NRAGE对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的作用机制

目的 研究神经营养蛋白受体相互作用的同源物(NRAGE)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和侵袭能力的作用机制。方法 选取84例CRC患者的临床病理材料,应用荧光定量PCR(qPCR)及免疫印迹实验检测CRC组织及癌旁正常组织中NRAGE的表达,分析癌组织中NRAGE的表达与临床病理特征的关系。RT-PCR及免疫印迹实验检测CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO及结直肠正常细胞系FHC中NRAGE mRNA及蛋白表达。MTT实验、Transwell迁移实验观察NC组、过表达NRAGE组及NRAGE敲低组肿瘤细胞增殖及迁移能力。qPCR及免疫印迹实验检测各组AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达差异。结果 与癌旁组织相比,CRC癌组织中NRAGE的mRNA及蛋白表达明显升高。癌组织中NRAGE的表达与肿瘤分期、远处转移及淋巴结转移有关(P<0.05)。与FHC细胞相比,CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO细胞中NRAGE的mRNA及蛋白表达较高(P<0.05)。...     

CKMT1A对人鼻咽癌HONE1细胞铂类化疗药物敏感性的影响及机制研究

近年来鼻咽癌患者五年生存率的提升难度明显增加,对铂类化疗药物的敏感性较差是主要原因,探讨耐药机制具有重要意义。本研究将鼻咽癌细胞转染分为空载体对照组(空载体质粒)、线粒体肌酸激酶1A(CKMT1A)过表达组(CKMT1A过表达载体质粒),分别进行MTT法检测、流式细胞术检测、实时荧光定量PCR检测和Western blot检测。结果显示随着顺铂浓度的增加,CKMT1A过表达组吸光度值下降幅度更明显(P<0.01)。根据顺铂IC₅₀结果选取2 μmol/L顺铂处理细胞24 h后,两组细胞均表现为G0/G1期比例明显下降,S期和G2/M期比例明显增多。2 μmol/L顺铂处理细胞48 h后,CKMT1A过表达组细胞凋亡率明显高于空载体对照组(P<0.01);CKMT1A过表达组c-PARP、Bax相对表达量明显高于空载体对照组,BCL-2相对表达量明显低于空载体对照组(P<0.05)。2 μmol/L顺铂处理细胞6 h后, CKMT1A过表达组p-STAT3相对表达量明显高于空载体对照组(P<0.01)。过表达CKMT1A可通过细胞凋亡信号通路下调STAT3磷酸化水平,抑制靶基因表达,促进人鼻咽癌细胞株HONE1凋亡,提升对铂类化疗药物的敏感性。     

WNK1在结直肠癌中的表达情况及对预后的影响

目的探讨WNK1在结直肠癌(CRC)中的表达情况及对预后的影响。方法采用免疫组织化学方法检测68例CRC患者中WNK1基因的表达水平。采用log-rank检验和Kaplan-Meier生存曲线分析WNK1表达水平与总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的关系。采用蛋白免疫印迹法对细胞的上皮和间质标志物进行分析,通过Transwell分析与划痕实验验证WNK1基因对CRC细胞迁移能力的影响。结果 CRC组织WNK1的表达阳性率[(55.9%(38/68)]高于癌旁组织[14.7%(10/68)],差异有统计学意义(P<0.05)。WNK1的表达与淋巴结转移和TNM分期相关(均P<0.05)。WNK1高表达CRC患者OS率和PFS率均低于WNK1低表达患者(均P<0.05)。经蛋白免疫印迹法证实WNK1在HCT116和HCT15细胞系中的表达均下调,HCT116细胞中灰度降低72%,HCT15细胞中灰度降低85%。在HCT116和HCT15细胞中,WNK1的下调可恢复上皮标志物钙黏附蛋白E的表达,并伴随间质标记物波形蛋白的丢失。Transwell结果显示,采用siRNA抑制WNK1基因后HCT116细胞中通过滤膜迁移至下室的细胞(57.00±4.36)少于转染空载体对照组(230.00±8.89),差异有统计学意义(P<0.05);HCT15细胞中通过滤膜迁移至下室的细胞(61.00±3.61)少于转染空载体对照组(241.00±5.52),差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,在HCT116中下调WNK1基因后细胞48 h划痕愈合率(10.7%)低于转染空载体对照组(60.3%),差异有统计学意义(P<0.05);在HCT15中下调WNK1基因后细胞48 h划痕愈合率(7.8%)低于转染空载体对照组(45.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 WNK1在CRC中的表达显著高于正常结直肠组织,且WNK1高表达与CRC TNM分期及复发转移相关。抑制WNK1基因可抑制上皮细胞-间充质转换(EMT)和CRC细胞的迁移能力。     

DTX2通过Notch2/Akt轴促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨DTX2对结直肠癌（CRC）细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法 利用基因工具干预CRC细胞,分为敲低组（DTX2-shRNA）、敲低空载组（neg-shRNA）、未转染组（con）、过表达空载组（pcDNA）及过表达组（pcDNA-DTX2）,利用qRTPCR及Western blotting法检测转染效率。采用划痕和Transwell侵袭实验检测DTX2基因的表达改变对CRC细胞迁移侵袭能力的影响,并通过Western blotting检测各组中Notch2、NICD、Akt、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平。CRC细胞共转染pcDNA-DTX2和Notch2 siRNA,检测回复实验对CRC细胞迁移侵袭能力的影响。结果 CRC细胞中DTX2 mRNA和蛋白表达量,敲低组中明显降低（P<0.01）,过表达组中明显升高（P<0.01）。划痕和Transwell侵袭实验提示,CRC细胞迁移侵袭能力,DTX2 shRNA显著低于con和neg-shRNA(P<0.01);pcDNA-DTX2显著高于con和pcDNA(P<0.01)。Wes...     

GDI2通过p75NTR通路调节结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的：探讨GDP解离抑制因子2(GDI2)对结直肠癌（CRC）细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡以及细胞周期的影响及其机制。方法：TCGA数据库分析GDI2 mRNA在CRC肿瘤组织中的表达。将CRC细胞分为sh-NC组和sh-GDI2组，采用CCK-8法检测细胞活力，克隆形成实验检测细胞增殖，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭，流式细胞术检测细胞凋亡和周期，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测GDI2基因表达，western blotting检测GDI2蛋白和神经生长因子受体（p75NTR）通路关键因子（IKK、p-NF-κB和p-IκB）的表达。构建异种移植瘤裸鼠模型，观察GDI2对CRC肿瘤生长的影响。结果：与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞相比，GDI2在CRC患者肿瘤组织和细胞系中的表达上调（P<0.05）。sh-GDI2能抑制CRC细胞增殖、迁移、侵袭，阻滞细胞周期进程，并促进凋亡（均P<0.05）。与sh-NC组相比，sh-GDI2组p75NTR蛋白表达上调，IKK、p-NF-κB、p-IκB蛋白表达下调（均P<0.05）。敲低GDI2可明显抑制裸鼠体内...     

双氧化酶成熟因子2基因检测在肺癌患者淋巴结转移及预后预测中的价值研究

目的:研究双氧化酶成熟因子2(DUOXA2)基因在肺癌患者肿瘤组织中的表达,以及其与肺癌患者临床病理特征和预后的相关性。方法:选取90例接受手术治疗的肺癌患者,通过定量PCR检测肺癌肿瘤组织和癌旁正常组织中DUOXA2 mRNA表达,通过免疫印迹法和免疫组织化学法检测DUOXA2蛋白表达,通过多因素回归分析法分析肺癌患者预后相关因素。结果:DUOXA2 mRNA和蛋白在90例肺癌患者肿瘤组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。DUOXA2蛋白在肺癌肿瘤组织中的表达水平与肺癌患者年龄、性别、病理类型、肿瘤大小和TNM分期无关(均P>0.05),而与淋巴结是否转移有关(P<0.05);DUOXA2 mRNA和蛋白在30例淋巴结转移肺癌患者肿瘤组织中的表达水平显著高于其在60例淋巴结未转移肺癌患者肿瘤组织中的表达水平。多因素回归分析结果显示：DUOXA2在肺癌患者肿瘤组织中的表达水平是影响肺癌患者预后的独立危险因素(P=0.039)。结论:DUOXA2基因在肺癌患者肿瘤组织中表达升高,其表达水平与肺癌患者是否出现淋巴结转移有关,是影响肺癌患者预后的独立危险因素...     

miR-495-3p在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:检测miR-495-3p在结直肠癌(CRC)组织和细胞中的表达,探讨miR-495-3p对CRC细胞增殖、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR检测22对CRC及其癌旁组织和CRC细胞以及正常结肠上皮细胞中miR-495-3p的表达,选取其中差异表达最明显的两组细胞株转染miR-495-3p mimic、miR-495-3p inhibitor以及各自对照组。CCK-8和EdU实验检测细胞增殖能力、Transwell检测细胞迁移能力、流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:CRC组织和细胞中miR-495-3p表达降低(P<0.01)。与对照组相比,转染miR-495-3p mimic后细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05),凋亡细胞增多(P<0.05);转染miR-495-3p inhibitor后细胞增殖和迁移能力增加(P<0.05),凋亡细胞减少(P<0.05)。结论:miR-495-3p在CRC组织和细胞中低表达,上调miR-495-3p表达后能降低细胞增殖、迁移能力,增加细胞凋亡率,在CRC中扮演着抑癌基因的作用。     

miR-155-5p和TRIP13在结直肠癌组织中的表达及与预后的关系

目的 探讨miR-155-5p及甲状腺激素受体因子13(TRIP13)在结直肠癌(CRC)中的表达水平及与预后的关系。方法 选取2015年1月—2017年5月本院经病理确诊的78例CRC患者为研究对象。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测CRC组织及癌旁组织中的miR-155-5p、TRIP13 mRNA表达情况,免疫组化染色法测定CRC组织及癌旁组织中TRIP13蛋白表达情况;分析miR-155-5p、TRIP13蛋白表达对CRC患者预后的影响;采用Kaplan-meier分析组织中miR-155-5p、TRIP13蛋白对CRC患者预后的影响;采用Pearson检验分析CRC组织中miR-155-5p与TRIP13 mRNA表达水平的相关性;多因素Cox回归分析CRC患者预后的影响因素。结果 CRC组织miR-155-5p、TRIP13 mRNA表达水平及TRIP13蛋白的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05);CRC组织中miR-155-5p、TRIP13蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、浸润深度无关(P>0.05),与患者TNM分期、肿瘤分化...     

错配修复蛋白与结直肠癌病理特征及预后的关系研究

目的：探讨错配修复(MMR)蛋白功能状态与结直肠癌(CRC)患者临床病理特征及预后的关系。方法：收集2018年3月—2020年3月本院148例CRC患者，采用免疫组织化学法(IHC)检测手术切除的癌组织标本中MMR蛋白表达情况；分析CRC患者MMR蛋白表达与临床病理特征及预后的关系。结果：148例CRC患者中，错配修复蛋白缺失(dMMR)患者18例(12.16%),其中PMS2联合MLH1缺失10例，MSH6缺失4例，PMS2缺失2例，MSH2联合MSH6缺失2例；CRC患者MMR功能状态与TNM分期、淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位、CEA水平无关(P>0.05);Kaplan-Meier生存分析显示，dMMR组整体生存情况优于pMMR组(P<0.05);COX回归分析表明：TNM分期Ⅲ/Ⅳ、合并淋巴结转移、低分化是CRC患者总生存期(OS)的独立危险因素(P<0.05),dMMR是CRC患者OS的独立保护因素(P<0.05)。结论：CRC患者MMR功能状态与TNM分期、淋巴结转移、分化程度密切相关，dMMR是CRC患者预...     

长链非编码RNA AC005062.1通过调控结肠癌转移相关基因1的表达对结直肠癌恶性表型的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)AC005062.1通过调控结肠癌转移相关基因1(MACC1)的表达对结直肠癌(CRC)恶性表型的影响。方法 应用GSE84983和GSE104364数据库,分析lncRNA AC005062.1在结直肠癌中的表达水平。收集医院肿瘤外科进行CRC手术治疗患者的肿瘤组织(肿瘤组)及癌旁组织(对照组),随机抽取8对,采用qPCR法检测两组中lncRNA AC005062.1的表达。运用小干扰RNA(siRNA)下调CRC细胞中lncRNA AC005062.1的表达后,采用CCK-8法检测两组细胞增殖,流式细胞方法检测两组细胞周期和凋亡,伤口划痕实验检测两组细胞迁移。利用数据库比较lncRNA AC005062.1和MACC1基因在染色上的定位,用qPCR和蛋白免疫印迹方法检测两组组织中MACC1转录水平和蛋白水平的表达;下调CRC细胞中lncRNA AC005062.1,qPCR和蛋白免疫印迹方法检测MACC1转录水平和蛋白水平的表达。结果 GSE84983和GSE104364数据库分析及两组组织检测结果提示CRC中lncRNA AC005062...     

黏附连接蛋白Afadin在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 分析结直肠癌(CRC)组织中Afadin表达水平与临床病理学因素及预后的相关性.方法 利用免疫组织化学及蛋白免疫印迹(Western blot)对CRC组织中Afadin的表达水平进行检测,比较肿瘤组织及非肿瘤组织间的表达差异;免疫组织化学检测CRC组织中Afadin表达水平,计算免疫组织化学染色评分,并与临床病理学因素和预后资料进行相关性分析.结果 CRC组织中Afadin的表达水平较非肿瘤组织明显降低,并且Afadin表达水平与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移状况相关,Afadin低表达患者总生存率较Afadin高表达患者降低.结论 CRC存在Afadin表达水平降低的现象,Afadin的表达水平和CRC的进展和预后相关.     

结直肠癌组织中lncRNA TUSC7与miR-1270表达的相关性及临床病理意义

目的:探究结直肠癌(CRC)组织中长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤抑制候选基因7(TUSC7)与微小RNA-1270(miR-1270)的相关性及二者与CRC患者预后的关系。方法:lnCAR数据库检索lncRNA TUSC7在CRC和正常结直肠组织中的表达情况。选取2018年6月至2019年1月本院收治的130例CRC患者为研究对象,收集手术切除的CRC和癌旁组织,检测CRC和癌旁组织中lncRNA TUSC7、miR-1270表达水平;分析CRC组织中lncRNA TUSC7表达水平与miR-1270相关性;分析CRC组织lncRNA TUSC7、miR-1270表达水平与CRC临床病理特征和预后关系。生物信息学网站预测lncRNA TUSC7与miR-1270的关系。结果:lnCAR数据库分析显示,lncRNA TUSC7在CRC组织中的表达水平低于正常结直肠组织(P<0.05); qRT-PCR结果显示,CRC组织中lncRNA TUSC7表达水平低于癌旁组织(P<0.05),miR-1270表达水平高于癌旁组织(P<0.05); CRC组织lncRNA T...     

转录因子Ascl2调控Acss1/3的表达影响结直肠癌患者预后

转录因子Ascl2作为WNT信号靶基因,可影响结直肠癌（CRC）前体细胞干性特征,探讨其能否调控短链脂肪酸β-氧化而影响CRC患者的预后。方法 下载稳定干扰Ascl2表达的CRC LS174T细胞（sh-Ascl2/LS174T）的mRNA及miRNA差异表达数据（GSE69036和GSE34926）分析其靶基因;应用RT-PCR方法和Western 印迹定量检测sh-Ascl2/LS174T及对照细胞中的Ascl2、Acss1和Acss3的mRNA表达水平,以及Ascl2和Acss1蛋白表达水平,从GSE44076表达数据和UALCAN数据比较在正常结直肠粘膜、CRC组织和不同临床病理分期的肿瘤组织的表达水平差异;TCGA数据库下载548例CRC患者基因 mRNA表达量及相关临床信息,用Spearman等级相关分析表达相关性,Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox回归分析评估危险因素。结果 sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA较对照细胞下调2.08倍,miR-4282表达水平下调2.069倍。RT-PCR定量检测sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA和miR-4282水平明显下降(P＜0.01), Acss3的mRNA水平明显升高(P＜0.05);Acss1和Ascl2蛋白水平较对照细胞均明显下降。CRC组织Ascl2和Acss1的mRNA水平明显高于癌旁结直肠粘膜组织(P＜0.001),而Acss3明显低于癌旁结直肠粘膜组织 (P＜0.001);CRC组织中Ascl2与Acss1的mRNA表达水平呈正相关,与Acss3的表达水平呈负相关(均P＜0.001)。Ascl2和Acss3表达水平与疾病特异性生存期（DSS）、总体生存期（OS）、无进展生存期（PFS）无关,Acss1高表达组比低表达组的DSS (P=0.0389)和OS (P=0.04)明显降低。Ascl2与Acss1基因异常表达、Ascl2、Acss1和Acss3基因异常联合表达与CRC患者的DSS存在显著的联系(P=0.0377和P=0.0161),Ascl2、Acss1和Acss3三个基因的联合异常表达是影响CRC患者DSS的危险因素之一(P=0.043)。结论Ascl2对CRC细胞中的Acss1/3的表达可能具有调控作用而导致其短链脂肪酸β-氧化的重编程,它们的联合异常表达可以一定程度预测CRC患者的预后     

MAD1基因在主动脉夹层中的表达及对主动脉平滑肌细胞的影响

收集病变的升主动脉中膜组织标本为主动脉夹层组；收集同期在本院行尸检且无手术史、大血管病变史的升主动脉壁内组织标本18份为对照组；RT-PCR和Western blot检测有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD1) mRNA和蛋白表达水平。在体外建立MAD1基因高表达人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)模型,检测细胞增殖和凋亡情况以及凋亡相关蛋白。结果显示主动脉夹层组患者主动脉夹层中MAD1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。随着转染时间的延长,各组细胞增殖水平均逐渐增加,转染48 h、72 h后MAD1过表达组细胞增殖情况低于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。转染48 h后,MAD1过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。MAD1过表达组含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA和蛋白相对表达量明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.05)。实验结果表明,MAD1过表达可通过抑制细胞增殖,激活细胞外凋亡途径和细胞内凋亡途径来促进人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC细胞凋亡,参与主动脉夹层的发生与发展。     

Twist1和血管生成拟态在结直肠癌中的表达和临床意义

目的 分析Twist1在结直肠癌(CRC)中的表达及对血管生成拟态(VM)的影响。方法 收集124例CRC病例资料,通过免疫组织化学分析CRC组织及正常结直肠黏膜组织中Twist1、血管内皮细胞钙黏连蛋白(VE-cadherin)表达差异及其与预后及临床参数间的关系,对比CRC组织及正常结直肠黏膜组织中存在的VM现象。沉默CRC细胞株Twist1表达水平,通过蛋白免疫印(Western blot)迹检测VM法相关分子表达情况,观察Twist1对于结直肠癌细胞侵袭、迁移和VM的影响。结果 与正常结直肠黏膜组织比较,CRC组织Twist1、VE-cadherin阳性率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Twist1、VE-cadherin及VM与CRC的血管侵犯和淋巴结转移有关(P<0.05);总生存率统计分析显示,Twist1高表达CRC患者5年生存率明显低于Twist1低表达患者(P<0.01)。沉默Twist1表达后,si-Twist1组CRC细胞的侵袭、迁移能力较si-NC组(阴性对照)明显降低(P<0.05),上皮间质转化(EMT)相关因子Snail、...     

核转录因子I-C在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探究核转录因子I-C(nuclear factor I-C,NFIC)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)组织中的表达水平，分析其与食管鳞状细胞癌患者各临床病理特征及预后的关系。方法 采用实时荧光定量PCR检测54例手术切除的食管鳞状细胞癌组织及相应的癌旁组织中NFIC mRNA表达水平；采用免疫组织化学染色法检测食管鳞状细胞癌组织及相应的癌旁组织中NFIC蛋白表达情况，分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的相关关系。结果 食管鳞状细胞癌组织中NFIC mRNA表达水平均明显低于癌旁组织(P<0.05),NFIC蛋白阳性表达率也明显低于癌旁组织(P<0.05)。食管鳞状细胞癌组织中NFIC蛋白在低分化、淋巴结转移患者中呈现显著低表达(P<0.05)。食管鳞状细胞癌组织中NFIC蛋白表达水平与患者性别、年龄、肿瘤部位、TNM分期无明显相关性(P>0.05)。NFIC蛋白阴性表达患者的5年随访中位生存时间为21个月，明显低于NFIC蛋白阳性表达患者(48个月，P<0.05)。结论 NFIC...     

RBM43调控Slug mRNA抑制肝癌细胞转移的机制研究

目的 探讨RBM43通过调控Slug mRNA的稳定性抑制肝癌细胞转移的作用。方法 使用于江苏省肿瘤医院接受肝癌根治性切除术的88例患者的病理组织样品及肝细胞癌(HCC)细胞系Huh-7作为实验材料。通过免疫组织化学和蛋白免疫印迹确定RBM43在HCC组织中的表达情况。分别用RBM43表达载体和空白对照载体质粒转染Huh-7细胞,获得过表达RBM43组和对照组细胞。采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白免疫印迹检测2组细胞中RBM43和Slug mRNA及蛋白的表达情况,通过CCK8、集落形成和伤口愈合实验、Transwell侵袭实验评估2组细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 RBM43在肿瘤组织中IHC评分和肿瘤组RBM43蛋白的相对表达水平均低于癌旁组织(P<0.05);过表达RBM43组细胞的RBM43和Slug mRNA和蛋白的相对表达水平均显著低于对照组(P<0.05),且过表达RBM43组细胞的在传代接种后3、5和7 d时的细胞活力均显著低于同时期的对照组(P<0.001);过表达RBM43组细胞的克隆形成能力,划痕恢复速度和Transwell侵袭能力均...     

移植肾功能延迟恢复患者肾小管上皮细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白的表达

目的:探讨移植肾功能延迟恢复(DGF)患者肾小管上皮细胞凋亡率与凋亡相关基因bcl-2和Bax表达水平的关系,阐明DGF病理损伤机制。方法:586例同种异体肾移植后63例发生DGF患者作为DGF组,观察分为DGF期和恢复期2组,对照组为10例移植术后肾功能正常的志愿入组者。行肾组织穿刺活检病理切片进行原位末端标记检测细胞凋亡率,采用免疫组织化学法检测肾组织凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达水平。结果:DGF组患者肾小管细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01);与对照组比较,DGF组患者肾组织Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),而Bax蛋白表达水平增高(P<0.001),Bcl-2/Bax比值降低,DGF期患者肾小管细胞凋亡率与Bcl-2蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.52,P<0.05),与凋亡促进基因Bax表达水平呈正相关关系(r=0.63,P<0.05),DGF恢复期患者肾小管上皮细胞凋亡率与Bcl-2和Bax表达无相关性。结论:DGF患者移植肾小管上皮细胞凋亡率增高,与凋亡相关基因蛋白表达水平有关,提示肾小管上皮细胞凋亡可能参与了DGF的病理损伤过程。     

miR-211对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化功能的影响及机制

目的 研究microRNA-211(miR-211)对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化(EMT)功能的影响及其相关机制.方法 SKOV-3卵巢癌细胞株分别转染miR-211模拟物(211M组)及其阴性对照模拟物(NCM组),并设立未转染对照组,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-211含量;Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法检测3组细胞Snail、α-连环蛋白(α-Catenin)和与性别决定相关的高迁移率基因群4(SOX4)表达水平;采用Western blot法检测SOX4过表达对miR-211抑制EMT的拮抗作用;双荧光素酶实验检测miR-211与SOX4的关系.结果 211M组miR-211的表达水平明显上调,表达水平为未转染对照组的(706.67±30.95)倍(P<0.05).211M组迁移细胞数量为(12.32±0.77)个/视野,明显低于未转染对照组的(82.25±1.05)个/视野(P<0.05).211M组侵袭细胞数量为(9.22±0.32)个/视野,明显低于未转染对照组的(62.10±1.77)个/视野(P<0.05).211M组细胞Snail蛋白表达量明显降低,α-Catenin蛋白表达量明显升高,SOX4蛋白表达量明显降低.SOX4+211M组卵巢癌细胞中Snail蛋白表达量明显升高, α-Catenin蛋白表达量明显降低.双荧光素酶检验结果显示SOX4为miR-211的下游靶基因.结论 miR-211可能通过降低下游靶基因SOX4水平影响EMT相关蛋白表达,抑制卵巢癌SKOV-3细胞的EMT功能.     

低氧微环境增强MACC1调控PI3K/AKT信号通路促进结直肠癌肿瘤干细胞样特性

目的探讨低氧微环境和结肠癌转移相关基因1(MACC1)对结直肠癌(CRC)肿瘤干细胞(CSC)样特性生物学行为的影响及机制。 方法将空载体(LV-ctrl组)、MACC1过表达载体(LV-MACC1)转染结肠癌细胞HCT116,同时在低氧微环境条件下培养LV-MACC1细胞(LV-MACC1+hypoxia组)。分别应用CCK-8法及免疫细胞化学法、划痕实验、Transwell侵袭实验、肿瘤球形成实验检测细胞增殖、迁移能力、侵袭能力及体外肿瘤形成能力。免疫印迹法检测MACC1、CD133、CD44、AKT和p-AKT蛋白的表达,740 Y-P验证PI3K/AKT在MACC1诱导的肿瘤干细胞样特性中的作用。 结果与LV-ctrl组比较,LV-MACC1组的细胞增殖、迁移和侵袭能力均增强,肿瘤球形成增多,CD44、CD133和p-AKT蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。与LV-MACC1组比较,LV-MACC1+hypoxia组的细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,肿瘤球形成增多(P＜0.05)；CD44、CD133和p-AKT蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。与对照组比较,740 Y-P增加了细胞CD133和CD44蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论低氧微环境增强MACC1调控PI3K/AKT信号通路促进结直肠癌细胞出现肿瘤干细胞样特性。