不同剂量电离辐射对大肠癌HCT-8细胞凋亡的影响

目的:本研究通过检测不同剂量电离辐射对大肠癌细胞凋亡的影响,探讨逆转肿瘤多药耐药的方法.方法:采用流式细胞术检测大肠癌多药耐药HCT-8细胞凋亡的变化.结果:与假照射组相比,2Gy大剂量照射后HCT-8细胞凋亡小体百分率明显增加(P<0.01),先给予低剂量照射(50mGy,100mGy,200mGy)后,再给予大剂量照射,HCT-8细胞凋亡小体百分率进一步增加(P<0.01),其中以100mGy 2Gy组增加明显,与单纯2Gy大剂量照射组比较,无统计学意义.结论:结果表明大剂量辐射可以明显诱导大肠癌多药耐药HCT-8细胞凋亡.     

电离辐射对Jurkat T细胞周期进程的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术 (FCM) 检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系研究发现,2.0 Gy X射线照射后Jurkat T细胞相继发生S期延迟和G₂期阻滞,S期细胞百分率于照射后立即增加(P<0.001),而G₂+M期细胞百分率照射后8 h开始显著增加（P<0.001）。剂量-效应关系研究发现,75 mGy低剂量X射线照射即可诱导Jurkat T细胞发生S期延迟（P<0.001）和G₂期阻滞（P<0.05）;0.5~6.0 Gy较大剂量X射线照射后,Jurkat T细胞发生S期延迟和G₂期阻滞。与假照组相比较,G₀/G₁期细胞百分率显著降低（P<0.001）,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性,而S期和G₂+M期细胞百分率显著升高（P<0.05或P<0.001）。结论：X射线照射可以改变Jurkat T细胞周期进程,诱导其相继发生S期延迟和G₂期阻滞,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性。     

低剂量X线照射诱导小鼠胸腺细胞凋亡适应性反应的相关凋亡基因p53、Bcl-2和Bax蛋白表达

目的：探讨低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡适应性反应的相关基因蛋白调控机制。方法：用X射线全身照射Kunming系雄性小鼠,其诱导剂量（D1）为25、50、75、100和200 mGy（剂量率12.5 mGy•min^-1）,攻击剂量（D2）为1.5 Gy（剂量率287 mGy•min^-1）,D1和D2间隔6 h。通过流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。 结果：D2组与假照射组比较,其胸腺细胞Bcl-2蛋白阳性百分率明显降低（P<0.05）,Bax蛋白明显增加（P<0.05）,而Bcl-2/Bax比值非常明显降低（P<0.001）;p53蛋白非常明显增加（P<0.001）。D1+D2组与D2组比较,D1在25～75 mGy时,Bcl-2蛋白阳性百分率不同程度增加,Bax蛋白不同程度降低,而Bcl-2/Bax比值非常明显增高（P<0.01）;p53蛋白明显降低（P<0.001或P<0.05）。 结论：在25～75 mGy低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡的适应性反应中,其相关凋亡基因蛋白Bcl-2表达增加,Bax降低,Bcl-2/Bax比值增高,p53降低,导致凋亡的胸腺细胞减少。     

低剂量辐射对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的：探讨低剂量辐射（LDR）对骨髓间充质干细胞（BM-MSC）生物学特性的影响。方法：应用体外培养传代的P4、P5、BM- MSC,分别采用剂量为50、75和100 mGy X射线照射(剂量率为12.5 mGy•min^-1),　检测不同剂量照射后BM-MSC生长、细胞周期与凋亡的变化。结果：与对照组比较,50、75和100 mGy照射后第5天BM-MSC生长进度明显加快（P<0.05）; 与同一时间对照组比较,50、75和100 mGy照射BM-MSC后,G₀/G₁期细胞百分率减少(P<0.05）,照射后72 h降至最低;S期细胞百分率在照射后48 和72 h逐渐明显增多(P<0.05）,以75 mGy照射后72 h,S期细胞百分率增多最明显(68.88%);而细胞凋亡的变化是50、75和100 mGy照射后24和48 h有增多趋势,照射后72 h凋亡细胞百分率有减少趋势。结论：LDR对BM-MSC有兴奋性效应。     

低剂量辐射诱导Lewis细胞适应性反应的观察

目的了解低剂量辐射对Lewis细胞适应性反应的影响及其可能机制。方法体外培养Lewis细胞,分为假照组(D0组)、低剂量照射组(D1组)、高剂量照射组(D2组)、低剂量+高剂量照射组(D1+D2组),D0组不照射,D1组给予75 mGyγ射线照射,D2组给予2 Gyγ射线照射,D1+D2组给予75 mGy+2 Gyγ射线照射(低剂量与高剂量照射时间间隔为8 h)。照射后10 d行GIEMSA染色,计算细胞存活分数;用流式细胞仪检测照射后30 min9、0 min3、h6、h、12 h2、4 h4、8 h细胞周期比例。结果 D2组和D1+D2组的细胞存活分数明显低于D1组,差异有显著性(F=115.70,q=7.17、8.03,P<0.01),D2组与D1+D2组比较差异无显著性(P>0.05)。D1组与D0组比较、D2组与D1+D2组比较细胞照射后30 min~48 h G1期差异无显著性(P>0.05);D2组、D1+D2组与D0组和D1组比较照射后6 h即出现G1期阻滞,48 h仍未恢复正常,差异有显著性(F=107.78~150.92,q=7.14~15.21,P<0.01)。各组不同时间S期和G2/M期比较差异无显著性(P>0.05)。结论低剂量辐射不能诱导体外培养的Lewis细胞产生适应性反应,其机制可能与细胞周期调控有关。     

PKC亚型选择性与辐射诱导肝HepG2细胞凋亡

目的 探讨PKC在X线辐射诱导HepG2凋亡中发挥抗凋亡作用的PKC亚型选择性.进一步明确引起放射耐受的PKC亚型.方法 MTT法检测细胞存活率;HepG2细胞常规方法培养;细胞分对照组(不加任何处理因素)、辐射组(单纯6 GyX线辐射);Varian2100直线加速器,6 MV X线,剂量6 Gy,剂量率为400 cGy/min辐射细胞;流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度和阳性细胞百分数及细胞凋亡率.结果 辐射组HepG2细胞的PKCa平均荧光强度为2.28,与对照组细胞比较,差别具有显著统计学意义(P<0.05);辐射组细胞PKC 8平均荧光强度为5.03,与辐射前比较差别显著(P<0.01);而PKCζ、γ、ε、θ在两组细胞中平均荧光强度较低,且两组间差别不显著(P>0.05),未检测到PKC B的表达.PKCα、δ的阳性细胞百分数在对照组及辐射组较其他所测亚型为高,且辐射亦使这两种PKC亚型的阳性细胞百分数升高;其他所测亚型阳性细胞百分数较低,且辐射对它们的影响不明显.结论 PKC α、δ可能在辐射诱导凋亡的保护作用占主导地位.     

miR-21对宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响

目的：探讨miR-21与宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性之间的关系,阐明miR-21对细胞凋亡和自噬改变的可能作用机制。方法：人宫颈癌HeLa细胞分为假照组和4 Gy照射组,分别转染miR-21 NC（阴性对照）、miR-21 mimics、miR-21 inhibitor NC和miR-21 inhibitor。实时荧光定量PCR检测照射前和照射后miR-21的表达水平;集落形成实验观察miR-21对HeLa细胞辐射敏感性的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和自噬细胞百分率;采用生物信息学方法预测miR-21的靶基因;荧光素酶报告基因分析验证miR-21与靶基因3′UTR的结合;Western blotting法检测相关蛋白beclin1表达水平。结果：与假照组比较,4 Gy照射组miR-21表达水平明显增加(P<0.05）;集落形成实验,与miR-21 NC组比较,miR-21 mimics组HeLa细胞辐射敏感性无明显变化(P>0.05）;与miR-21 inhihitor NC组比较,miR-21 inhibitor 组HeLa细胞辐射敏感性无明显变化(P>0.05）;与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组HeLa细胞凋亡率明显增加(P<0.05）;与miR-21 inhibitor NC组比较,miR-21 inhibitor组HeLa细胞凋亡率明显减少（P<0.05）。与miR-21 NC组比较,miR-21 mimics组自噬率升高（P<0.05）。与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组自噬率升高（P<0.05）;与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组beclin1蛋白表达水平增加（P<0.05）。
结论：发现了miR-21新的靶基因beclin1。过表达miR-21促进辐射诱导的凋亡和自噬,但对于宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性无直接影响。
［关键词］ miR-21;宫颈肿瘤;HeLa细胞;辐射敏感性;细胞凋亡;自噬     

3H-脱氧葡萄糖掺入判断高能X线照射A549肺腺癌多细胞肿瘤球体的疗效

目的 用3H-脱氧葡萄糖(3H-DG)掺入判断6MV X线照射A549肺腺癌多细胞肿瘤球体(MTS)的疗效。方法 MTS分别作低剂量分割和单次照射,中等剂量单次照射。MTS消化成单个细胞后用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡比率。96孔盘每孔1个MTS,加37 kBq 3H-DG后掺入60 min,吸出MTS抽滤后测量β计数。结果 2～8 Gy低剂量照射后未见明显细胞周期阻滞和凋亡,分割照射组MTS的摄取减低,4.84 Gy单次照射后的摄取明显高于其他各组(P<0.05);15～30 Gy照射后,细胞G2-M期阻滞百分率增加,各照射组3H-DG摄取均小于对照组(P<0.05),随照射剂量递增,MTS摄取3H-DG的能力降低;15 Gy照射后第10天有活细胞增殖,25或30 Gy照射后第40天有活细胞增殖。结论 用3H-DG可以监测高能X线照射A549肺腺癌MTS的疗效,不同剂量照射后球体细胞的再增殖时间对于设计放疗方案和安排18F-FDG显像时间有指导作用。     

放射敏感性、X线辐射剂量对鼻咽癌细胞miR-7表达的影响

目的 探讨放射敏感性、X线辐射剂量对鼻咽癌细胞miR-7表达的影响.方法 以低放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1、高放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-2为研究对象,采用析因设计的方法,分别给予CHE-1、CNE-2假照(0 Gy)、低剂量照射(2Gy)、高剂量照射(8Gy).Trizol法提取总RNA,设计特异性茎环引物逆转录miR-7,随机六引物逆转录18 s rRNA,所得cDNA进行染料法荧光定量PCR,以0 Gy照射的CNE-1细胞为参照样本,△△Ct法计算各组细胞miR-7的相对表达值,SPSS13.0行析因设计资料方差分析.结果 CNE-1和CNE-2的miR-7表达量有显著差异(F=135.483,P<0.001),CNE-1的miR-7表达量(x=4.49±3.62)高于CNE-2(x=1.29±1.10),不同剂量照射后,鼻咽癌细胞株miR-7表达量也有显著性差异(F=39.565,P<0.001),CNE-1接受2 Gy X线照射后miR-7表达最高,8 Gy照射组次之,0Gy照射组最低.CNE-2接受2GyX线照射后miR-7表达最低,8Gy照射组次之,0Gy照射组最高.结论 放射敏感性不同导致细胞受X线辐射后,miR-7表达调整方向不同,即低放射敏感细胞上调,而高放射敏感性细胞下调;X线辐射剂量将影响miR-7的表达调整幅度,即低剂量照射后miR-7调整幅度大,高剂量照射后调整幅度小.抑制miR-7表达可能会提高鼻咽癌细胞的放射敏感性.     

pNEgr-mIL-12真核表达重组质粒的构建及在COS-7细胞和黑色素瘤B16细胞中的表达

目的:构建含辐射敏感启动子的pNEgr-mIL-12真核表达载体,转染哺乳动物细胞后经不同剂量X射线照射,检测mIL-12的表达.方法:限制性内切酶酶切构建pNEgr-mIL-12表达载体;脂质体转染法转染COS-7细胞和B16细胞;ELISA法检测mIL-12p70表达.结果:①pNEgrmIL-12重组质粒转染瞬时表达细胞COS-7细胞,经不同剂量X射线照射后,照射组mIL-12表达量比未照射组明显增高(P＜0.05,P＜0.001),约为未照组的1.5～2.5倍;在2.0 Gy照后表达增高最为明显,表达于照后4 h达峰值,在观察的72h内保持于较高水平;②转染pNEgr-mIL-12的B16细胞于2.0 Gy照后增高明显,为未照射组的1.5倍;并且经2.0 Gy X射线照射后随时间延长表达水平逐渐增高;低至0.05 Gy的剂量对两种细胞亦均有激活作用.结论:pNEgr-mIL-12重组质粒具有辐射激活下游基因表达的功能,且经不同剂量X射线照射后表达均有增强,尤以2.0 Gy照射组作用明显,但在低剂量50、75、100 mGy照后表达水平增高与对照组差异均有显著性.     

低剂量辐射对HCT-8细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的：研究低剂量照射(LDR)对人结肠癌细胞(HCT-8)增殖、细胞周期及其相关信号蛋白表达的影响,为低剂量辐射临床应用提供理论依据。方法：体外培养人结肠癌细胞HCT-8,分为7个实验组：假照组（0 mGy）,25、50、75、100和200 mGy低剂量X线照射组和1 000 mGy高剂量X线照射组。照射后用细胞计数法及噻唑蓝比色(MTT)检测细胞增殖率,用流式细胞术测定细胞周期中G₀/G₁、S、G₂/M期的比例。应用蛋白法分析检测细胞周期及相关信号蛋白（共9个蛋白）的表达。结果：经细胞计数及MTT实验证实,25、50、75、100和200 mGy低剂量辐射组HCT-8细胞增殖率与假照组比较差异均无显著性（P>0.05）,与高剂量组比较差异均有显著性（P<0.05）。经流式细胞术检测,与假照组比较,75 mGy低剂量辐射12和24 h后,HCT-8细胞 G₀/G₁期比例增高(P>0.05),S期比例显著降低(P<0.05);G₂/M期比例显著升高（P<0.05）;48 h后G₀/G₁、S及G₂/M期HCT-8细胞比例与假照组比较差异均无显著性（P>0.05）。蛋白分析检测,低剂量辐射后HCT-8细胞中Akt、PCNA、P27、CDK2、cyclin E、EGFR、ERK1/2、p-ERK、p-GSK-3α/β等 9种蛋白表达量均较假照组降低。结论：低剂量辐射对HCT-8细胞增殖无促进作用,但在一定程度抑制细胞增殖及细胞周期相关蛋白的表达。     

离子辐射通过caspase途径而非p53途径诱导Jurkat细胞凋亡

目的:研究离子辐射诱导Jurkat细胞凋亡的动态趋势及其机制。方法:分别以5、10、20Gy的辐射量照射Jurkat细胞,其中一份样本在照射前加入zVAD.fmk,在照射后培养6、12、24、36和48h收获细胞,应用AnVPI双染和呈现subG1峰技术,在流式细胞仪上定量测定凋亡细胞。采用WesternBlot技术检测p53蛋白的表达。结果:细胞受照射后,凋亡细胞数随培养时间的延长和辐射量的加大而增加。在6h,只有20Gy才诱导细胞显著凋亡(P<0.005),5Gy的照射要到24h才出现明显的凋亡(P<0.05)。在48h,20Gy照射诱导的凋亡细胞数是所有时间点和剂量强度中最高的(P<0.001)。加有zVAD.fmk的细胞,尽管都是10Gy照射,比未加zVAD.fmk的细胞表现出凋亡细胞明显减少(P<0.005),但与未加zVAD.fmk、照射量是5Gy的细胞相比,凋亡细胞数仍显著增加(P<0.005)。Jurkat细胞在照射前后都没有p53表达。结论:离子辐射诱导细胞凋亡呈现出时间和剂量效应关系;capase抑制剂zVAD.fmk部分抑制离子辐射诱导细胞凋亡;离子辐射诱导细胞凋亡的机制独立于肿瘤抑制基因p53,caspase可能在其中起重要作用。     

电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响

目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI 双染、流式细胞术(FCM)检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系,2.000 Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18 h显著增加,至24 h始终维持在较高水平（P＜0.001）;细胞坏死百分率于照射后4 h显著增加,12 h 达峰值,至48 h始终维持在较高水平（P＜0.001）。剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18 h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化（P＞0.05）。2.000~6.000 Gy较大剂量X射线照射后18 h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加（P＜0.001）。结论：2.000 Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长。     

大肠癌细胞 XRCC2基因对电离辐射损伤的反应

目的：构建稳定的XRCC2基因沉默大肠癌细胞系及阐明沉默XRCC2基因表达的大肠癌细胞对电离辐射损伤的反应。方法采用Western blot法检测不同肿瘤细胞系人大肠癌细胞系（ T84、HT29、Lovo）、食管癌EC9706细胞、乳腺癌MCF－7细胞和人正常胚肾HEK293细胞中XRCC2蛋白的表达水平。大肠癌T84细胞经0、2、4、8、12 Gy X射线照射后和8 Gy X线照射后0、6、24、48 h,用Western blot法和实时定量PCR法测定XRCC2蛋白和mRNA的表达水平。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞,用嘌呤霉素进行细胞筛选,采用Western blot法和实时定量PCR法,检测沉默XRCC2蛋白和mRNA表达的效率。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞,经X线照射后,采用单细胞凝胶电泳测定沉默XRCC2基因表达的T84细胞的DNA损伤修复。结果与人正常胚肾HEK293细胞相比,在不同肿瘤细胞系中XRCC2蛋白均呈不同程度的高表达,其中在大肠癌T84细胞中XRCC2蛋白表达最高。随着X线照射剂量的增加,T84细胞中XRCC2蛋白的表达水平逐渐升高,8 Gy照射后XRCC2蛋白表达水平在48 h内随着时间的延长而逐渐升高;XRCC2 mRNA表达也表现出随剂量增加和时间延长而逐渐升高。与未处理的细胞相比,转染XRCC2 shRNA质粒的细胞中XRCC2蛋白和mRNA表达明显下降,约分别减少了70％和60％。照射后的T84细胞DNA损伤修复中shRNA－XRCC2组TDNA％、TM和OTM均显著高于未处理组和shR-NA－SC组,差异有统计学意义（t＝15.12、11.36、13.15,P＜0.01）。结论成功建立了稳定表达XRCC2基因沉默的大肠癌T84细胞系,XRCC2基因沉默导致辐射诱导的DNA损伤修复能力下降。     

紫薯花青素抗结肠癌作用及其诱导细胞凋亡机制

目的: 探讨紫薯中原花青素(PCI)对人结肠癌细胞(HCT-116)的细胞毒性作用,阐明其诱导细胞凋亡的机制。方法: 取处于对数生长期HCT-116细胞和人成纤维细胞HF-91随机分为对照组(PBS组)、阳性药组[25 mg·L^-1顺铂(DDP)]和PCI组(终浓度分别为25、50和100 mg·L^-1)。采用CCK8法检测细胞增殖抑制率,AO/EB法荧光显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞术检测JC-1线粒体膜电位变化,qPCR法检测p53和caspase-3 mRNA表达水平。结果: 与DDP组比较,100 mg·L^-1 PCI组HCT-116细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05),各浓度PCI组HF-91细胞增殖抑制率明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。与DDP组比较,50和100 mg·L^-1 PCI组HCT-116细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,DDP组和不同浓度PCI组HCT-116细胞中caspase-3和p53 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与DDP组比较,不同浓度 PCI组HCT-116细胞中caspase-3 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05),100 mg·L^-1 PCI组HCT-116细胞中p53 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论: 紫薯花青素对消化系统肿瘤细胞具有较强的毒性作用,而对正常细胞毒性较小。     

Effect of Ionizing Radiation on the Expression of p16, CyclinDI and CDK4 in Mouse Thymocytes and Splenocytes

Objective To investigate the effect of ionizing radiation on the expression of p16, CyclinDl, and CDK4 in mouse thymocytes and splenocytes. Methods Fluorescent staining and flow cytometry analysis were employed for the measurement of protein expression. Results In time course experiments, it was found that the expression of p16 protein was significantly increased at 8, 24, and 48 h for thymocytes (P<0.05, P<0.01, and P<0.05, respectively) and at 24 h for splenocytes (P<0.05) after whole body irradiation (WBI) with 2.0 Gy X-rays. However, the expression of CDK4 protein was significantly decreased from 8 h to 24 h for thymocytes (P<0.05,P<0.01) and from 8 h to 72 h for splenocytes (P<0.05-P<0.01). In dose effect experiments, it was found that the expression of p16 protein in thymocytes and splenocytes was significantly increased at 24 h after WBI with 1.0, 2.0, and 4.0 Gy (P<0.05-P<0.01), whereas the expression of CDK4 protein was significantly decreased with 2.0Gy for thymocytes (P<0.05) and 0.5-6.0 Gy f     

Effects of whole body irradiation with X—rays on the expression of TfR on lymphocytes in spleens of mice

目的:通过研究不同剂量X射线全身照射后小鼠脾淋巴细胞运铁蛋白(TfR)表达的变化,探讨电离辐射后TfR对免疫功能的作用.方法:应用直接免疫荧光抗体和流式细胞仪检测TfR表达的变化.结果:75 mGy X射线全身照射后24 h和72 h,脾脏中TfR阳性表达细胞数显著增加;但1～6 Gy X射线全身照射后24 h,脾脏中TfR阳性表达细胞数显著减少.同时检测的IL-2活性显示出平行变化.结论:低剂量电离辐射时TfR增强免疫功能,而在高剂量电离辐射时TfR则抑制免疫功能.TfR表达的变化可能是因为电离辐射使IL-2活性改变所致.     

电离辐射对破骨细胞分化过程中RANK表达的影响及其致骨损伤的分子机制

目的：研究电离辐射对破骨细胞分化过程中核因子κB受体活化因子(RANK) mRNA和蛋白表达的影响,探讨辐射导致骨损伤的分子机制。方法：采用50 μg•L-1 核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞。RQW264.7细胞分为对照组(未处理)、RANKL处理组(50 μg•L-1RANKL处理)、照射处理组(2 Gy γ射线照射)、照射联合RANKL处理组(50　μg•L-1RANK处理+2 Gy γ射线照射)。采用抗酒石酸磷酸酶(TRAP）染色法检测各组破骨细胞的分化状态;采用PCR法检测各组细胞中RANK mRNA的表达水平;采用Western blotting法检测各组细胞中RANK蛋白的表达水平。 结果：RAW264.7细胞经过RANKL诱导7 d后,TRAP染色呈现阳性,表明已经成功分化成为破骨细胞。与对照组比较,RANKL处理组和照射处理组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白的表达水平上调（P<0.05）;与RANKL处理组比较,照射联合RANKL组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：电离辐射可以促进破骨细胞前体细胞的增殖和成熟,增加其活性,但是对破骨细胞的增殖、成熟与活性却有一定的抑制作用。
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The role of DNA damage repair and Chk2 protein in hyper-radiosensitivity of lung adenocarcinoma A549 cells

To explore the role of the Chk2 protein expression and DNA double strand breaks (DSBs) repair in low dose hyper-radiosensitivity (HRS)/increased radioresistance (IRR) of non-small cell lung cancer,A549 cells were subjected to irradiation at the dosage ranging from 0.05-2 Gy.Clonogenic survival was measured by using fluorescence-activated cell sorting (FACS) plating technique.Percentage of cells in M-phase after low doses of X-irradiation was evaluated by phospho-histone H3-FITC/PI and Western blotting was used to detect protein expression of Chk2 and phospo-Chk2.DNA DSBs repair efficiency was also measured by induction and persistence of γ-H2AX.The results showed that the killing ability of irradiation with A549 cells increased at low conditioning dose below 0.3 Gy.Within the dose of 0.3 to 0.5 Gy,A549 cells showed a certain extent of radiation resistance.And when the dose was more than 0.5 Gy,survival fraction exhibited a negative correlation with the dosage.There was no difference between the 0.1 or 0.2 Gy dosage groups and the un-irradiated group in terms of the percentage of cells in M phase.But in the high dosage group (0.3-1.0 Gy),the percentage of cells in M phase was decreased markedly.In addition,the percentage of cells in M phase began to decrease two hours after irradiation.One hour after irradiation,there was no conspicuous activation of Chk2 kinase in 0.1 or 0.2 Gy group,but when the irradiation dose reached 0.3 Gy or higher,Chk2 kinase started to be activated and the activation level showed no significant difference among high dosage groups (0.4,0.5,1.0 Gy).Within 1 to 6 h,the DNA DSBs repair efficiency was decreased at 0.2 Gy but increased at 0.5 Gy and 1.0 Gy,which was in line with Chk2 activation.We are led to conclude that the mechanism of HRS/IRR in A549 cell line was probably due to early G2/M checkpoint arrest and enhanced DNA DSBs repair.In this regard,Chk2 activation plays a key role in G2/M checkpoint activation.