miR-223调控人牙周膜成纤维细胞中RANKL表达的功能初探

目的：探讨miR?223对人牙周膜成纤维细胞中核因子?κB受体活化因子配体（ RANKL）的调控作用。方法：构建过表达miR?223的人牙周膜成纤维细胞,Western blot及实时定量RT?PCR检测人牙周膜成纤维细胞内RANKL和骨保护素（ OPG）的表达,计算RANKL／OPG比值的改变。结果：过表达miR?223的人牙周膜成纤维细胞,RANKL的表达明显下调,RANKL／OPG比值下降。结论：miR?223可调控RANKL的表达,破坏RANKL／OPG比例的平衡,改变破骨细胞的微环境,影响破骨细胞分化。     

TNF-α和PGE2联合在人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达中的作用

目的:探讨不同浓度组合的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和前列腺素E2(PGE2)在人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)mRNA表达中的作用。方法:将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度组合的TNF-α和PGE2处理24h,通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)来观察人牙周膜成纤维细胞RANKL、OPG mRNA表达水平。结果:不同浓度组合对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达有促进作用,尤以10ng/mL TNF-α 10-7mol/L PGE2组合对RANKL mRNA表达的促进作用及RANKL/OPG比值的增强作用最为明显。结论:10ng/mL TNF-α和10-7mol/L PGE2联合具有协同作用,通过促进人牙周膜成纤维细胞RNAKL/OPG表达量,可能在调节牙周炎引起的牙槽骨吸收中起到重要的作用。     

前列腺素E2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的：探讨前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）mRNA表达的影响。方法：将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L）的PGE2分别处理2、8、24、48h,使用Trizol抽提总RNA,通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来观察人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达强度变化。结果：10^-9～10^-6mol/LPGE2在2～24h可上调人牙周膜成纤维细胞RANKL mRNA的表达,但抑制OPGmRNA的表达,且RANKL/OPG比率呈上升趋势。结论：PGE2有可能通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL/OPG mRNA表达比例,从而间接地调节破骨细胞的分化和活性。     

牙龈卟啉单胞菌对纯钛表面成骨细胞表达OPG和RANKL mRNA的影响

目的:在转录水平上观察牙龈卟啉单胞菌对成骨细胞表达OPG及RANKL mRNA的影响.方法:用浓度分别为106、18CFU/mL的牙龈卟啉单胞菌刺激接种于纯钛表面的成骨细胞,24 h后提取各组成骨细胞总RNA并应用逆转录-聚合酶链式反应和mRNA比色定量的方法检测OPG及RANKL 基因表达.结果:MG-63成骨细胞基础表达较强的OPG mRNA及少量的RANKL mRNA,牙龈卟啉单胞菌以浓度依赖的方式增强RANKL mRNA的表达,减弱OPG mRNA的表达.结论:牙龈卟啉单胞菌通过上调RANKL/OPG的比率可间接的调节破骨细胞的活性从而影响支抗种植体周的骨代谢.     

重组人白介素-1α对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG影响的荧光定量RT-PCR研究

目的：通过观察重组人白介素-1α（rhIL-1α）对体外培养人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子kB受体活化因子配基（RANKL）和骨保护素（OPG）表达的影响来探讨牙槽骨改建的调节机制。方法：以不同浓度rhIL-1α（0、5、10、20μg/L）作用于体外培养HPDLFs,于24 h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKLmRNA和OPG mRNA的表达。结果：rhIL-1α同时上调HPDLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,但RANKL/OPG的比值增加,这种调节作用在10μg/L的作用浓度时最明显。结论：rhIL-1α可在体外影响HP-DLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,调节RANKL/OPG比值,与牙槽骨改建密切相关。     

IL-1β对人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)为研究对象,观察不同浓度的白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)mR-NA表达的影响。方法:组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定,以第5代HPDLF作为实验靶细胞,分别用不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100 ng/mL)的IL-1β进行干预,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLF中OPG、RANKL mRNA的表达。结果:IL-1β在0.01～10 ng/mL浓度范围内能明显上调HPDLF中OPG mRNA的表达(P<0.05),并在0.1 ng/mL时上调作用达到最大(P<0.05)。此后,随着IL-1β浓度的增加,OPG mRNA的表达量逐渐减少。IL-1β在0.01～100 ng/mL浓度范围内均可明显上调HPDLF中RANKL、RANKL/OPGmRNA的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性,即随着IL-1β浓度增加,HPDLF中RANKL、RANKL/OPG mRNA的表达也逐渐增加,各浓度组两两比较除10 ng/mL与100 ng/mL相比无显著性差异外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1β可促进HPDLF中RANKL mRNA的表达,上调RANKL/OPG mRNA的比值。     

牙齿萌出过程中 RANKL mRNA 的表达与破骨细胞的关系

目的:探讨核因子κB受体活化剂配体 RANKL 在大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方组织中 mRNA 的表达及破骨细胞的分化情况.方法:运用原位杂交法检测大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方组织中 RANKL mRNA 的表达;TRAP 染色观察破骨细胞分化情况.结果:出生1、3、5、7 d大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方牙囊成纤维细胞、成釉细胞 RANKL mRNA的阳性表达强于对照组牙龈成纤维细胞(p<0.01).大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方出生后1 d破骨细胞多为单核,3 d时多核破骨细胞增多.结论:RANKL mRNA 在大鼠出生后1、3、5、7 d下颌第一磨牙牙囊成纤维细胞、成釉细胞中有表达,可能通过促进破骨细胞的分化及成熟参与牙齿的萌出.     

降钙素基因相关肽对兔成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的：探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对成骨细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)基因表达的影响，了解CGRP在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法：将体外培养的兔成骨细胞用不同浓度的CGRP处理24h，通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来观察成骨细胞两种目的基因(OPG，RANKL)的mRNA表达强度变化。结果：CGRP呈剂量依赖性的刺激成骨细胞OPG mRNA表达，同时亦下调RANKL mRNA表达。结论：CGRP通过调节成骨细胞OPG／RANKL的比值可间接地调节破骨细胞活性，从而影响骨代谢。     

高迁移率族蛋白B1对牙周膜成纤维细胞表达细胞因子影响的研究

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对人牙周膜成纤维细胞表达白细胞介素-6（IL-6）、破骨细胞核因子κB受体活化因子（RANKL）、骨保护因子（OPG）的影响,初步探讨HMGB1在牙周疾病的作用。方法采用原代组织块培养法,培养人牙周膜成纤维细胞,用第4~6代的细胞进行实验。分别用10、30、100 ng·mL-1质量浓度的HMGB1孵育牙周膜成纤维细胞24 h后,RT-PCR检测IL-6、RANKL、OPG的mRNA表达;Western blot法检测RANKL、OPG的蛋白表达。均以0 ng·mL-1质量浓度组为对照,所得数据用单因素方差分析处理。结果HMGB1在10、30、100 ng·mL-1质量浓度时,细胞中的RANKL/OPG mRNA的比值增高（P<0.05）,100 ng·mL-1质量浓度时细胞中的IL-6 mRNA的表达量增高（P<0.05）。Western blot检测结果显示10 ng·mL-1质量浓度组的RANKL/OPG的比值有明显增高。结论一定浓度的HMGB1可使牙周膜细胞中的RANKL/OPG比值增高,还会诱导炎症因子IL-6 mRNA表达上调。提示HMGB1可能会在牙周炎的发病以及炎症进展中发挥作用。     

牙龈蛋白及其对破骨和成骨细胞功能的影响

牙龈卟啉单胞菌分泌的牙龈蛋白作为牙周病的一种重要的毒力因子,一方面通过降解骨保护蛋白（OPG）及促进核因子-κB（NF-κB）受体活化因子配体（RANKL）的释放激活OPG/RANKL/NF-κB受体活化因子信号转导通路,进而诱导破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化,增强破骨细胞功能;另一方面,牙龈蛋白可通过线粒体依赖性内在程序性细胞死亡通路和肿瘤坏死因子受体家族介导的外在程序性细胞死亡通路诱导成骨细胞程序性细胞死亡,抑制成骨细胞功能,最终导致牙槽骨丧失。本文就近年来牙龈蛋白及其对破骨和成骨细胞功能的影响相关研究进展作一综述。     

灯盏花联合机械牵张力对成骨细胞OPG和RANKL蛋白表达的影响

目的：研究灯盏花、机械牵张力以及灯盏花与机械牵张力联合作用下对体外培养的成骨细胞OPG和RANKL蛋白表达的影响,探讨灯盏花对正畸骨改建的作用机理。方法：体外培养成骨样细胞株MG63细胞,细胞的机械牵张力刺激采用SXG4201型四点弯曲细胞力学加载仪。分别单用机械牵张力刺激（2000 μstrain,0.5Hz）、单用灯盏花（1mg/mL）干预、以及机械牵张力（2000 μstrain,0.5Hz）和灯盏花（1mg/mL）联合干预MG63细胞不同时间（3h,6h,12h,24h）后,提取细胞总RNA和蛋白质,用Western blot方法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达。结果：单用机械牵张力刺激MG63细胞后OPG蛋白表达上调,且呈时间依赖性,而RANKL蛋白表达无明显变化;单用灯盏花干预MG63细胞后OPG蛋白表达下调,RANKL蛋白表达增加;两者联合干预MG-63细胞后,OPG蛋白表达量减少,RANKL蛋白表达显著增加。结论：灯盏花能拮抗机械牵张力对成骨细胞OPG分泌的刺激作用,促进机械牵张力对成骨细胞RANKL分泌的刺激作用。     

HMGB1对大鼠骨髓基质干细胞增殖和分化的影响

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGBl）对于大鼠骨髓基质干细胞BMSCs增殖、成骨／破骨的影响。方法：原代培养的大鼠BMSCs,分别以浓度为0,100,500ng／mLHMGBl作用于BMSCs,M‘rr法检测细胞数目;以浓度为0,100,500ng／mLHMGBl作用于BMSCs,7d后行AIJP染色和RT—PCR检测成骨／破骨基因的表达（骨钙素OCN,骨保护素OPG,核因子KB受体活化因子配体RANKL）。结果：HMGBl存100、500ng／mL浓度时,第3d和第5dBMSCs的OD值有明显升高,在第7d对BMSCs的ALP染色没有明显的改变,OCN和OPG基因的表达也没有明显变化,HMGBl明显提高了BMSCs的RANKI．及RANKI．／OPG基因表达。结论：HMGBl对大鼠BMSCs的增殖和破骨基因表达有明显的促进作用,为HMGBl应用于临床提供实验依据。     

LPS刺激单核巨噬细胞培养上清对成骨细胞OPG/RANKL的影响

目的观察经牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对小鼠成骨细胞MC3T3-E1 OPG/RANKL表达的影响。方法收集经100 ng/mL Pg-LPS刺激的单核巨噬细胞RAW264.7培养24 h后的上清,以不同稀释浓度（10%、20%、30%、40%和50%）的培养上清作用于MC3T3-E1 24h,分别通过RT-PCR、免疫印迹法(Western blotting)检测细胞OPG/RANKL基因和蛋白水平表达的变化,采用SPSS17.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果MC3T3-E1经不同稀释浓度的培养上清刺激后,其OPGmRNA及蛋白表达随浓度的增加而显著减少(P<0.05),而RANKLmRNA及蛋白表达随浓度的增加显著增加(P<0.05)。结论Pg-LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清可通过抑制成骨细胞OPGmRNA及蛋白的表达,增加RANKLmRNA及蛋白的表达而抑制其成骨能力,且与浓度呈一定的正相关。     

17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞RANKL、OPG表达影响的研究

目的:探讨17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法:通过酶消化法分离培养SCAPs,将SCAPs分别于对照组(普通培养基+10μmol/L无水乙醇)和含0.1μmol/L17β-雌二醇的培养基培养3d和7d后,实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测RANKL、OPG mRNA和蛋白表达。结果:17β-雌二醇刺激3d和7d组,OPGmRNA和蛋白表达均较对照组升高(P<0.01),RANKL mRNA和蛋白表达均较对照组降低(P<0.01)。结论:17β-雌二醇可能通过调节RANKL/OPG系统,参与调节SCAPs成牙/骨及破牙/骨活性。     

糖尿病大鼠牙周组织中免疫调节相关信号通路研究

目的观察糖尿病大鼠模型牙周组织中CD4、CD8、核因子-κB受体活化子配体(receptor activator forNF-κB ligand,RANKL)及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的变化。方法 38只健康雄性SD大鼠,随机选取30只,高热量饲料喂养1个月后,建立肥胖模型,随后每只大鼠按55 mg/kg一次性静脉注射链脲佐菌素(strepto-zotocin,STZ),建立糖尿病模型组;其余8只普通饲料喂养1个月后,一次性静脉注射相同剂量的pH值4.5、0.1 mol/L柠檬酸缓冲液,设为对照组。建模第16周处死大鼠,解剖上颌骨,制作3μm厚连续切片,荧光免疫组化检测牙周组织中CD4、CD8及RANKL、OPG的表达。采用激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal micro-scope,LSCM)采集图像,行灰度值分析,比较CD4、CD8、RANKL、OPG在糖尿病组和对照组大鼠牙周组织中的表达差异。结果糖尿病组CD4、CD8、RANKL的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);糖尿病组与对照组相比OPG表达降低,差异无统计学意义。结论糖尿病可能通过RANKL/OPG调节途径促进牙周炎的发生发展。     

黄芩苷对人牙周膜细胞功能活性调节的实验研究

目的：通过观察中药黄芩的有效成份黄芩苷对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）增殖、矿化成骨等功能活性的影响,研究黄芩对人牙周膜细胞的调节作用。方法：采用组织贴块联合胶原酶消化的方法,体外分离、培养、纯化和鉴定hPDLCs后,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、酶联免疫吸附、半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）等方法,检测不同浓度的黄芩苷（10、1.0、0.1、0.01mg/L）对hPDLCs增殖、矿化成骨、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、细胞核因子-κB受体活化因子配基（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）mRNA表达等方面的影响。结果：0.1mg/L的黄芩苷对于增加人牙周膜细胞的增殖活性、碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原蛋白的表达作用最强;适宜浓度的黄芩苷可以降低RANKL/OPGmRNA比值。结论：黄芩苷能促进hPDLCs的增殖和成骨作用,该作用可能与RANKL/OPG信号通路相关。     

生理性根吸收过程中乳牙牙髓干细胞通过α7nAChR调节破骨细胞分化能力的研究

目的:探讨生理性根吸收过程中乳牙牙髓干细胞(DDPSCs)通过α7亚型烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)对破骨分化能力的调节作用.方法:酶消化法和有限稀释法分离培养根吸收不同时期DDPSCs和恒牙牙髓干细胞(DPSCs).采用实时定量PCR和Western blot,检测各组细胞α7nAChR、RANKL、OPG的表达及其比值差异,以及阻断α7nAChR后RANKL、OPG的表达及其比值变化.结果:α7nAChR表达及RANKL/OPG比值在根吸收中期DDPSCs中明显升高(P＜0.05).阻断α7nAChR后,RANKL/OPG明显下降(P＜0.05).结论:在乳牙生理性根吸收过程中,α7nAChR通过上调自身表达,参与对RANKL/OPG的调节,影响DDPSCs的破骨分化能力.