耐阿米卡星铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药基因及其基因型研究

目的了解耐阿米卡星（AMK）铜绿假单胞菌（Pa）的氨基糖苷类修饰酶基因和氨基糖苷耐药基因的存在情况及其基因型。方法对临床分离的72株多重耐药Pa（其中对AMK耐药Pa组和对AMK敏感Pa组各36株）分别用聚合酶链反应（PCR）测定9种主要的氨基糖苷类修饰酶基因和2种氨基糖苷耐药基因,用基因外重复回文序列（REP）-PCR进行基因型研究。结果在分组研究中AMK耐药Pa组表现为aac（6′）-Ⅰ和aac（3）-Ⅱ基因同时阳性的占42.4%,aac（6′）-Ⅰ和ant（2″）-Ⅰ基因同时阳性的占36.4%,是耐药组的主要修饰酶基因;AMK敏感Pa组表现为aac（6′）-Ⅰ基因阳性的占50.0%,aac（3）-Ⅱ基因阳性的占33.2%,是敏感组的主要修饰酶基因。2种氨基糖苷耐药基因（RmtA和RmtD）均为阴性。REP-PCR显示耐药菌株可分为A～G 7型,其中AMK耐药Pa组的主要分型为F型（其中尤以F1型为多）;AMK敏感Pa组以E型为多见。结论通过2种或多种氨基糖苷类修饰酶同时作用于AMK是Pa对AMK耐药的重要途径之一。     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法自2007年7—10月间南京地区住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药鲍曼不动杆菌,微量肉汤稀释法测定11种抗菌药物的敏感性;PCR法检测16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因。结果20株多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶(armA、rmtB)基因均为阴性;氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ基因阳性株10株、aac(3)-Ⅱ阳性株1株、aac(6′)-Ⅰb基因阳性株13株、ant(3″)-Ⅰ基因阳性株12株;ant(2″)-Ⅰ基因、aac(6′)-Ⅱ基因及aac(6′)-Ⅰad基因均为阴性。结论南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷药物耐药的主要原因是aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ4种氨基糖苷类修饰酶基因的存在;尚未检出氨基糖苷类修饰酶新亚型———aac(6′)-Ⅰad基因和16S rRNA甲基化酶armA、rmtB基因。     

南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型的调查

目的调查和研究南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型及其耐药特性。方法用K-B法测定97株鲍曼不动杆菌对庆大霉素、阿米卡星2种抗菌药物的耐药性,用PCR法检测氨基糖苷类药物修饰酶基因。结果同时耐庆大霉素、阿米卡星的鲍曼不动杆菌44株,庆大霉素耐药阿米卡星敏感的有4株,庆大霉素敏感阿米卡星耐药的有3株,从51株表型耐药菌中检出4种修饰酶基因,其中带有aac(3)Ⅰ-基因19株(37.3%);带有aac(3)-Ⅱ基因15株(29.4%);有aac(6′)-Ⅰ基因8株(15.7%);ant(3″)Ⅰ-基因为3株(5.8%);同时具有aac(3)Ⅰ-和aac(6′)Ⅰ-基因的5株(9.8%);有aac(3)-Ⅱ和aac(6′)Ⅰ-基因的1株(1.9%)。结论南京地区鲍曼不动杆菌所带基因以aac(3)-Ⅰ和aac(3)-Ⅱ为主,其与氨基糖苷类药物耐药有一定的关系。     

铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究

目的了解氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌16S r RNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的携带情况,探讨铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药机制。方法收集临床分离的氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌35株,采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及体外药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)检测arm-A、rmt-A、rmt-B、rmt-C、rmt-D 5种16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ6种氨基糖苷修饰酶基因。结果对氨基糖苷类药物耐药的铜绿假单胞菌同时对多种其他抗菌药物耐药,仅碳青霉烯类的亚胺培南耐药率较低,为5.7%。21株检出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因,占60.0%;30株检出氨基糖苷修饰酶基因,占85.7%,其中28株检出aac(3)-Ⅱ基因,占80.0%,18株检出ant(3″)-Ⅰ基因,占51.4%,其余8种基因未检出。结论在铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药的菌株中,检测出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ氨基糖苷修饰酶基因,铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。     

多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药研究

目的探讨宜兴市第二人民医院临床分离多重耐药铜绿假单胞菌与氨基糖苷类抗菌药物的表型与基因型的关系,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用琼脂纸片扩散(K-B)法对临床分离的铜绿假单胞菌进行药敏试验,选出34株多重耐药菌株,用聚合酶链反应(PCR)法检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、ant(2′)-Ⅰ、ant(3′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ检出阳性率分别为85.3%、44.1%、17.6%、11.8%、5.9%。对庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星的耐药率分别为91.18%、44.12%、88.24%、85.29%。结论多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药程度不同,临床应根据药敏结果选择用药,以减少耐药菌株的产生,控制院内感染。     

大肠埃希菌氨基糖苷酰基转移酶基因型的研究

目的了解大肠埃希菌的耐药谱、氨基糖苷酰基转移酶基因(aac)的分布规律及其与氨基糖苷类抗生素耐药的相关性。方法琼脂稀释法测定无菌体液分离的44株大肠埃希菌对阿米卡星等12种抗生素的耐药性,聚合酶联反应(PCR)法测定酰基转移酶基因型aac(3)-Ⅰ、Ⅱ和aac(6′)-Ⅰ。结果大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率为45.45%(20/44),对亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)的耐药率为0,对哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶的耐药率较低(<20%),对左氟沙星、环丙沙星的耐药率较高(>60%),对氨基糖苷类阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率分别为18.18%、56.82%、61.36%。氨基糖苷类耐药模式TG(妥布霉素、庆大霉素)>TGA(妥布霉素、庆大霉素、阿米卡星)>T(妥布霉素)>G(庆大霉素),分别占36.36%、18.18%、6.82%、2.27%。氨基糖苷酰基转移酶基因检出以aac(3)-Ⅱ最高,占52.27%(23/44),aac(6′)-Ⅰ次之,占29.55%(13/44),aac(3)-Ⅱ和aac(6′)-Ⅰ同时检出者占15.91%(7/44),未检出aac(3)-Ⅰ。ESBLs阳性株的aac(3)-Ⅱ、aac (6′)-Ⅰ检出率分别为60%、50%,高于ESBLs阴性株的45.81%、12.51%。TG模式与其耐药基因aac(3)-Ⅱ符合率较高,为93.75%(15/16)。结论本地分离大肠埃希菌氨基糖苷类耐药模式以TG为主,酰基转移酶基因以aac(3)-Ⅱ为主,aac(6′)-Ⅰ次之,aac(3)-Ⅰ罕见。     

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均>50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和aac(3)-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac(3)-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

呼吸内科多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因检测分析

目的 了解该院呼吸内科分离多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因和β-内酰胺酶基因携带情况.方法 用聚合酶链反应技术检测14株多重耐药铜绿假单胞菌耐药相关基因.结果 除GIM、SPM、VIM-1、VIM-2、CTX-M、aac(3′)-Ⅰ、aac(3′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ基因全部为阴性外,其余耐药基因有不同程度的阳性.结论 携带多种耐药基因是呼吸内科多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类和β-内酰胺类抗菌剂耐药的重要机制.     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因探讨

目的了解浙江省丽水地区铜绿假单胞菌(PA)临床分离株中氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因存在状况。方法从分离的40株PA中,测定其对3种氨基糖苷类抗生素的敏感性,采用PCR及序列分析的方法分析AMEs基因{aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ与ant(2″)-Ⅰ}类型。结果40株PA分离株中ant(2″)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅱ基因阳性率分别为52.5%和45.0%,未检出aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)基因类型。结论浙江丽水地区耐氨基糖苷类抗生素的铜绿假单胞菌存在ant(2″)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅱ基因,且PA对氨基糖苷类抗生素耐药严重,应注意对其进行临床监测和监控。     

多重耐药的铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与其多重耐药基因的相关性分析

目的 调查本院多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的存在状况,Ⅰ类整合子的分布情况以及其与多重耐药基因相关性分析.方法 采用K-B法测定临床分离的铜绿假单胞菌对15种药物的耐药性,筛选出35株多重耐药菌株,采用聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺酶编码基因、OPrD2基因、氨基糖苷类修饰基因和Ⅰ类整合子基因.结果 35株多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶编码基因CTX-M-1、TEM、SHV的检出率分别为51.4%、31.4%、14.0%;OPrD2基因的阳性率为28.6%;氨基糖苷类修饰基因aac(6′)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ和ant(3″)-Ⅱ的阳性率分别为20%、2.86%、14.3%和17.1%;Ⅰ类整合子阳性的菌株中,CTX-M-1、TEM、SHV、aac(6′)-Ⅱ和ant(3″)-Ⅰ的检出率为45.4%、9.1%、27.3%、36.4%和27.3%,未检出aac(6″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ基因.结论 本院多重耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,常见的有β-内酰胺酶编码基因、OPrD2基因和氨基糖苷类基因.Ⅰ类整合子广泛存在于多重耐药的铜绿假单胞菌中,并携带多种耐药基因参与形成铜绿假单胞菌的多重耐药.     

肠球菌属细菌高水平庆大霉素耐药及其转座子的检测

目的研究2006—2009年北京地区临床分离高水平庆大霉素耐药(HLGR)肠球菌属细菌的双功能修饰酶基因转座子结构。方法采用脑心肉汤微稀释法测定北京地区169株临床分离粪肠球菌和21株屎肠球菌的高水平庆大霉素耐药性,应用菌落PCR扩增方法检测HLGR菌株中双功能修饰酶基因及两端插入序列(IS256),分析转座子结构。结果 169株粪肠球菌中,111株(65.7%)为HLGR株,HLGR菌中97.3%含有双功能修饰酶基因,其中10.2%含有完整结构的转座子(双功能修饰酶基因两端均含有IS256插入序列),89.8%含有截断结构的转座子(缺失一端或两端的插入序列)。21株屎肠球菌中,15株(71.4%)为HLGR株,所有HLGR菌株均含有双功能修饰酶基因,其中13.3%含有完整结构的转座子,86.7%含有截断结构的转座子。结论 2006—2009年北京地区临床分离肠球菌HLGR率高,并且绝大多数HLGR株含双功能修饰酶基因,通常形成截断结构的转座子。     

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物的耐药机制研究

目的探讨鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药机制。方法K-B法检测19株鲍曼不动杆菌对4种氨基糖苷类药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果14株鲍曼不动杆菌携带aacA4基因,检出率为74%。结论aacA4型氨基糖苷类修饰酶是鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药的重要机制。     

Plasmid-mediated aminoglycoside phosphotransferases in Haemophilus ducreyi.

Three clinical isolates of Haemophilus ducreyi, representing at least two subtypes, were shown to be resistant to streptomycin and kanamycin. They also produced a beta-lactamase and chloramphenicol acetyltransferase and were resistant to tetracycline. In the three strains the resistance to both aminoglycoside antibiotics was encoded by a plasmid of ca. 4.7 kilobases which apparently did not carry ampicillin, chloramphenicol, or tetracycline resistance genes, as determined after transfer to Escherichia coli by transformation. Resistance to streptomycin and kanamycin was due to the presence of two aminoglycoside phosphotransferases (APH). The enzyme modifying kanamycin was a 3',5"-APH of type I [APH(3',5")-I], as inferred from its substrate profile and immunological cross-reactivity with the APH(3',5")-I encoded by the transposable element Tn903. However, the APH(3',5")-I gene in H. ducreyi did not appear to be carried by Tn903.     

多药耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的研究1株多药耐药铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶基因、菌膜蛋白OprD2基因、整合子和转座子介导的各种耐药基因、16SrRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因以及氯霉素与四环素相关耐药基因的的存在情况。方法以K—B法测量其对抗菌药物的耐药性;以PCR法检测其相关耐药基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果该株铜绿假单胞菌检出TEM基因OXA-10基因,且伴有OprD2缺失;转座子遗传标记MerA阳性,Ⅰ类整合子遗传标记qacEAl-Sul1阳性;耐氨基糖苷类基因aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ、rmtB阳性,耐氯霉素基因cm1A阳性。结论造成本株铜绿假单胞菌多药耐药的主要原因是该菌株存在多种抗生素相关耐药基因。     

MRSA和MSSA氨基糖苷类药物耐药性和耐药基因检测

目的比较耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M RSA)和甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(M SSA)对氨基糖苷类药物耐药性和耐药基因携带的不同。方法运用K-B法和PCR方法分别对16株M RSA和24株M SSA 4种氨基糖苷药物(丁胺卡那霉素、奈替米星、庆大霉素、妥布霉素)耐药性和氨基糖苷类耐药基因进行检测。结果M RSA与M SSA对氨基糖苷类药物耐药率分别为93.8%,62.5%,100%,100%和0.0%,0.0%,29.2%,33.3%,三种氨基糖苷类药物耐药基因aac(6')/aph(2')、aph(3')III、an t(4',4')携带率分别为68.8%,62.5%,6.3%和29.2%,8.3%,0.0%。结论M RSA较M SSA对氨基糖苷类药物有着更高的耐药性和耐药基因携带率。M RSA较M SSA对氨基糖苷类药物存在着更为复杂的耐药机制。     

36株多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药基因的流行病学研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因的存在情况。方法收集2012年8—11月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者的临床标本中分离到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株36株。应用KB纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性、应用PCR检测细菌对氨基糖苷类药物的耐药基因。结果36株多重耐药鲍曼不动杆菌对头孢哌酮一舒巴坦有较高的敏感率（33．3％）,对其他抗菌药物的敏感率均较低（20．0％）。36株多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因aac（3）-I、aac（6’）Ib、aph（3’）-I和16SrRNA甲基化酶基因armA的阳性率分别为72．2％（26株）、72．2％（26株）、80．6％（29株）和80．6％（29株）。结论本组多重耐药鲍曼不动杆菌多耐药情况比较严重,其对氨基糖苷类药物耐药与氨基糖苷类耐药基因的存在密切相关。     

54株肺炎克雷伯菌氨基糖苷类抗生素耐药基因分析

目的了解临床分离的54株肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的耐药谱,分析氨基糖苷乙酰转移酶基因的分布规律及其与氨基糖苷类抗生素耐药的相关性,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用MIC法测定临床分离的54株肺炎克雷伯菌对7种氨基糖苷类抗生素的耐药谱,应用Whonet5.4软件统计耐药率,通过聚合酶链反应进行氨基糖苷乙酰转移酶基因研究。结果 54株肺炎克雷伯菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、链霉素、大观霉素和奈替米星的耐药率分别为14.8%、77.8%、59.3%、68.5%、66.7%、61.1%、22.2%;测试菌株中存在aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(3)-Ⅳ、aac(3)-Ⅰ4种耐药基因,aac(3)-Ⅱ和aac(6′)-Ⅰ是主要的产酶基因,检出率分别为78.5%和65.0%。结论产生氨基糖苷类钝化酶是临床分离的肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素主要的耐药机制,临床分离菌的耐药表型和钝化酶基因关系较为复杂,可能与耐药菌中存在多钟耐药基因有关,临床实验室应加强检测,指导临床合理使用抗菌药物。     

In70 of plasmid pAX22, a bla(VIM-1)-containing integron carrying a new aminoglycoside phosphotransferase gene cassette

An Achromobacter xylosoxydans strain showing broad-spectrum resistance to beta-lactams (including carbapenems) and aminoglycosides was isolated at the University Hospital of Verona (Verona, Italy). This strain was found to produce metallo-beta-lactamase activity and to harbor a 30-kb nonconjugative plasmid, named pAX22, carrying a bla(VIM-1) determinant inserted into a class 1 integron. Characterization of this integron, named In70, revealed an original array of four gene cassettes containing, respectively, the bla(VIM-1) gene and three different aminoglycoside resistance determinants, including an aacA4 allele, a new aph-like gene named aphA15, and an aadA1 allele. The aphA15 gene is the first example of an aph-like gene carried on a mobile gene cassette, and its product exhibits close similarity to the APH(3')-IIa aminoglycoside phosphotransferase encoded by Tn5 (36% amino acid identity) and to an APH(3')-IIb enzyme from Pseudomonas aeruginosa (38% amino acid identity). Expression of the cloned aphA15 gene in Escherichia coli reduced the susceptibility to kanamycin and neomycin as well as (slightly) to amikacin, netilmicin, and streptomycin. Characterization of the 5' and 3' conserved segments of In70 and of their flanking regions showed that In70 belongs to the group of class 1 integrons associated with defective transposon derivatives originating from Tn402-like elements. The structure of the 3' conserved segment indicates the closest ancestry with members of the In0-In2 lineage. In70, with its array of cassette-borne resistance genes, can mediate broad-spectrum resistance to most beta-lactams and aminoglycosides.     

金黄色葡萄球菌耐药表型及基因型研究

目的探讨金黄色葡萄球菌耐药基因检测与其对抗菌药物的耐药表型是否一致。方法对临床分离得到的74株金黄色葡萄球菌,采用纸片扩散法进行药敏试验,用法国生物梅里埃公司全自动分析仪进行鉴定,同时,根据从检索到的耐药基因序列,设计了特异性引物,采用聚合酶链反应（PCR）检测该金黄色葡萄球茵对抗茵药物的耐药基因。结果菌株对抗茵药物呈多重耐药。对该研究中抗菌药物的耐药率均在60．0％以上。MRsA多重耐药菌株占64％以上。MRSA耐药表型检出率和耐药基因mecA的检出率基本一致。3种氨基糖苷类修饰酶基因的检出率由高至低依次为aac6、nph3、ant4。结论携带mecA基因是金黄色葡萄球菌多重耐药的主要原因。耐药袁型的检出率与采用PCR检测金昔色葡萄球菌抗菌药物耐药基因的检出率基本一致。