精液凝固蛋白Semenogelin和附睾蛋白酶抑制剂Eppin的研究进展

精液凝固蛋白Semenogelin (Sg)与附睾蛋白酶抑制剂Eppin参与精液凝胶的形成,并调控精液液化.Sg通过Eppin与精子结合可抑制精子活动.抗Eppin抗体与Sg对精子活动有着类似的抑制作用,重组Eppin免疫的猴子出现不育,从不育猴子提取的抗Eppin抗体在体外可显著抑制人类精子的活动.现就Sg、Eppin在精液凝固过程中的相互作用,抗Eppin抗体、Sg对精子抑制作用及其分子机制的研究进展作一综述.     

附睾蛋白酶抑制剂Eppin与精囊Fibronectin相互作用

Eppin(SPINLW1;基因号:57119)基因是定位于人类染色体20q12-13.2的单拷贝基因[1-2],仅在睾丸和附睾中表达.以重组Eppin制作的疫苗可造成猴子的不育,既往研究认为Eppin调控精液的凝固和液化过程,影响精子的获能和运动,其详细的机制尚不清楚.     

附睾蛋白酶抑制蛋白的研究进展

附睾蛋白酶抑制蛋白(Eppin)基因是最近克隆到的一种人类和小鼠附睾和睾丸中特异性表达的基因。Epp in蛋白是一种富含半胱氨酸同时含有乳清酸蛋白(WAP)和牛胰蛋白酶抑制蛋白(BPTI)结构域的分泌蛋白,它与精子成熟和生殖有关,此外还参与了人类附睾的天然免疫系统。针对Epp in蛋白的免疫避孕是一种有效和安全的方式,但还需进一步验证它的安全性。本文就Epp in的生殖和免疫功能及在免疫避孕中的应用进行综述。     

人精子表面乳铁蛋白受体的分子特性

人类精子表面存在附睾蛋白酶抑制剂(Eppin)、Clusterin和乳铁蛋白(Lf)蛋白质复合体~([1]),调控着精液的凝固和液化过程,人类精浆中以及精子表面均含有丰富的乳铁蛋白(Lf).本研究旨在观察人类精子膜表面是否存在与之相结合的受体(LfR).     

附睾蛋白酶抑制剂对前列腺特异性抗原活性的抑制作用

目的 观察附睾蛋白酶抑制剂(Eppin)是否抑制前列腺特异性抗原(PSA)酶活性.方法 利用分子克隆技术体外构建、表达、纯化重组Eppin和PSA.利用PSA水解变色底物S-2586的颜色变化,于分光光度计下测定其吸光度值,代表PSA酶反应速度,反应体系是在缓冲液0.1 mol/LTris-HCl,pH8.3,1.0 mol/L NaCl中进行,观察不同浓度Eppin的加入对PSA酶反应速度的影响.结果通过体外重组技术获得较高纯度和生理活性的Eppin和PSA,通过PSA水解变色底物S-2586的检测,重组PSA具有酶活性,0.3 μmol/L PSA与底物S-2586反应的饱和曲线分析显示Km(反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度)值是0.5 μmol,底物饱和浓度0.2 mmol/L,分别加入4中不同浓度的重组Eppin 0、0.56、1.16、2.32 μmol/L,随着Eppin浓度的增加,PSA水解其变色底物S-2586速度明显减慢,PSA活性越来越受到抑制.结论 附睾蛋白酶抑制剂(Eppin)是前列腺特异性抗原(PSA)一种新的特异性抑制剂.

Abstract：

Objective To investigate the inhibitory effects of the epididymal protease inhibitor (Eppin) on the activity of prostate specific antigen (PSA).Methods Recombinant Eppin and recombinant PSA were produced by molecular cloning technique in vitro.The enzymatical analysis of Eppin inhibiting PSA was done in the reaction buffer 0.1 mol/L Tris-HC1,pH 8.3,1.0 mol/L NaCl.The hydrolysis of velocity of PSA to the chromogenic substrate S-2586 was detected by spectrometer.Results Recombinant Eppin and PSA with high purity were produced by molecular cloning technique.The recombinant PSA had the enzymatical activity by hydrolyzing its substrate S-2586.0.3μmol/L PSA and the substate S-2586 reaction to the saturation curve analysis showed that Km( response rate of half the maximum reaction rate when the substrate concentration) value was 0.5μmol,and substrate saturated concentration was 0.2 mmol/L.With the increases of Eppin (0,0.56,1.16,2.32μmol/L),the hydrolysis velocity of PSA to S-2586 was slowed down.Conclusion Eppin,as a new inhibitor,specifically inhibits the activity of PSA.     

附睾环节的节育研究现况

附睾是男性生殖系统的一个重要器官 ,是精子成熟与贮存的场所。现公认最为理想的男用避孕环节是干扰精子成熟以及附睾机能。一些抗生育药物可直接作用于附睾 ,阻止精子正常发育 ;用附睾及精浆等分泌的某些具生物活性的蛋白去免疫动物 ,也能导致动物不育或生育能力下降。这些无疑为开发新型男性避孕、节育方法指明方向。     

附睾环节的节育研究概况

附睾是男性生殖系统的一个重要器官,是精子成熟与贮存的场所。现公认最为理想的男用避孕环节是干扰精子成熟以及附睾机能。一些抗生育药物可直接作用于附睾,阻止精子正常发育;用附睾及精浆等分泌的某些具生物活性的蛋白去免疫动物,也能导致动物不育或生育下降。这些无疑为开发新型男性避孕、节育方法指明方向。     

育精阴对雄性豚鼠免疫性不育的实验研究

目的　研究中药育精阴治疗免疫性不育的作用及其机理。方法　运用主动免疫法造成豚鼠实验性变态反应性睾丸炎 (EAO)模型 ,观察睾丸生精细胞和附睾尾部精子质量的变化。运用不同剂量育精阴灌胃 ,观察育精阴对生精上皮和附睾尾部精子质量的作用。结果　发现实验性变态反应性睾丸炎造成睾丸生精细胞退行性病变 ,附睾精子质量下降。育精阴可减轻和修复实验性变态反应对睾丸附睾的损伤 ,提高附睾精子质量。结论　育精阴对实验性变态反应性睾丸炎造成的免疫损伤有修复作用     

冻融附睾精子卵浆内显微注射治疗阻塞性无精子症不育二例

附睾取精结合卵浆内单精子注射（ＩＣＳＩ）治疗无精子症不育［１］时,若将ＩＣＳＩ后多余的附睾精子冷冻保存,当患者助孕治疗失败需要再次治疗时,可用冻融附睾精子进行ＩＣＳＩ,避免再次附睾手术。作者用冻融附睾精子ＩＣＳＩ治疗２对阻塞性无精子症的不育夫妇获得妊...     

冻融附睾精子卵浆内显微注射治疗阻塞性无精子症不育

附睾取精结合卵浆内单精子注射（ＩＣＳＩ）治疗无精子症不育时，若将多余附睾精子冻存，当患者再次助孕治疗时，可用冻融附睾精子行ＩＣＳＩ，避免再次附睾手术的损伤，我们采用此方法治疗３对无精子症不育夫妇。报告如下。材料与方法３例患者中，２例为先天性输精管缺如...     

葡萄糖调节蛋白前体GRP78和肿瘤排斥抗原GP96为仓鼠附睾头部精子特有

哺乳动物睾丸中的精子经过“附睾成熟”期,由静止状态转变成为运动状态。该过程中精子从附睾头部向附睾尾部移动,同时精子发生了一系列的形态、生理和生化改变,如蛋白组成和蛋白修饰的改变可能会影响精子获能的潜能。本实验使用基质辅助激光解吸／电离串联质谱（MALDI-MS／MS）法分析仓鼠睾丸头部和尾部精子的蛋白组学,成功发现了113个蛋白质点。对113个蛋白质点进一步对照比较发现30个蛋白质点（对应20个蛋白）的密度发生了显著改变,其中附睾尾部精子5个蛋白的密度增加,11个蛋白密度减少;此外,葡萄糖调节蛋白前体GRP78和肿瘤排斥抗原GP96为仓鼠附睾头部精子特有,而纤维蛋白原样蛋白1为附睾尾部精子所特有。几个蛋白密度增加可能与附睾成熟过程中精子代谢和ATP产生相关。一些蛋白如ERp57,GRP78,GP96,Hsp60,Hsp70和二氢硫辛酰胺S-乙酰转移酶的密度改变通过免疫印迹法得到验证。本研究首次报道了仓鼠精子的蛋白质组学研究,全面展示了仓鼠精子附睾成熟过程中的蛋白结构改变。     

移动性附睾

最近有报告附睾由二根韧带固定至睾丸,上韧带固定附睾头,下韧带固定体及尾,另有输精管韧带连接输精管近端和附睾尾,使保持一个锐角。这些韧带对保存睾丸附睾的输出小管及血管的完整性起重要作用,并可保持附睾的旋绕平顺。若韧带缺如,附睾系膜变宽,附睾可向两边自由移动。体部下端及尾部的旋绕可松散,附睾输精管角变钝,这种移动性附睾可造成不育。在一组特发性不育症中占9％,在200名病人(100名有生育力,100名无生育力)中经检查,有9名不育者发现移动附睾。其临床特征典型,附睾远离睾丸而可自由移动。3例持续无精子,6例间歇无精子。睾丸活检示小管扩张,9例作附睾固定于睾丸手术,3例示精液质量改善,     

Molecular mechanism of epididymal protease inhibitor modulating the liquefaction of human semen

Aim： To study the molecular mechanism of epididymal protease inhibitor （Eppin） modulating the process of prostate specific antigen （PSA） digesting semenogelin （Sg）. Methods： Human Sg cDNA （nucleotides 82-849） and Eppin cDNA （nucleotides 70-423） were generated by polymerase chain reaction （PCR） and cloned into pET-100D/TOPO. Recombinant Eppin and Sg （rEppin and rSg） were produced by BL21 （DE3）. The association of Eppin with Sg was studied by far-western immunoblot and radioautography. In vitro the digestion of rSg by PSA in the presence or absence of rEppin was studied. The effect of anti-Q20E （N-terminal） and C-terminal of Eppin on Eppin-Sg binding was monitored. Results： Eppin binds Sg on the surface of human spermatozoa with the C-terminal of Eppin （amino acids 75-133）. rSg was digested with PSA and many low molecular weight fragments were produced. When rEppin is bound to rSg, then digested by PSA, incomplete digestion and a 15-kDa fragment results. Antibody binding to the N-terminal of rEppin did not affect rSg digestion. Addition of antibodies to the C-terminal of rEppin inhibited the modulating effect of rEppin. Conclusion： Eppin protects a 15-kDa fragment of rSg from hydrolysis by PSA.     

急性热应激引起大鼠附睾早期微环境的变化

目的研究热应激引起大鼠附睾早期微环境的变化。方法建立大鼠附睾热应激动物模型,42℃水浴30min,随后提取应激组和正常组附睾头部蛋白质,利用双向凝胶电泳分离、质谱鉴定大鼠附睾受热后差异变化的蛋白质;进一步通过生物信息学、Western blot和免疫组化等方法进行验证。结果蛋白质组学研究二维电泳图谱能检测到92个蛋白,经过质谱分析得出其中有24个蛋白具有意义,其中有12个蛋白上调,12个蛋白下调。热应激组与正常组有显著的差异蛋白质,这些具有意义的差异蛋白质经过免疫组化和Westem blot分析法也得出一致性的结论。结论热应激能导致附睾早期微环境变化,尤其是对附睾蛋白质差异表达以及对精子在附睾中的成熟过程有着显著的影响。     

精索静脉曲张不育患者精浆α－糖苷酶的检测及其意义

对１５例正常生育男性和３８例精索静脉曲张不育男性精浆中附睾功能的特异性标记酶α－１．４－糖苷酶（α－Ｇ）活性进行测定，以探讨精索静脉曲张不育患者附睾功能有无异常以及精索静脉曲张程度、治疗效果与α－活性的关系。结果显示，精索静脉曲张不育患者α－Ｇ活性较正常人明显下降（Ｐ＜０．００１）；亚临床型以及临床各级精索静脉曲张者精浆α－Ｇ活性无差别。手术治疗病人中，精子质量无改善者精浆α－Ｇ活性较改善者降低更为明显。说明附睾功能异常及其异常程度与精索静脉曲张不育的形成和预后有一定的联系。亚临床型精索静脉曲张有必要积极治疗     

双侧附睾肿块伴不育患者α-葡糖苷酶结果分析

目的:通过测定不育患者精浆α-葡糖苷酶含量与双侧附睾肿块大小和精子密度的关系,探讨α-葡糖苷酶在附睾梗阻性无精子症诊断中的价值。方法:根据精子密度将76例不育患者分为正常精子密度组(n=27),少精子症组(n=21),梗阻性无精子症组(n=28),分别测定不育患者和正常对照人群的性激素、精浆α-葡糖苷酶及WBC染色,各组分别行阴囊触诊和阴囊B超检查双侧附睾肿块的大小。结果:梗阻性无精子症组精浆α-葡糖苷酶含量(22.01±6.10)U/m l与各组比较差异有显著性(P<0.05),且精浆α-葡糖苷酶含量和双侧附睾肿块体积(r=-0.417,P<0.05)与白细胞(r=-0.342,P<0.05)呈负相关。结论:α-葡糖苷酶在判断附睾肿块导致的梗阻性无精子症中有一定的诊断价值。     

抽取附睾精子作人工受精治疗梗阻性无精子症初步报告

本文从５例梗阻性无精子症不育患者输精和收集附睾精子。其中除１例为附睾先天性梗阻，作附睾－输精管吻俣术外，余均为远端输精管不通畅或缺如。第二性症发育良好，性激素，睾丸容积等均正常。抽吸附睾液放入术前精浆和精子保养液中冷冻保存，解决复苏后４例行人工授精。     

泌尿生殖道炎症及相关指标与男性不育关系的研究进展

随着现代社会生活方式的改变与工作压力的增加,人类的生育能力有明显下降的趋势。不育是指夫妻之间发生无避孕性生活长达一年而女方仍未受孕。在全球范围内,有15%的育龄夫妇不育。不育的发生受到男女双方因素的影响,其中因男性因素导致的不育占50%左右[1]。先天解剖结构畸形、精索静脉曲张、环境毒物接触、免疫与炎症、遗传与内分泌等诸多因素可导致男性不育。有研究发现6.9~8.5%的不育男性存在泌尿生殖道的炎症与感染[2]。男性睾丸、附睾、前列腺等内生殖器的生物功能都可受到炎症的损害,从而导致精子发生、精子运输以及精子功能的改变。本文讨论了泌尿生殖道炎症与男性不育之间的关系,以及相关炎症指标的临床意义。     

锌-α_2-糖蛋白(ZAG)在雄性大鼠生殖系统中表达差异的研究

目的 探讨(研究)锌-α2-糖蛋白(ZAG)在成年雄性SD大鼠生殖系统中的表达情况.方法 应用商品化试剂盒分别抽提RNA和蛋白质,利用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)和免疫印迹(Westernblot)的方法研究ZAG在SD大鼠生殖系统各器官中的表达情况.结果 雄性SD大鼠生殖系统各器官中均有ZAG蛋白的存在,不同组织表达有一定的差异,尤其是在尾部附睾及附睾脂肪组织中表达较高,其它组织相对较低.结论 大鼠生殖系统中ZAG主要分布在尾部附睾及附睾脂肪组织.通过对ZAG蛋白在雄性SD大鼠生殖系统表达差异的研究,有助于进一步了解该蛋白在雄性生殖系统中的生物学功能.     

人精子表面Eppin蛋白分子网络的研究

Eppin(SPINLW1;基因号:57119)基因是定位于人类染色体20q12-13.2的单拷贝基因[1-2],属丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中的成员,用125I标记的重组Eppin对新鲜的、有活动力的"上游"精子饱和性结合分析表明,精子表面可能存在Eppin的结合受体[3].