食管鳞癌组织中MMP-2和E-cadherin的表达及其意义

目的探讨食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706中MMP-2和E—cadherin的表达及其与食管鳞癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化S-P法检测100例食管鳞癌组织及食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706中MMP-2和E—cadherin蛋白的表达，应用RT—PCR技术检测两株细胞系中MMP-2mRNA和E—cadherinmR—NA的表达。结果食管鳞癌组织中MMP-2蛋白阳性率明显高于正常黏膜组织（P〈0．01），且与癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移密切相关（P〈0．05）；E—cadhefin蛋白在食管鳞癌组织中阳性率明显低于正常黏膜组织（P〈0．01），与癌组织分化程度、有无淋巴结转移呈负相关（P〈0．05），与浸润深度无明显相关性（P〉0．05）；MMP-2和E—cadherin在食管鳞癌中的表达呈负相关（P〈0．01）；细胞系中MMP-2mRNA和E—cadherinmRNA的表达有显著性差异（P〈0．01）。结论食管鳞癌组织中MMP-2呈高表达；E—cadherin呈低表达，二者对食管癌的发生、浸润转移具有相反的调节作用；联合检测其变化可更准确预测食管癌的恶性生物学行为。     

神经型钙黏附蛋白的表达对食管鳞癌侵袭和转移的影响

目的:探讨神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义.以及RNA干扰(RNAi)沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的影响.方法:采用免疫组织化学PV法和RT-PCR检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中N-cadherin蛋白和mRNA的表达.将N-cadherin基因的RNA干扰载体稳定转染至EC9706.通过RT-PCR和Western blotting检测RNAi的效果:运用Transwell体外侵袭实验检测RNAi后细胞侵袭能力的改变.结果:正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中N-cadherin的阳性表达率依次升高,分别为29.0％(18/62)、61.3％(19/31)、75.8％(47/62),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);N-cadherin蛋白的阳性表达率与食管鳞癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关(x2=6.916,6.924,4.486,P<0.05).食管鳞状细胞癌组织中N-cadherinmRNA的相对含量高于癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织(0.6631±0.0162 vs0.4613±0.0239,0.1538±0.0192),组间比较差异有统计学意义(x2=819.242,P<0.01).RNAi后EC9706中N-cadherin的表达显著下降;Transwell小室体外侵袭实验显示,EC9706的体外侵袭能力也降低.结论:食管鳞癌组织中N-cadherin的高表达与食管鳞癌的浸润、恶化有密切的关系.RNAi沉默N-cadherin基因表达能够使EC9706体外侵袭能力降低.     

曲古霉素A对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的作用及机制

目的探讨曲古霉素A（TSA）对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的影响及机制。方法用AnnexinV-FITC和PI进行双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TSA对食管癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果 1.0μmol/L的TSA诱导EC9706细胞凋亡率增加（P〈0.05）,且呈浓度依赖性;0.5μmol/L的TSA作用48 h后细胞凋亡率增加（P〈0.05）,呈时间依赖性。TSA处理的EC9706细胞Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;TSA诱导EC9706细胞caspase-8及caspase-9裂解活化,且随作用时间延长逐步升高。结论一定量的TSA可以诱导EC9706细胞凋亡,凋亡原因与Bax表达增强、Bcl-2减少以及凋亡细胞中caspase-8及caspase-9介导的caspase-3活化有关。     

食管癌Mal基因5′调控区的克隆及序列分析

目的：探讨Mal基因在人食管癌中表达下调的机制。方法Mal基因5′调控区是一高G＋C含量的区域，总G＋C含量占67．08％（487／726个），经优于PCR反应条件扩增正常胎盘组织和人食管癌细胞系EC9706、EC8712、EC109的Mal基因5′端调控区，对PCR产物进行克隆和序列测定，对测序结果进行相比比较，结果：成功地扩增出Mal基因5′调控区。与正常胎盘组织相比，食管癌细胞系EC9706，EC8712、EC109均有Mal基因5′调控区第654位的T→C改变，相应的密友子TCC变为CCC，所编码的氨基酸由丝氨酸变为脯氨酸；EC9706还有第657位的T→C改变，相应的密码子TGC变为CGC，所编码的氨基酸由半胱氨酸变为精氨酸；EC8712有第139位的A→G改变，相应的密码子GGA变为GGG，所编码的甘氨酸仍为甘氨酸。结论：建立了Mal基因5′调控区的PCR扩增方法；食管癌Mal基因5′调控区可能存在点突变。     

HMGB1、VEGF—C在肺癌组织中的表达及临床意义

采用免疫组织化学染色方法检测肺癌组织中高迁移率族蛋白1（HMGB1）及血管内皮生长因子C（VEGF-C）的表达。结果发现,非小细胞肺癌（NSCLC）组织HMGB1及VEGF-C阳性率明显高于癌旁组织（P〈0．05）。HMGB1在肺鳞癌组织中阳性表达率明显低于腺癌组织,而其癌旁组织阳性表达率明显高于腺癌癌旁组织（P均〈0．05）。肺鳞癌组织中VEGF-C阳性表达率明显低于腺癌组织（P〈0．05）;有淋巴结转移NSCLC组织HMGB1及VEGF-C阳性率明显高于无淋巴结转移NSCLC（P均〈0．05）;VEGF-C表达与HMGB1表达呈正相关（P〈0．05）。认为HMGB1和VEGF—C的表达与肺癌组织病理类型和淋巴结转移相关,可作为肺癌转移、治疗和预后判断指标。     

PTEN、survivin蛋白在食管癌中的表达及其相关性

应用免疫组织化学sP法检测60例食管癌组织及20例癌旁正常黏膜的survivin和PTEN的表达水平。结果：survivin在食管癌组织的阳性表达率为70．0％，癌旁正常黏膜为40．0％（P〈0．05）；低、高分化癌的阳性表达率差异显著（P〈0．05）；有、无淋巴结转移者的阳性表达率分别为88．9％、61．9％（P〈0、05）；其表达与肿瘤的浸润深度显著相关（P〈0．05），与患者的性别、年龄无关（P〉0．05）。PTEN在癌旁正常黏膜阳性表达率为90．0％。食管癌组织为36．7％（P〈0．05）。低、高分化癌的阳性表达率差异显著（P〈0．05）；有、无淋巴结转移者的阳性表达率分别为16．7％、45．2％（P〈0．05）；与患者的性别、年龄及浸润深度无关（P〉0．05）。survivin和PTEN在食管癌中的表达呈负相关。认为PTEN低表达及survivin的过表达与食管癌的发生及其生物学行为密切相关，可作为食管癌早期诊断及评估预后的客观指标。     

MS CT在食管癌诊断中的价值及其征象与MMP-2表达的相关性分析

目的探讨多层螺旋CT（MSCT）在食管癌诊断中的价值及其征象与食管癌组织MMP-2表达的关系。方法对59例经胃镜活检证实的食管癌患者于放疗前行MSCT检查,同时应用免疫组化SP法检测59例食管癌组织和41例癌旁组织中MMP-2表达情况,分析食管癌MSCT征象与MMP-2表达的关系。结果MSCT扫描诊断食管癌57例,与病理诊断结果符合率为96．6％;癌组织和癌旁组织中MMP-2表达阳性率分别为59．32％、31．71％（P=0．007）;食管癌组织MMP-2表达与MSCT所示浸润深度、气管／支气管受侵、主动脉受侵、椎前三角受侵、颈部淋巴结转移、纵隔淋巴结转移均有明显相关性。结论MSCT对食管癌及其淋巴结、远处脏器转移诊断准确率高,且其征象与MMP-2表达密切相关,对明确食管癌治疗方案起重要作用。     

吲哚胺2，3-双加氧酶及CD25在食管癌组织中的表达及临床意义

目的检测吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）及CD25在人食管癌及癌旁组织中的表达,了解其与食管癌临床病理特征之间的关系及在肿瘤免疫逃避中的作用。方法应用免疫组织化学法检测60例食管癌及12例癌旁组织中IDO及CD25的表达。结果IDO及CD25在食管癌组织的表达明显高于癌旁组织（P〈0．05）;IDO及CD25在癌组织中的高表达具有相关性（r=0．958,P〈0．01）;IDO与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移相关（P均〈0．05）。结论IDO及CD25在癌组织中均高表达,IDO的过表达可能参与了食管癌的发生发展,促进了肿瘤细胞的浸润和淋巴结转移。     

microRNA-101和环氧合酶-2在胃癌中的表达及其临床意义

背景：microRNAs是一类对靶基因表达具有转录后调控作用的非编码小RNA。microRNA-101（miR-101）在多种恶性肿瘤中呈低表达,而过表达外源性miR-101可发挥肿瘤抑制作用。前期体内、外实验发现外源性miR-101可抑制胃癌细胞增殖和环氧合酶-2（COX-2）表达。目的：检测胃癌组织中的miR-101、COX-2表达并探讨其临床意义。方法：收集手术切除胃癌组织和配对癌旁非癌组织标本30例,以实时荧光定量RT—PCR检测miR-101、COX-2mRNA表达,分析两者间以及两者与胃癌主要临床病理特征的关系。结果：绝大多数胃癌组织中miR-101表达低下,COX-2mRNA则呈过表达。胃癌组织与癌旁非癌组织间miR-101、COX-2mRNA表达量差异显著（P〈0．01）,且两者表达在癌组织和癌旁组织中均呈负相关（癌组织：r=-0．767,P=0．000;癌旁组织：r=-0．718,P=0．000）。TNMⅢ、IV期胃癌和伴淋巴结转移的胃癌中,miR-101表达分别显著低于TNMI、Ⅱ期病例和无淋巴结转移病例（P〈0．05）,COX-2mRNA表达分别显著高于TNMI、Ⅱ期病例和无淋巴结转移病例（P〈0．05）。结论：miR-101与COX-2之间的负相关性可能有助于胃癌的临床诊断;miR-101表达低下伴COX-2过表达与胃癌临床进展和转移有关,对预后判断有一定参考价值。     

Rho-GDI2在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2（Rho—GDI2）基因在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法运用RT-PCR技术和免疫组化技术检测60例胰腺癌组织及配对的癌旁组织中Rho—GDI2mRNA和蛋白的表达,分析胰腺癌Rho-GDI2的表达与临床病理参数间的关系。结果胰腺癌组织及相应癌旁组织中Rho-GDI2mRNA表达量分别为0．661±0．021和0．199±0．023;Rho—GDI2蛋白阳性表达率分别为73．3％（44／60）和41．7％（25／60）,癌组织的表达均显著高于癌旁组织,差异有统计学意义（P值均〈0．01）。胰腺癌组织Rho-GDI2蛋白表达与患者性别、年龄及肿瘤部位无相关性,而与肿瘤大小、分化程度、病理分期、淋巴结转移、血管侵犯等相关（P值均〈0．05）。结论Rho-GDI2在胰腺癌组织中过表达,且与胰腺癌的恶性生物学行为密切相关。     

N-cadherin knock-down decreases invasiveness of esophageal squamous cell carcinoma in vitro

AIM： To examine the expressions of N-cadherin and E-cadherin in specimens of 62 normal esophageal epithela, 31 adjacent atypical hyperplastic epithelia and 62 esophageal squamous cell carcinomas （ESCCs）, and to investigate the roles of N-cadherin in the invasiveness of ESCC cell line EC9706 transfected by N-cadherin shRNA.
METHODS： PV immunohistochemistry was used to detect the expression pattern of N-cadherin and E-cadherin in specimens of 62 normal esophageal epithelia, 31 adjacent atypical hyperplastic epithelia and 62 ESCCs. The invasiveness of ESCC line EC9706 was determined by transwell assay after EC9706 was transfected by N-cadherin shRNA.
RESULTS： The positive rotes of N-cadherin decreased in the carcinoma, adjacent atypical hyperplastic and normal esophageal tissues （75.8%, 61.3% and 29.0%, P 〈 0.05）, respectively, while those of E-cadherin increased （40.3%, 71.0% and 95.2%, P 〈 0.05）. The increased expression of N-cadherin and decreased expression of E-cadherin were related to invasion, differentiation, and lymph node metastasis （P 〈 0.05）. The expression level of N-cadherin decreased in the N-cadherin knocked down cells, and the invasiveness of those cells decreased significantly as well. The number of cells which crossed the basement membrane filter decreased from 123.40 ± 8.23 to 49.60 ±6.80 （P 〈 0.05）.
CONCLUSION： E-cadherin and N-cadherin expression is correlated with the invasion and aggravation of ESCC. The down-regulation of N-cadherin lowers the invasiveness of EC9706 cell line.     

肝素酶基因表达与食管癌转移的关系

目的　探讨肝素酶基因表达与食管癌转移的关系。方法　采用逆转录聚合酶链反应技术 ( RT-PCR)检测 5 4例食管癌组织、癌旁组织及正常粘膜中肝素酶基因的表达。结果　有淋巴结转移的食管癌癌组织中肝素酶基因阳性表达率为 90 .5 % ( 19/ 2 1) ,癌旁组织为 6 1.9% ( 13/ 2 1) ,正常粘膜为 0 ( 0 / 2 1)。无淋巴结转移的食管癌癌组织中肝素酶基因阳性表达率为 15 .2 % ( 5 / 33) ,癌旁组织为 6 % ( 2 / 33) ,正常粘膜为 0 ( 0 / 33)。有淋巴结转移的食管癌组织及癌旁组织中肝素酶基因阳性表达率均高于无淋巴结转移者 ,二者相比差异均有显著性 (癌组织 P<0 .0 0 1,癌旁组织 P<0 .0 5 )。结论　肝素酶基因表达可能与食管癌发生转移有关 ,其可能成为预测食管癌转移的指标     

Effect of endothelin-1 in esophageal squamous cell carcinoma invasion and its correlation with cathepsin B

AIM： To investigate the effect of endothelin-1 in the invasion of esophageal cancer and determine whethel cathepsin B plays a role in the course.
METHODS： Western blotting was employed tc detect the expression of ET-1 protein in 75 sample., of esophageal squamous cell cancer and matched normal esophageal rnucosa. Bosentan, a dual ET （A/B）- receptor antagonist, was used to inhibit the binding of endothelin-1 and its receptors and cut down its biological role. In vitro matrigel invasion assays were made to show the invasive ability of esophageal cancer cells with and without bosentan. Subsequently, we evaluated cathepsin B activity and expression in EC9706 cell with and without bosentan.
RESULTS： We found 74.7% （56/75） tumors had an overexpression of ET-1 protein by Western blotting. Bosentan significantly inhibited matrigel invasion of cancer cells in vitro. EC9706 cells have a positive expression of cathepsin B protein, and bosentan can down-regulate its expression and activity.
CONCLUSION： Endothelin-1 may enhance the invasive ability of human esophageal cancer cells, and its role is correlated with cathepsin B.     

食管鳞癌中Paxillin mRNA的表达及其与癌转移的关系

目的探讨Paxillin mRNA表达与食管癌转移的关系。方法采用原位杂交方法检测54例食管鳞癌、癌旁不典型增生组织及其正常食管组织中Paxillin mRNA的表达。结果有淋巴结转移的21例（A组）食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织和正常食管组织中Paxillin mRNA阳性表达率分别为90．48%（19／21）、52．38％（11／21）和0，无淋巴结转移的33例（B组）食管鳞癌组织、癌旁组织和正常食管组织中的Paxillin mRNA阳性表达率分别为33．33％（7／33）、23．80％（5／33）和0。两组癌组织、癌旁不典型增生组织中Paxillin mRNA阳性表达率比较，P均〈0．05。结论Paxillin mRNA表达与食管鳞癌的转移密切相关。     

沉默CXCR4基因对食管鳞癌EC-9706细胞中MMP-9基因表达的影响

目的:探讨在食管鳞癌EC-9706细胞中沉默CXCR4基因对MMP-9基因表达的影响,为阐明CXCR4基因在食管鳞癌侵袭转移中的作用提供实验依据.方法:化学合成2条靶向CXCR4基因的siRNA1和siRNA2,同时设立荧光标记阴性对照和空白对照.脂质体法转染入EC-9706细胞,荧光显微镜下观察转染效率.转染48h后,半定量RT-PCR检测各组细胞CXCR4和MMP-9基因mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞CXCR4和MMP-9基因蛋白表达的变化,侵袭小室检测各组细胞穿膜细胞数的变化,MTT检测各组细胞的A值.结果:与阴性对照和空白对照相比,转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞CXCR4mRNA和蛋白的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);同时与阴性对照和空白对照相比,转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达同样明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞穿膜细胞数与阴性对照和空白对照相比明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);MTT结果显示转染CXCR4siRNA1和siR...     

Expression of ECRG4, a novel esophageal cancer－related gene,downregulated by CpG island hypermethylation in human esophageal squamous cell carcinoma

AIM: To study the mechanisms responsible for inactivation of a novel esophageal cancer related gene 4 (ECRG4) in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). METHODS: A pair of primers was designed to amplify a 220 bp fragment, which contains 16 CpG sites in the core promoter region of the ECRG 4 gene. PCR products of bisulfite-modified CpG islands were analyzed by denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC), which were confirmed by DNA sequencing. The methylation status of ECRG 4 promoter in 20 cases of esophageal cancer and the adjacent normal tissues, 5 human tumor cell lines (esophageal cancer cell line-NEC, EC109, EC9706; gastric cancer cell line- GLC; human embryo kidney cell line-Hek293) and 2 normal esophagus tissues were detected. The expression level of the ECRG 4 gene in these samples was examined by RT-PCR. RESULTS: The expression level of ECRG 4 gene was varied. Of 20 esophageal cancer tissues, nine were unexpressed, six were lowly expressed and five were highly expressed compared with the adjacent tissues and the 2 normal esophageal epithelia. In addition, 4 out of the 5 human cell lines were also unexpressed. A high frequency of methylation was revealed in 12 (8 unexpressed and 4 lowly expressed) of the 15 (80 %) downregulated cancer tissues and 3 of the 4 unexpressed cell lines. No methylation peak was observed in the two highly expressed normal esophageal epithelia and the methylation frequency was low (3/20) among the 20 cases in the highly expressed adjacent tissues. The methylation status of the samples was consistent with the result of DNA sequencing. CONCLUSION: These results indicate that the inactivation of ECRG 4 gene by hypermethylation is a frequent molecular event in ESCC and may be involved in the carcinogenesis of this cancer.     

明胶酶B mRNA在食管癌组织中的表达

目的探讨明胶酶B mRNA在食管癌组织中表达的临床意义.方法用原位杂交法检测41例食管癌患者的癌组织及癌旁组织明胶酶B mRNA的表达.结果食管癌患者的癌组织明胶酶B mRNA的表达率(33/41)与癌旁组织的表达率(24/41)相比有显著差异(P＜0.05).有淋巴结转移食管癌患者的癌组织明胶酶B mRNA的表达率(18/19)与无淋巴结转移的表达率(15/22)相比有显著差异(P＜0.05).侵及浆膜层癌组织表达率(16/18)高于未侵及浆膜层者(17/23),但无统计学意义.结论明胶酶B在食管癌的侵袭和转移过程中可能具有重要作用.     

转染kiss-1基因对人食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究转染kiss-1基因对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨其在食管癌基因治疗中的可行性和特异性.方法:在食管癌细胞系EC9706中转染kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.稳定表达该基因的细胞为转染kiss-1基因组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型;监测肿瘤生长变化,HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、Western blot方法检测kiaa-1 mRNA和蛋白变化.结果:转染kiss-1基因组肿瘤生长受到显著抑制:HE染色显示转染kiss-1基因组及转染空质粒纽肿瘤组织内坏死均较空白对照组多;RT-PCR、Western blot结果表明转染kiss-1基因组裸鼠肿瘤组织kiss-1 mRNA和蛋白表达均显著升高,三组间比较差异具有统计学意义(F=72.685,24.807,均P<0.05).结论:转染kiss-1基因能抑制人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,且能有效上调kiss-1 mRNA和蛋白的表达,可为食管癌的基因治疗提供新的靶点、开辟新的思路.