骨髓间充质干细胞对自然衰老小鼠T细胞的调节作用研究

目的：研究探讨小鼠骨髓间充质干细胞对自然衰老小鼠T细胞的节作用影响情况。方法：通过流式细胞术研究对比衰老小鼠和年轻小鼠T细胞培养48h后CD8＋CD28＋的共表达率差异,根据以上研究结果分别对比隔离共培养组、混合共培养组和对照组之间T细胞上CD8＋CD28＋的共表达率差异。结果：实验一中衰老组培养48h后CD8＋CD28＋共表达率为（4.08±0.3493）%,年轻组培养48h后CD8＋CD28＋共表达率为（5.04±0.5741）%。两者相比有统计学差异（P〈0.05）。实验二隔离共培养组中骨髓间充质干细胞与淋巴细胞以1：1在Transwell系统中共培养,48h后其对应的CD8＋CD28＋共表达率为（10.26±1.0784）%,混合共培养组中骨髓间充质干细胞与淋巴细胞以1：1比例在六孔板中共培养,48h后CD8＋CD28＋共表达率为（6.42±1.5680）%。对照组中淋巴细胞以106数量进行培养,48h后CD8＋CD28＋共表达率为（4.08±0.3493）%。两两对比有统计学差异（P〈0.05）。结论：衰老小鼠和年轻小鼠的T细胞在CD8＋CD28＋的共表达比例上存在差异。骨髓间充质干细胞能够通过分泌的某些细胞因子使这种衰老的T细胞变得趋向于＂年轻态＂。     

小鼠胃癌模型的建立及T细胞免疫功能的变化

目的 通过多因素联合攻击法建立小鼠原发胃癌模型并检测其免疫功能水平的变化.方法 采用BALB/C小鼠以3-甲基胆蒽(3-MCA)挂线法联合N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)灌胃法诱导小鼠胃癌.于12周及20周取血及脾细胞检测其CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg Cells)及T细胞亚群,同时取胃标本行病理学检查,通过统计学方法分析结果.结果 多因素联合攻击法诱导率为37.5%(6/16),实验组小鼠(4.52±1.97)g体质量变化有所降低(P<0.05).脾白细胞计数(372±140)×10~9升高(P<0.05).外周血(8.07±6.62)%及脾(6.45±4.13)%CD4~+CD25~+Treg细胞比例均升高(P<0.05),脾CD4~+/CD8~+细胞比值(1.95±0.62)明显升高(P<0.05).结论 多因素联合攻击法为小鼠胃癌为小鼠胃癌模型建立提供了良好的模型.小鼠胃癌发展过程中CD4~+CD25~+Treg细胞呈高表达,且在肿瘤形成后免疫功能呈现免疫抑制状态.     

大肠癌患者外周血调节性T细胞的检测及临床意义

目的观察大肠癌患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T（Treg）细胞数量的变化，探讨其与肿瘤临床病理特征的关系。方法应用流式细胞仪分析大肠癌患者和健康对照组外周血单个核细胞的Treg细胞数目，比较Treg细胞百分比变化与大肠癌临床病理特征的相关性。结果结直肠癌患者Treg细胞占CD4^＋T细胞百分比（15±8）％，与健康对照组（6．0±3．5）比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；CEA正常的结直肠癌患者Treg细胞占CD4^＋T细胞百分比（13±4）％，与CEA升高的结直肠癌患者Treg细胞（17±10）％比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；Duke＇s C和D期的结直肠癌患者Treg细胞占CD4^＋T细胞百分比（19±6）％，与A期和B期Treg细胞百分比（12±5）％比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结直肠癌患者外周血TGF-131含量（1．2±0．4）ng／L，与Treg细胞数目呈正相关（r=0．253，P〈0．05）。结论Treg细胞在大肠癌患者中比例升高，可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制，Treg细胞增加可作为大肠癌患者肿瘤进展的重要标志。     

肾移植受者外周血辅助性T淋巴细胞17、调节性T细胞表达及其平衡关系的研究

目的 探讨肾移植慢性排斥反应(CR)患者外周血辅助性T淋巴细胞(T helper,Th)17、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)、Th17/Treg变化及意义.方法 采用流式细胞术检测24例肾移植CR患者(CR组)和22名健康志愿者(正常对照组)外周血中的Th 17占CD4+T淋巴细胞的比例...     

骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞介导HOSJ—8603细胞凋亡

目的：探讨骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞（OSS－CTL）对人骨肉瘤细胞系HOS－8603细胞凋亡的诱导作用,以揭示其抗肿瘤机制。方法：OSS－CTL与HOS－8603细胞按不同效靶比共同孵育后,通过电镜观察HOS－8603细胞的超微结构变化,并用流式细胞仪定量检测OSS－CTL与HOS－8603细胞凋亡发生状况。结果：HOS－8603细胞被OSS－CTL攻击后浓缩、深染,致密的染色质沿核膜下凝聚,并有凋亡小体形成。效靶比为1：1、50：1、100：1时,HOS－8603细胞凋亡发生率分别为0．6％、12．4％及21．6％。结论：OSS－CTL可通过诱导人骨肉瘤细胞系HOS－8603发生细胞凋亡起到抗肿瘤作用,且效靶比值增大后靶细胞凋亡的数量有明显增多的趋势。     

调节性T细胞与原发性肝癌的免疫治疗

原发性肝癌的免疫治疗近年来发展迅速,在基础和临床前期研究中取得了令人鼓舞的治疗成果.但和其它恶性肿瘤类似,肝癌存在着严重的肿瘤免疫微环境抑制,大大影响了肝癌免疫治疗的效果.调节性T细胞(Treg)是一类免疫负性调控细胞,在维持人体自身免疫稳定和抗肿瘤免疫过程中起着重要作用,是形成肿瘤免疫微环境抑制的重要机制之一.有关Treg同肝癌的研究表明,Treg有可能成为肝癌免疫治疗的潜在靶点.     

特发性膜性肾病患者外周血滤泡辅助性T细胞的表达特点及临床意义

目的 探讨滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh)及其亚型在特发性膜性肾病患者外周血表达的特点,Tfh细胞与特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)免疫紊乱的关系及IMN患者Tfh细胞表达异常的临床意义。方法 纳入2020年1月至2020年12月就诊于新疆维吾尔自治区人民医院肾脏病科的新发IMN患者41例,定为病例组;并纳入同期于新疆维吾尔自治区人民医院体检中心进行健康体检的健康志愿者30名,定为健康对照组。流式细胞法检测两组外周血Tfh细胞及其两个亚群[诱导性协同共刺激分子阳性Tfh细胞(inducible synergistic co-stimulation molecules positive Tfh cell,ICOS⁺Tfh)和程序性死亡受体1阳性Tfh细胞(programmed cell death protein 1 positive Tfh cell,PD-1⁺Tfh)],并计算ICOS⁺/PD-1⁺     

不同的免疫抑制方案对肾移植受者免疫调节性T细胞及表面因子的影响

目的比较钙调磷酸酶抑制剂[环孢素A（CsA）和他克莫司（FK506）]与西罗莫司（SRL）对CD4^＋CD25^＋免疫调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Tregs）及其细胞表面标志性因子细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）和叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的影响，为临床合理选择免疫抑制方案提供依据。方法选择2004年1月至4月行。肾移植的患者30例，男女不限，年龄20～50岁，随机分为3组，每组10例。（1）CsA组：免疫抑制方案为CsA＋霉酚酸酯（MMF）＋泼尼松（Pred）；（2）FK506组：免疫抑制方案为FK506＋MMF＋Pred；（3）SRL组：免疫抑制方案为SRL＋MMF＋Pred；3组的免疫诱导治疗方案均相同。各组分别于术前、术后半年、1年、2年取血样检测CD4^＋CD25^＋high／CD4^＋T细胞比值及CD4^＋CD25^highT细胞表面CTLA-4和Foxp3的表达率；比较3组治疗方案对各项指标的影响。结果应用3种不同的免疫抑制方案后，各组受者CD4^＋CD25^high／CD4^＋T细胞比值及CD4^＋CD25^highT细胞表面CTLA-4和Foxp3的表达率均明显低于术前，虽然半年后有所上升，但CsA和FK506组各项指标上升明显较SRL组慢，SRL组各项指标恢复水平明显优于钙调磷酸酶抑制剂组。结论SRL与钙调磷酸酶抑制剂比较，对CD4^＋CD25^＋Treg细胞影响明显较轻，可能对器官移植术后移植免疫耐受的诱导和维持有促进作用。     

小鼠CD4T细胞转化的双阴性T细胞的效应分子研究

目的 研究小鼠CD4 T细胞转化的CD4-CD8-双阴性T细胞的功能特点,进一步明确双阴性T细胞的免疫抑制作用机制.方法 应用转录组测序和蛋白质质谱技术分析了小鼠转化的双阴性T细胞基因表达谱.应用流式细胞术等技术验证了细胞活化分子CD44、CD69和OX40的表达水平并应用CFSE染色法验证双阴性T细胞的杀伤功能.结果 小鼠转化的双阴性T细胞表达了与其他成熟CD4 T细胞不同的细胞表型.小鼠转化的双阴性T细胞明显高表达细胞表面活化分子CD44、CD69和OX40,以及颗粒酶、穿孔素等细胞杀伤相关基因.穿孔素基因敲除的双阴性T细胞抑制淋巴细胞增殖的能力明显降低.结论 小鼠CD4 T细胞转化的双阴性T细胞是与其他成熟CD4 T细胞不同的T细胞终末分化亚群.小鼠转化的双阴性T细胞高表达细胞活化分子和免疫杀伤类细胞因子,并主要通过穿孔素途径发挥免疫抑制功能.     

A prospective longitudinal analysis of cytomegalovirus (CMV)‐specific CD4+ and CD8+ T cells in kidney allograft recipients at risk of CMV infection

Cytomegalovirus (CMV)‐specific cellular immunity is essential in controlling CMV infection after transplantation. We investigated whether CMV‐specific T cell levels predict CMV DNAemia after kidney transplantation. Using cytokine‐flow cytometry, we enumerated interferon‐γ producing CMV‐specific CD4+ and CD8+ T cells at serial time points among CMV‐mismatched (D+/R?) and seropositive (R+) kidney recipients who received 3 months of valganciclovir prophylaxis. Among 44 patients, eight (18%) developed CMV DNAemia at a mean (±SD) time of 151 (±33) days after transplantation, including two (5%) with CMV syndrome and three (7%) with tissue‐invasive CMV disease. Cox proportional hazards regression analysis showed that CMV mismatch (D+/R?) status (HR: 13, 95% CI: 1.6–106.4; P = 0.02) and diabetes mellitus (HR: 5.6; 95%CI: 1.1–27.9; P = 0.03) were significantly associated with CMV DNAemia. In contrast, the percentage or change‐over‐time in CMV‐specific CD4+ [pp65 (P = 0.45), or CMV lysate (P = 0.22)] and CD8+ [pp65 (P = 0.43), or IE‐1 (P = 0.37)] T cells were not significantly associated with CMV DNAemia. CMV‐specific T cell assays have limited clinical utility among CMV R+ kidney recipients who received valganciclovir prophylaxis. On the other hand, the clinical utility of CMV‐specific T cell assays will need to be assessed in a larger cohort of CMV D+/R? kidney recipients who remain at high‐risk of delayed‐onset CMV disease.     

RATG对CD4+细胞和CD8+细胞共刺激分子基因表达和细胞因子分泌的影响

目的 探讨兔抗人胸腺细胞多克隆抗体(RATG)在体外对CD4+细胞和CD8+细胞共刺激分子基因表达和细胞因子分泌的影响.方法 从正常成人外周血单个核细胞中分离和纯化CD4+细胞和CD8+细胞,加入RATG,37℃下培养.分别于24、48和72 h收集培养上清液和细胞,以不处理的细胞为正常对照,正常兔Ig处理的细胞作为阴性对照.采用实时聚合酶链反应技术检测培养细胞的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)、CD154、Foxp3、OX40、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、IL-10和IL-2受体(CD25)的基因表达水平,应用Multiplex检测技术测定培养上清液中IFIN-γ、IL-2、IL_4和IL-10的水平.结果 与正常CD4+细胞比较,加入RATG的CD4+细胞培养24 h,其CTLA-4、CD154、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-2、IL-10和CD25基因转录表达均上调,阴性对照CD4+细胞则无这些基因转录表达的上调.处理48 h后,CD4+细胞的CD154和IL-2的基因转录表达呈现下调现象,而CTLA4、Foxp3、0X40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因转录水平均较24 h时明显降低.处理72 h后,CD4+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40和CD25的基因转录表达再次呈现高水平,CD154和IFN-γ的基因转录表达上调表达不明显,而IL-2和IL-10的基因转录表达则呈现明显的下调.RATG处理的CD4+细胞培养上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度显著增加,以处理24 h的水平最高,而阴性对照者未测出.与正常CD8+细胞相比较,加入RATG处理的CD8+细胞培养24 h,其CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ,、IL-2、IL-10和CD25的基因转录表达呈现明显上调,而CD154基因转录表达稍有下调.RATG处理48 h,CD8+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ和CD25基因转录表达仍维持在高水平,CD154基因转录表达仅仅呈现低水平的上调,IL-10基因转录表达水平显著下降,而IL-2的基因转录表达则明显下调.处理72 h,CD8+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因转录表达仍维持在高水平,CD154基因转录表达则呈现下调,而IL-2基因转录表达的下调更为显著.阴性对照CD8+细胞则未呈现这些基因转录的上调现象.RATG处理的CD8+细胞培养上清液中IFN-γ、IL-2和IL-10显著增多,以处理24 h的浓度最高,IL-4浓度升高的幅度较小,而正常CD8+细胞和阴性对照CD8+细胞几乎检测不到IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.结论 在体外,RATG可以刺激CD4+细胞和CD8+细胞上调多种促进免疫抑制的共刺激分子基因表达,促进其分泌与免疫调节相关的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.     

Role of Integrin CD103 in Promoting Destruction of Renal Allografts by CD8+ T Cells

Infiltration of CD8(+)TCRalphabeta(+) T-effector populations (CD8 effectors) into graft epithelial compartments has long been recognized as a key lesion in progression of clinical renal allograft rejection. While the afferent phase of allograft immunity is increasingly well-defined, the efferent pathways by which donor-reactive CD8-effector populations access and ultimately destroy the graft renal tubules (rejection per se) have received remarkably little attention. This is an important gap in our knowledge of transplantation immunology, because epithelial compartments comprise the functional elements of most commonly transplanted organs including not only kidney, but also liver, lung, pancreas, and intestine. Furthermore, there is increasing evidence that attack of graft epithelial elements by CD8-effector populations not only causes short-term graft dysfunction but is also a major contributor to development of chronic allograft nephropathy and late graft loss, which now represent the salient clinical problems. Recent studies of the T-cell integrin, alpha(E)beta(7) (CD103), have provided insight into the mechanisms that promote interaction of CD8 effectors with graft epithelial compartments. The purpose of this communication is to review the known properties of the CD103 molecule and its postulated role in the efferent phase of renal allograft rejection.     

Contrasting effects of B cell depletion on CD4+ and CD8+ memory T cell responses generated after transplantation

Alloreactive memory T cells play a key role in transplantation by accelerating allograft rejection and preventing tolerance induction. Some studies using µMT mice, which are constitutionally devoid of B cells, showed that B cells were required for the generation of memory T cells after allotransplantation. However, whether B cell depletion in normal adult mice has the same effect on memory responses by CD4⁺ and CD8⁺ T cells activated after transplantation has not been thoroughly investigated. In this study, we tested the effect of anti‐CD20 antibody‐mediated B cell depletion on CD4⁺ and CD8⁺ memory T cell alloresponses after skin transplantation in wild‐type mice. We found that B cell depletion prevented the development of memory alloresponses by CD4⁺ T cells but enhanced that of CD8⁺ memory T cells. Next, we tested the influence of B cell depletion on hematopoietic chimerism. In OT‐II CD4⁺ anti‐OVA TCR transgenic mice sensitized to ovalbumin antigen, B cell depletion also impaired allospecific memory T cell responses and thereby enhanced donor hematopoietic chimerism and T cell deletion after bone marrow transplantation. This study underscores the complexity of the relationships between B and T cells in the generation and reactivation of different memory T cell subsets after transplantation.     

不同分期前列腺癌患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的变化及与胰岛素抵抗的相关性

目的 :观察不同分期前列腺癌患者外周血单个核细胞CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化及与胰岛素抵抗的关系。方法:采用流式细胞术检测62例前列腺癌患者(患者组,临床TNM分期Ⅰ期5例、Ⅱ期16例、Ⅲ期21例、Ⅳ期20例)外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目,计算CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率;并检测其空腹胰岛素及空腹血糖水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用ELISA法测定外周血胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平,分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与胰岛素抵抗的相关性,并与42例健康体检者进行对照。结果:与健康对照组相比,前列腺癌患者HOMAIR明显升高(6.68±1.66 vs 3.68±1.42),IGF-1水平明显下降[(96.39±21.21)ng/ml vs(164.56±30.58)ng/ml],PBMC CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分率[(13.88±0.96)%vs(5.33±0.65)%]及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对值[(3.55±0.29)×107vs(1.99±0.78)×107]明显升高(P0.05,P0.01)。患者PBMC CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分率及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对数﹑HOMA-IR均随TNM分期逐渐加重而增加,IGF-1逐渐下降;相关性分析表明:CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对数均与HOMA-IR呈明显正相关(r分别为0.689、0.722,P0.01),与IGF-1呈明显负相关(r分别为-0.896、-0.747,P0.01)。结论:前列腺癌患者存在不同程度的胰岛素抵抗,且随着疾病程度的加重,外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目和比例及胰岛素抵抗逐渐加重;CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞可能通过调节胰岛素抵抗参与其形成和发展。     

反复自然流产患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的检测

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)在反复自然流产发病机制中的作用。方法:应用流式细胞术检测29例原因不明的反复自然流产妇女(URSA组)和20例正常妊娠妇女(正常对照组)外周血中CD4+CD25+Tr的比例。结果:URSA组外周血中CD4+CD25brightTr百分率[(1.98±0.96)%]显著低于正常对照组[(3.21±1.25)%,P<0.05],而2组间CD4+CD25+总百分率、CD4+CD25dim细胞百分率以及CD4+CD25bright/CD4+比值均无显著性差异(P均>0.05)。结论:URSA的发生可能与患者CD4+CD25brightTr比例下降有关,CD4+CD25brightTr在母胎免疫耐受中发挥重要作用。