蜜环菌不同发育阶段多糖成分的研究

目的 :对蜜环菌不同发育阶段体内多糖的性质和含量进行研究。方法 :提取、分离、纯化蜜环菌菌丝体、发酵液、菌索和子实体多糖 ,应用红外光谱分析法、高效液相色谱法、凝胶渗透色谱法和凝胶色谱法等方法测定蜜环菌 4种多糖的性质、多糖组成、多糖含量和多糖分子量。结果 :蜜环菌菌丝体和发酵液多糖为单一葡萄糖组成的葡聚糖 ;菌索和子实体多糖由葡萄糖、木糖组成 ,这两种单糖在菌索多糖中的摩尔比为 1∶14,在子实体多糖中的摩尔比为 1∶10。蜜环菌多糖的分子量为 1万～7万。蜜环菌不同发育阶段多糖含量分别为菌丝体含 9.00% ;发酵液含 0.87g·(100ml)^-1;菌索含 1.12% ;子实体含 2.27%。结论 :蜜环菌不同发育阶段多糖成分的研究 ,为综合开发利用蜜环菌提供了科学依据。     

不同品种灵芝多糖含量差异研究

目的 :比较产粉灵芝与无粉灵芝多糖含量的不同,明确不同品种灵芝子实体多糖含量的差异。 方法 :光学显微镜观察灵芝子实体结构,蒽酮-硫酸法测定了不同品种灵芝多糖含量。 结果 :无粉灵芝的多糖含量比产粉灵芝多糖含量高出近1倍;灵芝子实体由4部分组成,分别为菌皮、皮层、菌肉、菌管;子实体中菌管所占比例最大,厚度比例占70％以上,且多糖含量在各部分中也最高,最高可达3.88％。 结论 :无粉灵芝多糖含量高于产粉灵芝;菌管是灵芝子实体多糖的主要来源。     

HPGPC联合HPLC-ELSD测定樟芝子实体中多糖分子量、多糖组成和单糖含量

目的:建立高效凝胶色谱法(HPGPC)测定樟芝子实体中多糖分子量,HPLC-ELSD法测定樟芝子实体多糖组成和单糖含量的分析方法。方法:HPGPC法采用ShodexOHPak SB-803HQ色谱柱(300 mm×8 mm);流动相:0.70%硫酸钠溶液(含0.02%的叠氮钠);柱温:35℃,流速:0.5 mL/min。HPLC-ELSD法采用Zorbax Carbohydrate色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(80∶20);柱温:30℃;流速:0.5 mL/min。联合上述两种方法进行测定。结果:采用上述HPGPC法可以成功计算出樟芝子实体多糖的分子量,采用HPLC-ELSD法可以测定樟芝多糖的组成及单糖的含量。结论:HPGPC联合HPLC-ELSD法可以简单快速的测定樟芝子实体多糖的分子量、多糖的组成和单糖的含量,可以用于樟芝子实体多糖提取纯化后的质量控制。     

灵芝生长过程中灵芝多糖含量变化规律研究

目的：对灵芝人工袋料栽培生长过程中灵芝多糖的含量变化情况进行跟踪测量，研究灵芝多糖在灵芝生长过程中的含量变化规律。方法：采用硫酸一苯酚法对不同生育时期的灵芝培养基和子实体样品中灵芝多糖的含量进行测定，比较不同生育时期灵芝多糖含量的变化规律。结果：在灵芝培养基中，随着灵芝菌丝的生长和成熟，灵芝多糖的含量逐步增加，直到开伞期达到最高值，从孢子弹射期后，灵芝多糖含量急剧下降。在灵芝子实体中，从灵芝现蕾开始，灵芝多糖含量逐步增加，到孢子弹射前达到最高值，孢子弹射后，含量急剧下降。从子实体和培养基中灵芝多糖含量的对比情况来看，在孢子弹射前，子实体中灵芝多糖含量远高于培养基；但在孢子弹射后，子实体和培养基中灵芝多糖含量均急剧下降，二者的灵芝多糖含量没有极显著差异。结论：在灵芝生产中，应该选择在开伞期后、孢子弹射前采收子实体为宜。这时采收的灵芝子实体产品灵芝多糖含量最高，品质最好。将灵芝采收后的培养基用于灵芝多糖的提取，进行合理的开发利用，可以大力提高灵芝生产的经济效益。     

灵芝子实体与菌丝体及破壁菌丝主要活性成份的比较

目的:对人工栽培的灵芝子实体、茵丝体及破壁处理菌丝体的主要化学成分进行测定分析,为灵芝药材品质及检测产品质量提供依据.方法:用硫酸蒽酮法测定灵芝多糖含量;采用齐墩果酸作对照,香草醛一冰醋酸显色,分光光度计测吸光值测定三萜化合物.结果:无论多糖还是三萜化合物,菌丝体含量均高于子实体,破壁处理高于未处理.     

假单胞杆菌、灵芝等几种菌的发酵液对猪苓菌生长的影响

 目的：证明在猪苓菌发酵过程中加入假单胞杆菌、灵芝、金针菇等几种菌的发酵液对猪苓多糖产生是否具有促进作用。方法：采用平板培养法、发酵培养法。平板培养法直接测定生长量；发酵培养所得的发酵液采用3，5-二硝基水杨酸法测定多糖含量。结果：在猪苓菌发酵培养过程中加入假单胞杆菌、灵芝、金针菇等几种菌的发酵液可使猪苓菌球数量增多、重量大、多糖含量高。以假单胞杆菌发酵液的处理效果最佳；在平板培养时，培养25d菌落直径达72．25mm，在发酵培养过程中，在最佳产糖期发酵液中粗多糖含量达7．800mg·ml^－1，而对照分别为48．63mm和5．200mg·ml^－1。结论：在猪苓菌丝体培养过程中加入假单胞杆菌、灵芝、金针菇等几种菌的发酵液均对其菌丝的生长及发酵过程中多糖的产生具有促进作用。     

灵芝的液体培养

灵芝是一种名贵中药,属担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、灵芝菌属.近年研究表明灵芝含有能提高人体免疫能力、具有抗肿瘤活性的灵芝多糖,所以灵芝具有抗癌、延缓衰老、镇静止痛和护肝等功效[1],且毒性极低[2].灵芝的子实体和菌丝体在药用价值方面相同,目前我国主要从灵芝子实体中提取灵芝多糖,人工栽培子实体生产周期长,生产力低下,而采用液体发酵法,工业化生产灵芝菌丝体和灵芝多糖可缩短生产周期,大大提高灵芝多糖的生产能力.因此,要发展灵芝生产,提高灵芝液体培养的生物学产量有重要意义.为了提高灵芝菌丝体液体发酵的生产能力,为工业化生产灵芝菌丝体及多糖提供经济实用的培养基,我们对灵芝菌丝体液体生长的营养条件进行了研究.     

猴头菌丝体多糖的化学研究

目的:对猴头菌丝体的多糖类成分进行化学组成及结构研究。方法:DEAE 纤维素、DEAE-Sephadex 柱分离,葡聚糖凝胶柱层析测定纯度,凝胶过滤法测定分子量,酶解、气相色谱及光谱分析等测定化学组成及结构。结果和结论:从猴头菌丝体中分离得到5 个多糖均一体,其主要成分HEPA₁ 分子量6 .2 ×10⁴ ,为以葡萄糖为主的杂多糖,单糖组成摩尔比为葡萄糖∶阿拉伯糖∶木糖= 33 .1∶1 .7∶1 .0 ;HEPA₄ 分子量2 .6 ×10⁴ ,为杂多糖肽,肽部分由17 种氨基酸组成,占糖肽的3 .8 % ;HEPB2 分子量1 .2×10⁴ ,为以葡萄糖为主的杂多糖,单糖组成摩尔比为葡萄糖∶阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖= 50 .7∶2 .1∶1 .0∶2 .4 。各均一体单糖间的甙键构型均以α-甙键为主。     

蓝光对灵芝子实体生长和糖代谢相关酶的影响

目的研究蓝光对灵芝子实体生长、生物量、多糖及4种糖代谢相关酶的影响,为灵芝子实体培养中光质的优化提供依据。方法用自然光和蓝光两种光质处理栽培灵芝,在灵芝不同生长发育时期观察其形态变化,采用苯酚-硫酸法测定灵芝多糖含量,并测定灵芝子实体4种糖代谢相关酶活性,同时采用SPSS 17.0统计软件分析多糖含量与糖代谢酶间的相关性。结果研究发现,在灵芝子实体的生长发育过程中,蓝光处理生物量积累、多糖含量及4种糖代谢相关酶活性均显著高于自然光处理,多糖含量与HK、PGI、α-PGM活性变化趋势一致,均是先升高后降低,最大值均出现在菌盖形成期,多糖含量与G-6-PDH活性变化趋势存在差异。相关性分析显示,蓝光处理的灵芝子实体多糖含量与HK、PGI、α-PGM活性呈现显著的相关性(P0.01)。结论研究表明蓝光处理对于灵芝子实体产量有明显的促进作用,促进多糖的积累和相关酶活的活性。由此推测HK、PGI、α-PGM是灵芝多糖合成的关键酶。     

2个灵芝菌株子实体和孢子粉活性成分比较研究

目的:研究分析2个灵芝菌株(A1、A2)子实体和孢子粉中活性成分含量差异,筛选出适宜北京地区栽培的优质高产灵芝菌株。方法:采用分光光度法及超高效液相色谱(UPLC)法分别对2个灵芝菌株子实体和孢子粉中多糖、总三萜和3种灵芝酸(灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝酸C2)含量进行检测。结果:灵芝A2菌株孢子粉中多糖含量显著高于A1菌株,A1菌株子实体所含总三萜和3种灵芝酸含量均高于A2菌株。结论:综合比较分析,在北京地区以获得优质灵芝子实体为目的,栽培A1菌株更适合,以孢子粉为主要生产目的,适宜栽培A2灵芝菌株。     

富锗灵芝菌丝体中2种同工酶及脂肪酸、无机元素含量分析

 目的　研究富锗灵芝菌丝体中超氧物歧化酶、酯酶2种同工酶及脂肪酸、无机元素含量的变化。方法　聚丙烯酰胺凝胶电泳分析同工酶谱,气相色谱-质谱联用(GC-MS)测定脂肪酸,电感耦合等离子体发射光谱分析(ICP-AES)测定无机元素。结果　富锗灵芝菌丝体与普通灵芝菌丝体比较:①同工酶谱存在明显差异;②多不饱和脂肪酸相对含量提高;③除锗、钾含量提高外,其余7种无机元素含量均降低。结论　锗能促进灵芝菌丝体超氧物歧化酶、酯酶的活性和提高其多不饱和脂肪酸含量。     

稀土对灵芝生长影响的初步研究

 目的：研究在灵芝培养料中添加稀土元素对灵芝的菌丝生长、子实体的鲜重和干重的影响。方法：采用稀土拌料的方法。结果：稀土的浓度对灵芝菌丝的生长均有一定程度的抑制作用,抑制率在7.49％～10.96％之间;稀土浓度对灵芝的菌丝均有增白作用,洁白度随稀土浓度的增加而降低。稀土在100,150μg·g^-1时,灵芝子实体的干重和鲜重有显著增加。在50μg·g^-1时,虽灵芝子实体的鲜重有所减少,但其干重却增加2.0％。结论：稀土浓度在100～150μg·g^-1时,灵芝的产量增加显著,可供生产使用。     

Ganoderma lucidum mycelia enhance innate immunity by activating NF-kappaB

Ganoderma lucidum is a popular medicinal mushroom in China and Japan for its immunomodulatory and antitumor effects. The goal of this research is to investigate the effect of dried mycelia of Ganoderma lucidum produced by submerged cultivation on the enhancement of innate immune response. We found that Ganoderma lucidum mycelia (0.2-1.6 mg/ml) stimulated TNF-alpha and IL-6 production after 8h treatment in human whole blood. IFN-gamma release from human whole blood was also enhanced after 3 day-culture with Ganoderma lucidum mycelia (0.2-1.0mg/ml). However, Ganoderma lucidum mycelia did not potentiate nitric oxide production in RAW264.7 cells. To better understand the possible immuno-enhancement mechanisms involved, we focused on nuclear factor (NF)-kappaB activation. Electrophoretic mobility shift assay revealed that the Ganoderma lucidum mycelia (1.6 mg/ml) activated kappaB DNA binding activity in RAW264.7 cells. These results provide supporting evidences for the immunomodulatory effect of Ganoderma lucidum mycelia.     

Antiherpetic activities of various protein bound polysaccharides isolated from Ganoderma lucidum

To investigate antiherpetic substances from Ganoderma lucidum, various protein bound polysaccharides, GLhw, GLhw-01, GLhw-02, GLhw-03, were isolated by activity-guided isolation from water soluble substances of the carpophores. These substances were examined for their antiviral activities against herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2) by plaque reduction assay in vitro. Among them, the acidic protein bound polysaccharide, GLhw-02 of a brownish substance, exhibited the most potent antherpetic activity with 50% effective concentrations (EC50) of 300 approximately 520 microg/ml in Vero and HEp-2 cells, and its selectivity indices (SI) were more than 20. GLhw-02 was identified to consist mainly of polysaccharide (approximately 40.6%) and protein (approximately 7.80%) by anthrone test and Lowry-Folin test, and showed the usual molar ratio (C:H:O = 1:2:1) of carbohydrates by elemental analysis. These results suggest that GLhw-02 possesses the possibility of being developed from a new antiherpetic agent.     

高效液相色谱法测定灵芝提取物中尿苷和腺苷含量

目的:建立一种测定灵芝提取物中尿苷和腺苷含量的高效液相色谱法,测定不同产地灵芝提取物中的尿苷和腺苷的含量。方法:色谱柱:Diamonsil C18(2)(5μm,250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈-0.04 M KH2PO4=9∶91;流速:1 mL·min-1,检测波长:260 nm,柱温:35℃。结果:尿苷和腺苷分别在0.2~50μg·mL-1和0.1~20μg·mL-1范围内,峰面积与浓度的线性关系良好;尿苷和腺苷的平均准确度均在99.91%~102.12%之间;日内、日间精密度RSD均小于1.76%,样品回收率均在94.42%~100.50%之间。6个不同产地的灵芝提取物中,以福建灵芝中尿苷含量和吉林灵芝中腺苷含量最高,其他5个产地灵芝中尿苷和腺苷含量差异无统计学意义。结论:该方法特异性强、准确度高、重复性好,可用于测定灵芝提取物中的尿苷和腺苷含量,为灵芝提取物的评价提供参考和依据。     

灵芝菌对茯苓药材的生物转化研究

目的：利用灵芝菌对中药材茯苓药材进行固态生物转化,研究转化产物中总多糖和总三萜量的变化情况。方法：采用微波法提取茯苓及转化产物中的总多糖并采用苯酚-硫酸法进行含量测定;采用超声法提取茯苓及转化产物中总三萜并用香草醛-高氯酸法进行含量测定。结果：经生物转化后产物中的总多糖含量明显高于未经转化的茯苓药材（P<0.01）,而总三萜含量明显升高（P<0.01）,说明灵芝菌的生物转化过程改变了茯苓药材的原始特性;茯苓对灵芝生长具有促进作用,表现为灵芝菌丝生长旺盛未受抑制、转化产物中总多糖及总三萜含量显著高于茯苓原药材。结论：利用灵芝菌对中药茯苓进行生物转化来提高总多糖和总三萜含量,具有方法简单、成本低等优点,在中药现代化中有较高的应用价值。     

固体灵芝精的制备及质量控制

 目的对固体灵芝精的制备及质量控制标准进行研究。方法固体灵芝精是由泰山赤灵经水提取、真空雾化干燥而制成;用可见 紫外分光光度法测定多糖,高速氨基酸自动分析仪测定各种游离氨基酸,高频等离子体发射光谱仪测定无机元素。结果：固体灵芝精所含的有效成分与泰山赤灵芝相同,且按相同重量计含量高得多,其总糖含量泰山赤灵芝为0.0018%,而固体灵芝精为20.5%,微量无素的含量比泰山赤灵芝高100～1000倍。结论提取工艺设计合理,制剂稳定,质量控制方法准确可靠。     

不同生长阶段灵芝中微量元素与重金属含量分析

利用ICP-MS、AFS和AAS对同一菌种灵芝深层发酵菌丝体、不同生长阶段的子实体及孢子粉中微量元素与重金属含量进行分析。发酵菌丝体、子实体及孢子粉中均含有生物必需微量元素和重金属,以孢子粉中含量相对较高。硒的含量在各个阶段几乎相同,而锗的含量则呈现生物富集的现象。