免疫组化和原位杂交法诊断尖锐湿疣的对比研究

目的：探讨原位杂交（ISH）和免疫组化（IHC）方法诊断尖锐湿疣（CA）的敏感性与特异性,并与组织病理相比较;了解湘潭地区CA患者感染人乳头瘤病毒（HPV）的基因类型及分布。方法：分别用原位杂交和免疫组化方法对临床和（或）病理组织学诊断CA的124例病例进行检测。结果：IHC检测HPV-P阳性84例,HPV16阳性82例,总阳性率为69.4%（86/124）,阳性细胞主要分布在棘细胞上层及颗粒细胞层;ISH检测HPV6/11阳性108例（87.09%）,HPV16/18阳性14例（11.29%）,HPV16/18阳性的12例中有6例合并有HPV6/11阳性（4.8%）。ISH总阳性率为93.5%（116/124）,HPV6/11、HPV16/18同时感染42.85%,阳性细胞广泛出现在棘层中上层、颗粒层及角化不全细胞核内,在角化不全层被挤压的细胞核内也可见到阳性表达可见。结论：原位杂交和免疫组化是诊断尖锐湿疣的重要辅助手段;原位杂交法检测HPV6/11、HPV16/18比免疫组化法敏感性和特异性都要高,且定位准确、背景清晰,能对感染有准确的组织学定位,更有助于HPV分型研究,因此是诊断和研究CA的较好和先进的方法。湘潭地区CA以HPV11和6感染为主,有较高的混合感染率。     

外阴鳞癌组织中脆性组氨酸三联体缺失与人乳头状瘤病毒感染状态的关系

目的：探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因缺失与人乳头状瘤病毒（HPV）感染在外阴鳞癌发生发展中的作用和意义。方法：采用免疫组化SP法检测42例外阴鳞癌中的FHIT蛋白的表达,以PCR方法检测HPV感染情况,并以10例正常外阴组织作为对照,分析HPV阳性组和阴性组外阴鳞癌组织中FHIT蛋白的表达与其临床病理特征的关系。结果：FHIT在正常外阴组织中呈阳性表达;FHIT在外阴鳞癌组中阴性率为71.4%（30/42）,明显高于正常组（P=0.000）,且随着细胞分化程度的降低,FHIT阴性率上升。FHIT基因的表达在HPV阳性组和阴性组间比较,差异具有统计学意义（P=0.030）。结论：FHIT基因缺失与外阴鳞癌发生发展有关。HPV感染可能是引起FHIT异常的原因。     

外阴恶性肿瘤中P21、ILK及HPV6／11、HPV16／18的检测及意义

目的：探讨P21、ILK及HPV6／11、HPV16／18与外阴恶性肿瘤的关系。方法：P21、ILK用免疫组化SP法检测,HPV6／11、HPV16／18用原位杂交法（ISH）检测。结果：外阴恶性肿瘤组、外阴上皮内瘤变（VIN）组、正常组中,P21、ILK的阳性表达率分别为40．00％（12／30）、52．38％（11／21）、0（0／10）和63．33％（19／30）、47．62％（10／21）、0（0／10）;外阴病变各组P21、ILK的阳性表达率均显著高于正常组（P〈0．05）。外阴恶性肿瘤组、VIN组中HPV6／11、HPV16／18的阳性表达率分别为60．00％（18／301、42．86％（9／21）和33．33％（10／30）、28．57％（6／21）,正常对照组未检测出;HPV6／11在外阴恶性肿瘤组、VIN组中的阳性表达率均显著高于正常组（P〈0．05）;HPV16／18在外阴恶性肿瘤组中的阳性表达率显著高于正常组（P〈0．05）。结论：P21、ILK及HPV感染在外阴恶性肿瘤的发生及发展中可能起一定的作用。     

白斑、扁平苔藓及口腔癌中人类乳头瘤病毒的检测

目的：比较口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）发展过程中各阶段病损的人类乳头瘤病毒（human papilloma virus, HPV）感染率，以探讨将HPV感染作为癌变预测信号的可能性，同时比较两种方法在检测口腔内HPV感染方面的灵敏度差异。方法：使用第二代杂交捕获（hybrid capture，HC-Ⅱ）法检测255例口腔黏膜上皮细胞样本中的HPV感染情况，样本取自12例健康口腔黏膜、211例病理诊断的病例和32例临床诊断的病例，具有病理诊断和临床诊断的病例包括口腔黏膜良性病变8例、癌前病变口腔黏膜白斑（oral leukoplakia，OLK）伴上皮单纯增生74例、OLK伴上皮异常增生（oral epithelial dysplasia, OED）42例、癌前状态扁平苔癣（oral lichen planus，OLP）91例以及OSCC 28例。使用原位杂交（in situ hybridization，ISH）法检测109例石蜡包埋组织中的HPV感染情况，包括33例OSCC 和76例OLK，76例OLK中有30例上皮单纯增生、15例轻度OED、15例中度OED、16例重度OED。结果：OLP样本的HPV阳性率为12.12%（8／66），高于OLK （2.59%， 3／116， χ2=4.666，P =0.031）及OSCC（7.14%， 2／28， χ2=0.513，P=0.474）；OSCC样本的HPV阳性率（7.14%，2/28）高于OLK（2.59%， 3/116），但差异无统计学意义;烟斑样本只有1例，没有参与统计学分析。ISH法检测109例口腔黏膜病损石蜡切片中16/18型及31/33型HPV DNA，仅1例OSCC样本为阳性；同时经HC Ⅱ和ISH法检测的样本中有94.6%（35/37）的检测结果一致，均为阴性；另2例分别为OSCC早期浸润和OLK伴上皮单纯增生，经HC-Ⅱ检测为HPV阳性，但ISH检测结果为阴性。随访66例参与HPV检测的OLP患者，平均随访期为（36.2±10.5）个月，发现其中3人发生了癌变，HPV阳性患者癌变率为12.50％（1／8）,高于HPV阴性患者癌变率3.45％（2／58），通过卡方检验差异无统计学意义，P＝0.249。结论：没有足够证据证明HPV感染或检测阳性可作为预测OLK癌变的信号；患OLP的患者处于癌前状态，OLP中HPV检出率高于OLK及OSCC，提示OLP患者由于某种原因对HPV易感，可考虑为OLP 患者常规做HPV检测，推荐使用HC-Ⅱ法，同时应对HPV阳性的OLP患者加强随访。     

湘潭地区尖锐湿疣人乳头瘤病毒感染的分型研究

目的了解湘潭地区尖锐湿疣(Condyloma Acuminatum,CA)患者感染人乳头瘤病毒(hunan papilooma virus,HPV)的基因类型及分布。方法分别用原位杂交(In situ hybridization,ISH)和免疫组化(immunohistiochemistry,IHC)方法对临床和/或病理组织学诊断CA的266例病例进行检测。结果 IHC检测HPV-P阳性166例,HPV-16阳性32例,总阳性率为65.41%(174/266),阳性细胞主要分布在棘细胞上层及颗粒细胞层;ISH检测HPV6/11阳性235例,HPV16/18阳性42例,HPV16/18阳性的42例中有24例合并有HPV6/11阳性。ISH总阳性率为95.11%(253/266),HPV6/11、HPV16/18同时感染57.14%,阳性细胞广泛出现在棘层中上层、颗粒层及角化不全细胞核内。结论本地区CA以HPV6/11感染为主,少数为高危型HPV16/18型;有较高的混合感染率。两种检测方法相比较,原位杂交技术阳性率和阳性细胞数均显著高于免疫组化技术,因此是诊断和研究CA的较好和先进的方法。     

口腔白斑和鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒感染分析

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染与口腔鳞状细胞癌(OSCC)临床病理特征间的关系.方法 原位杂交(ISH)和免疫组织化学(IHC)分别检测10例正常口腔黏膜,26例口腔白斑(OLK)和56例OSCC中的HPV16/18水平,分析不同组间HPV16/18阳性率间的差异和OSCC中HPV16/18感染与性别、年龄、TNM分期、组织学分化、淋巴结转移、吸烟的关系.结果 ISH和IHC检测HPV16/18阳性率差异无统计学意义(P＞0.05);OSCC和OLK患者中HPV16/18阳性率高于正常口腔黏膜(P＜0.05);OSCC中吸烟者HPV16/18阳性率明显高于非吸烟者(P＜0.05).结论 HPV16/18感染是部分OSCC的发病因素,其与吸烟对OSCC发病具有协同作用.     

乳腺癌c-erbB-2的表达和扩增

目的研究c-erbB-2蛋白表达、基因扩增及其与乳腺癌的关系并将免疫组化(IHC)和原位杂交(ISH)结果进行比较.方法应用免疫组化ABC法检测144例乳腺癌石蜡切片中c-erbB-2蛋白表达状况,对其中25例浸润型导管癌用光敏生物素标记DNA探针进行原位杂交检测c-erbB-2扩增情况.结果乳腺癌中c-erbB-2过度表达阳性率为48.6%,浸润型导管癌阳性率最高,达74.1%.过度表达与肿瘤体积、淋巴结转移状况、组织学分级、核分裂计数和临床分期呈正相关,与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)状况呈负相关.过度表达者5年生存率显著低于表达阴性者.25例浸润型导管癌中,c-erbB-2原位杂交阳性率为48%(12/25),与IHC结果一致性,IHC强阳性(3+)者ISH均阳性(10/10),IHC阴性者ISH均阴性(8/8),IHC弱阳性(1+～2+)者大部分ISH阴性(5/7).结论 c-erbB-2过度表达与乳腺癌不良预后有关.比较IHC和ISH两种方法发现,高水平c-erbB-2过度表达(3+)与基因扩增有极好的一致性,而低水平表达者与基因扩增无明确关系.     

原位杂交检测宫颈活检组织HPV感染的临床意义

目的探讨原位杂交（ISH）检测宫颈活检组织中人类乳头瘤病毒（HPV）感染对宫颈癌早期诊断的临床意义。方法对128例宫颈活检的石蜡标本,分别行常规检测和ISH-HPV检测。结果①二种方法检测慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（CIN）、宫颈鳞状细胞癌（SCC）HPV感染检出率分别为2.5%与8.9%、37.5%与55.0%和66.6%与90.0%,检出率SCC〉CIN〉慢性宫颈炎,ISH法明显优于常规检测法（χ2=7.5625,P〈0.01）。②在所检测的128例宫颈活检组织标本中,21～30岁患者的HPV感染率明显高于其它年龄组。结论慢性宫颈炎、CIN、宫颈鳞状细胞癌与HPV6/11/16/18/31/33密切相关,随着病变程度的加重,HPV感染的检出率明显升高。ISH方法对早期宫颈HPV感染患者在分子病理学水平作出准确、特异、快速的诊断,同时具有细胞阳性定位功能。通过HPV感染的检测,可以积极预警年轻人群中宫颈癌的发生。     

高危型人乳头瘤病毒阴性宫颈癌患者临床病理特征分析

背景　宫颈癌是女性常见的生殖道恶性肿瘤。高危型人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染是其主要病因。然而临床研究发现,有相当一部分宫颈癌患者高危型HPV检测结果为阴性,且这类患者术后复发风险、肿瘤细胞侵袭以及转移风险均增加。目的　分析高危型HPV阴性宫颈癌患者的临床病理特征。方法　2003-2016年浙江大学医学院附属妇产科医院住院治疗、临床病理资料完整且术前有HPV-HC2检测结果的宫颈癌患者共1 416例,经第2代杂交捕获技术（HC-Ⅱ）检测高危型HPV阳性宫颈癌患者1 296例,高危型HPV阴性宫颈癌患者120例。调取120例高危型HPV阴性宫颈癌组织石蜡标本,采用实时荧光聚合酶链式反应（PCR）法对高危型HPV进行再检测,获取高危型HPV真阴性患者为高危型HPV阴性组。从1 296例高危型HPV阳性宫颈癌患者中以随机数字表法选取与高危型HPV真阴性组等量的患者为高危型HPV阳性组。收集两组患者的发病年龄、初次生育年龄、分娩次数、临床分期及病理类型等。结果　1 416例宫颈癌患者中,HC-Ⅱ法检测高危型HPV阴性120例,阴性率为8.5%。实时荧光PCR法显示,高危型HPV仍为阴性89例,阴性率为6.3%,两次检测符合率为74.2%（89/120）。高危型HPV阴性组患者发病年龄28~75岁,平均发病年龄（45.2±4.2）岁;高危型HPV阳性组患者发病年龄21~78岁,平均发病年龄（46.3±5.1）岁。两组患者平均发病年龄、各发病年龄构成、初次生育年龄、分娩次数、临床分期比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。两组患者病理类型比较,差异有统计学意义（χ2=22.062,P=0.001）。结论　采用实时荧光PCR法检测宫颈癌组织石蜡样本中的高危型HPV是一种高敏感度的检测方法。与高危型HPV阳性宫颈癌相比,高危型HPV阴性宫颈癌发病率不高,但其腺癌、腺鳞癌及其他少见类型癌的比例高于高危型HPV阳性的宫颈癌患者。     

导流杂交与杂交捕获二代及原位杂交在女性生殖道人乳状瘤病毒检测中的比较

目的：通过比较导流杂交（HybfiMax）与杂交捕获二代（HC-Ⅱ）及原位杂交（ISH）在女性生殖道人乳头状瘤病毒（HPV）感染检测中的，一致性，评价导流杂交法的应用价值。方法：对413例女性的宫颈脱落细胞标本，用HybfiMax和HC-Ⅱ进行HPV检测，比较检测结果的一致性，并计算两种方法对高级别病变检出率的差异；对101例患者的宫颈石蜡切片标本进行HPV16／18原位杂交（ISH），比较HybriMax分型结果与ISH结果的一致性。结果：HybriMax与HC-Ⅱ对13种高危型HPV的检测结果总符合率为92．5％，Kappa指数为0．75，一致性极好，对组织病理证实为宫颈上皮内瘤变Ⅱ级（CINⅡ）及其以上病变的检出率无差异。HybriMax和ISH检测HPV16／18的符合率为89．1％，Kappa指数为0．776，一致性极好。结论：HybirMax检测结果与HC-Ⅱ及ISH高度吻合，是较理想的HPV检测方法。     

新疆维吾尔族宫颈癌组织中HPV—DNA表达及存在状态的研究

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒（HR—HPV）在新疆维吾尔族宫颈癌患者中的表达、存在状态及其与宫颈癌的相关性。方法 选择第2代杂交捕获（Hybrid capture,HC2）检测HR—HPV阳性的30例维吾尔族宫颈鳞癌（SCC）患者,利用巢式PCR检测其组织标本中的HPV16-DNA的表达,多重Taqman探针荧光定量PCR检测HPV16～DNA在组织中的存在状态。结果 巢式PCR检测结果 显示宫颈鳞癌患者HPV16-DNA检出率为96．7％,与HC2法的HPV—DNA检出率差异无统计学意义（P〉0．05）;HPV16-DNA在宫颈癌组织中以整合态存在,其整合率为89．7％;HPV16-DNA的表达水平与宫颈癌患者的年龄、有无淋巴结转移无关（P〉0．05）,但其在病理分级高的患者中表达高于病理分级低的患者（P〈0．05）,在临床分期高的患者中表达高于低分期患者（P〈0．05）。结论 HR—HPV感染是导致宫颈癌的主要因素,而HPV16是新疆维吾尔族宫颈癌主要的病毒类型,其在组织中多以整合态存在,在宫颈癌发病中起主要作用,HPV—DNA整合状态与宫颈细胞的恶性转化密切相关。     

食管癌中人乳头状瘤病毒感染与p53的相关性研究

目的观察分析食管癌中人乳头状瘤病毒(HPV)感染与p53的相关性。方法选取2011年3月至2012年3月盐亭县肿瘤医院收集的食管癌患者的组织石蜡标本共80例。分别收集入选患者的癌组织、癌旁组织以及正常的食管黏膜组织,进行HPV和p53表达的检测。结果癌组织样本中,HPV阳性率为22.5%,癌旁组织为47.5%,正常组织为6.25%,三者阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);p53表达显示,癌组织的阳性率为91.3%,癌旁组织为51.3%,正常组织为2.5%,三者阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。HPV感染和p53表达呈正相关(r=0.382)。结论 HPV感染与p53表达呈正相关性,与食管癌的发生、发展相关关。     

基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1 mRNA及蛋白在骨性关节炎中的表达

目的：探讨骨性关节炎（OA）中金属蛋白酶-13（MMP-13）,转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA和蛋白表达的意义.方法：采用免疫组织化学技术,对60例OA病例及20例正常对照组进行了MMP-13及TGF-β1蛋白表达的检测;通过原位杂交技术,对30例OA及10例正常对照进行了MMP-13及TGF-β1在mRNA水平表达的检测.结果：MMP-13mRNA和蛋白在OA组阳性表达的积分光密度（IOD）值均显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA中两者的表达有显著正相关性（P〈0.01）;TGF-β1mRNA和蛋白在OA组阳性表达的IOD值均显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA中两者的表达亦有显著正相关性（P〈0.01）;MMP-13mRNA,TGF-β1mRNA及相应蛋白在OA中的表达均呈负相关（P〈0.05或P〈0.01）.结论：OA中TGF-β1高表达通过下调关节软骨与滑膜细胞中MMP-13的表达,对OA关节软骨起保护作用.     

人乳头状瘤病毒感染致宫颈癌及癌前病变风险研究

目的 探讨感染人乳头状瘤病毒（human papilloma virus,HPV）后患宫颈癌及癌前病变风险.方法 采用HPV-DNA核酸扩增及导流杂交技术,对7 234例来我院就诊的宫颈异常患者,进行HPV21种亚型的基因检测和宫颈液基薄层细胞学（TCT）检测,对细胞学检测结果为非典型鳞状细胞（ASCUS）以上和/或HPV-DNA检测阳性的患者,行活组织病理检查,对HPV感染后患宫颈癌及癌前病变风险进行分析.结果 HPV总感染率为27.37%,检出率前四位依次是HPV 16型6.97%（504/7 234）、52型5.68%（411/7 234）、58型5.27%（381/7 234）和33型3.33%（241/7 234）,其中高危型病毒（HR-HPV）感染占78.16%（2147/2747）.宫颈癌患者HPV的检出率为73.33%（33/45）.单型HPV感染后患轻度鳞状上皮内瘤变（LSIL）及高度鳞状上皮内瘤变（HSIL）和宫颈癌的风险分别是HPV阴性者的4.055倍（95% CI 2.528～6.505）和5.103倍（95% CI 3.838～6.786）,多型混合HPV感染后患宫颈LSIL及HSIL和宫颈癌的风险分别是HPV阴性者的7.313倍（95% CI 4.314～12.397）和7.550倍（95%CI 5.395～10.564）.结论 单型HPV感染致宫颈HSIL或宫颈癌的风险是HPV阴性者的5.1倍,多型混合HPV感染致宫颈HSIL或宫颈癌的风险是HPV阴性者的7.6倍.     

免疫组化和原位杂交联合应用在尖锐湿疣临床诊断中的价值

目的探讨免疫组化和核酸原位杂交检测人乳头状瘤病毒(HPV DNA)在尖锐湿疣病理诊断中的表达,为临床诊治提供依据。方法收集55例尖锐湿疣石蜡包埋组织标本,用HPV多克隆抗体行免疫组化染色,用HPV6/11DNA的寡核苷酸探针行原位杂交。结果免疫组化染色34例(61.8%)HPV多克隆抗体染色阳性;原位杂交46例(83.6%)表达HPV DNA阳性;其中18例(32.7%)在免疫组化染色中不表达或可疑表达而在原位杂交中表达阳性;联合应用免疫组化和原位杂交技术检测有52例(94.1%)呈阳性反应。结论免疫组化和原位杂交技术检测HPV是病理诊断尖锐湿疣的重要辅助手段,原位杂交法优于免疫组化法(P<0.05),二者联合应用明显提高了HPV的检出率。     

免疫组化和核酸原位杂交在尖锐湿疣病理诊断中的意义

目的　探讨免疫组化和核酸原位杂交检测人乳头瘤病毒 (HPV)在尖锐湿疣 (CA)病理诊断中的意义。方法　 44例病理形态学诊断为尖锐湿疣的石蜡包埋组织标本 ,用 HPV多克隆抗体和 HPV- 11单克隆抗体行免疫组化染色 ;用分别针对 HPV6和 HPV11- DNA的寡核苷酸探针行原位杂交。结果　 1免疫组化染色 :37/4 4例(84.1%) HPV多克隆抗体染色阳性 ;6 /4 4例 (13.7%) HPV- 11单克隆抗体染色阳性 ;2原位杂交 :有 38/4 4例(86 .4%)表达 HPV- DNA,其中既表达 HPV6 - DNA又表达 HPV11- DNA者 2 6例 (5 9.1%) ;3联合应用免疫组化和原位杂交技术检测 ,有 43/4 4例 (97.7%)呈阳性反应。结论　免疫组化和原位杂交技术检测 HPV是病理诊断尖锐湿疣的重要辅助手段 ,二者的联合使用明显提高了 HPV的检出率。在临床应用中结合形态学改变 ,可提高尖锐湿疣诊断的准确性。     

宫颈癌及癌前病变中人乳头瘤病毒基因型检测

目的：了解人乳头瘤病毒（HPV）基因型在宫颈癌及癌前病变中的分布。方法：采用PCR方法及限制性片段长度多态性分析（RFLP）对231例宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者进行HPV检测并鉴定基因分型。结果：231例宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者中共检出HPV感染192例（83．1％）,其中宫颈上皮内瘤变Ⅰ（CINⅠ）、宫颈上皮内瘤变Ⅱ-Ⅲ（CINⅡ-Ⅲ）和宫颈癌中HPV检出率分别为62．3％、86．8％和98．2％,之间比较差异有显著性（P〈0．01）。HPV的主要基因型分别为HPV16（47．4％）、HPV18（12．5％）、HPV58（9．9％）和HPV52（6．3％）。结论：宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中HPV感染以16、18、58和52型最为常见。