The antiapoptotic effect of insulin against anoxia/reoxygenation injury in cultured cardiomyocyte of neonatal rat

Objective： To study protective effect of insulin against cardiomyocyte apoptosis in anoxia/reoxygenation （A/R） injury of neonatal rat. Methods： The model of A/R injury was finished through receiving anoxia for 2h and reoxygenation for 4h in cultured cardiomyocytes of neonatal rat. The cardiomyocytes were divided randomly into 3 groups： control group （CON）, anoxia/reoxygenation group （A/R） and insulin-treated group （INS）. At the end of reoxygenation of 4 hours, activities of lactate dehydrogenase （LDH）, contents of malondiaidehyde （MDA）, were assessed through spectrophotometric procedures, myocyte apoptosis were detected through TUNEL and DNA Ladder. Results： MDA, LDH, and Apoptosis Index were significantly decreased in INS group compared with A/R group （P〈0.01）. Conclusion： Insulin has a protective effect against A/R injury in cultured cardiomyocyte of neonatal rat; the protective mechanism may contribute to antiapoptosis of insulin.     

促红细胞生成素对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的:观察促红细胞生成素(eryrthropoietin,EP)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响及其相关机制探讨.方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,建立H/R模型.心肌细胞随机分为4组:①H/R组缺氧2 h,复氧4 h;②EP组在缺氧前1 h予EP(10 U/ml),随即缺氧2 h,复氧4 h;③Wortmannin EP组(W EP) 在EP预处理前30 min予3-磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3-K)特异性阻断剂Wortmannin(100 nmol/L);④正常对照组流式细胞仪检测细胞凋亡率.Western blot法检测心肌细胞EP受体表达和p-AKt/AKt比值.结果:EP可明显降低缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,并明显增强SD乳鼠心肌细胞p-AKt/AKt比值;而Wortmannin减弱了EP的抗细胞凋亡作用,显著降低了p-AKt/AKt比值.结论:细胞凋亡参与了心肌缺氧/复氧损伤;EP可减少缺氧/复氧引起的SD乳鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与EP激活PI-3K/AKt信号通路有关.     

Nonhematopoietic erythropoietin derivative protects cardiomyocytes from hypoxia/reoxygenation-induced apoptosis

Objective:Carbamylated EPO(CEPO)is a derivative of erythropoietin(EPO)by subjecting it to carbamylation.It does not stimulate erythropoiesis,but effectively protects tissue from injury.The present study was to investigate the effect of CEPO treatment using in vitro models of hypoxia/reoxygenation(H/R).Methods:Cardiomyocytes were exposed to hypoxia(95% N2 and 5% CO2)for 1 hour followed by 4 hours of reoxygenation(95% O2 and 5% CO2).CEPO was administered after hypoxia,just before reoxygenation.The apoptotic cardiomyocytes were determined by flow cytometry.The level of protein was assessed by western blot analysis.Results:CEPO treatment significantly decreased the apoptotic cardiomyocytes by 54.20% compared with H/R group.Western blot analysis showed that CEPO administration increased the level of Bcl-2(an antiapoptotic protein)by 62.22% compared with H/R group.Conclusion:Acute administration of CEPO protected cardiomyocytes from H/R-induced apoptosis.CEPO protected cardiomyocytes with a concomitant upregulation of Bcl-2 after H/R injury.     

比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤的影响

目的研究比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用,并探讨该作用的机制。方法对大鼠心肌细 胞株（H9c2）进行缺氧复氧（6 h/2 h）,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,将H9c2细胞随机分成4组：正常对照组（control组）、缺 氧/复氧组（H/R组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理组（H/R+B组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理+PI3K/AKT阻滞剂LY294002组（H/ R+B+LY组）;分别采用MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡、ROS水平,Western免疫印迹法检测心肌 细胞p-AKT及p-GSK3β蛋白表达情况。结果与正常组相比,H/R组细胞活力下降,细胞凋亡率增加、ROS水平升高;经比索洛 尔预处理后,细胞活力明显提高,细胞凋亡率下降、活性氧水平降低,p-AKT/GAPDH、p-GSK3β/GAPDGH显著提高,而加入 PI3K/AKT阻滞剂LY294002后比索洛尔的保护作用消失。结论比索洛尔能减少缺氧/复氧所引起的氧化应激,对心肌细胞具 有明显的保护作用,其作用机制是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路而提高AKT、GSK3β磷酸化水平,减少ROS产生,增加细胞 的活性实现的。     

Ghrelin对缺氧／复氧心肌细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的:本实验研究Ghrelin对缺氧/复氧干预下心肌细胞凋亡的影响以及其具体的作用机制.方法:用体外培养的SD乳大鼠心肌细胞,建立缺氧(4 h)/复氧(1h)模型.实验分4组:①对照组;②缺氧/复氧组(H/R);③H/R+Ghrelin干预组;④H/R+Ghrelin+沃曼青霉素干预组.分别检测各组培养液中LDH浓度,Tunel法测定各组细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞内激酶磷酸化Akt的表达.结果:实验发现,与H/R组和H/R+Ghrelin+沃曼青霉素干预组相比H/R+Ghrelin组能明显减轻缺氧/复氧损伤所导致的LDH的漏出(30.00±6.60与78.00±4.20U/L;30.00±6.60与61.67±7.22U/L),以及明显减低心肌细胞的凋亡率(0.0859±0.0303与0.3516±0.06329;0.0859±0.0303与0.3255±0.02258)(P<0.05).同时H/R+Ghrelin干预组磷酸化Akt的表达明显增强.结论:Ghrelin具有减轻缺氧/复氧所引起的心肌细胞损伤,抑制心肌细胞凋亡的作用.与Ghrelin激活细胞内信号传递途径PI3K/Akt(磷脂酰肌醇3激酶/丝-苏氨酸激酶)有关.     

甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系

目的探讨甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系。方法建立甲状腺功能亢进症模型大鼠,随机分为模型组、LY294002组（PI3K抑制剂）、740Y-P组（PI3K激动剂）,每组12只;另取12只SD大鼠设为对照组。分组处理后,酶联免疫吸附法（ELISA）检测甲状腺功能指标血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺素（TSH）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;测定空腹血糖水平（FBG）、胰岛素抵抗指数（IRI）;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测大鼠心肌组织PI3K/Akt通路蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI显著升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt显著降低（P<0.05）;与模型组比较,LY294002组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt降低（P<0.05）;740Y-P组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI降低（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt升高（P<0.05）。结论PI3K/Akt通路可调控甲状腺功能亢进症模型大鼠胰岛素抵抗,激活该通路,可使甲状腺功能恢复正常,减轻炎症反应,抑制心肌细胞凋亡,改善胰岛素抵抗。     

低分子壳聚糖对缺氧/复氧大鼠心肌细胞中ClC-3表达的影响

目的: 研究低分子壳聚糖(LMCTS)对缺氧/复氧(H/R)损伤大鼠心肌细胞中氯离子通道3(ClC-3)表达的影响,探讨LMCTS对大鼠心肌细胞H/R损伤的保护作用及其与ClC-3通道的关系。方法: 原代培养的大鼠心肌细胞分为空白对照组,模型组和200、400及600mg·L^-1LMCTS组。除空白对照组细胞不做任何处理、正常培养外,其余各组细胞均进行低压缺氧处理1h,之后在37℃条件下复氧24h,构建心肌细胞H/R损伤模型,其中模型组不加药物,正常培养;而不同浓度LMCTS组细胞在构建模型前分别给予200、400和600mg·L^-1LMCTS。采用RT-PCR法检测大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA的表达水平;Western blotting法和免疫荧光法检测大鼠心肌细胞中ClC-3蛋白的相对表达水平。结果: RT-PCR法和Western blotting法检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),其中以600mg·L^-1LMCTS组心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平最低。免疫荧光检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞荧光强度明显增强;与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞荧光强度明显降低。结论: 大鼠心肌细胞中ClC-3表达水平与心肌细胞H/R损伤有关联,LMCTS可降低ClC-3表达水平,其可能通过降低ClC-3表达水平对大鼠心肌细胞H/R损伤发挥保护作用。     

Effects and mechanism of glucagon-like peptide-1 on injury of rats cardiomyocytes induced by hypoxia-reoxygenation

Background Although the insulinotropic role of glucagon-like peptide-1 （GLP-1） in type 2 diabetes mellitus has been substantiated, its role in cardioprotection remains largely unknown. This study aimed to determine the effects of GLP-1 on injury of rats cardiac myocytes induced by hypoxia-reoxygenation （H/R） and the possible mechanisms.
Methods The cultured neonatal rats cardiac myocytes were randomly divided into seven groups： the normal control group, the H/R group, the GLP-1＋H/R group, the GLP-1＋H/R＋UO126 （the p42/44 mitogen-activated protein kinase （MAPK） inhibitor） group, the GLP-1＋H/R＋LY294002 （phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K） inhibitor） group, the H/R＋UO126 group, and the H/R＋LY294002 group. The lactate dehydrogenase （LDH） activity, apoptosis rate of cardiac myocytes, and caspase-3 activity were detected after the injury of H/R.
Results Compared with the normal control group, the activity of LDH, cardiac myocyte apoptosis rate, and caspase-3 activity all increased significantly in the H/R group （P 〈0.01）. Compared with the H/R group, these three indices all decreased in the H/R＋GLP-1 group （P 〈0.01）. However, the changes of LDH activity, apoptosis rate, and caspase-3 activity were inhibited by LY294002 and UO126 respectively.
Conclusions GLP-1 can directly act on cardiac myocytes and protect them from H/R injury mainly by inhibiting their apoptosis. Its mechanism may be through the PI3K-Akt pathway and the MAPK signaling pathway.     

川芎嗪对大鼠心肌再灌注损伤保护机制的实验研究

目的:观察川芎嗪对大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的保护作用以及其作用机制。方法:建立在体大鼠心肌IR模型,随机分为假手术组,IR组,川芎嗪低、中、高剂量组以及川芎嗪+渥曼青霉素组。测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,心肌梗死面积,缺血心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Western blotting法检测心肌磷酸化蛋白激酶B(Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达。结果:与IR组相比,川芎嗪中、高剂量组的血浆CK-MB和LDH水平降低,心肌组织MDA含量减少,SOD活性增加,心肌梗死面积减小,Akt磷酸化水平增高,川芎嗪各组eNOS磷酸化水平均增高。渥曼青霉素显著抑制川芎嗪所致的Akt和eNOS磷酸化,并能消除川芎嗪的心肌保护作用。结论:川芎嗪预处理能减少大鼠心肌缺血再灌注损伤且与剂量相关,其通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/Akt-eNOS信号通路保护在体大鼠再灌注损伤心肌。     

异丙酚缓解大鼠脑缺血再灌注损伤及其机制研究

目的:探究麻醉药物异丙酚缓解大鼠脑缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion,IR)的作用及机制.方法:健康雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组、模型组、异丙酚(Pro)组、Pro+DPCPX组、Pro+LY294002组、Pro+DPCPX+LY294002组,每组12只.血管内线栓法阻断大脑中动脉,建...     

氯通道阻滞剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤致心肌细胞凋亡的作用

目的本研究应用大鼠在体心肌缺血再灌注损伤（I/RI）动物模型,观察氯通道阻滞剂DIDS（4,4＇-disothiocya-nostibibene-2,2＇-disulfonic acid）对心肌细胞凋亡的作用以及与磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路可能存在的相互作用,明确DIDS心肌保护作用的可能机制。方法 75只大鼠随机分成5组：假手术组,I/RI组,I/RI＋DIDS（14 mg/kg）,I/RI＋LY294002（PI3K-Akt特异性阻断剂）,I/R＋DIDS＋LY294002组。TTC染色检测心肌梗死范围;TUNEL法测定细胞凋亡;Caspase-3试剂盒检测caspase-3活性;免疫印迹法检测p-Akt水平。结果与I/R组比较DIDS可以减少心肌梗死范围（各组n=4,P〈0.01）,可以明显抑制心肌细胞凋亡（各组n=5,P〈0.01）,降低凋亡效应子caspase-3活性（各组n=5,P〈0.01）,提高I/RI心肌的p-Akt水平（各组n=5,P〈0.01）,LY294002可以部分阻断这些作用,LY294002自身并无减少心肌梗死范围的作用。结论氯离子通道阻滞剂DIDS对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用,其作用部分是通过PI3K/Akt信号通路来实现的。     

PI3K/Akt通路在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨内吗啡肽-1对心肌缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路的作用以及对细胞凋亡的影响。方法 将50只SD雄性大鼠随机分为5组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、内吗啡肽-1后处理组（EM50组）、内吗啡肽-1+渥曼青霉素后处理组（EM50+Wort组）和PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素后处理组（Wort组）。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min复制心肌缺血再灌注模型,实验期间动态监测大鼠心率、平均动脉压;再灌注结束后检测大鼠血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛等生化指标,RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达情况,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、磷酸化Akt蛋白和总Akt蛋白的表达。结果 与S组比较,IR组心率和血压降低（P<0.05）;与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高（339.94±26.65 vs 284.01±34.99;75.02±14.45 vs 55.83±20.98,P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性下降（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加（132.77±8.25 vs 84.10±12.42,P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较高（0.61± 0.06 vs 0.38±0.04,P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量降低（1.70±0.39 vs 3.78±0.71;0.30±0.08 vs 0.53±0.07,P< 0.05）,Bcl-2基因的表达量升高（1.20±0.44 vs 0.55±0.25,P<0.05）;与EM50组比较,EM50+Wort组心率和血压降低（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性增加（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性降低（P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较低（P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量升高（P<0.05）,Bcl-2基因表达量降低（P<0.05）。结论 EM-1后处理可调节细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤。PI3K/Akt信号通路可能对EM-1后处理产生的心肌保护效应发挥一定的介导作用。     

丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素PI3K/Akt信号通路的调节作用及其机制

目的：观察丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中胰岛素受体（IR）、胰岛素受体底物1（IRS-1）、PI3K和Akt的调节作用,初步探讨丝胶降血糖的作用机制。方法：36只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和实验组,每组12只。模型组和实验组大鼠采用高脂高糖饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ,35 mg·kg^-1·d^-1,连续2 d）的方法制备2型糖尿病模型,以STZ注射结束后72 h的空腹血糖≥ 11.1 mmol·L^-1作为成模标准。模型建立成功后,实验组大鼠给予2.4·kg^-1·d^-1丝胶灌胃,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,连续用药35d。取各组大鼠血液标本,采用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖;取各组大鼠肝组织,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测各组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白的表达,采用过碘酸-Schiff染色法检测各组大鼠肝糖原含量。结果：模型组大鼠血糖水平明显高于正常组（P<0.05）,实验组大鼠血糖水平明显低于模型组（P<0.05）。正常组和实验组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白呈棕黄色和（或）棕褐色颗粒,小部分呈弥散状;模型组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达量明显减少,呈棕黄色和（或）棕褐色颗粒,其中IR、IRS-1和Akt蛋白主要位于肝细胞胞膜和胞质,PI3K蛋白主要位于肝细胞胞质。各组大鼠肝切片均可见肝糖原阳性染色的红色或紫红色颗粒,其中模型组大鼠肝糖原染色浅,面积较小。与正常组比较,模型组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达水平及肝糖原含量明显降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达水平及肝糖原含量明显升高（P<0.05）。结论：丝胶可通过上调糖尿病大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt的表达以增强肝脏胰岛素PI3K/Akt信号通路的转导效应,从而起到降低血糖的作用。     

二氯乙酸对肥大心肌细胞缺氧复氧的抗凋亡作用

目的研究缺氧复氧损伤诱导体外培养新生大鼠的肥大心肌细胞凋亡及干预糖代谢对此过程的作用.方法取体外培养的新生大鼠心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, AngⅡ)诱导其肥大,分4组:一组于3%O2、5%CO2、92%N2的培养箱中培养12、24、36 h,再恢复正常条件培养4 h,造成缺氧复氧损伤的肥大心肌细胞模型;另三组加入二氯乙酸盐(dichloroacetate, DCA)分别使其终浓度为10-3、10-4、 10-5 mmol/L,再缺氧复氧相同时间;电镜观察肥大心肌细胞及凋亡细胞的超微结构变化;Hochest33342/PI荧光染色识别凋亡细胞;TUNEL法观察心肌细胞凋亡形态学特征,并记数凋亡心肌细胞数,检测心肌细胞凋亡率.结果肥大心肌细胞在缺氧12、24和36 h后复氧4 h,TUNEL法可检测到阳性的凋亡细胞,凋亡率分别为:(19.99±4.88)%,(22.66±5.08)%和(24.47±5.74)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-3mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别为(16.5±3.24)%, (9.7±3.52)%和(22.5±3.41)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-4mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别(17.4±3.72)%, (20.6±3.94)%和(23.5±3.76)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-5mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别(18.4±3.44)%, (21.3±3.77)%和(23.8±3.73)%.结论缺氧引起的心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高;缺氧复氧较单纯缺氧肥大心肌细胞凋亡率增加; DCA对缺氧复氧损伤引起的肥大心肌细胞凋亡有抑制作用.     

PI3K/Akt通路在硫化氢后处理保护心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨硫化氢后处理对原代培养的新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及可能机制。方法以硫氢化钠(NaHS)作为外源性硫化氢供体。原代培养新生大鼠的心肌细胞随机分为5组:①正常对照组;②缺氧复氧组(hypoxia-reoxygenation,HR组);③二甲基亚砜组(dimethyl sulfoxide,DMSO组);④硫化氢后处理组(hydrogen sulfide post-con-ditioning,H2S组);⑤LY294002+H2S后处理组(LY+H2S组)。分别于缺氧前和复氧2 h检测各组的心肌细胞存活率、培养液中CK和LDH的活性;复氧末,用流式细胞学技术检测各组心肌细胞凋亡情况;Western blot检测HIF-1α、p-Akt与Akt蛋白的表达情况。结果通过比较可知,复氧2 h时,H2S组心肌细胞存活率较HR组升高显著[(71.55±1.46)%vs(62.03±1.29)%,P<0.01],CK、LDH活性以及心肌细胞凋亡率明显降低[(244.99±21.38)U/L vs(329.53±26.14)U/L,(371.64±18.62)U/L vs(427.69±13.25)U/L,(...     

缺氧与缺氧/复氧诱导肥大的心肌细胞凋亡

目的探讨缺氧与缺氧/复氧诱导肥大的心肌细胞凋亡效应。方法应用血管紧张素Ⅱ诱导培养的新生小鼠心肌细胞肥大,并给予缺氧、缺氧/复氧刺激,用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率。结果肥大心肌细胞在缺氧8h时即出现显著的细胞凋亡。缺氧时间延长至12h时其凋亡率较8h时显著增加(P<0.05)。肥大心肌细胞在缺氧后/复氧4h,细胞凋亡率比单纯缺氧时进一步增加(P<0.05)。缺氧或缺氧/复氧时,肥大的心肌细胞组的凋亡率均较正常心肌细胞组显著增高(P<0.05)。结论缺氧可诱导肥大的心肌细胞凋亡,且在缺氧后复氧可加重肥大心肌细胞凋亡的程度;与正常心肌细胞相比,缺氧及缺氧/复氧刺激更易引起肥大的心肌细胞凋亡。     

LPS预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨14-3-3γ基因在LPS预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法构建pSU-PER/14-3-3γRNA干扰重组质粒,转染入心肌细胞,分为5组:对照组、A/R组、LPS+A/R组、pSUPER+LPS+A/R组、pSUPER/14-3-3γ+LPS+A/R组。Western blot检测14-3-3γ蛋白表达,生化自动分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果 A/R损伤使细胞存活率下降,LDH升高,细胞凋亡增加,mPTP开放;LPS预处理可使14-3-3γ表达明显增加,通过抑制mPTP开放,对A/R损伤的细胞有保护作用;pSUPER/14-3-3γRNA干扰重组质粒通过抑制14-3-3γ蛋白表达,取消LPS预处理的保护作用。结论 LPS预处理可对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤,其机制与上调14-3-3γ,从而抑制mPTP开放有关。     

Reactive oxygen species contribute to the induction of superoxide dismutase during heat shock in cultured rat neonatal cardiomyocytes

Objective To explore the influence of reactive oxygen species (ROS) during heat shock on the activity of superoxide dismutase (SOD) and the endurance of cardiomyocytes against hypoxia-reoxygenation damage. Methods Cultured rat neonatal cardiomyocytes were divided into 5 groups (n=6/group): normal control, anoxic control, heat shock, heat shock + SOD (150 U/ml) and exogenous ROS pretreated. Myocytes were first incubated in a CO(2)incubator (37℃) with Hank’s solution for 30 min, followed by specific pretreatment. Heat shock was performed by incubating the cells in a 43℃ incubator for 30 min; exogenous ROS were generated by the reaction of xanthine oxidase with xanthine. After the dishes were returned to normal incubation conditions for 24 h, myocytes underwent hypoxia (3 h) and reoxygenation (1 h). Results Compared with control groups, ROS production increased after the cells experienced heat shock (1.28±0.34 nmol/mg·protein vs 0.80±0.23 nmol/mg·protein and 0.74±0.20 nmol/mg·protein, P&lt;0.05) or ROS pretreatment (3.30±0.58 nmol/mg·protein, P&lt;0.05). 24 hours later, accompanied by attenuated cellular injury, significantly increased SOD activity was found in heat shock (2.55±0.43 U/mg·protein vs 0.77±0.12 U/mg·protein and 0.63±0.09 U/mg·protein, P&lt;0.05) and exogenous ROS pretreated (2.34±0.31 U/mg·protein, P&lt;0.05) groups following reoxygenation. Moreover, opposite results were found when myocytes were treated with SOD during heat shock. Conclusions The release of ROS during heat shock triggers delayed myocardial protection by altering the activity of SOD. ROS may play an important pathophysiological role in heat shock induced myocardial protection.     

L-Carnitine拮抗培养心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的：探讨L－Carnitine对心肌细胞缺氧／复氧损伤的防护作用及其可能的机制。方法：以原代培养新生鼠心肌细胞建立缺氧／复氧损伤模型,观察不同剂量L－Carnitine处理后细胞增殖活性,凋亡细胞百分率及DNA断片化率,作为反映L－Carnitine对心肌细胞缺氧／复氧损伤防护作用及其机制的指标。结果：在5－5000nmol/L范围内,L－Carnitine预处理对培养心肌细胞缺氧／复氧损伤均显著保护效应,在5,50及500nmol/L时均显著降低DNA断片化率;L－Carnitine在50nmol/L时与单纯缺氧／复氧组比较可显著降低凋亡细胞百分率。结论：缺氧／复氧对心肌细胞的影响之一是可诱导心肌细胞亡。L-Carnitine对培养心肌细胞培养缺氧／复氧损伤具有防护作用。其机制可能与抑制缺氧／复氧诱导细胞凋亡有关。     

人PI3KCG慢病毒载体的构建及其在乳大鼠原代心肌细胞中的表达和初步功能检测

目的:构建含有人磷脂酰肌醇3-激酶p110γ(phosphatidylinositol 3-kinase,catalytic subunit gamma,PI3KCG)基因的慢病毒载体,鉴定其在乳大鼠原代心肌细胞中的表达并作初步功能检测。方法:利用同源重组的方法构建含PI3KCG基因慢病毒载体质粒,测序鉴定后采用脂质体转染法同慢病毒系统三质粒共转染293T细胞,转染后24 h和48 h荧光显微镜下观察阳性对照组中的绿色荧光蛋白的表达,同时PCR法鉴定重组PI3KCG慢病毒质粒转染293T细胞成功,收集72 h病毒上清。培养乳大鼠原代心肌细胞,分为对照组,缺氧/复氧组,空载体阳性对照组,PI3KCG实验组,PI3KCG+Ly294002组5组,将含PI3KCG慢病毒载体的病毒液转染心肌细胞,检测各组的细胞培养上清中的乳酸脱氢酶浓度,观察预转染PI3KCG基因对心肌细胞缺氧/复氧过程中的保护作用。结果:成功构建含有PI3KCG基因的慢病毒载体质粒,并在293T细胞中成功表达。与缺氧/复氧组比较,PI3KCG组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶水平明显降低(P<0.01);心肌细胞的存活率、搏动频率明显升高(P<0.01)。结论:PI3KCG慢病毒载体有望成为探讨PI3K/AKT信号通路激活在防止心肌细胞缺血再灌注损伤的有效工具。