P物质对血管内皮细胞一氧化氮分泌及表达的影响

目的探讨P物质（SP）对血管内皮细胞一氧化氮（NO）分泌及表达的影响.方法采用不同浓度P物质（10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L）作用于人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,分别于15 min、30 min、1 h、3 h、6 h和12 h检测培养上清液中NO含量,并应用免疫组化方法检测HUVEC内诱生型一氧化氮合成酶（iNOS）和内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）的表达.结查10-9mol/L～10-6mol/L浓度范围的SP作用15 min,均可使HUVEC内eNOS表达增强,分泌NO水平上升,并于1 h后达峰值,与对照组比较具有显著性差异（P＜0.05）,其中10-8mol/LSP浓度组作用最为明显;而不同浓度的SP对HUVEC内iNOS的表达与对照组比较无显著性差异.结论SP可通过增强HUVEC内eNOS的表达来促进NO的分泌;SP对HUVEC内iNOS的表达则无明显影响.     

二苯乙烯苷对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶及其基因的调节作用

目的探讨二苯乙烯苷（THSG）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）一氧化氮（NO）含量及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性的影响及其机制。方法培养HUVECs,分为阴性对照组和THSG 1,10,100 μmol•L－1组,用分光光度比色法检测HUVECs上清液中NO含量和eNOS活性,RT PCR法检测HUVECs eNOS mRNA水平,Western Blot检测HUVECs eNOS蛋白表达。结果与阴性对照组比较,THSG各剂量组HUVECs中NO含量和NOS活性显著提高,eNOS mRNA和蛋白表达上调（P＜0.05）,并呈剂量依赖性。结论THSG可通过上调血管内皮细胞中eNOS表达来增加NO量,从而发挥舒张血管作用。     

银杏黄酮苷对氧化损伤内皮细胞产生NO、eNOS和ICAM-1的影响

目的观察银杏黄酮苷对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）产生NO、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和人可溶性细胞间黏附分子（ICAM-1）的影响。方法体外培养HUVEC,传至3代后,以不同浓度的银杏黄酮苷分别作用于HUVEC,然后进行氧化损伤处理。以硝酸还原酶法测定培养液上清中的NO水平,免疫细胞化学法检测内皮细胞eNOS的表达,ELISA法测定细胞培养液中ICAM-1的含量。结果HUVEC在氧化损伤（H2O2100μmol/L,2h）后产生NO的量显著减少（P〈0.01）,eNOS表达下调,ICAM-1表达上调;银杏黄酮苷可以剂量依赖性的增加内皮细胞NO生成量,上调eNOS的表达,下调ICAM-1表达。结论银杏黄酮苷可能通过增加HUVEC eNOS的表达增加N0的释放、抑制ICAM-1的表达等机制对内皮细胞起保护作用。     

外源性硫化氢改善人脐静脉内皮细胞早熟性衰老与eNOS表达的关系

目的拟探讨硫化氢(H₂S)延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的关系,为延缓HUVECs衰老提供新的靶点。方法建立60μmol/L过氧化氢(H₂O₂)1 h诱导HUVECs衰老模型;通过检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SAβ-Gal)染色阳性率来研究评估外源性硫氢化钠(NaHS)预处理对衰老的作用。同时通过Western blot法和RT-PCR法检测内皮细胞中eNOS蛋白和eNOS mRNA的表达,通过硝酸盐还原酶法检测一氧化氮(NO)含量。结果与对照组相比,HUVECs经60μmol/L H₂O₂预处理后,能显著提高细胞SA β-Gal阳性率。而NaHS的预处理可以显著减少细胞SAβ-Gal阳性率,但可增加eNOS蛋白、eNOS mRNA的表达及增加NO含量。结论 NaHS可以通过上调内皮细胞中eNOS的活性和蛋白表达改善H₂O₂诱导的内皮细胞衰老。     

神经生长因子在培养的大鼠脑皮质神经细胞抑制谷氨酸引起的一氧化氮合酶基因表达及一氧化氮释放

目的 研究神经生长因子（NGF）对谷氨酸引起的原代培养的神经细胞一氧化氮（NO）释放和原生型一氧化氮合酶（cNOS)基因表达的影响。方法 测定神经细胞的生存力来分析NGF的作用，用荧光分析法测定细胞上清液NO含量，用Northern blot杂交法观察cNOS mRNA表达。结果 谷氨酸（0.5-2.0mmol/L）引起神经元大量死亡，NO过量释放，NOS抑制剂L－NAME（100μmol/L）及NGF（100μg/L）显抑制谷氨酸引起NO释放及细胞死亡。NGF（50，100μg/L）显降低谷氨酸引起的cNOS mRNA的高表达。结论 NO介导了谷氨酸对皮质神经元的毒性，NGF通过抑制cNOS活性，降低NO释放来保护大脑皮质细胞对抗谷氨酸毒性。     

丹皮酚对高脂血清损伤的人内皮细胞的保护作用(英文)

目的观察丹皮酚对高脂血清损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并探讨其作用机制。方法 20%高脂血清作用于HUVECs细胞24 h制备高脂血清损伤模型。丹皮酚组细胞加入20%高脂血清24 h后再分别加入丹皮酚124,247和495μmol.L-1。采用倒置显微镜观察HUVECs形态学变化;MTT法检测细胞存活率;用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量;用RT-PCR法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。结果与正常对照组相比,模型组中大部分细胞出现片状分离和脱落,然而丹皮酚干预后细胞形态趋于正常。丹皮酚能够显著提高细胞存活率(P<0.01)。经丹皮酚124,247和495μmol.L-1干预后,细胞存活率从模型组的(53.0±10.1)%依次升高至(68.4±9.1)%,(84.5±6.7)%,(98.1±7.5)%。丹皮酚能够显著提高NO含量和eNOS mRNA水平(P<0.01)。NO含量从模型组的(54±4)μmol.L-1依次升高至79±6,115±5和(136±6)μmol.L-1;eNOS mRNA的表达水平由模型组的0.215±0.060增加至0.451±0.045,0.563±0.013,0.704±0.068。结论丹皮酚可能通过上调高脂血清损伤人脐静脉内皮细胞eNOS的表达促进NO的合成,从而发挥其对高脂血清损伤内皮细胞的保护作用。     

洛伐他汀保护内皮祖细胞的机制研究

目的探讨洛伐他汀(lovastatin)保护内皮祖细胞(en-dothelial progenitor cells,EPCs)的机制。方法EPCs与洛伐他汀或者血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体(lectin-like oxi-dized low density lipoprotein receptor,LOX-1)的特异性阻断抗体(LOX-1 mAb)预处理24 h后,再与氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)孵育48 h。然后,检测EPCs迁移、粘附和管状结构形成能力。为探讨洛伐他汀的作用机制,检测EPCs生成一氧化氮(nitric oxide,NO)的量,内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)和LOX-1蛋白及mRNA表达。结果oxLDL抑制EPCs迁移、粘附及管状结构形成能力,降低NO产生、eNOS蛋白及mRNA表达,增加LOX-1蛋白及mRNA表达。洛伐他汀和LOX-1 mAb恢复EPCs功能,逆转oxLDL对NO、eNOS及LOX-1的调节。结论洛伐他汀通过调节eNOS和LOX-1而保护EPCs免受oxLDL的损害。     

胰岛素抵抗状态下血红素氧合酶-1/一氧化碳与一氧化氮合酶/一氧化氮相互调节的研究

目的探讨胰岛素抵抗状态下血红素氧合酶-1（HO-1）／一氧化碳（CO）与一氧化氮合酶（NOS）／一氧化氮（NO）的相互调节关系。方法通过6周高脂饮食成功复制胰岛素抵抗SD大鼠模型44只，分为胰岛素抵抗组26只，正铁血红素组10只，锌原卟啉组8只；分别腹腔注射生理盐水、正铁血红素、锌原卟啉。12只经6周普通饲料喂养的SD大鼠为对照组，给予腹腔注射生理盐水。检测血CO含量以及胸主动脉组织的NO、诱导型NOS（iNOS）、内皮型NOS（eNOS）的水平，RT-PCR检测主动脉iNOS、eNOS mRNA的表达。结果正铁血红素提高胰岛素抵抗大鼠主动脉组织eNOS活性及其mRNA表达，降低iNOS活性及其mRNA表达。降低血清及动脉组织的NO水平。增加动脉血CO水平。结论HO-1通过对NOS／NO信息通道的调节。抑制iNOS的活性，从而使应激状态下NO水平下降。发挥HO-1的血管保护作用。     

S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉安对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的影响

目的 观察S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺（SNAP）对RAW 264.7诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响,探讨NO在动脉粥样硬化（炎症）过程中的作用.方法 以RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组,采用不同浓度（30、100、300、400、500μmol/L）的SNAP对巨噬细胞进行干预24 h,应用RT-PCR法检测RAW 264.7巨噬细胞iNOS mRNA的表达,采用Western blotting技术检测iNOS蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,不同浓度SNAP（30、100、300、400、500 μmol/L）组iNOS mRNA的表达比空白对照组均明显降低（P＜0.05）,不同浓度SNAP（30、100、300 μmol/L）组iNOS蛋白表达明显低于空白对照组（P＜0.05）.结论 NO可以抑制巨噬细胞自身iNOS mRNA基因转录,降低iNOS的合成而发挥负反馈作用.     

β肾上腺素受体激动对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶磷酸化的影响

目的：观察血管内皮β肾上腺素受体激动对内皮一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达及磷酸化水平的影响,阐明β受体激动后eNOS调节的分子机制。方法：异丙肾上腺素（ISO）1μmol/L与培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）孵育30min后,裂解细胞并用免疫沉淀法分离eNOS蛋白,运用同位素两步色谱法（L-[^3H]精氨酸转化法）检测eNOS活性;蛋白免疫印迹增强化学发光法检测eNOS表达水平和eNOS蛋白丝氨酸磷酸化水平,并观察高选择性β1或β2肾上腺素受体阻断剂对上述作用的影响。结果：ISO与内皮细胞孵育30min引起eNOS活性增高;不影响eNOS蛋白表达,但丝氨酸磷酸化水平明显增加;选择性β2受体阻断剂ICI 118551可完全阻断ISO的作用,而选择性β1受体阻断剂CGP 20712A无影响。结论：ISO通过提高eNOS丝氨酸磷酸化水平增加eNOS活性,这种作用是通过β2肾上腺素受体介导的。     

白藜芦醇对高脂处理人脐静脉内皮细胞SIRT1表达、eNOS活性及NO分泌的影响

目的:探讨白藜芦醇对高脂处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)表达、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性及一氧化氮(NO)分泌的影响。方法:将HUVEC分为正常对照组、高脂组及高脂+白藜芦醇预处理组,培养24h后采用逆转录-聚合酶链反应法及Western印迹法分别检测培养细胞中SIRT1的mRNA及蛋白表达水平;分别以硝酸还原酶法、化学比色法检测培养液中的NO分泌量和eNOS活性。结果:与高脂组比较,白藜芦醇可增强SIRT1的mRNA及蛋白表达水平,升高NO分泌量及增强eNOS活性(P<0.05)。结论:白藜芦醇可能通过增强SIRT1表达及促进NO分泌而具有保护内皮细胞免受高脂损伤的作用。     

动态观察实验性高脂血症对血管内皮活性物质含量及其基因表达的影响以及DDPH的内皮细胞保护作用

目的　观察在高脂血症动物模型形成过程中不同程度的高血脂以及DDPH对动脉血中NO、ET 1含量以及动脉壁eNOS、内皮素 1基因表达的影响。方法　在实验性家兔高脂血症模型基础上 ,采用半定量逆转录多聚酶链式反应(RT PCR)等技术 ,观察了不同时期的高脂血症对内皮素及一氧化氮代谢的影响以及DDPH的干预作用。结果　不同时期的高脂饮食可造成不同程度的高脂血症 ,相应的血管内皮细胞的内皮素 1和一氧化氮的代谢紊乱也有所不同 :轻、中度高脂血症可引起eNOS及内皮素 1mRNA表达水平升高和外周血ET 1含量增高 ;而重度高脂血症可引起eNOS及内皮素mRNA表达水平下降和外周血NOP、ET 1浓度降低 ;DDPH(ig)可明显降低实验性家兔的高血脂 ,并同时促进一氧化氮代谢产物 (NOP)、ET 1含量的升高和eNOS、ET 1mRNA的表达。结论　不同程度的高脂血症对血管内皮活性物质及其基因表达的影响是不同的。DDPH可保护血管内皮细胞 ,恢复血管活性物质合成和释放 ,从而恢复血管的反应性     

Effects of resistin on insulin signaling in endothelial cells

The objective of this study was to investigate the effects of resistin on insulin signaling in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). HUVECs were incubated with recombinant human resistin (0–100 ng/mL) for 24 h. Akt and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) phosphorylation levels of endothelial cells under basal or insulin stimulated conditions were measured by Western blot. Nitric oxide (NO) production of HUVECs was also detected. The results showed that resistin could significantly inhibit Akt and eNOS phosphorylation and NO production in endothelial cells under insulin stimulated conditions (P < 0.05 vs control). But under basal conditions, treatment with resistin could result in a decrease in eNOS phosphorylation (P < 0.05 vs control) but had no effect on NO production and Akt phosphorylation levels. These findings suggested that resistin exerted an inhibitory effect on NO production by inhibiting insulin signaling and eNOS phosphorylation in endothelial cells.     

野百合碱对培养的肺动脉内皮细胞NO含量、eNOS蛋白表达及肺动脉平滑肌细胞收缩性的影响

目的研究野百合碱(monocrotaline pyrrole,MCTP)对培养的牛肺动脉内皮细胞(calf pulmonary artery endothelial cells,CPAEs)一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及肺动脉平滑肌细胞收缩的影响。方法采用荧光共聚焦激光显微镜检测培养的牛肺动脉内皮细胞的NO含量;Western blot检测eNOS蛋白表达;胶原凝胶实验分析肺动脉平滑肌细胞收缩性。结果经野百合碱处理的牛肺动脉内皮细胞NO含量和eNOS蛋白表达较对照组明显减少、肺动脉平滑肌细胞收缩性增强。结论MCTP可抑制eNOS蛋白表达,肺动脉内皮细胞NO产生受到抑制,使肺动脉平滑肌细胞收缩性增强,这些改变与肺动脉高压的形成可能存在一定关系。     

The effect of puerarin on serum nitric oxide concentration and myocardial eNOS expression in rats with myocardial infarction

Puerarin (1) is a major effective ingredient extracted from the traditional Chinese medicine Ge-gen (Radix Puerariae, RP). Recently, puerarin has been used to treat patients with coronary artery diseases (CAD). However, the mechanisms of puerarin on CAD are still not very clear. In this study, we investigated the role of puerarin on serum nitric oxide (NO) concentration, myocardial endothelial nitric oxide synthase (eNOS) gene expression, the protein expression of eNOS and inducible nitric oxide synthase (iNOS), as well as the level of protein kinase B (Akt/PKB) phosphorylation in rats with myocardial infarction. We found that puerarin (120 mg/kg/day, i.p.) could increase serum nitrite concentration in rat with myocardial ischemia (MI). It also induced the gene expression or activation of eNOS, protein expression of eNOS, and the Akt/PKB phosphorylation. From these results, we suggested that puerarin could increase serum nitric oxide level of rat with myocardial infarction, which should be one of the mechanisms of the therapeutic effect of puerarin on CAD. The increased expression of eNOS and the Akt/PKB pathway may be the underlying mechanism by which puerarin stimulates NO production.     

芝麻素对2型糖尿病大鼠主动脉内皮功能的保护作用

目的探讨芝麻素改善2型糖尿病大鼠主动脉内皮功能损伤的作用及可能机制。方法采用长期高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立2型糖尿病大鼠模型。灌服不同剂量芝麻素(120、60 mg.kg-1.d-1)8周后处死动物。离体血管灌流法测大鼠主动脉内皮依赖性舒张反应及NO生物活性,测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和总抗氧化能力(total antioxidative capacity,T-AOC),Western blot测主动脉内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitricoxide synthase,eNOS)、硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NT)和还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶亚基P47phox蛋白表达。结果与模型组相比,芝麻素(120 mg.kg-1.d-1)组内皮依赖性血管舒张功能增强,NO活性升高;血清MDA含量降低,T-AOC水平升高;主动脉eNOS蛋白表达增高,NT和P47phox蛋白表达降低。结论芝麻素可改善糖尿病大鼠血管内皮功能,其机制与上调血管eNOS表达和减轻NO氧化失活有关。     

The effect of puerarin on serum nitric oxide concentration and myocardial eNOS expression in rats with myocardial infarction

Puerarin (1) is a major effective ingredient extracted from the traditional Chinese medicine Ge-gen (Radix Puerariae, RP). Recently, puerarin has been used to treat patients with coronary artery diseases (CAD). However, the mechanisms of puerarin on CAD are still not very clear. In this study, we investigated the role of puerarin on serum nitric oxide (NO) concentration, myocardial endothelial nitric oxide synthase (eNOS) gene expression, the protein expression of eNOS and inducible nitric oxide synthase (iNOS), as well as the level of protein kinase B (Akt/PKB) phosphorylation in rats with myocardial infarction. We found that puerarin (120 mg/kg/day, i.p.) could increase serum nitrite concentration in rat with myocardial ischemia (MI). It also induced the gene expression or activation of eNOS, protein expression of eNOS, and the Akt/PKB phosphorylation. From these results, we suggested that puerarin could increase serum nitric oxide level of rat with myocardial infarction, which should be one of the mechanisms of the therapeutic effect of puerarin on CAD. The increased expression of eNOS and the Akt/PKB pathway may be the underlying mechanism by which puerarin stimulates NO production.