胞周期、诱导细胞凋亡有效抗胃癌,其诱导肿瘤细胞凋亡机制可能与激活caspase 3、caspase 8和caspase 9活性密切相关。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对胃癌培养细胞系BGC-823增殖及凋亡的影响.方法 应用MTT法检测NS-398对胃癌细胞BGC-823细胞增殖的影响;应用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测NS-398对胃癌细胞BGC-823细胞凋亡的影响.结果 NS-398随剂量的增加及作用时间延长对胃癌细胞呈抑制作用;体外NS-398能减少BGC-823细胞株COX-2的表达,对BGC-823有细胞毒作用,可增加细胞凋亡率.结论 NS-398可抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,促进胃癌BGC-823细胞的凋亡.其可能机制是与抑制COX-2表达有关.     

葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响及其作用的分子机制。方法体外培养BGC-823细胞,MTT法观察葫芦素B对细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9的活性,采用Western blot方法检测葫芦素B对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果葫芦素B对BGC-823细胞的增殖有抑制作用,且此作用呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测结果显示,葫芦素B诱导BGC-823细胞凋亡,呈剂量依赖性。葫芦素B处理后Caspase-3、Caspase-9活性升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bak的表达增加。结论葫芦素B可以抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

香芹酚抑制人胃癌细胞增殖的体外实验研究

目的:研究香芹酚对胃癌BGC-823细胞的生长、凋亡及侵袭的影响。方法:采用MTT法检测香芹酚对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用;流式细胞技术检测香芹酚对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响;Transwell法检测香芹酚对胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR检测MMP-9、TIMP-1的表达;Western blot检测caspase-9、PARP的表达以及ERK、P38信号通路的激活情况。结果:香芹酚能够明显抑制胃癌细胞生长(P<0.05),与对照组相比,香芹酚处理组胃癌BGC-823细胞凋亡明显增加(0μmol·L-1vs 10μmol·L-1,0μmol·L-1vs 20μmol·L-1,0μmol·L-1vs 40μmol·L-1,0μmol·L-1vs80μmol·L-1),侵袭能力显著降低(0μmol·L-1vs 80μmol·L-1),差异均有统计学意义(P<0.000 1)。香芹酚处理组细胞caspase-9、TIMP-1表达升高(P<0.000 1)、PARP发生裂解(P<0.000 1),P38信号被激活,同时MMP-9表达降低(P<0.000 1),ERK信号通路受到抑制。结论:香芹酚能够抑制胃癌细胞的增殖和侵袭,诱导其凋亡,其作用与MAPK信号通路激活密切相关。     

Effects of quercetin on the apoptosis of the human gastric carcinoma cells

Quercetin, a natural constituent abundantly present in grapes, red wine, and other food products, is known to possess potent antiproliferative effects against various malignant cells. The present study aims to investigate the effect of quercetin on the apoptosis and morphology of gastric carcinoma BGC-823 cells, as well as the probable mechanism, in an effort to identify an effective drug as a potential candidate for gastric cancer. Gastric carcinoma BGC-823 cells were treated with quercetin, and cell morphology was determined by light microscopy and transmission electron microscopy. Apoptosis and cell cycle were measured by flow cytometry, using propidium iodide staining. The apoptotic protein expression of caspase-3, Bcl-2 and Bax was detected by Western blot. Quercetin induced apoptosis in BGC-823 cell. Some morphologic features of apoptosis were found, such as cell shrinkage or even apoptosis body. Quercetin changed the apoptotic protein expression. These results indicate that quercetin can induce apoptosis of the BGC-823 cells. A decrease in Bcl-2/Bax ratio with the increased expression of caspase-3 provides evidence that quercetin-induced apoptosis may be mediated via the mitochondrial pathway.     

微小RNA-588靶向调控脾酪氨酸激酶的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡的作用

目的 探讨微小RNA-588(miR-588)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响以及潜在的作用机制.方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞SGC-7901、BGC-823和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-588的表达水平;将胃癌细胞SGC-7901、BGC-823分为anti-miR-NC组...     

Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用

目的:建立胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株,研究Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用。方法:使用顺铂逐步增加剂量法诱导胃癌BGC-823细胞,以建立其多药耐药细胞株BGC-823/DDP;MTT细胞毒实验检测顺铂对肿瘤细胞的细胞毒作用;半定量RT-PCR检测Oct-4基因的表达;基因转染干扰Oct-4表达;Western blot实验检测Oct-4蛋白的表达改变。结果:经过30～34周的诱导我们建立了胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对BGC-823和BGC-823/DDP细胞的IC50值分别为(2.33±0.12)和(21.46±0.97)μmol/L(P<0.01),与BGC-823细胞比较,BGC-823/DDP细胞对顺铂耐药是其9.21倍;半定量RT-PCR检测显示胃癌耐药株BGC-823/DDP高表达Oct-4基因;Western blot结果显示化学合成的siRNA可以靶向下调Oct-4蛋白的表达;siRNA干扰BGC-823/DDP细胞Oct-4基因的表达后,BGC-823/DDP细胞对顺铂的的IC50值从(22.04±1.84)μmol/L减小到(6.15±0.53)μmol/L,二者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:研究结果表明,Oct-4基因的高表达在胃癌顺铂的耐药中起着重要的作用。     

冬凌草甲素诱导胃癌BGC-823细胞凋亡及G2／M细胞周期阻滞作用研究

目的研究冬凌草甲素体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用，阐明其作用机理，为临床应用提供科学依据。方法用MTT方法测定冬凌草甲素体外抑制BGC-823细胞生长的作用。用共聚焦荧光显微镜和流式细胞仪分别观察诱导凋亡的情况。线粒体膜电位和细胞内钙离子浓度分别用荧光探针标记后流式细胞仪测定。凋亡和细胞周期相关蛋白的表达用Westem blotting进行测定。结果冬凌草甲素对BGC-823细胞的半数生长抑制浓度IC50值为22．21μmol.L^-1，并诱导细胞凋亡，呈现浓度依赖性。此外，能够降低线粒体膜电位，升高细胞内钙离子浓度，激活caspase-3前体。同时，冬凌草甲素能够使得BGC-823细胞阻滞在细胞周期的G2／M期，伴随有cyclin A蛋白的表达下降。在发生凋亡和细胞阻滞之前，观察到p53蛋白的表达增加。结论冬凌草甲素能够诱导BGC-823细胞产生凋亡，并使细胞周期阻滞在G2／M期。其凋亡机理与caspase-3的激活，p53蛋白表达上调及cyclin A表达下调相关。     

沉默己糖激酶结构域蛋白1表达对胃癌细胞增殖、侵袭、转移和上皮间充质转化的影响

目的探讨己糖激酶结构域蛋白1(HKDC1)成为胃癌潜在治疗靶点的可能性。方法用脂质体法向胃癌细胞NCI-N87,BGC-823和HGC-27转染沉默HKDC1表达的小干扰RNA(siRNA)(siRNA-1和siRNA-2),同时设阴性对照siRNA(siRNA-NC)组,分别获得NCI-N87-siRNA-NC,NCI-N87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞,BGC-823-siRNA-NC,BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞,HGC-27-siRNA-NC,HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞,用Western印迹法检测siRNA对HKDC1表达的抑制效果,并计算抑制率。将上述细胞接种入96孔板,孵育72 h后,磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测细胞存活,计算细胞存活率。将上述细胞分别接种入无基质胶和铺有基质胶的Transwell小室,24 h后计数小室下室细胞数,分别检测细胞迁移和侵袭能力。收集上述细胞提取蛋白质,用Western印迹法检测上皮间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和Snail的表达。结果分别转染siRNA-1和siRNA-2,对NCIN87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞HKDC1表达的抑制率分别为(20.5±0.1)%和(48.6±0.1)%,对BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞的抑制率分别为(56.5±0.1)%和(58.9±0.1)%,对HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞的抑制率分别为(63.5±0.1)%和(85.9±0.1)%。与对应的阴性对照组细胞相比,NCI-N87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞的存活率分别为(68.2±2.5)%和(70.4±2.1)%(P<0.01),BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞的存活率分别为(77.0±0.1)%和(73.7±0.1)%(P<0.05),HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞的存活率分别为(63.2±0.6)%和(70.4±0.1)%(P<0.01,P<0.05)。NCI-N87-siRNA-NC,NCI-N87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞的迁移数分别为488±43,319±27和262±37(P<0.01),侵袭数分别为143±8,68±2和30±2(P<0.01);BGC-823-siRNA-NC,BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞的迁移数分别为1131±69,830±159和579±57(P<0.01),侵袭数分别为1127±113,781±97和565±96(P<0.01);HGC-27-siRNA-NC,HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞的迁移数分别为453±36,190±25和57±16(P<0.01),侵袭数分别为645±53,462±62和264±47(P<0.01)。与对应阴性对照组相比,3种细胞HKDC1 siRNA-1和HKDC1 siRNA-2组细胞内E-钙黏蛋白的表达显著升高(P<0.05),N-钙黏蛋白和Snail的表达显著下降(P<0.05)。结论沉默HKDC1表达可抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移,并抑制上皮间充质转化。     

FAM3B基因cDNA克隆及其在胃癌细胞系BGC-823的表达

目的克隆FAM3B cDNA,构建FAM3B重组表达载体并在胃癌细胞系BGC-823中表达,观察其对细胞系的影响,探索新的肿瘤治疗途径。方法构建pEGFP-N2-FAM3B真核表达质粒,将pEGFP-N2-FAM3B转染人胃癌细胞系BGC-823,研究其对胃癌细胞产生的作用。结果重组pEGFP-N2-FAM3B真核表达质粒构建成功,经pEGFP-N2-FAM3B转染后,荧光显微镜下可见转染的BGC-823细胞有绿色荧光蛋白的表达,转染后的BGC-823细胞生长减慢。结论构建完成真核表达载体pEGFP-N2-FAM3B,重组pEGFP-N2-FAM3B质粒在胃癌细胞系BGC-823细胞内成功表达。