梅花鹿鹿茸、鹿托盘及鹿骨水溶性总蛋白比较研究

目的:比较鹿茸、鹿托盘、鹿骨水溶性总蛋白差异.方法:采用SDS-聚丙烯酰铵凝胶电泳和BCATM蛋白含量测定法比较鹿茸、鹿托盘、鹿骨水溶性总蛋白差异.结果:鹿茸水溶性总蛋白、鹿托盘水溶性总蛋白和鹿骨水溶性总蛋白的相对含量及组成差异极其明显,SDS-聚丙烯酰铵凝胶电泳法及BCATM蛋白含量测定法是鉴别鹿茸、鹿托盘及鹿骨有效方法.结论:本研究对鉴别鹿茸、鹿托盘、鹿骨粉具有一定的意义.     

正交实验法优选发酵蜈蚣粉中水溶性总蛋白提取工艺及其抗肿瘤效果

目的:优选中药发酵蜈蚣粉中水溶性总蛋白的最佳提取工艺。方法:在对中药发酵蜈蚣粉中总蛋白提取条件进行单因素考察的基础上,采用L_9(3~4)正交实验设计法,以发酵蜈蚣粉水溶性总蛋白含量为指标,考察提取时间、pH值、料液比三个因素对提取物中的水溶性总蛋白含量的影响,优选出最佳提取工艺。结果:中药发酵蜈蚣粉水溶性总蛋白的最佳提取工艺为:向发酵蜈蚣粉中加入20倍量的pH值为9的蒸馏水超声提取150 min。在最佳工艺下提取发酵蜈蚣粉中总蛋白对乳腺癌MCF-7细胞具有很好的抑制效果。结论:实验中优选的发酵蜈蚣粉中总蛋白提取工艺简便、可行,能准确反映总蛋白含量和一定的抗肿瘤效果。     

正交试验优选蜘蛛水溶性蛋白的超声提取工艺

目的:研究蜘蛛中蛋白的最佳超声提取工艺条件。方法:以蜘蛛粉为原料,探究超声处理方法提取蜘蛛水溶蛋白的提取条件,以水提液中蛋白的含量为考察指标,分别对超声处理过程中的提取时间、料液比、PH进行单因素实验,并通过正交试验法优化蛋白超声提取工艺。结果:液料比、提取时间、提取液p H均对蜘蛛的蛋白质提取具有极显著的作用。蜘蛛蛋白的最佳超声提取工艺为料液比1:40 (g:ml),提取时间50分钟,提取液p H10,最佳工艺下,蜘蛛水溶性总蛋白提取率11. 02%。结论:超声波提取蜘蛛水溶性总蛋白具有操作方便,经济高效的特点,在中药成分提取具有很好的应用前景。     

梅花鹿鹿角盘蛋白的分离纯化及其对大肠杆菌抑菌机制的初步研究

目的 分离纯化梅花鹿鹿角盘蛋白并对其抑菌机制进行初步探究.方法 以鹿角盘为原料,采用酸提醇沉提取鹿角盘总蛋白,SephacrylS-100HR和反向高效液相层析分离纯化鹿角盘抗菌蛋白,最终确定蛋白质分子质量.以大肠杆菌为研究对象,测定抗菌蛋白的最小抑菌浓度(MIC);结合荧光显微镜、扫描电镜、流式细胞仪等方法从大肠杆菌...     

人参水溶性蛋白的提取及SOD活性测定

目的提取人参水溶性蛋白,测定其蛋白含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。方法采用缓冲溶液抽提及硫酸铵分级沉淀法制备人参水溶性总蛋白,采用Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量、SDS-PAGE法进行蛋白鉴定、邻苯三酚自氧化法进行SOD活力测定,并采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行活力显示。结果通过Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量达80%,蛋白收率达1%,SDS-PAGE电泳检测显示人参中主要含有8种蛋白亚基。邻苯三酚自氧化法测得SOD活力达16.048 U/mg蛋白,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条活性谱带。结论人参中具有较丰富的水溶性蛋白,且这些水溶性蛋白具有较高的SOD活性。     

鹿角脱盘蛋白的提取工艺研究

目的 建立鹿角脱盘蛋白提取工艺.方法 采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE),考察不同pH值、不同料液比、不同浸提时间、不同盐浓度等影响因素对蛋白提取效果的影响.结果 鹿角脱盘蛋白的提取工艺为:pH值12的缓冲液(含50 mM EDTA、0.5 M NaCl)浸提,料液比为1∶5,浸提时间为3 h,浸提次数2次.结论 验证实验结果表明,鹿角脱盘总蛋白收率可达2%,纯度可达80%.优选出的工艺稳定、合理、可行.     

蜈蚣粉发酵前后水溶性活性物质含量对比研究

目的:探究蜈蚣粉发酵前后水溶性活性物质含量差异。方法:通过水提法对发酵前后蜈蚣粉进行水溶性活性物质的提取,分别采用苯酚-硫酸法、定磷法、福林酚法对总糖、总核酸、总蛋白进行含量的测定,并比较蜈蚣粉发酵前后水溶性活性物质含量的差异。结果:通过对蜈蚣粉发酵前后水溶性活性物质含量测定,得出发酵前每克样品中总糖含量为5.7807mg、总核酸含量为14.8141mg、总蛋白含量为90.9678mg,发酵后每克样品中总糖含量为19.8494mg、总核酸含量为50.3089mg、总蛋白含量为101.7339mg。结论:蜈蚣粉发酵后总糖、总核酸和总蛋白含量,均大于发酵前总含量。     

人参水溶性总蛋白对BALB/3T3细胞增殖以及对COLⅠ和TGF-β1基因表达的影响

目的观察不同质量浓度的人参水溶性总蛋白对小鼠胚胎成纤维(BALB/3T3)细胞增殖以及对Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达的影响。方法应用细胞培养技术,对BALB/3T3细胞进行培养,以不同质量浓度的人参水溶性总蛋白加入BALB/3T3细胞中,采用噻唑蓝(MTT)法检测人参水溶性总蛋白对BALB/3T3细胞的增殖影响,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测COLⅠ和TGF-β1 mRNA的表达,采用蛋白印迹(Western blot)法检测COLⅠ和TGF-β1的蛋白表达。结果 MTT法显示,人参水溶性总蛋白能够促进小鼠BALB/3T3细胞的增殖,并且随着人参水溶性总蛋白质量浓度的增加,细胞的增殖率逐渐增加;RT-PCR显示,与对照组比较,随着给药质量浓度的增加,COLⅠ和TGF-β1的mRNA表达逐渐增加;Western blot显示,经过处理的BALB/3T3细胞,随着给药质量浓度的增加,COLⅠ和TGF-β1的蛋白表达量逐渐增加。结论人参水溶性总蛋白能够促进小鼠BALB/3T3细胞的增殖,其增殖作用在分子水平上与可能与调控COLⅠ和TGF-β1蛋白的表达有关。     

强骨胶囊的提取工艺研究

目的:优选强骨胶囊的最佳提取工艺。方法:以分别提取当归中挥发油、正交试验法提取处方中脂溶性成分和水溶性成分,以浸膏量和淫羊藿苷的含量为双指标。结果:最佳提取工艺为先提取当归中的挥发油采用β环糊精包合;对脂溶性成分采用10倍量65%乙醇回流提取2次,每次1.5 h,再加水溶性成分用10倍量的水煎煮3次,每次1.5 h。结论:该提取工艺设计合理,结果可靠,为优化并规范强骨胶囊的制备工艺提供理论依据。     

西洋参水溶性蛋白的提取工艺研究

目的:优化西洋参水溶性蛋白的最佳提取工艺。方法:采用单因素考察和L9(34)正交试验,以西洋参水溶性蛋白的提取率为考察指标,优化最优的提取工艺。结果:采用pH值为7的缓冲溶液,料液比(w/v)1∶15,浸提两次,每次12h为西洋参水溶性蛋白的最佳提取工艺。结论:优化得到的提取工艺合理,重复性良好,可为西洋参水溶性蛋白提取工艺的确定提供实验依据。     

Proteomic analysis of the effect of triterpenes from Patrinia heterophylla on leukemia K562 cells

For centuries, Patrinia heterophylla had been used in China to treat many diseases including tumor. Triterpenes has been identified as the major active constituents in Patrinia heterophylla. To elucidate the antitumor mechanism of triterpenes from Patrinia heterophylla1 (TPH), a proteomic analysis is carried out with TPH treatment in K562 cells. The total proteins extracted from TPH treated K562 cells are analyzed by two dimensional gel electrophoresis (2-DE) and compared with those untreated K562 cells. Mass spectrometry is applied to identify the differentially expressed proteins. Twenty-three differentially expressed significant proteins are discovered. Eight proteins are later identified by mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) and Mascot software. Among them, four proteins are up-regulated (Aldolase A, Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, Flavin reductase and Hemoglobin subunit) and four proteins were down-regulated (Heat-shock protein 90 〈Alpha〉 (HSP90-〈Alpha〉), Eukaryotic translation initiation factor 5A, Moesin, tublin) by TPH treatment in K562 cells. The identified proteins are associated with energy metabolism, oxidative stress, apoptosis, signal transduction, differential induction, and protein biosynthesis. These findings might provide valuable insights into the antitumor mechanism of TPH in K562 cells.     

梅花鹿鹿角脱盘总肽的分离纯化及其抗肿瘤活性研究

目的分离纯化梅花鹿鹿角脱盘总肽,以小鼠乳腺癌细胞系MA782为体外研究对象,初步研究鹿角脱盘总肽的抗肿瘤活性。方弦采用酸提醇沉、真空旋转蒸发及冷冻干燥提取鹿角脱盘总肽,再经SephadexG-25凝胶过滤层析除盐,BCA法测定总肽的蛋白质浓度,SDS-PAGE电泳分析总肽中的蛋白质,MTT法和流式细胞仪检测鹿角脱盘总肽对小鼠乳腺癌细胞系MA782增殖的影响和细胞周期的变化。结果分离纯化出鹿角脱盘总肽粗提物,其蛋白质含量为91．800％;SDS—PAGE分析显示,鹿角脱盘总肽中主要含有11kDa,18kDa,40kDa,64kDa和80kDa5种多肽,总肽对小鼠乳腺癌细胞的增殖具有明显抑制作用,细胞周期各期细胞比例变化明显,当总肽浓度为30mg／L时,作用72h后细胞抑制率最高为69．200％,G0／G1期细胞百分比为81．621％,S期细胞百分比为8．983％。结论鹿角脱盘总肽对乳腺癌细胞具有抑制作用,为深入研究鹿角脱盘的抗肿瘤活性提供了实验依据。     

复方茵柏颗粒剂成型工艺的研究

目的：确定复方茵柏颗粒剂的成型（制粒）工艺条件。方法：考察不同辅料（乳糖、可溶性淀粉、糊精）及可溶性淀粉用量对浸膏粉吸湿性的影响;用正交试验法优选制粒工艺条件,考察颗粒的流动性与吸湿性。结果：3种辅料均可明显降低浸膏粉的吸湿性。最佳制粒工艺条件为：浸膏粉与可溶性淀粉按1∶1的比例混匀,以80%乙醇为润湿剂制软材,醇的用量为浸膏粉的1.2倍。成品颗粒的流动性好,临界相对湿度约为67%。结论：本研究为复方茵柏颗粒制粒工艺条件的确定及生产环境的控制提供了科学的实验依据。     

木蝴蝶药材质量标准研究

目的:研究木蝴蝶药材的质量标准。方法:性状鉴定,粉末显微鉴定,以黄芩苷对照品作对照进行TLC鉴别,按《中华人民共和国药典》2010年版(一部)要求对其中的水分、总灰分、酸不溶灰分、杂质、醇溶性浸出物等指标进行分析。结果:市售5批药材中水分、醇溶性浸出物含量均符合药典标准,醇溶性浸出物含量以云南最高,达31.09%。确定了木蝴蝶药材总灰分范围:3.16%~3.99%;酸不溶灰分范围:0.01%~0.06%;杂质含量范围:0.04%~0.09%,并对其含量限度提出了建议。结论:研究结果为进一步完善木蝴蝶药材质量标准提供依据。     

黑翅土白蚁抗HIV活性部位中蛋白质成分的分离鉴定

目的对黑翅土白蚁抗HIV-1活性部位中水溶性蛋白质进行分离鉴定。方法利用离子交换层析技术进行分离纯化,对纯化物CM-1进行定性定量分析。结果纯化物CM-1初步判定为蛋白质类化合物,其中含18种氨基酸,粗蛋白含量是46.75%,必需氨基酸含量是24.72%,氨基酸总量是61.5%。结论纯化物CM-1是否具有抗HIV活性有待进一步研究。     

不同等级厚朴饮片质量评价指标的系统聚类分析

目的:建立厚朴饮片质量评价指标的聚类分析,规范该饮片的质量规格。方法:测定不同产地及同一产地不同树龄厚朴饮片的水溶性浸出物、醇溶性浸出物、挥发油、厚朴酚与和厚朴酚的含量,并对其进行不同类间距离聚类分析。结果:厚朴饮片的水溶性浸出物、醇溶性浸出物、挥发油及总酚的含量与厚朴的级别呈正相关。厚朴饮片可分为三个等级,一级饮片:规格为厚度4~6 mm,挥发油质量分数0.7%,水溶性浸出物质量分数10%,醇溶性浸出物质量分数20%,厚朴酚与和厚朴酚总质量分数15%。二级饮片:规格为厚度2~4 mm,挥发油质量分数0.35%,水溶性浸出物质量分数5%,醇溶性浸出物质量分数8%,厚朴酚与和厚朴酚总质量分数7%。三级饮片:低于以上各指标值的均归为此类。结论:利用质量指标评价厚朴饮片与传统分级存在一定的相关性,为综合评价厚朴饮片质量规格提供了新思路。     

肿节风有效部位胶囊的制备工艺及质量标准研究

目的：优化肿节风有效部位胶囊的制备工艺,建立肿节风有效部位胶囊的质量标准。方法：考察肿节风浸膏粉流动性、吸湿性和堆密度;运用薄层色谱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法对制剂中有效部位总黄酮、异嗪皮啶进行定性和定量测定。结果：肿节风浸膏粉休止角为26．26。;72h吸湿百分率为9．68％;堆密度为0．73g／ml;薄层色谱斑点清晰集中;胶囊平均含水量为3．27％;装量差异为1．32％;40rain时总黄酮溶出度为82．14％,异嗪皮啶溶出度为99．92％;芦丁在0．02～0．07mg／ml浓度范围内,与吸光度呈良好的线性关系（r=0．9997）,平均回收率为101．19％;异嗪皮啶进样量在0．0001～0．0005μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0．9998）,平均回收率为100．64％;胶囊中总黄酮和异秦皮啶含量分别不低于160mg和4mg。结论：制备工艺科学合理,定性鉴别准确,质量标准易于操作,重复性好,能用于该制剂的质量控制标准。     

肉苁蓉属4种肉苁蓉可溶性蛋白的SDS-PAGE电泳分析

目的对肉苁蓉属4个种进行鉴别。方法采用可溶性蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳。结果肉苁蓉属4个种的SDS-PAGE图谱存在显著差异,其多态性条带为81.82%。结论各个种的电泳图谱可以相互区别,肉苁蓉属可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱可作为种间鉴定的蛋白指纹图谱。     

素馨花药材质量标准的研究

目的：对素馨花药材的水分、总灰分、酸不溶灰分、水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量等进行研究。方法：按照《中华人民共和国药典》2010年版（一部）附录IXh水分法（烘干法）、附录IXK灰分测定法、附录XA浸出物测定法测定。结果：市售9批素馨花药材中水分含量平均值为5.34%;总灰分含量平均值为6.12%;酸不溶灰分含量平均值为0.31%;水溶性浸出物含量平均值为36.04%;75%乙醇浸出物含量平均值为34.58%。结论：为进一步建立和完善素馨花药材质量标准提供依据。     

电针预防老年患者术后认知功能障碍的临床观察

目的：观察术前电针刺激对全麻下行全膝置换老年患者术后认知功能障碍（POCD）发生率的影响及与血清S-10013蛋白、IL-1β、IL-6和α-TNF表达的关系。方法：选择全麻下行单侧全膝置换术老年患者85例（男39、女46）,随机分为电针组和对照组。电针组在麻醉后手术前于百会和神庭穴电针刺激30min。术前1d、术后1d和术后7d采用简易智能量表（MMSE）评价患者认知功能,并于诱导前、术毕和术后1d采血检测S-10015蛋白、IL-1β、IL-6和α-TNF。结果：最终79例患者完成评分和随访,电针组34例,对照组45例。电针组和对照组术后1dPOCD的发生率分别为20．59％和42．22％,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）,术后7dPOCD的发生率分别为8．82％和13．33％,两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。血清S-100β蛋白、IL-1β、IL-6和α-TNF表达术毕时两组均较术前增加,有统计学差异（P〈0．05）,术后1d的表达与术前比较无统计学差异（P〉0．05）。术毕和术后1d两组间比较均无统计学差异（P〉0．05）。结论：术前电针对全麻下行单侧全膝置换老年患者术后认知功能障碍的发生有一定的预防作用,术前电针不能降低血清S-100β蛋白、IL-1β、IL-6和α-TNF表达。