紫外线诱导细胞凋亡分子机制的研究进展

由于近年来大气中臭氧层的破坏，辐射到地面的紫外线（ultraviolet，UV）增多。近年来研究发现UV不仅能引发日光性皮炎、皮肤老化、免疫抑制、白内障和皮肤癌等疾病，还能诱导细胞发生凋亡。机体通过凋亡这种方式清除受损的细胞，从而避免癌症的发生。因此，有关UV诱导细胞凋亡的分子机制成为此领域研究的热点。     

紫外线致HeP-G2细胞调亡的分子机制初探

紫外线 (UV)是人类最常接触的具基因毒作用的因子。为探索紫外线辐射致细胞凋亡和组织损伤的分子机制 ,本研究采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经紫外线辐射处理的Hep G2细胞P5 3、Caspase3、bcl 2和P2 1等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况。结果表明经紫外线辐射处理的Hep G2细胞的P5 3、Caspase3和bcl 2基因表达增加 ,而P2 1未见明显改变 ,提示P5 3、Caspase基因在紫外线辐射诱导的细胞凋亡中起重要作用 ,bcl 2增高可能有抑制细胞的过度凋亡 ,保持内在平衡的作用。P2 1保持不变或下降可能反映了细胞对DNA损伤应答的新途径。     

135Hz极低频电磁场对Hep G-2细胞生长及凋亡的影响

目的：观察135Hz极低频电磁场（ELF）照射对HepG-2细胞生长及凋亡的影响．方法：用MTT比色法、流式细胞仪,检测经135Hz ELF照射6,12,24h后相应时问点细胞的活性、细胞周期、凋亡细胞的比例,并用扫描电镜以及透射电镜观察细胞超微结构变化．结果：ELF磁场暴露后,与相应对照组相比其A值均下降（P〈0．01）,细胞活性随照射时问延长而下降（P〈0．01）;使HepG-2细胞G1期阻滞,凋亡率随照射时间延长逐渐增高．扫描电镜以及透射电镜观察到实验组细胞几种特殊的形态学特征：凋亡细胞收缩,出泡,质膜及细胞器保持完整．染色质浓缩于核膜,最后,细胞解离成凋亡小体．结论：135Hz的ELF照射抑制HepG-2细胞生长并促进其凋亡．     

三氧化二砷诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的初步研究

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人喉癌Hep - 2细胞的生物学效应及其作用机制。 方法　Hep - 2细胞经不同浓度的As2 O3 处理 4 8h ,通过MTT法计算细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　As2 O3在 2、1、0 .5、0 .2 5 μmol/L的浓度范围作用Hep - 2细胞 4 8h ,细胞生长抑制率分别为 82 %、6 5 %、33%、15 % ,IC50 为0 .85± 0 .2 5 μmol/L ;细胞凋亡率分别为 2 1.7%、19%、5 .2 %、4 .6 %。 结论　As2 O3 对人喉癌Hep - 2细胞的抑制作用呈剂量依赖性 ,细胞生长抑制率与细胞凋亡率呈正的直线相关关系 (P <0 .0 5 )。     

COX-2 siRNA诱导人肝癌Hep3B细胞凋亡实验研究

目的:观察COX-2在人肝癌细胞Hep3B中的表达及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默COX-2基因对COX-2 mRNA和蛋白表达、细胞增殖及凋亡的影响。方法:将siRNA-COX-2质粒载体转染Hep3B细胞,WST-8法检测细胞增殖抑制情况,透射电镜观察凋亡小体出现情况;筛选单克隆细胞株Hep3B-sh,采用RT-PCR和Western blotting检测COX-2 mRNA和蛋白情况。结果:siRNA-COX-2能抑制Hep3B细胞的增殖,稳定转染pshRNA-COX-2可使Hep3B细胞中COX-2 mRNA及蛋白的表达明显减弱(P<0.01);透射电镜下可见凋亡小体出现,发生凋亡细胞数增加。结论:COX-2siRNA能有效抑制肝癌Hep3B细胞中COX-2的表达和细胞的增殖,促进凋亡发生,为肝细胞癌基因治疗提供实验依据和治疗靶点。     

缺血性脑损伤细胞凋亡的分子机制

有关凋亡 (apoptosis)的分子机制研究显示 ,凋亡是一个遗传性的程序性过程 ,涉及一系列基因的激活表达及调控 ,凋亡性细胞死亡不仅是正常神经系统发育所必需 ,而且参与脑缺血、脑外伤以及多种中枢神经系统变性疾病的病理性神经元死亡过程 ,越来越多的证据表明凋亡在脑损伤病理生理过程中发挥重要作用[1-2]。缺血性脑损伤所致的细胞凋亡可分3个阶段 :信号传递阶段、中央调控阶段和结构改变阶段。信号传递阶段是指脑缺血后神经细胞膜接受凋亡信号 ,凋亡因子进入神经元内启动凋亡程序的阶段 ,主要包括 ;死亡受体与配体结合或与其抗体交联 ,导致…     

UCP2对紫外线诱导细胞凋亡的影响

研究表明,紫外线辐射诱导细胞内活性氧(ROS)过度累积是导致细胞氧化损伤的最直接因素之一。长波紫外线(UVA)或中波紫外线(UVB)照射角质形成细胞后均可引起DNA损伤,UVA主要是通过生成ROS间接损伤DNA,UVB则是直接损伤DNA[1-2]。线粒体是细胞中的膜性结     

肝肿瘤细胞Hep G2培养条件的摸索及代谢能力的研究

目的 以MTT试验方法计算环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)对Hep G2细胞和体外安全性评价常用细胞系CHL、3T3细胞的50%致死浓度LC50,间接比较几种细胞系的代谢能力并确定Hep G2细胞适宜的培养试验条件.方法 用需代谢活化的阳性物CP以含血清和不含血清的培养液配制染毒液,按10.0,7.21,5.19,3.73,2.69,1.93,1.39,1.00 mg/ml浓度对CHL、3T3细胞和以不同培养液培养的Hep G2细胞染毒,在24 h时间点以MTT方法对细胞存活情况进行分析,计算LC50,比较各种细胞和不同培养条件下Hep G2细胞对CP的代谢活化水平,并观察不同培养条件下Hep G2细胞的生长状态.结果 MTT试验结果表明Hep G2细胞对CP的代谢能力最强,CHL细胞次之,而3T3细胞对CP的代谢能力最弱;三种不同培养液培养的Hep G2细胞无论染毒液是含血清的还是不含血清的均观察到CP对细胞的LC50:MEM＞DMEM＞RPMI 1640,Hep G2细胞在DMEM、RPMI 1640两种培养液中均生长状态良好,尤其是RPMI 1640培养的Hep G2细胞,在无血清的染毒液培养下即能获得较多的细胞又能表现出较强的代谢CP的能力.结论 Hep G2细胞对CP的代谢活化能力较CHL和3T3细胞强,以RPMI 1640培养的Hep G2细胞生长状态良好且较DMEM和MEM培养的细胞表现出更强的代谢活化CP的能力,能获得较理想的培养和试验结果.     

细胞凋亡及其在牙周炎发病中的分子机制

细胞凋亡（apoptosis）在牙周炎发病中起重要作用。细胞凋亡的调控基因主要有p53、Bcl-2、c-mys,而Fas和FasL相互作用与细胞凋亡发生关系密切。牙周炎细胞凋亡主要有两个途径,其一是通过线粒体诱导的内途径,另一是通过死亡受体信号传导通道发挥作用的外途径。本文探讨细胞凋亡在牙周炎的基因调控机制,为牙周炎的防治提供依据。     

紫外线诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡研究

目的 :研究紫外线照射对小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡率的影响。方法 :用UV照射培养的小鼠B16黑色素瘤细胞 ,于照射后不同时段分别用流式细胞仪 (FCM )及原位末端标记法 (TUNEL法 )检测B16细胞凋亡率。结果 :UV照射后 0h、12h、2 4h及 36h ,B16细胞的凋亡率分别为 (4 .13± 0 .15 ) % ;(9.2± 0 .74 ) % ;(2 1.6± 1.2 8) % ;(36 .7± 1 5 6 ) %。各时间段B16细胞的凋亡率与对照组B16细胞的 (2 .3± 0 .2 6 ) %相比均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :紫外线照射可诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡。     

H_2O_2致Hep-G2细胞凋亡及其分子机制初探

目的本研究旨在探索H2O2 诱导Hep-G2发生凋亡及其致凋亡发生的分子机制。方法采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经H2O2 处理的Hep-G2细胞Fas、bcl-2、P53、P21、Caspase3等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况。结果检测结果表明H2O2 处理的Hep-G2细胞的Fas和Caspase3基因表达增加, bcl-2基因表达减少,而P53、P21基因的表达未见明显改变,提示Fas、Caspase3和bcl-2基因在H2O2 诱导的细胞凋亡中起重要作用;bcl-2通过抑制诱导凋亡所致的细胞永生化,可能在肿瘤的发生、发展中起重要作用。P53、P21、保持不变,可能反映了H2O2 诱导的细胞凋亡不依赖P53途径。     

Expression of P53 during lens epithelial cell apoptosis induced by ultraviolet

Cataract is a disease induced by multi- factorsand its pathologic mechanism isstill unknown.Ithasbeen accepted that ultraviolet irradiation ( UVR) isone of the most important pathogenesis.Li etal hasreported that UVR could induce the apoptosis of lensepithelial cells( LECs) and resulted in lens opacities.In order to study the pathologic mechanism of UVR-induced cataract at molecular and cellular levels,weinvestigated the apoptosisof LECs and the expressionof P5 3.1　 MATERIALSAND M…     

非小细胞肺癌组织中P53和C-erbB-2蛋白的表达

目的：检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织中P53和C-erbB-2蛋白的表达。方法：采用免疫组织化学sP法检测30例癌旁正常组织和58例NSCLC组织中P53和C-erbB-2的表达,结合临床资料进行分析。结果：NSCLC组织中P53和C-erbB．2蛋白的阳性表达率分别为63．8％（37／58）和70．7％（41／58）,均高于癌旁正常组织（13．3％（4／30）,17．7％（5／30）,P均〈0．05）。NSCLC淋巴结转移组P53和C-erbB-2蛋白的阳性表达率分别为75．O％和80．O％,均高于无淋巴结转移组（38．9％,50．0％,P均〈0．05）。NSCLC组织中P53和C-erbB-2的表达有关（x2=5．32,P〈0．05）。结论：NSCLC组织中P53和C-erbB-2蛋白高表达,2者可能共同参与了NSCLC的发生发展与转移。     

子宫颈鳞状细胞癌中P53、MDM2的表达与HPV16感染的关系

目的探讨子宫颈鳞状细胞癌中P53、MDM2蛋白的表达及其与高危HPV16型感染的关系。方法免疫组化二步法检测43例子宫颈鳞状细胞癌、20例CIN、15例慢性子宫颈炎中P53、MDM2的表达,HPV16的检测应用原位杂交法。结果43例子宫颈鳞状细胞癌中HPV、P53、MDM2的表达率分别为46.51%、34.88%、25.58%,CIN中的表达率分别为45%、5%、15%,HPV16在慢性宫颈炎中的表达率为6.67%,P53、MDM2未见阳性表达,三组比较有统计学意义（P〈0.05）。P53、MDM2在HPV16阳性和阴性两组间的表达差异无统计学意义。结论HPV16与子宫颈鳞状细胞癌的发生密切相关,P53、MDM2的表达并不因HPV16的存在而消失。     

不同肝癌细胞系中P53/P21/MDM2表达初步观察

选用P53状态不同的Hep3B、PLC／PRF／5、HCC—9204、HepG2、HepG2215细胞，通过Western印迹分析观察各细胞P53蛋白以及P53下游基因p21、mdm2蛋白表达情况；将报告基因PG13-CAT转染细胞，通过观察CAT酶表达水平反映各细胞中P53的反式活化功能；P21—LUC质粒细胞内转染，比较不同细胞中P53对P21启动子的活化情况。结果显示，PLC／PRF／5细胞中P53蛋白高表达、低功能，但P21蛋白以及报告基因P21—LUC转染细胞后荧光素酶均具有较高水平表达；Hep3B细胞中P53蛋白无表达、无功能，P21蛋白低表达，MDM2蛋白表达相对较高；HCC—9204细胞具有较高MDM2表达，P53蛋白表达及功能均较低，P21亦呈低表达；HepG2215较HepG2细胞具有较高的P53、P21蛋白表达，P53活化报告基因的活性也较强。结果提示，肝癌细胞中P53活性与其表达水平、存在状态有关；某些细胞中P21的活化表达存在不依赖于P53的途径；MDM2与P53的表达具有负性相关倾向。     

抗氧化剂和Ca2+清除剂调控As2O3诱导白血病细胞凋亡中Bcl-2和p53的表达

目的: 研究抗氧化剂NAC, NDMS, CAT和Ca2+清除剂Quin 2调控As2O3诱导白血病细胞株NB4, K562, HL-60凋亡时Bcl-2和p53表达的作用. 方法: 不同浓度As2O3处理细胞内Bcl-2和p53用相应抗体标记, 并用流式细胞仪检测. 结果: 0.6,2.7和8.1 μmol*L-1 As2O3作用72 h能诱导NB4, K562和HL-60发生0.45±0.04, 0.58±0.06和0.62±0.08凋亡, 上述浓度药物能使NB4, K562, HL-60 3种细胞中Bcl-2蛋白的平均荧光强度分别由109±31, 101±32, 87±23下降到68±22, 54±33, 66±18.相反, 可使3种细胞中p53蛋白的平均荧光强度分别由18±5, 2±1, 3±1上升到30±9, 15±6, 28±8. 而抗氧化剂NAC, NDMS, CAT和Ca2+清除剂Quin 2对3种细胞内Bcl-2和p53表达没有显著影响, 但能抑制As2O3引起的p53表达上调. 对As2O3引起的Bcl-2下降则显示了不同的调控作用. 结论: As2O3诱导的Bcl-2下降、p53上升和细胞凋亡可被抗氧化剂和Ca2+清除剂抑制.     

野生型P53基因诱导人肝癌HepG2/5-Fu耐药细胞株凋亡的研究

目的 探讨野生型P53基因与人肝癌耐药的相关性，为肝癌的临床治疗提供新的依据。方法 以IONP—PLL纳米颗粒为基因转运载体，将wtp53基因转入HepG2／5-Fu耐药性细胞株，MTT法、台盼兰拒染实验和Hochest33258染色等分析5-Fu对转染有wtp53基因的HepG2／5-Fu细胞的杀伤效应。结果 转染wtp53基因的HepG2／5-Fu细胞对5-Fu呈剂量依赖性杀伤效应和时间依赖性杀伤效应，在5-Fu作用下，能发生明显的凋亡效应。结论 以wtp53基因为靶点的肝癌基因治疗有望成为治疗晚期肝癌的一种新的治疗策略。     

TRIM21促进T淋巴细胞凋亡的分子机制及临床应用价值分析

目的 探讨E3连接酶TRIM21在anti-Fas诱导的T淋巴细胞凋亡中的作用及其分子机制,为评价TRIM21在临床上的应用奠定基础.方法 构建TRIM21真核表达载体,设计TRIM21干扰片段,分别将它们过度表达于Jurkat T淋巴细胞中.将流式细胞仪分选的阳性细胞分为空载无药物组、空载药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21无药物组和TRIM21药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)分别进行药物处理,将转入对照双链小干扰RNA(siRNA)与TRIM21 siRNA的Jurkat T淋巴细胞分为对照siRNA无药物组、对照siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21 siRNA无药物组和TRIM21 siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h),并采用Annexin V/碘化丙啶双染法测定Jurkat T淋巴细胞的凋亡率.将分选Jurkat T淋巴细胞分为空载组和TRIM21过表达组,分别采用蛋白质免疫印迹法与实时定量聚合酶链反应检测TRIM21过度表达对抗凋亡蛋白c-FLICE抑制蛋白(FLIP)的蛋白质及mRNA水平表达的影响.结果 空载药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于空载无药物组(P＜0.001),TRIM21药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于TRIM21无药物组(P＜0.001).对照siRNA药物处理组的JurkatT淋巴细胞凋亡率显著高于对照siRNA无药物组(P＜0.001),但TRIM21 siRNA药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率大大降低,显著低于对照siRNA药物处理组(P＜0.001).以空载组的c-FLIP(L)蛋白质表达量为100％,TRIM21过表达组则为(31.25±0.25)％.以空载组的c-FLIP(L) mRNA表达量为100％,TRIM21过表达组则为(25.60±3.33)％.结论 TRIM21能抑制抗凋亡蛋白c-FLIP的表达,增强T淋巴细胞对Fas诱导细胞凋亡的敏感性.     

P53、P21和MDM2蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨P53、P21和MDM2蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中发生、发展中的作用以及相互关系.方法:采用免疫组化方法检测79例维族宫颈癌组织和40例维族正常宫颈组织中P53、P21和MDM2蛋白表达情况.结果:宫颈癌组织中P53蛋白的阳性表达率为68.4%,明显高于正常对照组12.5%(P＜0.01);P21蛋白阳性表达率96.2%,明显高于正常对照组35.0%(P＜0.01);MDM2蛋白阳性表达率为39.2%(31/79),明显高于正常对照组10.0%(P＜0.01).结论:P53、P21和MDM2蛋白的高表达与宫颈癌的发生、发展有关.