骨髓间充质干细胞对自然衰老小鼠T细胞的调节作用研究

目的：研究探讨小鼠骨髓间充质干细胞对自然衰老小鼠T细胞的节作用影响情况。方法：通过流式细胞术研究对比衰老小鼠和年轻小鼠T细胞培养48h后CD8＋CD28＋的共表达率差异,根据以上研究结果分别对比隔离共培养组、混合共培养组和对照组之间T细胞上CD8＋CD28＋的共表达率差异。结果：实验一中衰老组培养48h后CD8＋CD28＋共表达率为（4.08±0.3493）%,年轻组培养48h后CD8＋CD28＋共表达率为（5.04±0.5741）%。两者相比有统计学差异（P〈0.05）。实验二隔离共培养组中骨髓间充质干细胞与淋巴细胞以1：1在Transwell系统中共培养,48h后其对应的CD8＋CD28＋共表达率为（10.26±1.0784）%,混合共培养组中骨髓间充质干细胞与淋巴细胞以1：1比例在六孔板中共培养,48h后CD8＋CD28＋共表达率为（6.42±1.5680）%。对照组中淋巴细胞以106数量进行培养,48h后CD8＋CD28＋共表达率为（4.08±0.3493）%。两两对比有统计学差异（P〈0.05）。结论：衰老小鼠和年轻小鼠的T细胞在CD8＋CD28＋的共表达比例上存在差异。骨髓间充质干细胞能够通过分泌的某些细胞因子使这种衰老的T细胞变得趋向于＂年轻态＂。     

氩氦刀冷冻联合CpG寡脱氧核苷酸治疗小鼠皮下移植性结肠癌

目的 探讨氩氦刀冷冻消融联合CpG寡脱氧核苷酸（ODN）对小鼠移植性结肠癌的治疗作用.方法 BALB/c小鼠皮下接种结肠癌CT26细胞建立荷瘤鼠模型,小鼠被分成PBS组（6只,瘤周注射PBS组）、氩氦刀组（6只,氩氦刀冷冻组）、CpG ODN组（6只,瘤周注射CpG ODN）和联合治疗组（6只,氩氦刀冷冻加瘤周注射CpG ODN）.观察各组小鼠存活及肿瘤生长情况;采用酶联免疫吸附试验检测小鼠外周血中IL-12和IFN-γ的含量;利用流式细胞仪检测小鼠外周血中CD3＋CD4＋T细胞与CD3＋CD8＋T细胞比例;对氩氦刀组和氩氦刀联合CpG ODN组治愈小鼠进行再攻击实验,观察小鼠再次成瘤率.结果 氩氦刀组和联合治疗组小鼠的平均生存时间为（80.3±5.4）d和（83.8±5.5）d,明显长于PBS组[（53.7±3.7）d]和CpG ODN组[（51.5±6.8）d],差异均有统计学意义（P＜0.05）.氩氦刀组和联合治疗组抑瘤率分别为83.8%和86.2%.治疗后20 d,氩氦刀组和联合治疗组的CD3＋CD4＋T细胞/CD3＋CD8＋T细胞比值、IL-12和IFN-γ水平均高于PBS组和CpGODN组,差异有统计学意义（P＜0.05）;与氩氦刀组比较,联合治疗组CD3＋CD4＋T细胞/CD3＋CD8＋T细胞比值差异无统计学意义,但IL-12和IFN-γ水平则显著升高（P＜0.05）.肿瘤再攻击后,氩氦刀组和联合治疗组分别有5只（5/6）和1只（1/6）再次成瘤,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 氩氦刀冷冻联合CpG ODN可以增强荷瘤鼠的抗肿瘤免疫应答,增强了氩氦刀治疗小鼠的免疫功能,减少了肿瘤再次攻击的成瘤率.     

移植抗原特异性转基因CD8+T细胞对白细胞介素2的依赖性

目的研究白细胞介素2（IL-2）在调节移植抗原特异性转基因CD8^＋T细胞介导的免疫排斥反应中的作用。方法将经荧光染科CFSE标记后的C57BL／6小鼠和2CTg小鼠（CD4敲除鼠）淋巴细胞分别植入经致死剂量γ射线照射过的两组DBA／2J小鼠体内，检测CD4^＋与CD8^＋T细胞在体内分裂增殖的时相，并用胞浆内IL-2标志染色方法测定活化后T细胞表达IL-2的能力。以Balb／c小鼠为供者，糖尿病2CTg小鼠和2C Tg-IL-2KO小鼠（IL-2敲除鼠）为受者，进行胰岛细胞移植。观察CD8^＋ T细胞在介导移植排斥中的作用。结果DBA／2J小鼠输注了C57BL／6小鼠的淋巴细胞后，CD4^＋与CD8^＋T细胞分裂增殖均非常明显，前者表达大量IL-2，后者则不表达。DBA／2J小鼠输注了2CTg小鼠的淋巴细胞后。在完全没有CD4^＋T细胞存在的情况下，CD8^＋T细胞仍明显分裂增殖并大量表达IL-2。2CTg和2CTg—IL-2KO小鼠移植胰岛细胞后，前者迅速发生排斥反应，胰岛移植物的平均存活时间仅为8d，而后者胰岛移植物的平均存活时间〉50d。结论CD8^＋T细胞在产生和利用IL-2时有很大的可塑性。CD4^＋T细胞存在时，CD8^＋T细胞能有效利用CD4^＋T细来源的IL-2进行分裂增殖，在缺乏CD4^＋T细胞时，则利用自身来源的IL-2进行分裂增殖；移植抗原特异性CD8^＋T细胞的效应功能完全依赖于IL-2，排斥反应由CD8^＋T细胞介导时，阻断IL-2／IL-2受体通路可诱导移植物长期存活。     

雷公藤内酯醇在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用

目的探讨雷公藤内酯醇（triptolide,TPT）在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用及其机理。方法采用BALB/c小鼠作为供体,进行胰岛分离,以链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的C57BL/6糖尿病小鼠作为受体,行左肾被膜下胰岛移植。将移植后糖尿病小鼠随机（随机数字表法）分为3组,每组8只。于胰岛移植术后前5 d分别给予腹腔注射1%吐温80溶剂（对照组）、TPT 50μg/kg（L-TPT组）和100μg/kg（H-TPT组）,之后隔天注射1次,至术后第14天结束。术后监测受体血糖水平变化;并于术后第10天每组随机（随机数字表法）选取3只小鼠,切取左侧肾脏行病理学检查,流式细胞术检测脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例。结果对照组、L-TPT组和H-TPT组移植胰岛的中位存活时间分别为12.6 d（9～16 d）、21.4 d（14～27 d）和27.6 d（19～34 d）;脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例分别为（5.2±0.6）%、（12.0±1.3）%和（15.7±1.8）%。与对照组相比,L-TPT组和H-TPT组小鼠移植胰岛的中位存活时间明显延长（P〈0.05）,CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例显著增高（P〈0.05）。结论 TPT通过上调移植受体CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例,减轻了胰岛移植后的排斥反应,显著延长了移植胰岛的存活时间,其免疫抑制作用呈剂量依赖性。     

基于协同刺激分子表达量建立慢性HBV感染患者T淋巴细胞免疫功能评价新体系的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血T淋巴细胞CD28、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）、程序性死亡分子-1（PD-1）和T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（Tim-3）的表达及意义.方法 连续收集2012年10月至2013年6月在苏州大学附属第一医院住院的慢性HBV感染患者102例,其中慢性乙型肝炎（CHB） 42例,乙型肝炎肝硬化30例,肝癌30例.另选30名健康体检者作为对照组.采用流式细胞术和定量聚合酶链反应（PCR）技术测定所有研究对象外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量,并采用单因素方差分析和LSD-t检验比较各组间的差异.采用Spearman秩相关分析外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量与HBV DNA载量、乙型肝炎e抗原（HBeAg）和丙氨酸转氨酶（ALT）之间的相关性.结果 慢性HBV感染患者CD4＋ CD28＋、CD8＋ CD28＋和CD4＋ CTLA-4＋的表达均低于健康对照人群,其中肝癌组的CD4＋ CD28＋表达量低于CHB组（t=2.373,P＜0.05）,肝硬化和肝癌组的CD8＋CD28＋表达量低于CHB组（t=4.324和4.088,P＜0.01）.CHB组CD8＋ PD-1＋、CD4＋ Tim-3＋和CD8＋ Tim-3＋的表达量高于肝硬化、肝癌以及健康对照组（t=3.051,3.130,3.121,3.254和3.723,P＜0.01）.相关性分析显示,CD8＋T淋巴细胞PD-1表达量与ALT水平、HBV DNA载量呈正相关（r=0.516和0.582,P＜0.01）;CD8＋T淋巴细胞Tim-3的表达量与ALT水平、HBV DNA载量也呈正相关（r=0.578和0.556,P＜0.01）.此外,CD8＋T淋巴细胞PD-1与Tim-3的表达量也呈一定的正相关（r =0.506,P＜0.01）.结论 HBV感染患者外周血T淋巴细胞表面分子异常表达与其免疫功能紊乱和疾病慢性化的发生和发展相关.     

应用羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺脂探讨新型免疫抑制剂J2作用机制

目的探讨基于CIM立体构型设计的新型免疫抑制剂（J2）在小鼠体内的免疫抑制作用以及其作用机制。方法将羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记的C57BL／6（H-2b）小鼠的淋巴细胞4×10^6～6×10^6经尾静脉注入经印钴照射（900拉德）后的DBA／2（H-2d）小鼠体内构建模型。将DBA／2小鼠随机分为5组，每组5只，模型建立后即刻腹腔注射J2，每天1次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A（10mg／kg体重）；实验组J2A组（1mg／kg体重）、J2B组（4mg／kg体重）、J2C组（8mg／kg体重）。给药3d后分组处死DBA／2小鼠取脾制备淋巴细胞，用CD3、CD4、CD8单抗分别标记受检T细胞，FACS流式细胞仪检测CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞在小鼠体内分裂增殖的情况，并检测CD4^＋T细胞的凋亡情况。结果CFSE标记C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞着染率大于99％。对照组分裂的CD4^＋T细胞（75．34±1．58）％、分裂的CD8^＋T细胞（83．48±1．25）％明显多于CsA组和实验组（P〈0．01）。J2B组和J2C组分裂的细胞数分别与CsA组比较差异无统计学意义（P〉0．05），但J2A组多于CsA组（P〈0．05）。对照组CD4^＋T细胞早期凋亡的比例（41．1±3．4）％明显高于其他各组（P〈0．01）。J2A组（35．6±4．1）％、J2B组（24．0±3．7）％和J2C组（13．6±2．3）％CD4^＋T细胞早期凋亡的比例显著高于CsA组（7．4±1．9）％（P〈0．05）。结论J2可能抑制T细胞亚群CD4^＋T细胞的活化，从而进一步抑制CD8^＋T细胞的分裂增殖而具有免疫抑制作用。     

脾切除对乙型肝炎肝硬化患者外周血T细胞及其活化抗原HLA-DR的影响

目的：检测乙型肝炎肝硬化脾切除患者外周血T细胞活化抗原HLA-DR的表达水平,探讨其临床意义。方法：以28例乙型肝炎肝硬化脾切除患者为实验组（肝硬化脾切除组）,同时以38例乙型肝炎肝硬化非脾切除患者和22例健康人为对照组（肝硬化非脾切除组、健康组）。采用流式细胞技术检测外周血T淋巴细胞亚群及HLA-DR抗原的表达。结果：肝硬化脾切除组患者外周血CD3＋、CD4＋和CD8＋百分含量分别为（41.59±6.79）%,（22.64±6.87）%和（19.16±7.28）%,显著低于健康组和肝硬化非脾切除组。肝硬化脾切除组患者CD4＋/CD8＋的比值显著高于健康组;HLA-DR在CD3＋、CD4＋和CD8＋上的表达水平分别为（25.42±5.51）%,（22.36±4.90）%和（28.53±8.35）%,与健康组相比差异无统计学意义,但在CD3＋和CD8＋上的表达水平显著低于肝硬化非脾切除组。结论：肝硬化脾切除患者存在细胞免疫功能缺陷,表现为T细胞数量的减少和活化功能的下降。     

单倍体异基因淋巴细胞输注在小鼠移植物抗宿主病和移植物抗肿瘤效应中的意义

目的建立小鼠免疫耐受模型,探讨单倍体异基因淋巴细胞输注在小鼠移植物抗宿主病（GVHD）和移植物抗肿瘤（GVT）效应中的意义。方法64只BALB／C雌性小鼠按随机数字表法分为4组,每组16只。对照组：实验第4天接种肿瘤细胞（小鼠大肠癌CT26细胞株配制成1×10^7／mL的瘤细胞悬液,接种到雌性小鼠右腋皮下）后不予任何特殊处理;化疗组：实验第4天接种肿瘤细胞,第7天开始化疗;供体淋巴细胞输注（DLI）组：实验开始时进行预处理,第4天接种肿瘤细胞,第13、15、17天输注单倍体异基因淋巴细胞（雄性BALB／C小鼠制备的脾淋巴细胞）;化疗＋DLI组：实验开始时进行预处理,第4天接种肿瘤细胞,第7天开始化疗,第13、15、17天输注单倍体异基因淋巴细胞。预处理方案为输注单倍体异基因淋巴细胞＋环磷酰胺＋输注单倍体异基因淋巴细胞。化疗方案为小鼠接种肿瘤细胞后第3天给予环磷酰胺腹腔化疗。每日观察各组小鼠临床GVHD的指标,并给予临床评分。观察荷瘤鼠肿瘤生长情况,计算接种成功后首日到小鼠死亡的时间和肿瘤质量,计算抑瘤率。应用流式细胞仪检测各组小鼠外周静脉血中T细胞数量,接种后15d各组处死3只小鼠取瘤体制作成观察切片,HE染色后光镜观察。多组比较采用方差分析,组间比较采用LSD—t检验。结果化疗＋DLI组的小鼠GVHD临床表现轻于其他组小鼠。对照组、化疗组、DLI组、化疗＋DLI组GVHD评分分别为（2．3±0．6）分、（1．5±1．1）分、（6．7±0．9）分、（3．4±0．5）分,4组比较,差异有统计学意义（F=148．68,P〈0．05）。4组小鼠全部接种CT26细胞成功。对照组、化疗组、DLI组、化疗＋DLI组小鼠肿瘤质量分别为（3．40±0．20）g、（0．80±0．10）g、（2．20±0．20）g、（0．50±0．30）g,4组比较,差异有统计学意义（F=149．17,P〈0．05）;4组小鼠抑瘤率分别为0、77％±9％、35％±3％、85％±44％;4组小鼠CD3’分别为52．3％±2．9％、44．8％±3．1％、62．9％±3．5％、65．9％±3．3％,4组比较,差异有统计学意义（F：28．04,P〈0．05）;4组小鼠CD3＋CD4＋分别为32．1％±2．6％、27．1％±1．1％、42．6％±1．8％、41．7％±2．4％,4组比较,差异有统计学意义（F=40．29,P〈0．05）;4组小鼠CD3＋CD8＋分别为22．7％±2．2％、20．7％±1．8％、26．7％±0．8％、26．1％±0．7％,4组比较,差异有统计学意义（F=10．74,P〈0．05）;4组小鼠CD3＋CD＋CD25＋分别为8．7％±0．6％、6．6％±0．6％、11．2％±0．4％、13．3％±0．7％,4组比较,差异有统计学意义（F=82．88,P〈0．05）。4组小鼠的肿瘤组织均有不同程度的坏死、出血,其中DLI组和化疗＋DLI组肿瘤组织大片坏死,瘤细胞变小,间质内有大量炎性细胞浸润,化疗＋DLI组还可见大量增生的淋巴滤泡。对照组、化疗组、DLI组、化疗＋DLI组小鼠生存时间分别为（16．8±2．5）d、（26．3±2．9）d、（23．4±2．5）d、（33．7±4．6）d,4组比较,差异有统计学意义（F=46．45,P〈0．05）。结论（1）预处理方案可以诱导小鼠的特异性免疫耐受。（2）单倍体异基因淋巴细胞输注与化疗具有协同作用,联合应用可以抑制小鼠皮下移植瘤瘤体的生长以及延长小鼠的生存时间。（3）化疗可降低供体淋巴细胞输注后诱发的GVHD效应并且提高了GVT效果。（4）CD3＋CIN＋CD25＋T淋巴细胞在降低GVHD反应中起着重要的作用。     

感染相关性噬血细胞综合征患者干扰素γ、IP-10和CXCR3的表达及临床意义

目的 探讨细胞因子干扰素γ（IFNγ）、干扰素诱导蛋白10（IP-10）及受体CXCR3在感染相关性噬血细胞综合征（infection-associated hemophagocytic syndrome,IAHPS）患者中的表达及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测43例IAHPS患者血清IFNγ和IP-10的表达,以流式细胞术检测外周血CD_4~＋和CD_8~＋T淋巴细胞表面CXCR3的表达,并以无HPS感染组（35例）和健康体检者（20名）作为对照.采用SPSS 13.0软件分析数据,组间比较采用独立样本t检验.结果 IAHPS组血清IFNγ和IP-10水平分别为（608±135）pmol/L和（939±141）pmol/L,明显高于无HPS感染组[（154±45）pmol/L、（385±119）pmol/L,t值分别为4.97和4.02,P值均〈0.05]和健康对照组[（56±18）pmol/L、（248±98）pmol/L,t值分别为5.27和4.77,P值均〈0.05].IAHPS组的CD4＋和CD8＋T淋巴细胞表面CXCR3的表达分别为（35±11）%和（23±8）%,明显高于无HPS感染组[（24±7）%、（16±7）%,t值分别为3.12和3.62,P值均〈0.05]和健康对照组[（20±6）%、（12±5）%,t值分别为4.46和4.93,P值均〈0.05].结论 IAHPS患者外周血IFNγ和IP-10表达明显升高,CD_4~＋和CD_8~＋T淋巴细胞上的受体CXCR3表达也增强,这些趋化因子的异常表达可能与HPS的发病机制相关.     

肝癌mRNA致敏的DC对SCID荷瘤鼠的抑瘤作用

目的通过重建人肝癌PBL-SCID嵌合模型来观察mRNA致敏的树突状细胞疫苗（mRNA DC）在体内的抑瘤效应并探讨机制。方法采用人外周血淋巴细胞腹腔注射法建立Hu-PBL-SCID鼠模型,尾静脉分别注射mRNA DC疫苗、抗CD4^＋、CD8^＋＋mRNA DC、未致敏的树突状细胞（DC）。每周1次,共两次,然后接种2×10^6HepG-2cells,观察鼠成瘤率、成瘤潜伏期、肿瘤体积以及测定特异性CTL活性。结果ELISA法可检测到鼠血清中人IgG水平,Hu-PBL-SCID嵌合模型重建成功,各组小鼠间成瘤率无明显差异,但mRNA DC组成瘤潜伏期延长,肿瘤生长缓慢,2周后肿瘤体积明显小于抗CD4^＋、CD8^＋＋mRNA DC组、DC组和PBS组,差异有统计学意义（P〈0.05）,实验组脾淋巴细胞对HepG-2细胞有特异性杀伤效应,而对胃癌SGC-7901细胞则无杀伤活性。结论mRNA致敏的树突状细胞疫苗体内能诱导产生明显的抑瘤作用。     

NOD小鼠未成熟树突状细胞体外诱导淋巴细胞生成并扩增调节性T细胞的研究

目的 探索非肥胖糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)诱导并扩增调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的优化方案.方法 分离、培养NOD小鼠骨髓来源的imDC和淋巴细胞,并进行混合淋巴细胞培养,分别加...     

脐血间充质干细胞心肌移植对梗死区CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞分布的影响

目的研究犬脐血间充质干细胞（cbMSC）心肌移植对梗死区CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞分布的影响。方法取犬脐带血,密度梯度离心法分离出单个核细胞,贴壁培养法扩增间质干细胞;采用随机数字表法将成年雄性杂种犬36只分为实验组和对照组,采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立急性心肌梗死动物模型;实验组取第4代细胞用5-氮杂胞苷诱导72h,LacZ报告基因标记后经冠状动脉移植入犬心脏的梗死区域,对照组注射等体积的IMDM培养液;采用免疫组织化学法检测表达pgal的移植细胞以及梗死区域CD4^＋T、CD8^＋T的分布,应用Image—Proplus 5．1软件进行图象分析。结果异体犬cbMSC移植心肌梗死区后可长期存活;图象分析显示,实验组移植后第2、4、8周时,CD4^＋T的累积光密度值（IOD）为44．35±7．03,19．29±4．11和20．27±3．51,CD4^＋T与CD8^＋T的10D比值为0．63±0．12,0．51±0．15和0．66±0．08;对照组CD4^＋T的10D值为65．78±10．27,28．02±2．59和29．79±6．83,CD4^＋T与CD8^＋T的IOD比值为1．28±0．20,1．34±0．09和1．50±0．16,两组比较实验组明显低于对照组。检测表明,实验组移植后第2、4、8周时CD8^＋T的IOD为69．88±7．84,37．80±8．83和30．81±7．42,高于对照组的51．28±10．01,20．87±4．50和19．91±2．87。结论初步的实验结果表明,犬cbMSC的同种异体移植能产生免疫耐受,其机制可能与其抑制CD4^＋T,减少局部浸润的CD4^＋T数量,降低局部CD4^＋T／CD8^＋T比值有关。     

前列腺癌患者外周血中CD4^＋CD25^high调节性T细胞及调节因子TGF-β1和COX-2的表达

目的：通过检测前列腺癌患者以及健康志愿者外周血中CD4＋CD25high调节性T细胞、TGF-β1及COX-2的表达,初步探讨CD4＋CD25high调节性T细胞在前列腺癌发病机制中的作用及其与TGF-β1和COX-2的相关性。方法：应用流式细胞术检测30例前列腺癌患者治疗前后（其中前列腺癌局限组11例,非局限组19例）及20例健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）中CD4＋CD25high调节性T细胞占CD4＋T细胞的比例;应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其外周血清中TGF-β1和COX-2的表达。对前列腺癌患者上述指标进行术前术后对比分析,另对CD4＋CD25high调节性T细胞与TGF-β1及COX-2的相关性进行分析;并探讨上述指标在前列腺癌患者局限组和非局限组间是否存在差异性。结果：流式细胞术检测显示,前列腺癌患者治疗前PBMC中CD4＋CD25high调节性T细胞占CD4＋T细胞的比例为（18.32±7.49）%,高于健康志愿者对照组（7.77±1.86）%（P〈0.05）。前列腺癌患者治疗后其比值为（17.34±5.87）%,较治疗前稍减低,但两者相比无显著差异（P〉0.05）。ELISA检测外周血清中TGF-β1和COX-2显示,前列腺癌组分别为（215.97±55.16）ng/ml和（6.88±5.14）ng/ml,对照组分别为（149.75±47.11）ng/ml和（5.65±2.69）ng/ml;前列腺癌患者外周血清中TGF-β1的表达水平高于健康志愿者对照组（P〈0.05）,COX-2的表达水平与对照组无显著差异（P〉0.05）。通过多重线性回归分析表明,前列腺癌患者PBMC中CD4＋CD25high调节性T细胞的表达与血清中TGF-β1和COX-2的表达无显著相关。前列腺癌局限组和非局限组外周血中CD4＋CD25high调节性T细胞、TGF-β1及COX-2的表达均无显著性差异（P〉0.05）。结论：前列腺癌患者PBMC中CD4＋CD25high调节性T细胞可能参与前列腺癌的发生,其增殖机制与血清中TGF-β1和COX-2的表达无关,可能与肿瘤本身及肿瘤局部微环境相关。     

甲型H1N1流感危重症患者淋巴细胞亚群和CD4~＋CD25~＋调节性T细胞的检测及其意义

目的观察甲型H1N1流感（甲流）危重症患者外周血白细胞（WBC）、淋巴细胞（L）、中性粒细胞（N）、淋巴细胞亚群及CD4＋CD25＋调节性T细胞的变化,探讨外周血淋巴细胞亚群及CD4＋CD25＋调节性T细胞在危重症甲流发病机制中的作用。方法对8例甲流危重症患者和10例健康对照外周血WBC进行检测,并用流式细胞术对其淋巴细胞亚群及CD4＋CD25＋调节性T细胞进行检测。结果患病初WBC正常者5例,降低者3例,以L降低为主,最低达0.60×109/L。病程中8例患者WBC和N均明显升高,WBC最高达36.42×109/L,N最高达33.27×109/L;甲流危重症患者CD3＋（55.13±16.16）%、CD4＋（27.25±9.51）%显著低于正常对照组（P〈0.05）;B细胞（CD19）、NK（CD16＋CD56＋）细胞、CD8＋及CD4/CD8比例较健康对照组下降,但差异无统计学意义;患者CD4＋CD25highCD127LowT细胞（1.81±1.25）%稍低于与健康对照组,差异无统计学意义（P〉0.05）;但8例甲流危重症中有6例孕妇,1例死亡患者的CD4＋CD25highCD127LowT细胞含量为本研究中最高。结论甲流危重症患者外周血CD3＋、CD4＋细胞数量显著降低、CD4＋CD25＋调节性T细胞及CD4/CD8下降,提示细胞免疫异常可能在甲流危重症的发病机制中起重要作用;淋巴细胞亚群及CD4＋CD25＋调节性T细胞数量的检测可作为监测甲流患者免疫功能的指标,对于患者的治疗和预后有重要的参考价值。     

CD4~+T淋巴细胞内ATP含量与肝癌肝移植术后肿瘤复发的关系

目的探讨CD4+T淋巴细胞内三磷腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量与原发性肝癌(肝癌)肝移植术后肿瘤复发的关系。方法 64例次肝癌肝移植,56名健康志愿者(对照组)纳入该研究。采集外周血标本,用ImmuKnowTM免疫细胞功能测定试剂盒检测CD4+T淋巴细胞内ATP值。根据样本采集时肝癌肝移植患者是否发生肝癌复发,将采集的64份全血标本分为非复发组(51份)和复发组(13份)。结果健康对照组、非复发组、复发组的CD4+T淋巴细胞内ATP含量分别为(459±121)ng/ml、(308±101)ng/ml、(138±97)ng/ml,复发组的ATP值明显低于非复发组和对照组。ATP值降低(147ng/ml)时肝癌复发的风险明显增加,与肝癌复发存在良好的相关性。结论 CD4+T淋巴细胞内ATP含量与肝癌肝移植术后肿瘤复发具有良好相关性,监测肝癌肝移植术后患者的上述指标对评估其免疫状态、制定个体化治疗方案具有实用价值。     

大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离及功能鉴定

目的：研究利用免疫磁珠分选法稳定分离正常大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的方法。方法：采用免疫磁珠两步法分离大鼠脾组织CD4^＋CD25^＋T细胞。首先采用藻红蛋白（PE）标记的抗CD25抗体和抗PE多功能磁珠试剂盒阳性分选CD25^＋T细胞,再用抗异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体和抗IgG磁珠阳性分选获得CD4^＋CD25^＋T细胞。分离后的细胞经流式细胞仪检测分离纯度,台盼蓝染色检测细胞存活率,体外增殖实验检测其对CD4^＋CD25^-T细胞的免疫抑制作用。结果：两次阳性分选后获得的CD4^＋CD25^＋T细胞纯度为（90.4±1.6）%,细胞存活率为（92.6±2.4）%。体外增殖实验表明,CD4^＋CD25^＋T细胞能明显抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖（P〈0.01）。结论：采用免疫磁珠法两次阳性分选,可稳定地获得纯度理想并有免疫抑制功能的大鼠CD4^＋CD25^＋T细胞。     

原发性肝癌患者肿瘤浸润T淋巴细胞亚群分析

目的:了解原发性肝癌患者肿瘤浸润T淋巴细胞中CD4+及CD8+的表达特点。方法:收集30例原发性肝癌患者(均有乙型肝炎病毒感染背景)的癌组织(乙肝肝癌组)和癌旁组织(乙肝癌旁组)以及30例因良性病变而行肝切除的患者的新鲜肝组织(对照组),分离组织浸润淋巴细胞,用抗CD3、CD4和CD8单克隆抗体同时荧光染色,用流式细胞仪检测各表面标志的表达情况。结果:1)乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD3+CD4+T细胞占浸润淋巴细胞的比例分别为(22.31±3.68)%、(10.69±2.47)%及(4.21±4.26)%。乙肝肝癌组显著高于乙肝癌旁组及对照组,差异有统计学意义(P=0.000,P=0.001),乙肝癌旁组高于对照组,差异亦有统计学意义(P=0.019)。2)乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD3+CD8+T细胞占浸润淋巴细胞的比例分别为(26.10±5.82)%、(21.82±2.70)%及(41.31±14.01)%,乙肝肝癌组及乙肝癌旁组显著低于对照组,差异有统计学意义(P=0.014,P=0.004),而乙肝肝癌组与乙肝癌旁组之间差异无统计学意义(P=0.651)。3)乙肝肝癌组组织浸润淋巴细胞中CD3+CD4+T细胞与CD3+CD8+T细胞的比值为0.91±0.30,显著高于乙肝癌旁组(0.47±0.11,P=0.003)及对照组(0.11±0.13,P=0.000),CD3+CD4+与CD3+CD8+T细胞的比值出现失衡。结论:原发性肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中T细胞亚群失调,表现为CD3+CD4+T细胞所占比例升高,CD3+CD8+T细胞所占的比例下降,CD3+CD4+/CD3+CD8+明显升高。     

消癌平注射液联合化疗对中晚期肺癌患者CD4＋CD25＋FOXP3＋调节型T细胞的影响

目的探讨消癌平注射液联合化疗对中晚期肺癌患者CD4＋CD25＋FOXP3＋调节型T细胞的影响。方法 71例Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌患者随机分为治疗组与对照组,治疗组36例采用化疗联合消癌平注射液;对照组35例单独采用化疗,两组化疗均采用GP方案。完成2周期后,通过流式细胞仪测定两组患者治疗前后外周血中CD4＋CD25＋FOXP3＋调节型T细胞比例。结果治疗后治疗组患者CD4＋FOXP3＋T细胞占CD4＋T细胞及CD4＋CD25＋T细胞的比例分别为（6.2±2.4）%和（27.6±6.0）%,而对照组分别为（8.2±0.5）%和（32.1±7.6）%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。CD4＋T细胞占总淋巴细胞的比例,治疗组较对照组明显提高（P〈0.05）。结论消癌平注射液是一种较为理想的免疫增强剂,联合化疗可明显改善非小细胞肺癌患者的细胞免疫功能。     

反复自然流产患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的检测

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)在反复自然流产发病机制中的作用。方法:应用流式细胞术检测29例原因不明的反复自然流产妇女(URSA组)和20例正常妊娠妇女(正常对照组)外周血中CD4+CD25+Tr的比例。结果:URSA组外周血中CD4+CD25brightTr百分率[(1.98±0.96)%]显著低于正常对照组[(3.21±1.25)%,P<0.05],而2组间CD4+CD25+总百分率、CD4+CD25dim细胞百分率以及CD4+CD25bright/CD4+比值均无显著性差异(P均>0.05)。结论:URSA的发生可能与患者CD4+CD25brightTr比例下降有关,CD4+CD25brightTr在母胎免疫耐受中发挥重要作用。