聚合酶链式反应与DNA探针检测临床标本中结核分支杆菌的评价

本文应用ＰＣＲ联合ＤＮＡ探针快速检测临床标本中结核杆菌ＤＮＡ。对临床３０７例标本同时进行ＰＣＲ和Ｓｏｕｅｈｅｒｎ杂交。其中临床确诊为结核病的１０９例，二者的阳性率分别为４９．６％、６０．６％。未确诊结核病的１９８例，二者均为阳性２例、单纯ＰＣＨ阳性３例。结果表明ＤＮＡ探针检测的灵敏性和特异性高于ＰＣＲ。二者联合使用，有助于对疑难电泳图谱的分析和判断，降低假阴性和假阳性率。     

聚合酶链式反应与DNA探针检测临床标本中结核分支杆菌的评价

本文应用ＰＣＲ联合ＤＮＡ探针快速检测临床标本中结核杆菌ＤＮＡ。对临床３０７例标本同时进行ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交。     

聚合酶链反应检测结核分支杆菌临床标本制备方法的研究

分别检测６种结核菌ＤＮＡ提取方法的裂解效能、聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增灵敏度及其对临床标本的阳性检出率。结果显示，ＴＥ－ＴｒｉｔｏｎＸ法和Ｃｈｅｌｅｘ－１００法能裂解绝大多数的细菌并具最高的敏感性，可检测出少至１０个菌细胞，其临床标本的阳性检出率分别为９３．３％和８６．６％；而其余４种方法效果较差，ＴＥ－Ｔｒｉｔｏｎ和Ｃｈｅｌｅｘ－１００两种沸水浴法简捷、经济、高效，值得临床实验室推广使用。     

结核分支杆菌DNA的单管巢式聚合酶链反应检测

目的探讨单管巢式聚合酶链反应（ＳＮＰＣＲ）检测石蜡包埋组织结核分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性。方法应用普通ＰＣＲ（ＧＰＣＲ）、双管巢式ＰＣＲ（ＤＮＰＣＲ）和ＳＮＰＣＲ对结核分支杆菌ＢＣＧ和３０例结核性淋巴结炎石蜡包埋组织进行结核分支杆菌复合群ＩＳ６１１０特异插入序列片段ＤＮＡ检测。结果ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测ＢＣＧＤＮＡ均于１５ｆｇ以上呈现阳性结果，其敏感性明显优于ＧＰＣＲ（４８０ｆｇ）。ＧＰＣＲ、ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测３０例结核性淋巴结炎阳性率分别为４３％、１００％和１００％，抗酸染色阳性率（１０％）与３种ＰＣＲ法相比差异有非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＧＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ相比差异亦具非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＳＮＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ相同。结论巢式ＰＣＲ检测淋巴结石蜡包埋组织结核分支杆菌的敏感性显著高于ＧＰＣＲ，其中ＳＮＰＣＲ具有与ＤＮＰＣＲ相同的特异性和敏感性，并具有更大的实用价值。     

聚合酶链反应检测结核分支杆菌临床标本制备方法的研究

分别检测６种结核菌ＤＮＡ提取方法的裂解效能、聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增灵敏度及其对临床标本的阳性检出率，结果显示，ＴＥ－ＴｒｉｔｏｎＸ法和Ｃｈｅｌｅｘ－１００法能裂解绝大多数的细菌并具最高的敏感性，可检测出少至１０个菌细胞。其临床标本的阳性检出率分别为９３．３％和８６．６％，而其余４种方法效果较差，ＴＥ－Ｔｒｉｔｏｎ和Ｃｈｅｌｅｘ－１００两种沸水浴法简捷、经济，高效，值得临床实验室推广使用。     

应用多重聚合酶链反应法检测并鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌DNA

OBJECTIVE: To improve the specificity and sensitivity of polymerase chain reaction (PCR) technique for detecting and identification of DNA of M. tuberculosis and M. nontuberculosis. METHOD: Three pairs of oligonucleotide primer were used in triplex-PCR. A 383 bp DNA fragment encoding part of the 65,000 mycobacterial surface antigen, a 123 bp fragment corresponding to a specific M. tuberculosis complex sequence which was the insertion sequence 6110 (IS 6110) and a 268 bp fragment for human beta-globin were amplified by triplex-PCR respectively. RESULT: The sensitivity of the triplex-PCR-electrophoresis for the DNA of mycobacterium was 0.6 pg. The specific bands of 383 bp and 123 bp among the amplified DNA from M. hominis, M. bovis, BCG and M. simiae were present in the agarose gel. By contrast, only a band of 383 bp was found among the M. nontuberculosis which contained M. avium, M. chelonae, M. scrofulaceum, M. xenopi, M. kansasii, M. intracellulare and M. smegmatis. Compared with the standard strains, there was an additional 268 bp band in simulated clinical samples infected by Mycobacterium. The above 3 specific bands were found neither in other 15 bacterial species tested nor in Mycoplasma pneumoniae. 182 clinical samples were examined by culture, smear and triplex-PCR. 72 nontuberculous clinical samples were all negative. In 110 tuberculosis clinical samples, the positive rates were 2.7%, 13.6% and 32.7%, respectively. CONCLUSION: The triplex-PCR possesses a high specificity and sensitivity. This method could detect and identify the DNA of M. tuberculosis and M. nontuberculosis except M. simiae. It is a valuable tool for early diagnosis and differentiation for infection of M. tuberculosis and M. nontuberculosis.     

聚合酶链反应检测原发性肺结核分支杆菌DNA

比较研究了标准微生物技术与聚合酶链反应(PCR)检测儿童原发性肺结核的敏感性。PCR 可用于检测肺结核分支杆菌基因组中多拷贝IS 6110插入元件.患者和方法22例原发性肺结核患儿。男女各11例,平均年龄7±3岁.其中14例根据以下两项或多项标准确诊:有发热、体重下降、咳嗽等症状及体检     

标本处理方法对聚合酶链反应检测结核分支杆菌结果的影响

目的探讨应用十二烷基硫酸钠（SDS）处理标本在结核分支杆菌聚合酶链反应（PCR）中的价值。方法从186例活动性结核病人收集痰、胸腹水、脑脊液、尿、血液等标本266份,标本分别用SDS和常规方法进行处理。两种方法处理的标本同时用PCR-反相膜杂交试验检测结核分支杆菌,并将结果进行比较。结果用SDS和常规方法处理的标本,PCR-反相膜杂交试验结核分支杆菌的检出率分别为65.0%（173/266）和51.5%（136/266）。通过配对计数资料卡方检验,SDS法和常规法之间的差异具有非常显著性意义（χ     

AmpliSensor-聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌及临床应用

目的探讨Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ－聚合酶链反应（ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）在结核病诊断中的价值。方法采用ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ对７８４例结核病患者及１６０例肺癌患者的标本进行检测，并与ＰＣＲ（凝胶电泳后，经溴化乙锭染色）、涂片、培养等法比较。结果ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ的敏感性显著高于涂片及培养（Ｐ＜０．０１）。特异性较ＰＣＲ法高。结论ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ可以通过标准曲线划定检出下限，并可换算出标本中原始的靶ＤＮＡ值，同时具有较高的特异性和敏感性，对肺结核尤其是肺外结核的诊断有一定的临床意义。     

临床标本结核分支杆菌检测

迄今为止,对结核病的病原体快速诊断的方法仍很有限,涂片镜检结核分支杆菌的方法虽简便快速,但阳性率低。细菌培养结果右面靠,但需时3～8周。因此多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法^[1,2]。我们应用抗酸染色、细菌培养、荧光染色、PCR、PCR反向探针膜杂交法检测临床标本中的结构分支杆菌,并作比较分析报告如下。     

简便裂解法和多聚酶链反应检测临床标本中结核分支杆菌的DNA

结核病一直是世界范围内重要的传染病之一,由于AIDS 的流行,有增长的趋势。作者讨论了用多聚酶链反应(PCR)来检测临床标本中结核杆菌的DNA,同时比较了两种简便的用于结核杆菌裂解和DNA 释放的方法:超声振荡和用非离子清洁剂,蛋白酶K 裂解.来自结核病患者的75份标本(痰48份、胸膜渗出液20份、尿2份、脓肿穿刺液2份、滑膜腔积液1份、淋巴结活检标本1份、腹水1份)经罗丹明直接染色镜检,接种到固体培养基或Bactec 系统上.正常人咽部冲洗液6份和非结核病患者痰标本12份作为阴性对照.先将25份培养阳性标本(痰16份,胸膜渗出液8份、腹水1份)分别用超声振荡和酶裂解。试验结果表明,酶裂解优于超声振荡用于结核菌DNA的检测.75份来自66例结核病患者的标本,用染色镜检、培养和PCR 分别检测。48份(64%)抗酸染色阳     

结核病人外周血结核分支杆菌聚合酶链反应检测及临床意义

采用巢式聚合酶链反应 (ＰＣＲ)方法扩增结核病人外周血单核细胞 (ＰＢＭＣ)结核分支杆菌 (ＭＴＢ)ＩＳ6 110部分序列 ,并将其克隆与测序 ,结合临床资料分析探讨其临床意义。材料与方法　①对象 :我院 1999年住院的 77例活动性肺结核病人。另以同期住院的非结核病人 (10例肝炎 ,30例肺炎和慢性阻塞性肺疾病 )作对照。②ＰＣＲ引物 :根据Ｔｈｉｅｒｒｙ等[1] 报道的结核分支杆菌ＩＳ6 110序列 ,采用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件 ,在其保守区设计两对套式引物 ,委托上海生工生物工程公司合成。引物序列为 :ＴＢ15′ＣＧＴＧＡＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＴ…     

聚合酶链反应检测结节病与结核病患者分支杆菌DNA

结节病的病因不明,但其组织学改变类似结核病,因此分支杆菌很可能引起结节病发病。采用聚合酶链反应(PCR),可检测结节病临床标本中分支杆菌DNA。 104例受试者中62例疑有结核病,20例疑有结节病,余22例支气管肺癌、咯血及间质性肺疾病等的患者为对照。所有受试者均行支气管镜检,77例获得支     

应用聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的研究

应用聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的研究谭耀驹李一耕谭守勇我们选用分子量为３８０００片段长度为４１９ｂｐ（３８０００－４１９ｂｐ）系统，对患者的痰液、胸液、脑脊液、支气管冲洗液、淋巴分泌物等进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测，探讨其在实际应用中的可信性...     

DNA扩增抑制试验在聚合酶链反应检测结核分支杆菌中的作用

ＤＮＡ扩增抑制试验在聚合酶链反应检测结核分支杆菌中的作用张显忠郭爱军曹洪林杨明峰我们建立了ＤＮＡ扩增抑制试验，检测系统中抑制因素所造成聚合酶链反应（ＰＣＲ）试验的假阴性，以使ＰＣＲ技术更加完善。材料与方法：标本来源：病例系本院住院肺结核病患者，根据临...