重型β地中海贫血患者BCL11A表达水平及其与临床表现的相关性分析

目的探讨重型β地中海贫血患者（thalassemia major,TM）BCL11A表达特点及其与临床表现的关系。方法正常人和TM患者各24例,分离外周血单个核细胞,实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real time polymer-ase chain reaction,qRT-PCR）法检测BCL11A、γ基因mRNA表达水平,同时检测血常规血红蛋白（hemoglobin,Hb）、血红蛋白分析仪检测胎儿血红蛋白（fetal hemoglobin,HbF）,并行相关性检验。结果 TM患者的HbF、γmRNA水平显著高于正常人群（13.7%±13.6%vs 0.28%±0.15%,P〈0.001;2479%±279%vs 10.61%±0.41%,P〈0.001）,2组BCL11A基因mRNA水平无统计学差异（0.73%±0.26%vs 0.77%±0.22%,P=0.590）。TM患者中25%（6例）的患者HbF正常,与HbF升高者比较,其γmRNA水平要低（62.10%±16.49%vs 3285.2%±2792.2%,P〈0.001）,但BCL11A mRNA水平无统计学差异（0.78%±0.21%vs 0.72%±0.28%,P=0.704）。TM患者BCL11A mRNA水平与首次输血年龄无显著相关（r=0.201,P=0.345）。结论 BCL11A不参与TM患者的γ基因的开放和HbF代偿性增加。     

广西重型β-地中海贫血BCL11A基因多态性与胎儿血红蛋白的相关性研究

目的:探讨我国广西重型β-地中海贫血(地贫)BCL11A基因rs11886868、rs1427407及rs766432多态性与其胎儿血红蛋白(HbF)水平的相关关系.方法:应用PCR扩增、PCR-RFLP及DNA测序技术,对我国广西重型β-地贫患者BCL11A基因3个位点多态性检测并统计基因型频率,分析上述位点与正常对照者分布频率的差异,并分析重型β-地贫患者三位点多态性与HbF水平的相关关系.结果:重型β-地贫组BCL11A基因rs1427407和rs766432位点突变基因的频率明显高于正常对照组(均P<0.001),rs11886868位点各基因型分布两组比较差异无统计学意义(P>0.05).在重型β-地贫患者中,基因型分布与3个多态性位点有较大关联(P<0.001,Cp=0.497).rs11886868位点基因型与HbF水平无相关性(P>0.05),rs1427407和rs766432与HbF水平有关(rp=0.931,P<0.001;rp=0.915,P<0.001).结论:重型β-地贫患者BCL11A基因基因多态性与HbF水平有关,rs1427407和rs766432位点基因突变可能提高HbF水平.     

补肾益髓法对地中海贫血患者β-珠蛋白及BCL11A基因表达的影响

目的:探讨补肾益髓法对地中海贫血患者β-珠蛋白基因的调控作用及B细胞淋巴瘤11A蛋白(B-cell lymphoma11A,BCL 11A)基因表达影响。方法:将82例患者随机分为对照组和治疗组,每组41例。对照组口服羟基脲片治疗,每日25 mg·kg~(-1),每周2次,6周为1个疗程,连续治疗2个疗程。治疗组:在对照组的治疗基础上,配合应用补肾益髓法治疗,方药组成:山萸肉、何首乌、熟地黄、补骨脂、黄芪、鳖甲、甘草。各每袋10 g,生药量相当于2.27 g中药原材,由中国中医科学院广安门医院大兴制剂中心生产,每日1袋,每日3次,温开水冲服,连续治疗3个月。观察两组患者治疗前后血常规、β珠蛋白基因mRNA(β-mRNA)、γ珠蛋白基因mRNA(γ-mRNA)、BCL 11A水平变化情况,并比较两组患者的临床疗效。结果:与治疗前比较,两组患者血红蛋白(hemoglobin,Hb)、红细胞总数(red blood cel,RBC)、网织红细胞(reticulocyte,Ret)、红细胞平均体积(erythrocyte mean corpuscular,MCV)、γ-mRNA及γ/(γ+β)mRNA水平均较治疗前明显升高,差异有统计学意义(P0.05);BCL 11A及中医证候评分均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,治疗组患者治疗后Hb、RBC、Ret、MCV、γmRNA、γ/(γ+β)mRNA表达水平改善情况及治疗有效率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);BCL 11A水平及中医证候评分均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),两组之间及治疗前后β-mRNA水平比较,差异均无统计学意义(P0.05);两组不良反应比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:补肾益髓法能有效降低地中海贫血患者BCL 11A表达水平,提高Hb、WBC、Ret和γ-mRNA表达水平,具有较好的临床疗效,安全性良好,但对β-mRNA水平无明显影响,其具体作用机制有待于进一步研究。     

β重型地中海贫血儿童NK细胞频率及杀伤活性

目的分析β重型地中海贫血儿童NK细胞频率及杀伤活性与输血诱导的免疫抑制的相关性。方法收集2011年1月～2013年12月在广州市妇女儿童医疗中心及中山大学附属第三医院进行输血治疗长达3年的β重型地中海贫血儿童20例（β重型地中海贫血组）及健康儿童20例（对照组）,通过流式细胞技术检测其外周血NK细胞（CD3-CD56＋）的频率及NK细胞杀伤活性（CD107a表达）。结果与对照组比较,长期输血的β重型地中海贫血组儿童外周血NK细胞频率显著降低[（4.5±2.8）%比（12.0±4.0）%],差异有统高度计学意义（P=0.000）。外周血CD107a表达（NK细胞的杀伤活性）显著下调[（23.9±7.4）%比（51.4±11.9）%],差异有统高度计学意义（P=0.000）。结论β重型地中海贫血组儿童外周血NK细胞频率的减少及NK细胞杀伤活性（CD107a表达）的减弱,可能与输血诱导的免疫抑制相关。     

BCL11A对胎儿血红蛋白的调控

β-地中海贫血(β-thalassemia,β-地贫)和镰状细胞贫血(sickle cell anemia,SCA)均属于β-珠蛋白异常导致的血红蛋白病,不同程度地流行于东南亚、南亚、北非及地中海区域.胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)水平升高可明显改善两者的临床症状.B细胞淋巴瘤因子11A(B cell lymphoma/leukemia 11A,BCL11A)是一种锌指结构转录因子,在胎儿到成人血红蛋白转换过程中发挥重要的负向调节作用.BCL11A下调会激活γ-珠蛋白提高HbF表达,使β-地贫和SCA临床症状得到缓解.本文主要论述BCL11A对γ-珠蛋白的调控机制、BCL11A与β-地贫和SCA的治疗,从而为β-珠蛋白病的研究提供理论依据.     

RNA干扰对体外培养HUVECs增殖和CD105表达的影响

目的 应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对CD105的小片段RNA(siRNA)抑制CD105在体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中表达的情况,观察CD105沉默后对细胞生长的影响.方法 根据人的CD105 mRNA序列选择3个不同的靶位点,分别合成3条CD105 siRNA,并同时合成阴性对照和阳性对照siRNA.采用脂质体介导的基因法转染至体外培养的HUVECs中,采用RT-PCR检测各组细胞CD105表达水平,Western blot检测干扰前后CD105蛋白表达水平,并用MTT法检测人HUVECs的细胞活力.结果 RT-PCR和Western blot检测表明,3号CD105 siRNA能最有效沉默CD105的表达,转染后的HUVECs中CD105 mRNA水平和蛋白表达水平明显下降.MTT结果表明CD105的下调导致了HUVECs活力的下降.结论 特异性的siRNA可以下调HUVECs中CD105 mRNA及蛋白表达水平,减低细胞活力.也提示CD105可能对体外培养HUVECs的生长有促进作用,CD105可以作为治疗新生血管的靶点.     

重型β-地中海贫血基因分析及临床特点

目的:探讨重型β-地中海贫血的基因突变类型及临床情况.方法:应用聚合酶链式反应(PCR)、反向点杂交法(RDB)技术对34例重型β-地中海贫血患者进行基因突变类型的检测.结果:23种β-地中海贫血基因突变类型中检测出9种基因型12种组合,其中纯合子14例,双重杂合子19例,β-地中海贫血复合HbE 1例.结论:34例重型β-地中海贫血患者基因突变类型与广西β-地中海贫血基因分型的情况相符.β-地中海贫血遗传机制及临床表现相当复杂,基因检测技术的运用对于地中海贫血的临床诊断及治疗具有重要的意义.     

肇庆地区人群中β-地中海贫血的基因型分析

摘要：目的了解广东省肇庆地区人群中β-地中海贫血的基因类型及分布频率。方法应用聚合酶链反应技术（PCR）结合反向点杂交（RDB）技术检测β-地中海贫血基因。结果239例β-地中海贫血患者的基因突变类型包括209例杂合子占87．44％,21例双重杂合子占8．79％,9例纯合子占3．77％。其中最常见的基因突变类型为CD41_42占50．96％。其余常见的B-地中海贫血基因突变位点有,-28,A—G;IVS-2nt654,c—T;CDl7,A_T和CD71-72,＋A;BECD26（G-A）;CD27—28,＋C;分另0占14,56％、11．15％、6．51％、6．13％、4．21％和4．21％。结论肇庆地区β-地中海贫血基因最常见的突变类型为CD41-42,双重杂合子及纯合子β-地中海贫血较多见。做好婚前、产前检查和遗传咨询,对预防β-地中海贫血患儿出生极有必要。     

重型再生障碍性贫血转录因子FOXP3和IL-10的表达

目的 观察重型再生障碍性贫血（简称SAA）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞转录因子FOXP3的表达水平及白细胞介素10（IL-10）的分泌水平。方法选用6例初发SAA、6例免疫治疗后造血恢复的SAA患者及8例健康对照的外周血标本。免疫磁珠分选CD4＋CD25^＋T细胞,分别用ELISA法和RT—PCR法检测CD4^＋CD25^＋T细胞培养后IL-10分泌水平和转录因子FOXP3mRNA的表达水平。结果初发SAA组IL—10分泌水平和转录因子FOXP3mRNA的表达水平均显著低于造血恢复组和正常对照组（P〈0．01）,后2组间无明显差异。结论IL-10和转录因子FOXP3与S从的发病可能有关。     

腺病毒过表达及 siRNA 干扰人肝癌 HepG2细胞对11β-羟基类固醇脱氢酶 I表达的影响

目的：观察腺病毒（Ad-11β-HSD1）过表达系统及特异性siRNA（siRNA-11β-HSD1）干扰人肝癌HepG2细胞对11β-羟基类固醇脱氢酶I（11β-HSD1）表达的影响。方法应用Ad-11β-HSD1以及siRNA-11β-HSD1转染人肝癌HepG2细胞,用实时荧光定量PCR及Western Blot 检测11β-HSD1表达。结果转染72 h后,对照组及腺病毒过表达组细胞中均可见明显 GFP荧光,且转染48 h后蛋白水平明显升高;siRNA干扰48 h后,mRNA及蛋白水平均明显降低。结论腺病毒转染可有效过表达11β-HSD1,而siRNA干扰可有效抑制11β-HSD1表达。     

实时荧光定量RT-PCR检测人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA的表达

目的：建立实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应（real-time fluorescence quantitative RT-PCR）检测人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA的方法,并研究其与CD4＋CD25＋Treg细胞活性相关性。方法：提取人外周血单个核细胞总RNA,将mRNA逆转录成cDNA,以β-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3 mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4＋CD25＋Treg细胞含量,分析两者相关性。结果：哮喘患儿组CD4＋CD25＋Treg细胞百分率明显低于同龄对照组,P〈0.01;FOXP3 mRNA的表达也显著降低,P〈0.05;FOXP3和β-actin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物。结论：应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3 mRNA表达水平简便易行、结果稳定可靠。初步结果证实,外周血CD4＋CD25＋Treg细胞数量和FOXP3 mRNA表达有相同的趋势,存在一定的相关性。     

湖北随州地区孕妇2772例β-地中海贫血基因型分布及血常规参数变异调查研究

目的:探讨湖北随州地区孕妇β-地中海贫血基因型分布特征及其血常规参数变异情况。方法:收集进行地中海贫血筛查的孕妇2772例,对β-地中海贫血血液学表型阳性者进行β-地中海贫血基因检测。将检出β-地中海贫血基因突变的孕妇纳入β-地中海贫血组,并按1∶1比例随机选取非地中海贫血孕妇纳入非地中海贫血组。比较β-地中海贫血组与非地中海贫血组血常规参数。比较β⁺突变和β⁰突变孕妇血常规参数。结果:2772例接受地中海贫血筛查的孕妇中,经血常规参数分析初筛阳性362例(13.06%),进一步血红蛋白(Hb)电泳分析发现β-地中海贫血血液学表型阳性91例(3.28%)。β-地中海贫血基因检测发现82例(2.96%)存在β-地中海贫血基因突变,其中4种β⁺突变(IVS-Ⅱ-654、CAP、-28、-29)共37例(45.12%),5种β⁰突变(CD71-72、CD27-28、CD41-42、CD17、CD14-15)共45例(54.88%),占比最高的3种基因型分别是IVS-Ⅱ-654(36.59%)、CD41-4...     

β-arrestin 1在原发性胆汁性肝硬化患者PBMCs中的表达

目的探讨β-arrestin 1 mRNA在原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中以及在各细胞亚群（CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、B细胞）中的表达情况。方法利用基于TaqMan-MGB探针建立的实时荧光定量RT-PCR技术,分别检测50例PBC患者、50例健康体检者和50例乙肝后肝硬化患者PBMCs中的表达;再利用磁珠分离PBC患者、健康体检者的CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、B细胞和单核细胞,经实时荧光定量PCR技术分析β-arrestin 1 mRNA在各细胞亚群中的表达情况。结果β-arrestin 1 mRNA在PBC患者PBMCs、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和单核细胞中的表达明显高于健康对照组和疾病对照组（P〈0.01）,在B细胞,PBC组与健康对照组没有明显差异（P〉0.05）;疾病对照组与健康对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论β-arrestin 1可能参与PBC发病机制,其中涉及CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和单核细胞。     

β淀粉样蛋白诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αmRNA的表达

目的：研究不同浓度的p淀粉样蛋白（Aβ1-42）诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αLmRNA表达的变化。方法：小胶质细胞株复苏培养后分为2组：Aβ1-42组和抗CD14加Aβ1-42组。抗CD14加Aβ1-42组使用抗CD14抗体拮抗CD14的表达，再分别用不同浓度的Aβ1-42（0、62．5nmol／L、125nmol／L、250nmol／L）进行干预，2组均在Aβ1-42干预2h后用RT—PCR法检测CD14及TNF—αmRNA表达的量。结果：不同浓度的Aβ1-42干预小胶质细胞2h后，62．5nmol／L与0nmol／L Aβ1-42组CD14mRNA的表达相比较，差异无统计学意义。当Aβ1-42浓度为125nmol／L和250nmol／L时，CD14mRNA的表达逐渐增加（P〈0．05）。使用CD14抗体后，抗CD14加Aβ1-42组中CD14mRNA的表达与Aβ1-42组比降低（P〈0．05）。Aβ1-42组TNF-αmRNA的表达随Aβ1-42的浓度增加而增加（P〈0．05），与Aβ1-42组相比，抗CD14加Aβ1-42组中TNF-αmRNA的表达在Aβ1-42浓度为125nmol／L开始明显受到抑制（P〈0．05）。结论：Aβ1-42诱导的小胶质细胞可通过脂多糖受体CD14使TNF-αmRNA的表达增加，且与Aβ1-42的作用浓度呈正相关。     

抑制CD147表达对Jurkat T淋巴细胞集落形成的影响

目的研究小干扰RNA抑制CD147基因对Jurkat T淋巴细胞集落形成的影响。方法将CD147特异的siRNA,经LipofectamineTM2000转染Jurkat细胞48 h后,用半定量RT-PCR检测CD147 mRNA水平的变化,Western blot和流式细胞术（FCM）分别检测总蛋白和细胞表面蛋白水平的变化。通过荧光倒置显微镜比较特异性抑制CD147表达后Jurkat细胞集落形成的变化。结果与对照组相比siRNA干扰组细胞CD147 mRNA和蛋白水平的表达均降低,抑制率分别为（38.57±1.55）%和（47.4±1.47）%,细胞表面CD147的平均荧光强度（MFI）下降（50.5±4.7）%（P〈0.05）。随着CD147被抑制,siRNA干扰组细胞集落形成明显少于对照组（P〈0.05）。结论通过siRNA能抑制Jurkat细胞CD147的表达,随着CD147表达下降细胞集落的形成减少,提示CD147可能在炎症细胞粘附聚集中起到一定作用。     

过继性转移TGF-β诱导CD4＋CD25＋调节性T细胞对自然流产模型小鼠胚胎丢失率的影响

目的观察过继性转移转化生长因子-β（TGF-β）诱导生成CD4＋CD25＋调节性T细胞对自然流产模型小鼠胚胎丢失率的影响。方法从正常妊娠CBA/J孕鼠脾脏中分选CD4＋CD25-T细胞,体外经TGF-β诱导转化为CD4＋CD25＋调节性T细胞,流式细胞仪检测其对自身反应性T细胞增殖的抑制作用。实验小鼠随机分为正常妊娠组和自然流产模型组,后者根据干预方式的不同分为空白组（自然流产模型未干预）、CD4＋CD25＋T细胞组（自然流产模型过继性转移天然CD4＋CD25＋调节性T细胞）、TGF-β诱导CD4＋CD25＋T细胞组（自然流产模型过继性转移TGF-β诱导CD4＋CD25＋调节性T细胞）和对照组（自然流产模型注射CD4＋CD25-T细胞）。于孕第14日采集血样后处死小鼠。ELISA法检测血清白介素-10（IL-10）、TGF-β1和γ干扰素（IFN-γ）水平,Western blotting和Real-time PCR检测蜕膜组织Foxp3 mRNA和蛋白的表达。计算各组孕鼠胚胎丢失率。结果与空白组和对照组比较,天然CD4＋CD25＋T细胞组和TGF-β诱导CD4＋CD25＋T细胞组血清IL-10、TGF-β1水平升高,IFN-γ水平降低;蜕膜组织中Foxp3 mRNA和蛋白的表达上调;胚胎丢失率显著降低（P〈0.05）。结论向自然流产模型小鼠过继性转移TGF-β诱导生成CD4＋CD25＋调节性T细胞,可诱导小鼠体内Th1/Th2免疫反应向Th2优势偏移,降低胚胎丢失率。     

FQ—RT—PCR法检测β地中海贫血患者β与γ珠蛋白mRNA水平的研究

目的 :探讨 β地中海贫血患者中 β与γ珠蛋白mRNA水平及意义。方法 :用FQ RT PCR技术检测 2 7例 β地中海贫血患者和 2 5例正常对照组外周血中 β与γ珠蛋白mRNA水平。结果 :重型 β地中海贫血患者中γ/ (β+γ)mRNA比值 (70 83±2 2 1 7% )显著高于轻型 β地中海贫血患者 (0 99± 1 0 1 % )及正常对照组 (1 5 5± 4 1 4 % ) (P <0 0 0 1 )。轻型 β地中海贫血患者及正常对照组的γ/ (β +γ)mRNA比值两组比较无明显差别 (P >0 0 5 )。结论 :(1 )FQ RT PCR技术是一种敏感性强、特异性强、定量准确的新方法 ,适合于血红蛋白珠蛋白mRNA水平的定量测定。 (2 )γ/ (β+γ)mRNA比值增高是重型β地贫病人的特征之一。对 β地中海贫血患者珠蛋白mRNA水平的研究对β地中海贫血的临床疗效观察具有重要意义     

骨髓增生异常综合征患者白血病干细胞的表达

目的：检测细胞表面抗原 CD123（IL -3受体α链）在骨髓增生异常综合征（Myelodysplastic syndrome , MDS）患者骨髓中的表达,并探讨其与患者预后的关系。方法选择2010年11月至2012年8月在泰山医学院附属医院就诊的53例 MDS 患者及30例非恶性血液病患者骨髓标本,采用流式细胞术检测 CD34＋ CD38- CD123＋的表达情况;同时依据国际预后积分系统（IPSS）将 MDS 患者划分为低危组、中危- I 组、中危- II 组和高危组,分析CD34＋ CD38- CD123＋的表达与 MDS 患者预后的相关性。结果53例 MDS 患者骨髓 CD34＋ CD38- CD123＋/CD34＋表达为14.29±7.89%,显著高于对照组的表达水平1.22±0.89%,t ＝9.013,P ＝0.000;其中高危组 CD34＋CD38- CD123＋/ CD34＋的比例显著高于中危- I 组和低危组,P ﹤0.01;中危- II 组显著高于低危组和中危- I 组, P ﹤0.01,中危- I 组高于低危组,P ﹤0.05。结论在 MDS 患者骨髓单个核细胞中 CD123异常过度表达,有助于MDS 的诊断及预后判断。     

SH-SY5Y神经细胞中α3尼古丁受体基因表达沉默对β分泌酶蛋白表达的影响

目的:研究α3神经型尼古丁受体(nAChR)基因沉默对β分泌酶(BACE)蛋白表达的影响。方法:稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒及空质粒的SH-SY5Y神经细胞与正常对照组细胞,用Real time-PCR和Western印迹法检测α3 nAChR mRNA表达和蛋白水平表达,评价RNA的干扰效率;用蛋白质印迹方法分别检测细胞中β分泌酶2个亚型(BACE1和BACE2)蛋白表达水平的变化。结果:稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒的细胞克隆株,与空质粒和正常对照组相比BACE1蛋白表达水平增加,BACE2蛋白表达水平减少。结论:α3 nAChR可以通过增加BACE2蛋白表达水平及减少BACE1蛋白表达水平,影响Aβ生成从而减少Aβ的神经毒性作用,发挥神经保护作用。     

下调paralemmin-3表达对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞核转录因子-κB活性的影响

目的 研究下调paralemmin-3(PALM3)表达对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮A549细胞核转录因子-κB (NF-κB)活性的影响.方法 将针对PALM3的小干扰核糖核苷酸(siRNA)转染A549细胞后(PALM3siRNA转染组),用RT-PCR法检测PALM3 mRNA表达水平,同时设立control siRNA转染组及正常细胞组作为对照.转染48 h后,对3组细胞同时给予LPS刺激12 h后,收集细胞核蛋白和培养上清液,用ELISA的方法检测各组细胞培养上清液中的TNF-α、IL-6和IL-1β水平,用凝胶电泳迁移率实验的方法检测各组细胞NF-κB活性.结果 特异性siRNA转染后成功下调PALM3在A549细胞中的表达;给予LPS刺激后,与正常细胞组及control siRNA转染组相比,PALM3 siRNA转染组细胞释放炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β减少,同时PALM3 siRNA转染组细胞中NF-κB活性受抑.结论 下调PALM3的表达可减轻A549细胞对LPS诱导的炎症反应,调控PALM3的表达有望成为治疗急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征等炎症失控性疾病的新靶点.