BEL7402人肝癌细胞中癌基因的表达及丁酸钠对癌基因表达的影响

With dot blot and cytoplasmic hybridization techniques we found that the c-Ha-ras, c-Ki-ras, c-N-ras, c-myc and c-fos oncogenes were over-expressed in human hepatocellular carcinoma cell line BEL 7402 cells. The mRNA expression of c-Ha-ras, c-Ki-ras, c-N-ras and c-myc oncogenes could be inhibited by 2 mmol/L sodium butyrate treatment, but this had no effect on the expression of c-fos. However, the mRNA expression of c-Ha-ras, c-N-Ras and c-myc oncogenes was enhanced by 4 mmol/L sodium butyrate treatment, while the expression of c-Ki-ras and c-fos remained unchanged. No significant effect on the expression of carbamyl phosphate synthetase I, a tissue-specific enzyme associated with the differentiation of liver cells, was observed by 2 mmol/L or 4 mmol/L sodium butyrate treatment of the hepatoma cells.     

TRIM59靶向调控PPM1B对鼻咽癌侵袭和迁移的作用

目的 探讨TRIM59能否通过靶向PPM1B影响鼻咽癌侵袭和迁移。方法 TCGA数据库分析TRIM59在鼻咽癌中的表达;Western blot实验检测TRIM59和PPM1B在鼻咽癌和癌旁组织中的表达情况;RT-PCR和Western blot实验分别检测鼻咽癌细胞系中TRIM59和PPM1B mRNA和蛋白的相对表达量;建立HNE1细胞TRIM59过表达及抑制表达的稳定细胞系,实验设未转染组（Control）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、TRIM59 模拟物组（mimic-TRIM59）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及TRIM59抑制剂组（si-TRIM59）。Western blot和荧光素酶报告基因实验检测TRIM59和PPM1B靶向关系;Transwell小室检测HNE1细胞侵袭和迁移能力的变化。结果 TCGA数据库结果表明,TRIM59在鼻咽癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P= 0.006）;TRIM59在鼻咽癌组织中表达增加（P=0.01）且PPM1B 表达下降（P=0.03）;与HNEpC细胞相比,TRIM59在HNE1细胞中相对表达量显著增加（P=0.04）,PPM1B在HNE1细胞中相对表达量显著下降（P=0.02）;PPM1B为TRIM59下游靶基因且与TRIM59表达呈负相关（P=0.01）;Transwell结果显示,上调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力增强（P=0.01,P=0.02）,下调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制（P=0.01）;同时下调TRIM59且上调PPM1B表达后,HNE1细胞侵袭和迁移能力均较单独下调TRIM59表达显著被抑制（P=0.02,P=0.01）。结论 TRIM59通过靶向调控PPM1B影响鼻咽癌细胞侵袭和转移。     

EB病毒LMP1促进Tet-on-LMP1 HNE2鼻咽癌细胞增殖

目的探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白1（LMP1）对Tet-on-LMP1 HNE2鼻咽癌细胞生物学效应的影响.方法采用Western blot方法、流式细胞术DNA含量分析法、细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验和四唑盐（MTT）比色法检测不同剂量的DOX诱导下Tet-on-LMP1 HNE2细胞在不同时间点的增殖效应.结果在LMP1表达逐渐增强的情况下,Tet-on-LMP1 HNE2细胞由G0/G1期加速向S期的行进;细胞生长速度逐渐加快（P〈0.05）;软琼脂集落形成率逐渐上升（P〈0.05）;细胞吸光度值逐渐升高（P〈0.05）.结论EB病毒LMP1促进Tet-on-LMP1 HNE2鼻咽癌细胞增殖.     

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对鼻咽癌细胞VEGF和Survivin表达的影响

目的探讨17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对人鼻咽癌细胞（HNE1）的影响。方法采用流式细胞技术检测不同浓度（17-AAG）、不同时间处理后HNE1细胞凋亡情况,组织免疫细胞技术检测药物处理后对VEGF、Survivin蛋白表达的影响。结果 17-AAG可以诱导人鼻咽癌细胞的凋亡,且这种作用具有时间和计量依赖性,且可抑制细胞中VEGF、Survivin蛋白的表达。结论热休克蛋白抑制剂17-AAG具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用,对鼻咽癌的临床治疗具有一定的指导意义。     

长片段非编码RNA XIST可改变人鼻咽癌HNE1细胞对顺铂的耐药性

目的明确长片段非编码RNA（lncRNA）X失活特异性转录本（XIST）对人鼻咽癌细胞顺铂（DDP）耐药性的影响及可能的 机制。方法通过荧光定量PCR检测人鼻咽癌顺铂耐药HNE1细胞株（HNE1/DDP）中XIST的表达特征。采用MTT试验观察 XIST上调和下调对HNE1/DDP细胞DDP耐药性的影响,并通过EdU试验和流式细胞技术观察其对HNE1/DDP细胞增殖和凋 亡的影响。采用蛋白质印迹法检测XIST上调和下调对促凋亡因子程序性细胞死亡4（PDCD4）和Fas配体（Fas-L）蛋白表达的 影响。结果XIST在HNE1/DDP细胞的表达量显著高于HNE1细胞（0.57±0.06 vs 0.1±0.02,P<0.05）。下调XIST的表达显著降 低HNE1/DDP 细胞对DDP 的耐药性（P<0.05）,而上调XIST 增加对DDP 的耐药性（P<0.05）。下调XIST 的表达显著降低 HNE1/DDP细胞增殖（6.17±1.93 vs 16.59 4.86, P<0.05）并诱导细胞凋亡[（18.04±4.72）% vs（4.22±1.65）%, P<0.05],而上调XIST 增加细胞增殖（25.40±7.21 vs 13.16±3.95, P<0.05）并抑制细胞凋亡[（2.82±0.88）% vs（6.46±1.75）%, P<0.05]。下调XIST的表达 显著增加HNE1/DDP细胞中PDCD4（4.10±0.42 vs 1.0±0.12, P<0.05和Fas-L（3.07 0.29 vs 1.0±0.14, P<0.05）蛋白的表达,而上调 XIST降低PDCD4（0.36±0.11 vs 1.0±0.18, P<0.05）和Fas-L（0.17±0.09 vs 1.0±0.21, P<0.05）蛋白的表达。结论XIST在HNE1/ DDP细胞中表达升高,下调和上调XIST的表达可分别降低和增加HNE1/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与PDCD4和 Fas-L蛋白表达改变相关。     

大鼠肝癌变过程中几种癌基因的原位表达及c-Ha-ras1点突变的研究

目的：研究大鼠肝癌变过程中几种癌基因的表达和c-ha－ras1点突变。方法：通过DEN诱发癌变启动模型和肝癌模型,应用免疫组化、原位杂交和MDT－PCR－SSCP分别观测癌基因的表达和c-Ha-ras1点突变。结果：c-Ha-ras和c-myc基因的过表达参与了肝癌变的全过程,其中c-Ha-ras的过表达与癌前嗜碱性肝细胞灶、c-myc基因的过表达与卵圆细胞增殖关系密切。IGF－II基国在的过表达对癌前肝细胞增生灶／结节向肝细胞癌的演讲起重要作用。fms基因过表达仅与个别大鼠肝细胞癌有关。结论：大鼠肝癌变过程与c-Ha-ras1、IGF－II和fms基因的过表达及c-Ha-ras1点突湾有关,并与形态演变相联系。     

A cDNA located on chromosome 7q32 shows loss of expression in epithelial cell line of nasopharyngeal carcinoma

ｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｍａｒｋｅｒｓｏｎ 7ｑ32ｉｎＤＮＡｆｒｏｍ 2 4ｂｉｏｐｓｉｅｓｏｆｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｍａｔｃｈｅｄｎｏｒｍａｌｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆ 2 0ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ (ＥＳＴｓ)ｏｎ 7ｑ32ｂｅｔｗｅｅｎｈｕｍａｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ 1(ＨＮＥ1)ａｎ…     

端粒酶启动子调控tk基因靶向性杀伤鼻咽癌细胞的实验研究

目的 探讨端粒酶催化亚单位启动子/胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(hTERTp/tk)基因特异载体在体外靶向性杀伤鼻咽癌细胞的效应.方法 通过细胞转染将hTERTp/tk转染鼻咽癌细胞株中,采用RT-PCR及MTT法检测hTERTp/tk/pGL3体外特异性杀伤鼻咽癌细胞的效应及其tk基因、端粒酶表达.结果 转染hTERTp/tk/pGL3后可见tk基因表达,端粒酶及其hTERT表达较对照组下降.hTERTp/tk/pGL3能特异性杀伤鼻咽癌HNE1细胞,而对正常成纤维细胞无杀伤作用,hTERTp/tk/pGL3杀伤细胞的效应比阳性对照CMV/tk/pGL3的无选择性杀细胞作用略低.结论 hTERTp/tk基因特异表达系统具有靶向性杀伤鼻咽癌细胞的作用及抑制肿瘤细胞端粒酶活性.     

AZD9291通过抑制PI3K-AKT-mTOR通路抑制鼻咽癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨AZD9291对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响。方法 体外培养鼻咽癌HNE1和CNE2Z细胞,在HNE1细胞加入浓度分别为0、0.5、1、2、4、8 μmol/L 的AZD9291,CNE2Z细胞加入分别为0、1、2、4、8、16 μmol/L的AZD9291。采用CCK8法检测细胞存活率;集落克隆实验检测AZD9291对细胞的增殖抑制作用;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞修复和迁移能力;Western blot法检测EGFR相关信号通路蛋白及迁移相关蛋白的表达。结果 CCK8和集落克隆实验结果显示AZD9291可显著抑制HNE1和CNE2Z细胞增殖（P<0.01）;细胞划痕实验和Transwell实验结果显示AZD9291抑制HNE1和CNE2Z细胞迁移能力（P<0.01）;Western blot结果显示,随着浓度增加,AZD9291可通过调控EGFR下游PI3K-AKT-mTOR信号通路磷酸化蛋白的下调（P<0.01）,抑制HNE1和CNE2Z细胞迁移（P<0.01）。结论 AZD9291可通过抑制EGFR/PI3K/AKT/mTOR信号通路,抑制鼻咽癌HNE1和CNE2Z细胞的增殖并降低其修复和迁移能力,为后续AZD9291尝试用于鼻咽癌的治疗提供依据。     

氯喹通过上调miR129增强顺铂抗鼻咽癌作用

目的 探究miR129在氯喹增强顺铂促鼻咽癌细胞HNE1凋亡的作用及机制。方法 实验分为空白对照组、氯喹组、顺铂组、氯喹+顺铂组。MTT法观察HNE1细胞存活率;结晶紫染色法观察HNE1细胞集落克隆形成;采用HNE1细胞接种BALB/C 裸鼠建立移植瘤模型,随机分为4组,6只/组,3 d给药1次,连续用药4周,观察各组肿瘤生长情况;q-PCR检测HNE1细胞中miR129表达;质粒转染下调HNE1细胞miR129的表达;Western blot 法检测自噬相关蛋白p62、LC3B、Beclin1和耐药蛋白P-gp的表达;Annexin V/PI双染法,检测细胞凋亡率。结果 体内外实验结果均显示氯喹+顺铂较顺铂单用能显著抑制肿瘤的生长（P<0.01）。体外实验表明,下调抑癌基因miR129能显著促进HNE1细胞自噬、上调P-gp的表达（P<0.01）;氯喹显著抑制顺铂诱导的HNE1细胞自噬,上调HNE1细胞中miR129的表达（P<0.01）;转染抑制miR129后,氯喹抑制顺铂诱导HNE1细胞自噬的作 用被取消、氯喹和顺铂联合作用后HNE1细胞存活率显著增加（P<0.05）,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论 氯喹通过上调miR129抑制HNE1细胞自噬和耐药,增强顺铂的促凋亡作用。     

c－Ha－ras and c－myc antisense oligodeoxynucleotides inhibit the proliferation and DNA synthesis in human gastric carcinoma cel

ｃ－Ｈａ－ｒａｓａｎｄｃ－ｍｙｃａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＤＮＡｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓＤｅｎｇＪｉａｎｂ...     

人鼻咽癌细胞系中基质金属蛋白酶9的表达及意义

目的 检测MMP9在鼻咽癌细胞株及细胞株裸鼠成瘤瘤块组织中的表达,探讨MMP9的表达与鼻咽癌发生、发展的关系.方法 采用细胞免疫组织化学技术、RT-PCR、Western blot检测鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HNE1、HNE2和SUNE15株细胞株中MMP9表达;免疫组织化学(SABC 法)检测HNE1和CNE2细胞裸鼠成瘤后瘤块MMP9的表达.结果 5株鼻咽癌细胞株中,免疫组化显示HNE1和SUNE1细胞中MMP9蛋白表达阳性.RT-PCR及Western Blot检测结果显示.HNE1和SUNE1细胞中MMP9 mKNA及蛋白高表达.HNE1和CNE2细胞裸鼠种植成瘤后,5例瘤块中MMP9蛋白均强阳性表达.结论 MMP9在鼻咽癌细胞系中表达阳性,成瘤后表达增强,提示MMP9的表达可能与鼻咽癌侵袭转移有关.     

c-Ha-ras和c-myc反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞生长增殖的影响

作者观察了人工合成的反义c-Ha-ras和 c-myc寡聚脱氧核昔酸(ASO-r,ASO-m)对两株胃癌细胞中Ha-ras癌基因表达和细胞生长增殖的影响。观察到ASO-r能显著抑制MGc-803细胞P21蛋白合成(作用12 h抑制率达48.10％,P<0.01),同时对其DNA合成和细胞增殖也有较显著的抑制作用(抑制率分别为76.79％,55.61％,P<0.05)。ASO-r对SGc-7901细胞的DNA合成和细胞增殖也有类似的抑制作用(抑制率分别为76.78％,62.02％,P<0.05)。ASO-m对两株细胞的细胞增殖和SGc-7901细胞DNA合成均无明显影响,仅对MGc-803细胞的DNA合成有抑制作用(抑制率为71.37％,P<0.05)。结果表明:ASO-r能够阻断c-Ha-ras癌基因表达,并抑制胃癌细胞生长增殖;c-Ha-ras癌基因可能是维持胃癌细胞恶性生长表型的主要因素。     

大鼠肝癌变过程中细胞癌基因的表达

利用RNA-DNA杂交技术观察到:(1)在二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠肝癌过程中,含有增生结节肝和肝细胞癌肝中c-Ha-ras、c-Ki-ras、N-ras和c-fos癌基因的表达都较正常肝高,而c-myc的表达无明显改变。(2)在两种不同诱发肝癌起始/促癌模型的起始阶段,c-myc的表达显著增高。在2-乙酰氨基芴作用下,N-ras表达的增高非常显著。c-myc和N-ras的表达似有协同作用。在促癌阶段,c-myc和N-ras的表达接近正常。(3)在起始和促癌过程中,c-fos的表达都显著降低,c-Ha-ras和c-Ki-ras表达变化不显著。对这些结果的意义作了初步讨论。     

c-myc、P21^WAF1和LMP-1在鼻咽癌中表达的意义及其与Ki67的关系木

目的：研究原癌基因c-myc、细胞周期凋控蛋白（P21^WAF1）、EB病毒潜伏膜蛋白1（Latent membrane protein 1）LMP-1与Ki67在鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）中的表达及其相关性和临床意义。方法：应用免疫组织化学Envision二步法检测35例经治疗后，生存时间〈5年的鼻咽非角化性癌（Nonkeratinizing carcinoma，NKC），60例生存时间≥5年的NKC及对照组30例鼻咽黏膜慢性炎症组织（non—tumour nasopharyngeal tissue，NP）内c-myc，P21^WAF1，LMP-1，Ki67的表达水平。结果：（1）c-myc，LMP-1和Ki67在生存时间〈5年组、生存时间≥5年组及NP组中的阳性表达率依次递减（P〈0．05）；（2）P21^WAF1在NKC生存时间〈5年组，生存时间〉15年组及NP组中的阳性率依次递增（P〈0．05）；（3）c—myc的阳性表达与NKC的淋巴结转移有关（P〈0．05）。LMP-1，Ki67的阳性表达与NKC临床分期密切相关（P〈0．05）；（4）c—myc和LMP-1共同表达时较两者各自单独表达时，Ki67的强表达率明显增强；（5）c—myc和LMP-1的阳性表达与Ki67的强表达呈正相关关系，P21^WAF1的阳性表达与Ki67的强表达呈负相关关系。结论：c—myc，LMP-1的高表达及P21^WAF1的低表达与NPC细胞的增殖密切相关，且前两者在NKC发生发展中存在协同作用；通过检测c—myc，P21^WAF1，LMP-1及Ki67的表达，有助于对NKC预后的评估。     

抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.     

鼻咽癌细胞中外源性p16表达对CDK4,Cyclin D1及pRb的影响

目的：分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响,探讨其抑制细胞生长的机制。方法：绘制生长曲线,比较细胞倍增时间,分析ＨＮＥ１,＃４－２及＃３－２克隆中细胞增殖状况;利用流式细胞仪分析上述细胞中细胞周期分布的改变;结合Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法,分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响。结果：生长曲线示,ＨＮＥ－１倍增时间为２３．４ｈ,＃３－２和＃４     

THE EFFECTS OF RETINOIC ACID ON EXPRESSION OF C-MYC, C-FOS IN LEUKEMIC PROMYELOCYTES

The expression of c-myc, c-fos of leukemic promyelocytes (HL-60 and acute promyelocytic leukemia cells) from 18 acute promyelocytic leukemia (APL) patients treated with all-trans retinoic acid (RA) in vitro was studied. There was no expression of c-fos in HL-60 cells and APL cells from 17 patients. But in one case, a slight expression of c-fos in leukemic cells was observed, and the alteration of expression level was found during the treatment of the cells with RA in vitro. The expression of c-myc in HL-60 cells induced by RA was altered, decrease in the early, increase in the middle, and decline in the later stage were found. The c-myc expression in leukemic cells of eighteen APL patients was variable. There was c-myc expression in eleven APL cells, but no expression in the others. The APL cells with c-myc expression were treated with RA in vitro to observe the kinetic changes of c-myc RNA level. The results showed that the expression of c-myc was gradually decreased except in few cases. Using in situ hybridization technique for detecting the alteration of c-myc expression in leukemic cells of two APL patients. the high level of c-myc before RA treatment and low level of c-myc expression after obtaining complete remission induced by RA were found. The possibility of different proto-oncogenes implicated differentiation was discussed.     

PTTG、c-myc和P53在食管癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨PTTG、c-myc和P53蛋白在食管癌及癌前病变组织中的表达、相互关系及其临床意义。方法:应用免疫组化EnVision法检测食管癌、癌前病变及正常食管粘膜组织中PTTG、c-myc和P53蛋白的表达情况。结果:PTTG、c-myc和P53蛋白在正常食管粘膜组织与癌前病变和食管癌组织比较有统计学意义,癌前病变与食管癌组织比较有统计学意义,PTTG和c-myc蛋白的高表达与食管癌的临床分期和淋巴结转移有关;P53蛋白的高表达仅与淋巴结转移有关。结论:PTTG、c-myc和P53蛋白的过度表达参与了食管癌的发生、发展过程,PTTG基因的突变或激活是食管癌发生的早期事件。