利用杂交瘤建立三株分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体细胞的实验研究

以破伤风类毒素疫苗免疫Balb/c小鼠6次,每次间隔10—15天,末次免疫后三天取小鼠脾脏于铜网中研磨成单个细胞,按脾细胞与SP2/0瘤细胞的比值为10:1(脾细胞1.5×10~3,SP2/0瘤细胞为1.5×10~7)用50％PEG1000进行细胞融合,以Balb/c小鼠腹腔细胞为饲养细胞,于HAT培养液中将融合细胞分种于4块16孔大孔板(天津产)内,放入水封密闭的自制培养合中,充入5％Co_2混合气,37℃培养。培养5天后第一次换液,以后每3天观察换     

免疫小鼠脾脏RNA引起的免疫记忆参与细胞

本工作用体外抗体产生系统,研究了由免疫核糖核酸(iRNA)引起的、参与免疫记忆的T细胞与B细胞.实验动物采用8-12周龄的BALB/C小鼠及由BALB/C小鼠培育的裸鼠.抗原用10%绵羊红细胞(SRBC)或马红细胞(HRBC).取0.1ml抗原给小鼠作腹腔内注射,四周后再加强注射.免疫后五天将小鼠解剖,用改进Kidson法自小鼠脾脏提取iRNA.取500μgiRNA给小鼠作腹腔注射,四周后再加强注射.脾细胞的制备及试管内抗体形成的测定:在双玻皿内将小鼠脾脏切开,加入培养液制备成无菌的单个细胞悬液.在1ml RPMl1640培养液内计数脾细胞1×10~7,并加入青霉素G50U/ml、硫酸链霉素50μg/ml、硫烷醇(5×10~(-5)M),再补足20%胎     

抗hCG-β单克隆抗体的产生及初步鉴定

本文报道用hCG免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,获得6株分泌抗hCG单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中,2B5和2D8二株细胞的分泌抗体,对hCG-β亚基呈强阳性反应。其培养液抗体的ELISA效价为10~(-2)～10~(-4);注入同系小鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-5)～10~(-7)。2B5抗体为IgA,2D8抗体属IgG_1。它们对hCG-β的亲和常数(K_a)分别为0.8×10~9升/克分子和1.8×10~9升/克分子.在以~(125)I-hCG-β作为标记物的检测系统中,2B5抗体在50％抑制时同hLH的交叉反应为5.7％,而2D8抗体为3.1％.     

IL-2对于鼠流感病毒感染的预防效果

IL-2具有促进杀伤T 细胞增殖分化,诱导LAK 细胞等多种生物学作用。这些作用主要是提高抗体的产生、增强细胞免疫功能。据此推测IL-2在防止感染方面也起重要作用。本文通过给与小鼠IL-2,观察其预防流感病毒感染的效果。实验动物为9周龄雌性ICR 系小鼠。流感病毒是采用鸡受精卵增殖的A/PR/8/34(HINI)病毒,经鼻接种5LD50病毒给小鼠。每只鼠于腹腔内分别给予1mlIL-2,含量分别为5×10~4、1×10~4、5×10~3、1×10~3国际单位(IU)。对照组给予等量     

北亚立克次体单克隆抗体的产生及用于我国斑点热立克次体的鉴定

本文报道以斑点热立克次体精河株全细胞抗原免疫BALB/c小鼠,取10~8免疫小鼠脾细胞与10~7 Sp 2/0小鼠骨髓瘤细胞用50％PEG 1000融合,以微量间接免疫荧光(Micro-IFA)检测抗体。本试验融合率为79.2％,抗体分泌阳性率为22.7％。选择抗体滴度较高的三孔进行扩大培养及克隆化,选出三株杂交瘤细胞1—2C_(12),1—2F_5和1—2C_5,其腹水单克隆抗体     

SARS S DNA疫苗不同免疫方案诱导细胞免疫应答的影响

目的观察SARS S DNA疫苗经不同的免疫途径及免疫次数,所诱导的免疫效果之间的差异。方法 C57BL/6小鼠经肌肉和皮下途径初次或加强免疫SARS S DNA疫苗,取其脾和肺淋巴细胞经S抗原多肽刺激以后,应用ELISA、ELISPOT和FACS等检测诱导细胞产生细胞因子情况。结果肌肉初次免疫后产生IFN-γ的量较低(均值脾:2.7 pg/ml;肺:68.9 pg/ml),加强免疫2次或3次后IFN-γ水平明显提高(脾:809.2～1398.7 pg/ml;肺:202.3～534.6 pg/ml),与初次免疫比较差异有统计学意义(脾P<0.001,肺P<0.05)。皮下二次免疫后IFN-γ产生量为54.3～106.1 pg/ml,但三次免疫后IFN-γ量显著提高均值达到729.1 pg/ml与对照组比较P<0.05。二次免疫后抗原特异性阳性细胞的频率肌肉免疫(188个/2×105细胞)高于皮下免疫(57个/2×105细胞),两者差异有统计学意义(P<0.05),而免疫3次后2种免疫途径可诱导数量相当的特异性阳性细胞(169～198个/2×105细胞,P>0.05)。S抗原特异性CD4+T细胞亚群以分泌IL-2为主,而抗原特异性CD8+T细胞分泌IFN-γ为主。结论经肌肉和皮下2种途径注射SARS S DNA疫苗免疫后,均可诱导小鼠产生特异性细胞免疫应答;加强免疫后诱导免疫应答明显强于初次免疫;肌肉免疫两次或皮下免疫三次后可达最佳免疫效果。     

小鼠脾内一次免疫法制备抗人肝癌McAb

以人体肝癌细胞系SMMC-7721为免疫原,3×10~5细胞小鼠脾内一次注射后间接免疫荧光法检测血清抗体滴度远较同剂量腹腔内注射为高,而与1×10~7细胞腹腔注射相仿。 经脾内一次注射法免疫后88～90小时,取脾与小鼠骨髓瘤NS-1细胞系按常规方法融     

重组BCG—Sj26GST疫苗诱导小鼠sIL—2R和IFN—γ的变化

目的研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞 s IL- 2 R和 IFN- γ的影响。方法第 1次实验采用 1× 10 6 和 1× 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/ C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组。第 2次实验用 1× 10 6 CFU疫苗皮下和静脉注射分别免疫小鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,分离脾脏 ,用 Sj2 6或 Con A刺激脾细胞 ,用 EL ISA法检测脾细胞上清液中 s IL 2 - R和 IFN -γ含量。结果疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 ,s IL- 2 R和 IFN- γ水平显著升高 ;动态观察发现 s IL- 2 R和 IFN- γ分别于免疫后 8～ 10周和 4～ 8周达最高水平。结论日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗可加强宿主 Th1反应 ,促进 Th1细胞分泌 IL- 2和 IFN- γ,它们与免疫细胞相互作用 ,提高宿主抗血吸虫感染的保护力     

消化器癌新单克隆抗体KM01、KM02

日本神户大学医学部最近研制出消化器癌单克隆抗体两株,对胰癌的临床诊断有实用价值。免疫原用株化人类结肠癌细胞coLO201 10~8/PBS 5ml中,超声波处理破坏,15000g×30分离心,得细胞提取液。经Sepharose 4B过柱得高分子部,加等量福氏佐剂。免疫鼠每周一次,0.2ml.共5次。融合时以末次免疫4天后取脾,脾细胞与鼠骨髓瘤细胞P_3U_1按4∶1混合,按Galfre等方法融合,得两株分泌单克隆抗体细胞株,即KM_(01)和KM_(02)。     

胃癌免疫脂质体导向硼中子俘获治疗的实验研究

本文报告应用胃癌免疫脂质体包裹同位素~(10)B进行胃癌硼中子俘获治疗(BNCT)的初步研究。H_3 ~(10)BO_3和(Et_4N)_2~(10)B_(10)H_(10)分别包入脂质体,连接抗人胃癌单克隆抗体MGb_2,包裹率分别为5.3％和8.2％,平均每一脂质体可包入7.5×10_4和1.2×10_5个~(10)B原子,结合50分子抗体。免疫荧光和ELISA证实抗体活性保持80％～90％。两种免疫脂质体对胃癌细胞KATO Ⅲ的结合达7.6×10~9和5.5×10~9 ~(10)B/细胞,是正常细胞的23和27倍,均达到BNCT所需浓度(1×10_9 ~(10)B/细胞)。直接包裹~(10)B原料H_3~(10)BO_3,降低了成本。结果表明,制备的免疫脂质体对~(10)B具有较好的导向作用,可能用于胄癌的硼中子俘获治疗。     

抗人载脂蛋白E单克隆抗体制备及免疫学特性的研究

应用人血清纯化的ApoE免疫BALB/C小鼠,其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗人ApoE单克隆抗体的杂交瘤细胞株(E6C3,E4C2和E3C3),对其免疫学特性进行了研究。腹水效价为8×10~(-5)～2×10~(-6),与其它载脂蛋白没有交叉反应,制备免疫亲和层析柱纯化了ApoE,单抗相加试验和双抗体夹心试验证明,两株MeAb识别ApoE的两个不同抗原决定簇,抗体亚型均为IgG_1型。应用ELISA双抗体夹心法测定了人血清ApoE含量。     

一种简便有效的检测细胞体外分泌抗体的方法

本文采用ABC-细胞ELISA(ABC-CELISA)测定体外分泌抗体。将经纯白喉类毒素(PDT)免疫的小鼠脾细胞悬液(5～10×10~(?)/ml,经过充分洗涤),注入用PDT包被的酶板小孔,温育4～6小时。洗去细胞,加生物素化抗小鼠IgG以使生物素分子固相比。洗涤后,加亲和素-生物素化HRP复合物(ABC),继加底物溶液。显色反应表明,此法可检出少至10~4只脾细胞所分泌的抗体。由无关抗原免疫的鼠脾细胞或未免疫细胞只造成低度非特异性反应。试验重复性也较满意。认为ABC-CELISA是测定体外产生的抗体的一种简便、有效手段。     

抗大肠杆菌_(506)株36kD蛋白单抗的制备及其在人精子上的免疫定位

用纯化的36kD蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以PEG进行细胞融合,融合率为86％。采用ELISA筛选出杂交瘤细胞阳性孔。经过4～7次有限稀释克隆化,共获得7株能稳定分泌36kD相应MCAb的杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞分别注射小鼠腹腔,测定腹水McAb的效价为1:5×10~3～1:1×10~5,抗体亚型均为IgG1。用荧光显微镜观察,结果发现EC2作用的人精子头颈部出现明显荧光反应,提示共同抗原存在于人精子头颈部。这些结果有助于进一步探讨细菌感染引起男性不育的机制以及研制细菌避孕疫苗等工作。     

~(125)I标记单克隆抗体竞争结合试验在研究细胞表面抗原中的应用

用氯胺-T法将~(125)I标记到经高压液相纯化的单克隆抗体上进行竞争结合试验,对刺激前后人T细胞白血病细胞株Jurkat和H-TLV-1感染的HUT 102 B2细胞表面活化抗原进行定量检测,结果表明,静止Jurkat细胞不表达Tac抗原(CD25),TLisA1抗原为2.8×10~3/每个细胞,kd值为1.37×10~(-9)M;PMA 20ng/ml刺激24h后Jurkat细胞表面Tac分子为3930/每个细胞,kD值为1.56×10~(-10)M,TLisA1分子增加到2.4×10~4/每个细胞,kD值无明显变化。未刺激HUT     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

以RSV(Long株)抗原液滴鼻免疫BALB/c小鼠两次后,于小鼠腹腔脾区攻击。Sp 2/0骨髓瘤细胞和小鼠免疫脾细胞1:1O混合,50％PEG(MW1000)介导融合。用免疫间接萤光法检测,测出萤光(++)以上的阳性孔46个。对其中6个孔连续克隆三次,稳定传35代,获得稳定分泌抗RSV McAb杂交瘤细胞6D_9、4C_2、6F_3、6F_7、6H_9及10F_5六株。其小鼠腹水效价达1:8000～102400(++)。Ig亚类除6F_2外均为Ig 2a,6F_3未出沉淀线。因未做IgA、IgM类型鉴定,故有待证实。经交叉实验证明该McAb与腺病毒Ⅶ型、麻疹病毒、副流感病毒Ⅲ     

大鼠抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及其特性定鉴

将人血红蛋白(Hb)免疫LOU/M(IgK-1a)大鼠,取脾细胞与IR983F大鼠骨髓瘤细胞融合,制备了3株大鼠抗Hb单克隆抗体(McAb)2A10、9B5,4F12杂交瘤细胞株。3种McAb腹水效价分别为1:16×10~4、1:3.2×10~4、1:323×10~4。培养上清效价分别为1:256、1:16、1:8。亚类测定分别为IgM、IgG2_a、IgG2_4、染色体记数2A10为60±5,9B5为72±6。3种McAb的亲和常数分别为1.28×10~6M~(-1)、6.35×10~7M~(-1),3.64×10~8M~(-1)。特异性检测表明3种McAb与人Hb及人红细胞的亲和力明显高于其它种类动物的红细胞,与无关蛋白无结合活性。用这些McAb检测Hb最低可测到1υg水平,检测人红细胞可检测到4～8个RBC/ml(相当于90～190ngHb/ml)。大大高于目前临床常用的测定潜血方法。     

消化道肿瘤浸润淋巴细胞的提取、培养及表型分析

用机械分离、酶解聚和非连续密度梯度离心方法从28例消化道肿瘤制取肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)单细胞悬液。每克湿重瘤组织细胞得率为20.78±9.82×10~6(6.09～78.40×10~6),淋巴细胞占67.29±11.78％。相同方法自17例肿瘤区域淋巴结中得到的细胞为38.08±17.42×10~6/每克淋巴结,淋巴细胞占82.08±8.48％。在含高浓度rIL-2中培养时、区域淋巴结淋巴细胞(RNL)增殖力最强,PBL的增殖反应发生最早,但扩增时间短。免疫荧光标记流式细胞仪分析,患者淋巴细胞CD4比例减少,CD8增加,CD4/CD8显著降低,CD25~+细胞增加。经rIL-2培养后,T细胞(CD2~+,CD3~+)增加,多数样本以CD8生长为主,对照组以CD4生长为主。CD25~+细胞逐渐增加。TIL、RNL、PBL中Tac抗原最高表达率分别达36.8％、44.2％、20.6％。     

抗鸡巴氐杆菌荚膜抗原及菌体表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用美国标准菌株×75(5:A)、P1059(8:A)制备荚膜A型抗原及×75和P1059菌体抗原,分别免疫BALB/c小鼠,取脾细胞分别与Sp 2/O、NS-1、NS-0骨髓瘤细胞融合,用ELISA检测建立了抗荚膜A型杂交瘤细胞系2株(1B_1、2B_7),抗×75菌体表面抗原的杂交瘤细胞株13株(1A_7、1A_6、1D_4、1D_(10)、2B_5、2A_3、3C_1、5C_3、2C_2、1B_5、1A_4、3D_6、4A_7),抗P1059菌体表面抗原的杂交瘤细胞株1株(3B_7)。     

制备抗线粒体单克隆抗体的初步结果

83年初自大鼠肝经蔗糖密度梯度差速离心法分离到形态典型的线粒体,聚丙烯酰胺电泳证明无杂蛋白及核酸,以此线粒体为抗原免疫Balb/c小鼠,腹腔及皮下共免疫4次,末次注射3天后取脾,制成7.6×10~6/ml细胞悬液,与SP2/0骨髓瘤细胞按1:4在50％PEG(分子量4000)溶液中进行融合,融合率为39％,由于后来霉菌污染,仅选了未污染并克隆好的孔上清液进行检测,从151孔中用ELISA法检出特异性抗体的6孔(弱阳性的2孔)计有2H_4,2H_5,2H_6,5C_5,2B_(11),6B_9,有9孔为分泌小鼠Ig的杂交瘤细胞,计有2H_4,     

用不带Ia的供者血细胞进行免疫防止同种移植物排异反应

作者在小鼠同种胰岛组织移植前用不带Ⅰ区相关抗原(Ia)的供鼠红细胞免疫受鼠,以期延长移植物存活时间。给雄性B6小鼠(C57B1/6J,H-2~b)静脉注射链脲霉素(Streptozotocin)(180mg/kg体重)以造成糖尿病,血糖3次测定>400mg/100毫升者用作受鼠,移植后血糖3次>200mg/100毫升时定为有排异反应。免疫用之红细胞取自B10.BR(H-2~k)和B10.S(H-2~5)小鼠,经抗Ia抗血清及豚鼠血清(补体)共同孵育及稀释后由昆静脉注入受鼠。胰岛组织供鼠为B10.BR(H-2~k),胰岛细胞游离后立即经门静脉注入受鼠。实验分4组:1、移植前用已处理之B10.BR红细胞免疫;2、移植前用已处理之B10.S红细胞免疫;3、移植前用未处理之B10.BR全血免疫;4、移植前未免疫,作为对