妇科恶性肿瘤患者CD_3AK细胞与LAK细胞体外增殖能力动态观察

采用CD3MAb＋IL－2联合刺激法制备了妇科恶性肿瘤患者CD3AK细胞，体外动态观察CD3AK细胞的形态特征及增殖能力，井与LAK细胞进行比较。结果显示：①CD3AK细胞与LAK细胞在体外分别经CD3MAb（0．5mg／L）＋IL－2（105U／L）和IL－2（106U／L）刺激后，细胞体积增大，继之变为不规则形；②CD3AK细胞培养第1周增殖倍数为2．89，至第4周增殖倍数达109．37倍，均显著高于同期培养的LAK细胞的增殖倍数；③CD3AK细胞体外存活时间为4～5周，而LAK细胞仅为2～3周。结果提示：CD3AK细胞制备简便，体外存活时间长，增殖能力强，可以为临床提供充足的过继免疫效应细胞。     

CD3AK细胞加IL—2治疗恶性肿瘤体外与临床应用研究

ＣＤ３ＡＫ细胞在体外对体外癌细胞系细胞杀伤活性最强，对自体细胞杀伤活性与ＴＩＬ细胞接近，且均显著大于ＬＡＫ细胞，ＣＤ３ＡＫ细胞ＩＬ－２治疗癌症患者３０例中，ＣＲ＋ＰＲ１４例，有效率为４６％，Ｋｅｒｎｏｆｓｋｙ的生活质量标准评分治疗后有显著提高（Ｐ〈０．０１），血浆ＩＬ－２活性治疗后有明显提高（Ｐ〈０．０５），Ｔ４／Ｔ８治疗后有所提高。     

妇科恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞表型特征动态比较

CD3AK细胞和LAK细胞均为异质细胞群，为了比较妇科恶性肿瘤患者LAK细胞和CD3AK细胞在体外培养过程中的表型特征，采用间接免疫荧光法动态观察CD3AK细胞和LAK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率。结果表明：①培养第1周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率分别为61．36％，54．23％和52．96％，显著高于LAK细胞组（P＜0．01）；③培养第2，3周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率高于LAK细胞，但无统计学差异（P＞0．05）；③随着培养时间延长，CD3AK细胞CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均不同程度下降，尤以CD_3~＋细胞率下降最快，而LAK细胞在培养第2周，CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均有所升高，但第3周时又开始下降；④CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率在培养第1周最高，而LAK细胞在培养第2周最高。提示：CD3MAb和IL－2激活CD3AK细胞和LAK细胞的途径不同，致使CD3AK细胞和LAK细胞向不同的表型特征分化。     

妇科良、恶性肿瘤患者CD_3AK细胞的表型特征

为了解妇科肿瘤患者CD3AK细胞的表型特征，并探讨来源于妇科良、恶性肿瘤患者CD3AK细胞表型特征的异同，采用间接免疫荧光法测定良、恶性妇科肿瘤患者CD3AK细胞的CD3，CD4，CD8阳性细胞率。结果表明：①妇科恶性肿瘤患者CD3AK细胞于培养第1，2周，CD3，CD4和CD8阳性细胞率均较高（40．25％～61．36％），培养第3周，CD3，CD4和CD8阳性细胞率均有不同程度下降，尤以CD_8~＋细胞下降明显（第1周为52．96％，第2周为40．24％，第3周为25．72％）；②妇科良性肿瘤患者CD3AK细胞CD3，CD4和CD8阳性细胞率在培养第1周均较高（39．86％～59．84％），培养第2，3周均有降低，以CD_4~＋细胞下降更明显（第1周为50．52％，第2周为41．91％，第3周为29．97％）；③妇科良、恶性肿瘤CD3AK细胞CD3，CD4，CD8细胞阳性率除培养第1周恶性肿瘤组CD8细胞阳性率显著高于良性肿瘤组外（P＜0．05），余均无显著性差异（P＞0．05）。结果提示：CD3AK细胞是一异质细胞群，不同来源或相同来源不同功能状态的CD3AK细胞在体外受到刺激后，不同亚群细胞可呈选择性增殖，从而表现出不同的表型特征。     

栓塞加门静脉灌输CD_3 AK细胞治疗中晚期肝癌的研究

动态观察肝动脉化疗栓塞加门静脉插管化疗、灌输CD3 AK细胞治疗中晚期肝癌的临床疗效及对机体免疫功能的影响。将 2 0例中晚期肝癌随机分为A、B两组 ,A组 ( 10例 )肝动脉化疗栓塞加门静脉插管化疗、灌输CD3 AK细胞治疗 ,B组 ( 10例 )肝动脉化疗栓塞加门静脉插管化疗。另设C组 ( 10例 )肝良性肿瘤患者作为对照组。结果A组患者的细胞免疫指标 (CD3 、CD4 、CD4 /CD8、NKC、IL -2R、T淋巴细胞转化率 )及体液免疫指标 (sIL -2R、TNF -a)在术后第 1周开始迅速恢复且维持在高水平状态 (P <0 .0 5 ) ,术后第 2周、第 3周、第 4周均呈上升趋势且保持在高水平状态。B组术后细胞免疫及体液免疫功能指标在术后第 1周时较术前明显降低 (P <0 .0 5 ) ,术后第 2周开始逐渐恢复但较缓慢。A、B两组术后同期同指标相比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。C组外周血单个核细胞的分布及体液免疫功能指标在术前、术后相比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但均比A、B组高。A组的临床有效率为 70 % ,B组为 40 %。结论 :肝动脉化疗栓塞加门静脉插管化疗、灌输CD3 AK细胞治疗能提高中晚期肝癌临床疗效 ,提高肿瘤的Ⅱ期切除率及迅速恢复、提高机体的免疫功能。     

妇科良、恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞体外扩增能力比较

为探讨妇科良、恶性肿瘤患者CD3AK细胞的体外增殖能力，对其外周血淋巴细胞用CD3MAb＋IL－2诱导CD3AK细胞，体外动态观察CD3AK细胞增殖倍数，并与同期培养的LAK细胞进行对比。结果：①良性肿瘤组CD3AK细胞在培养第1周，增殖倍数高于恶性肿瘤组，但无显著性差异（P＞0．05），第2、3、4周，良、恶性肿瘤组CD3AK的增殖倍数较接近；②LAK细胞增殖倍数，在良性肿瘤组培养第1周时显著高于恶性肿瘤组（P＜0．05），培养第2、3周也高于恶性肿瘤组，但无统计学意义（P＞0．05）。结果提示：CD3AK细胞和LAK细胞短期培养时，不宜取材于恶性肿瘤患者。     

妇科肿瘤患者CD_3AK细胞对卵巢癌细胞杀伤活性动态观察

为探讨妇科良、恶性肿瘤患者CD3AK细胞体外对肿瘤细胞的杀伤活性，将5例妇科良性肿瘤，12例妇科恶性肿瘤患者的外周血单个核细胞制备成CD3AK细胞，用MTT法测定CD3AK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）的杀伤活性，同时观察不同效靶比的杀瘤情况，每周测定1次，共4周。结果：①良性肿瘤组CD3AK细胞对3AO的杀伤活性随着效靶比的增大而增强，在培养第1、4周，效靶比为20：1和40：1的杀瘤活性明显高于10：1；动态观察其杀瘤活性，培养第2周最低，第3、4周则较强；②恶性肿瘤组CD3AK细胞杀瘤活性当效靶比为10：1时低于20：1和40：1；动态观察其杀瘤活性，培养第2、3周高于第1、4周；③良、恶性肿瘤相比，CD3AK细胞杀瘤活性于培养第2周恶性肿瘤组显著高于良性肿瘤组（10：1，20：1）（P＜0．05），培养第4周（20：1）良性肿瘤组又显著高于恶性肿瘤组（P＜0．05）。结果提示：良、恶性妇科肿瘤患者CD3AK细胞对肿瘤的杀伤活性并不相同，临床上应针对良、恶性肿瘤患者CD3AK细胞的各自特点，选择适宜的治疗时间。     

CD3AK细胞治疗晚期恶性肿瘤疗效观察

目的：探讨抗CD3单克隆抗激活的杀伤细胞（CD3AK细胞）对晚期恶性肿瘤的疗效和对患者免疫功能的影响。方法：采用CD3AK细胞对58例晚期恶性肿瘤患者进行治疗,并对患者治疗前后的T细胞亚群和血清可溶性白介素2受体（sIL-2R)水平进行测定。结果：①治疗有效率（CD＋PR＋MR）为39．65％;②免疫功能变化：治疗后T细胞亚群中CD8^ 下降（P＜0．05）,CD3^ 、CD4^ 、CD4^ /CD8^ .比值均升高（P＜0．01）,sIL-2R水平显著下降（P＜0．01）。结论：CD3AK细胞能有效地治疗晚期恶性肿瘤。     

小鼠CD_3AK细胞抗肿瘤作用初步观察

目的：通过小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外对靶细胞的杀伤活性及其体内抗肿瘤作用的观察，了解ＣＤ３ＡＫ细胞的体内外抗肿瘤效应。方法：采用ＭＴＴ法检测小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外抗肿瘤细胞毒活性，并通过实体瘤的大小、瘤组织病理切片形态观察等分析小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞的体内抗肿瘤作用。结果：小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞不仅体外具有较强的细胞毒作用，且能在小鼠体内抑制Ｓ１８０肿瘤细胞的生长和扩散，并诱导Ｓ１８０细胞坏死，与生理盐水对照组比较有显著差异。结论：ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的体内外抗肿瘤作用     

IL—2基因转导CD3AK细胞免疫学功能的研究

目的：观察白细胞介素-2（IL-2）基因转导后CD3AK细胞免疫学功能的变化。方法：应用逆转录病毒载体将IL-2基因转导入CD3AK细胞，检测转导细胞中特异性Neo^R基因、培养上清IL-2的表达水平及转导CD3AK细胞的体外地产殖活性、细胞毒活性和细胞表型。结果：从转导细胞mRNA中扩增出长度为347bp的特异性Neo^R基因片段，转导细胞培养上清的IL-2表达水平显著增高，体外增殖活性和细胞毒活性均强于未转导组细胞，CD4^ /CD8^ 值升高。结论：PLIL-2SN逆转录病毒转导CD3AK细胞后，IL-2基因得到表达并增强CD3AK细胞的免疫学功能。     

CD_3AK细胞系的超微结构观察

目的观察CD_3AK细胞系的超微结构及其与杀伤功能相关的特征。方法用透射电镜观察有代表性的细胞的超薄切片。结果胞膜较完整,有少量突起,外形不规则,周围未见支原体污染。胞质中有膜泡分泌颗粒;大量游离核糖体,少量脂滴和线粒体;未见溶酶体。有的细胞胞质和细胞器较少。核形状不规则,常有凹陷,核染色质聚集成大块状。结论所建CD_3AK细胞系透射电镜下的超微结构具正常T淋巴细胞的特征,胞质中有与杀伤靶细胞相关的颗粒结构。     

原发性卵巢癌患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为探讨CD3AK细胞和LAK细胞杀瘤作用的特异性及靶细胞选择性，对比观察了3例原发性卵巢癌患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）和人早幼粒细胞白血病细胞系（HL60）的杀伤活性。结果表明：LAK细胞在培养第1～3周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性略高于对3AO的杀伤活性，但差异无显著性（P＞0．05）；CD3AK细胞在培养第1周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性均显著高于对3AO的杀伤活性（P＜0．05），而培养第2、3、4周时，对HL60和3AO的杀伤活性无显著区别（P＞0．05）。提示：LAK细胞和CD3AK细胞均缺乏杀瘤特异性，而CD3AK细胞具有一定的靶细胞选择性。     

螺旋藻多糖对CD_3AK细胞增殖能力的影响

研究了螺旋藻多糖（PS）对CD3McAb激活的杀伤细胞（CD3McAbactivatedkillercells,CD3AKcells）增殖能力的影响。结果表明，当PS浓度为2．5μg／ml培养体系条件下，对CD3AK细胞具有明显的刺激细胞增殖作用（P＜0．02）；对培养长达23d的CD3AK细胞杀伤肿瘤细胞（K563细胞）的活性仍维持在较高的水平（46．5％～50％）。     

妇科肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为比较CD3AK细胞和LAK细胞的杀瘤特性，观察了妇科肿瘤患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）的杀伤活性。结果表明：良性肿瘤组LAK细胞杀瘤活性高峰在培养第1、2周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05，P＜0．01），第3周则较低，而CD3AK细胞的杀瘤活性高峰在培养第3、4周，显著高于LAK细胞（P＜0．05）；恶性肿瘤组，LAK细胞杀瘤高峰在培养第1周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05），而CD3AK细胞杀瘤高峰在培养第2、3周，显著高于同期培养的LAK细胞（P＜0．05）。提示：妇科恶性肿瘤组LAK细胞和CD3AK细胞杀瘤活性高峰均较妇科良性肿瘤早1周左右；CD3AK细胞杀瘤活性高峰较LAK细胞延迟1～2周。说明CD3AK和LAK细胞的杀瘤活性在不同培养阶段表现不同，LAK细胞宜短期培养，CD3AK细胞宜长期培养。     

肿瘤患者外周血单个核细胞诱导的CD_3AK细胞体外抗肿瘤作用的初步观察

采用抗ＣＤ３单抗（１０μｇ／ｍｌ）联合ＩＬ－２（５０Ｕ／ｍｌ）诱导肿瘤病人外周血单个核细胞成为ＣＤ３ＡＫ细胞，并观察其体外增殖及抗肿瘤作用，结果显示：肿瘤病人的ＮＫ活性显著低于正常人，但其ＣＤ３ＡＫ细胞体外杀伤Ｋ５６２细胞的细胞毒活性与正常人比较无明显差异（Ｐ＞００５）。本研究初步表明：由肿瘤病人外周血单个核细胞诱导的ＣＤ３ＡＫ细胞，可作为过继免疫治疗的效应细胞进行自身淋巴细胞治疗     

CD3AK细胞治疗癌性腹水的疗效观察

采用ＣＤ３ＡＫ细胞和小量ｒⅠＬ－２联合腹腔内注射，治疗２４例癌性腹水患者。结果表明ＣＤ３ＡＫ细胞的临床应用安全可行，病人在治疗期间一般状况改善，生存质量提高，其中１６例患者腹水完全消失，８例腹水明显减少，连续观察３个月腹水未见进一步增加，未出现任何毒副反应。提示：ＣＤ３ＡＫ细胞与小量ｒⅠＬ－２腹腔内联合应用治疗癌性腹水安全有效，可延长患者生存期，提高生存质量。     

CD3 AK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤对患者免疫功能的影响

目的：探讨ＣＤ３ＡＫ细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的临床应用价值及对肿瘤患者免疫功能的影响。方法：利用桥联酶免疫法（ＡＰＡＡＰ法）和透射免疫浊度法对２８１例恶性肿瘤患者经ＣＤ３ＡＫ细胞悬液输注后进行外周血Ｔ细胞亚群和ＩｇＧ、ＩｇＭ及ＬｇＡ水平的检测和分析,并将各组治疗前、后的检测结果进行比较分析。结果：治疗后三组患者外周血中的ＣＤ３、ＣＤ４百分率、ＣＤ４／ＣＤ８比值及ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量较治疗前均     

临床应用白细胞介素Ⅱ和LAK细胞治疗中晚期恶性肿瘤26例初步报告

本文利用白细胞介素Ⅱ和ＬＡＫ细胞治疗２６例中晚期恶性肿瘤，其中显效１７例。进步９例。该结果提示白细胞介素Ⅱ和ＬＡＫ细胞是一种治疗中晚期恶性肿瘤的有效方法。     

CD_3AK细胞系支原体污染的巢式PCR检测法

本文应用巢式PCR和支原体营养琼脂培养法分别对CD_3AK细胞系进行支原体检测。两法结果均阴性;阳性对照皆为阳性。支原体营养琼脂培养法耗时,需几天时间;而巢式PCR法只需数小时即能得出结果,快速准确,因而可作为CD_3AK细胞在临输注前的常见支原体污染监测方法。