鸡卵清蛋白对蛋白酶抑制作用的研究

以新鲜鸡蛋清为材料,采用三氯醋酸-丙酮提取,冷丙酮沉淀,碳酸盐透析和DEAE-Cel-lulose离子交换层析分离出鸡卵清蛋白。研究了该蛋白质对蛋白酶活性的影响,结果表明鸡卵清蛋白对胰蛋白酶有强烈抑制作用并且抑制程度与温度、pH值等密切相关,能部分仰制枯草杆菌蛋白酶活性,不抑制胰凝乳蛋白酶。     

三甲基化壳聚糖卵清蛋白纳米粒的制备

目的：以N-三甲基壳聚糖盐酸盐（N—trimethyl chitosan chloride，TMC）为材料制备新型纳米粒（nanoparticles，NPs），包裹卵清蛋白（ovalbumin，OVA），以提高卵清蛋白的包封率。方法：利用TMC与三聚磷酸钠（tripolyphosphatesodium，TPP）之间的离子胶凝作用制备纳米粒；用纳米粒度及表面电位分析仪测定纳米粒的粒径及zeta电位；探讨OVA溶液的pH值及浓度，TMC溶液的浓度，TPP溶液的浓度等因素对OVA包封率的影响；用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺明胶电泳（Soldium Dodeoyl Sulfate—Polyacrylamide，SDS-PAGE）检验OVA在纳米粒制备及体外释放过程中有无降解。结果：本研究制备的TMC／OVA纳米粒为紧密球形，分布均匀，粒径约为135．4nm，zeta电位约为＋20mV；OVA的pH值及制备工艺是影响包封率的主要因素；SDS-PAGE电泳证实在纳米粒的制备及释放过程中OVA没有降解。结论：用离子胶凝法制备载蛋白多肽类疫苗的纳米粒，操作简便，采用合适的制备方法，调整处方可将包封率提高到90％以。     

人bFGF卵清蛋白分泌表达载体的构建及分析

目的：构建人碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的卵清蛋白分泌表达载体,为建立鸡输卵管生物反应器奠定基础。方法：利用PCR手段,从鸡基因组DNA克隆了4．1k（-4050bp-＋42bp）卵清蛋白（ovalbumin）上游调控序列,利用重叠PCR技术,将溶菌酶信号肽（lysozyme signal peptide）基因与人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因融合在一起。结果：经DNA测序和核酸电泳检测,OV启动子基因序列、pcsbFGF和pcOV-sbFGF电泳住点与预计结果一致。结论：人bFGF的卵清蛋白分泌表达载体构建初步完成,可进行进一步转染表达。     

卵清蛋白壳聚糖纳米粒的制备及其体外性质

目的 制备包载卵清蛋白(OVA)的壳聚糖(CS)纳米粒,考察影响其粒径的因素并进行体外释放及细胞摄取效率的研究.方法 采用离子交联法,以三聚磷酸钠(TPP)为交联剂制备包载OVA的CS纳米粒,以粒径为考察指标,采用单因素实验法,对CS溶液浓度、pH、TPP浓度、CS与OVA质量比、CS与TPP质量比进行考察,确定最佳处...     

ELISA法测定甲型H1N1流感病毒裂解疫苗中卵清蛋白含量的不确定度分析

目的:对ELISA法测定甲型H1N1流感病毒裂解疫苗中卵清蛋白含量不确定度进行评定分析。方法:按照卵清蛋白检测试剂盒说明书对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗中卵清蛋白含量进行测定。根据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059-1999)中有关规定对测量结果中带来的各个不确定度进行分析、评定和量化。结果:量化各个不确定度分量,提出了该法的合成不确定度评估结果。结论:该法测定甲型H1N1流感病毒裂解疫苗中卵清蛋白含量的扩展不确定度U=0.68 ng.mL-1(k=2)。     

疫苗中残留卵清蛋白ELISA定量测定方法的建立

目的 建立ELISA法检测疫苗中残留卵清蛋白的含量.   方法 将进口纯化兔抗卵清蛋白抗体作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记兔抗卵清蛋白抗体作为酶标抗体,以系列含量的卵清蛋白溶液为标准,采用ELISA双抗体夹心法,对供试品中残留卵清蛋白进行定量测定.   结果 最佳线性范围为1.25～20 ng/ml,相关系数r≥0.99;定量限度为1.25 ng/ml;准确性试验回收率为89.2%～103.6%;精密性试验内和试验间变异系数分别为5.6%～6.7%和4.2%～9.4%.与马血清、羊血清、人血清白蛋白、牛血清白蛋白、流行性感冒病毒裂解疫苗基质液及其他无残留卵清蛋白的疫苗均无交叉反应.   结论 本方法特异性强、灵敏度高,准确性、重复性和稳定性好,可用于疫苗中残留卵清蛋白的定量检测.     

奥曲肽联合呋塞米及清蛋白治疗肝肾综合征的临床疗效观察

目的：探讨奥曲肽联合呋塞米及清蛋白治疗肝肾综合征的临床疗效。方法回顾性分析2012年10月～2014年4月我院收治的81例肝肾综合征患者的临床资料,按照不同的治疗方法分为2组,对照组40例在常规护肝治疗的基础上采用呋塞米及清蛋白治疗,观察组41例在对照组基础上加用奥曲肽治疗。比较两组肾功能、24h尿量、临床疗效。结果观察组及对照组治疗后尿素氮、肌酐水平均明显低于治疗前,治疗后24h尿量明显高于治疗前（P＜0.05）,观察组治疗后尿素氮、肌酐水平明显低于对照组,24h尿量明显高于对照组（P＜0.05）。观察组治疗总有效率明显高于对照组（P＜0.05）。结论奥曲肽联合呋塞米及清蛋白治疗肝肾综合征效果显著,能显著改善患者的肾功能,提高治疗总有效率,可以临床推广应用。     

穿膜肽-抗体-微球偶联物的制备方法研究

目的：探讨制备穿膜肽-抗体-微球新型药物传送系统的可行性。方法：采用N-琥珀酰亚胺基-3-（2-吡啶二硫）-丙酸酯（SPDP）交联法将穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白（CPPs-EGFP）、牛血清白蛋白微球（BSA-NS）、乙肝高效价免疫球蛋白（HBIg）分别采用一次偶联法和二次偶联法两种交联方案进行共价交联,采用还原和非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫荧光法评价穿膜肽、抗体、微球间的交联。结果：两种交联方案制备的穿膜肽-抗体-微球偶联物,SDS-PAGE还原电泳均可见在低分子量端形成三条蛋白条带,非还原电泳均未见条带;在不同激发波长的荧光显微镜下,均可见微球表面分别发出绿色荧光和红色荧光。结论：应用SP-DP交联剂,无论是一次偶联法还是二次偶联法均能够将穿膜肽、抗体、微球有效地进行偶联,为进一步研究穿膜肽-抗体-微球新型药物传送系统的特性奠定了基础。     

酪酸梭菌对RSV感染加重的哮喘小鼠气道炎症的影响

目的酪酸梭菌对RSV感染的哮喘小鼠模型气道的炎症反应的影响。方法 6~8周龄雄性BALB/c小鼠36只,随机分为对照组(NC)、模型组(PC)、酪酸梭菌治疗组(LS),每组12只。除对照组(NC)以外,其余各组均采用卵清蛋白腹腔注射致敏和雾化吸入激发,建立小鼠哮喘模型,在哮喘模型建立后第二日用RSV隔日滴鼻,连续3次,复制急性病毒感染哮喘模型。对照组(NC)采用生理盐水替代卵清蛋白和RSV。酪酸梭菌组(LS)于0~33天给予酪酸梭菌灌喂,每日1次,第34天计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞数目;制作肺组织的病理切片,进行HE染色和Masson染色,观察肺组织病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF与血清中细胞因子IFN-γ、BALF中IL-12、IL-5及血清中嗜酸性粒细胞趋化因子。结果与模型组(PC)相比,酪酸梭菌组(LS)小鼠BALF中白细胞总数明显降低(P<0.01),BALF及血清中细胞因子IFN-γ、IL-12的水平升高(P<0.01),嗜酸性粒细胞趋化因子、IL-5水平降低(P<0.01)。结论酪酸梭菌可减轻RSV感染的哮喘小鼠气道炎症,酪酸梭菌对于RSV感染的哮喘小鼠具有一定的治疗作用。     

抗恩诺沙星抗血清的制备及其ELISA检测

目的:建立快速、灵敏的恩诺沙星残留酶联免疫检测方法(ELISA)。方法:采用混合酸酐法,将恩诺沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(Enrofloxac in-BSA)和包被抗原(Enrofloxac in-OVA)。通过背部多点免疫法免疫日本大白耳兔,制备抗恩诺沙星的特异性抗血清。结果:利用所获得的特异性抗血清,建立的恩诺沙星ELISA检测方法,其线性范围为5 ng.mL-1～2.5μg.mL-1(R2=0.9935),且与HPLC方法具有良好的相关性(R2=0.9892,n=9)。牛奶、大鼠血浆和尿液中的加样回收率分别为98.4%～105.8%,91.7%～101.2%,97.0%～110.3%。运用所建立的方法,对大鼠体内血浆及药品中恩诺沙星的含量进行了测定。结论:本研究所建立的检测恩诺沙星的ELISA方法具有样品前处理简单,灵敏度高及分析速度快等优点,适合用于恩诺沙星的体内分析及动物性食品中恩诺沙星的残留分析。     

东北林蛙卵活性成分及药理活性研究进展

林蛙卵是蛤蟆油生产后的主要副产物之一,因其年产量大且未能被充分利用逐渐得到关注。林蛙卵含有多种有利于人体健康的生物活性物质。近年来多位学者、专家对林蛙卵活性成分及药理活性进行研究,重点阐述林蛙卵中不饱和脂肪酸、蛋白质以及氨基酸等生物活性成分,揭示其药用及保健价值,为林蛙卵产品加工和开发提供参考。     

奥曲肽联合清胰汤治疗急性重症胰腺炎

目的观察奥曲肽联合清胰汤治疗急性重症胰腺炎(SAP)的治疗效果。方法 34例SAP患者在严密监护,禁食,胃肠减压,吸氧,止痛,抗感染,应用质子泵抑制剂,维持水电解质及酸碱平衡的基础上,应用奥曲肽25ug/h,持续静脉注入,清胰汤(大黄、柴胡、白芍、黄芩、木香、厚朴、元胡、芒硝)由胃管注入。结果 34例患者中31例经保守治疗成功,治愈率91.2%。结论奥曲肽联合清胰汤治疗SAP,疗效显著,缩短疗程。     

清蛋白微球的研究进展

综述清蛋白微球的制备方法、制备过程中的影响因素、释药特性和用途，旨在进一步提高对清蛋白微球的了解。     

海洋生物蛋白源酶解降压肽的研究进展

海洋生物蛋白源酶解降压肽具有高效无毒的特点,使其成为人们研究的热点,现简要综述酶解降压肽的降压机制、制备、活性评价等,并展望其开发应用前景。     

重组PACAP衍生物RMBYLL的高效制备及其体外生物学效应

为了利用基因工程技术高效制备具有治疗Ⅱ型糖尿病功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生物RMBYLL,并在体外研究其生物学效应,采用基因重组技术表达重组肽RMBYLL,纯化、制备并鉴定重组肽RMBYLL后,利用特定细胞系和Western-blot等技术,检测RMBYLL对VPAC1、VPAC2和PAC1受体的选择性和激动活性,以及重组肽RMBYLL对胰岛素受体介导的信号传导最终效应物—葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响。实验结果表明:利用重组肽技术制备的RMBYLL的M_r为3.901k,纯度大于95%,其产率为18.7 mg/(L发酵产物);制备的RMBYLL可与VPAC2受体特异结合并显著促进VPAC2-CHO细胞cAMP的产生,其受体半激活浓度(EC_(50))为0.90 nmol/L,目的肽RMBYLL可显著增强3T3-L1脂肪细胞GLUT4的表达,阳性实验组是对照组的1.91倍。由此表明,利用本研究确立的表达、纯化策略可实现高活性RMBYLL的高效制备,应用前期构建的含有特定受体的CHO细胞和3T3-L1脂肪细胞模型,可方便有效地进行相关药物肽的体外生物学效应研究。     

PACAP衍生多肽RDB的高效制备及其改善胰岛素抵抗作用的初步研究

为了制备垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生多肽RDB并初步研究其改善脂肪细胞胰岛素抵抗的作用,利用基因工程技术,选用大肠杆菌偏爱密码子,以重叠延伸PCR方法合成RDB基因序列,定向插入到高效表达载体pKYB-MCS中,用大肠杆菌ER2566进行表达,融合蛋白经Chitin-Beads柱纯化后,利用β-巯基乙醇诱导蛋白内含肽的N端自剪切,释放目的肽,再用HPLC制备纯度较高的PACAP衍生多肽RDB,实现RDB的高效制备;利用制备的重组肽RDB研究其对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的改善作用及初步机制。制备的重组肽RDB的Mr为3.990 k,纯度大于95%,其产率为17.3 mg/L发酵产物;制备的RDB可明显促进胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖利用及信号分子IRS-1的表达。结果表明在确立的优化条件下可高效制备纯度较高的PACAP衍生多肽RDB(纯度≥95%),RDB能改善胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的胰岛素敏感性,其作用机制与胰岛素信号通路相关蛋白的表达有关。     

奥曲肽联用清胰汤加减治疗急性胰腺炎的临床分析

目的 研究分析奥曲肽联用清胰汤加减治疗急性胰腺炎的临床效果.方法 选取本院收治的62例急性胰腺炎患者,将其随机分为两组,其中对照组34例患者接受常规治疗,治疗组28例患者在对照组治疗基础上加用奥曲肽联合中药清胰汤治疗,对比两组患者临床治疗后的临床病症改善、体征缓解时间情况.结果 治疗组患者临床症状消失时间及排气排便恢复时间显著优于对照组(P＜0.05);治疗组患者总有效率显著优于对照组(P＜0.05).结论 采用奥曲肽联用清胰汤加减治疗急性胰腺炎,可有效改善患者的临床症状,提高患者的生命质量,值得临床推广使用.     

卵清蛋白对几种药物溶解的影响

一些水溶性很小的药物,通过与水溶性载体形成分散体,可以提高其溶解度。卵清蛋白(分子量45000)是一种水溶性很好的无害的天然蛋白质,所以较化学合成的物质更有它的优点。材料、药品:卵清蛋白、氟联苯丙酸、双氯高灭酸、吲哚心安、地尔硫(?)。样品制备:取药物和卵清蛋白(按1:1,1:5,1:10,w/w)放入研钵,用1.4倍水研磨1h,然后在25℃真空干燥48h。测定内容与方法:溶解作用和溶解度、差示扫描量热法(DSC)和X 射线衍射法。结果和讨论:由于卵清蛋白的作用,药粉     

清胰汤与奥曲肽联合应用治疗重症急性胰腺炎疗效观察

目的 探讨清胰汤与奥曲肽联合应用治疗重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)的临床疗效.方法 将76例SAP患者随机分成治疗组和对照组.对照组36例给予禁食、胃肠减压、奥曲肤及支持对症治疗;治疗组40例在对照组治疗的基础上应用清胰汤胃管注入,观察两组疗效.结果 治疗组总有效率明显优于时照组;腹痛、腹胀缓解时间,血淀粉酶、血白细胞恢复正常时间均明显优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 应用清胰汤联合奥曲肽治疗SAP的效果优于常规治疗方法.     

吗啡与蛋白质结合物的合成

目的:利用蛋白质连接法合成吗啡人工全抗原。方法:混合酸酐法和碳二亚胺连接法,用BSA及OVA蛋白做载体蛋白,利用紫外光谱扫描及蛋白质电泳两种方法判断连接是否成功。结果:连接成功,连接产物分子量增加,且每分子牛血清白蛋白连接的吗啡分子数为40-48个,每分子卵清白蛋白(OVA)连接的吗啡分子数为13-16个。结论:此两种方法能成功合成吗啡人工抗原,且该抗原可作为吗啡免疫用抗原以及吗啡免疫检测方法建立所用包被抗原。