中华伍氏百叶散抗大鼠肝癌的实验研究

目的 :研究中华伍氏百叶散 (WSBYS)的抗癌作用。方法 :通过大鼠体重 ,肝脏病理学为指标 ,观察WSBYS对 2 -乙酰氨基芴 (2 -FAA)诱导的大鼠肝癌的治疗作用。结果 :服用WSBYS治疗的大鼠 ,肝癌病变程度低于阳性对照组 ,体重高于阳性对照组 ,且与剂量大小呈正相关。结论 :WSBYS对 2 -FAA诱导的大鼠肝癌有明显的治疗作用     

伍氏百叶散中成药中多糖含量测定

为测定复方中药伍氏百叶散中的多糖，试用乙醚脱脂水提取醇沉淀提取多糖。苯酚～硫酸法测定其含量，结果稳定可靠，变异系数1．73～3．36，回收率在96％～102．5％之间。     

调肝止血中药对置Cu-IUD大鼠外周血清及子宫组织t-PA,PAI活性的影响

目的：观察调肝止血中药柴胡止血液对置含铜宫内节育器(Cu—IUD)大鼠子宫局部及外周血清纤溶状态的影响，探讨调肝止血中药治疗置Cu—IUD后子宫异常出血的机理。方法：采用发色底物法测定了柴胡止血液对置Cu-IUD大鼠子宫组织及外周血清中组织型纤溶酶原激活物(t—PA)及其抑制剂(PAI)活性的影响。结果：与正常对照比较，置Cu—IUD后大鼠子宫组织t—PA活性明显升高，PAI活性也代偿性小幅度升高，t—PA，PAI比值明显高于正常对照组：使用柴胡止血液治疗后，t—PA活性及t-PA，PAI比值较模型对照组明显降低。同时，模型组t—PA活及t—PA，PAI比值较正常对照组有所升高，而PAI活性无明显变化，经柴胡止血液治疗后，t—PA、PAI活性及t—PA，PAI比值恢复正常一结论：置Cu—IUD大鼠子宫局部纤维系统功能亢进，其全身纤溶系统功能也有一定升高，调肝止血中药柴胡止血液对置Cu—IUD后大鼠子宫组织及外周血清纤溶状态有一定调整作用，能明显降低t—PA活性及t—PA，PAI比值，这是其有效治疗置Cu—IUD后子宫异常出血的作用机理之一。     

硝石矾石散对肝内胆汁瘀积型大鼠血清学及Na-K-ATP酶活性的影响

目的:探讨硝石矾石散对α-荼基异硫氰酸盐(α-naphthylisothiocyanate,ANIT)诱导的肝内胆汁瘀积大鼠模型的影响。方法:采用ANIT诱导制备肝内胆汁瘀积大鼠模型40只,雌雄各半,随机分为模型组、西药阳性对照组及中药治疗组,其中模型组20只,其余组各10只,另选未造模大鼠10只作为正常对照组。各组均日一次灌胃给药,西药组给予思美泰,中药组给予硝石矾石散,模型组和正常对照组给予等容积0.9%氯化钠注射液。给药时间从造模当天开始,于造模48h后处死模型组10只大鼠,留取血清及肝组织备用。用药7天后处死全部大鼠,观察各组大鼠肝功能指标及Na-K-ATP酶活性。结果:与模型组相比,中药组血清中总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、谷丙转氨酶(ALT)、血清总胆汁酸(TBA)、碱性磷酸酶(ALP)水平均明显下降(P<0.05),Na-K-ATP酶活性有明显差异(P<0.05)。结论:硝石矾石散对肝内胆汁瘀积模型有很好的治疗作用。     

益肾缓急汤对大鼠模拟高强度军事训练致肾损伤的防治作用

目的：观察中药益肾缓急汤对大鼠模拟高强度军事训练致肾损伤的影响。方法：30只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和中药益肾缓急汤治疗组。模型组和中药治疗组大鼠行8周跑台训练构建模拟军事训练肾损伤动物模型。每周末收集尿液．用于尿沉渣镜检及24h尿总蛋白、白蛋白、尿N-乙酰-β—D-葡萄糖苷酶（N—acetyl—β—D-glucosaminidase，NAG）检测；并于8周末取血和肾脏组织．检测血清肌酐和尿素氮，用放射免疫法检测血浆和肾组织血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）浓度，化学比色法测定肾组织中Na＋，K＋-ATP酶活性。结果：训练结束后模型组和中药治疗组大鼠24h尿蛋白、尿NAG活性、血清尿素氯和肌酐值均高于正常对照组（P〈0.05），中药治疗组低于模型组（P〈0.05）。模型组和中药治疗组大鼠血浆及肾组织AngⅡ浓度均高于正常对照组（P〈0.05）．模型组和中药治疗组间差异无统计学意义（P〉0.05）。模型组大鼠肾组织Na＋,K＋-ATP酶活性低于正常对照组（P〈0.05）。正常对照组和中药治疗组间差异无统计学意义。结论：中药益肾缓急汤有减少模拟军事训练肾损伤大鼠24h尿蛋白含量、降低尿NAG活性和减轻氮质血症作用．且抗氧化作用明显．可能对高强度军事训练引起的肾损伤有预防作用。     

消痞灵冲剂对实验性胃癌前期病变大鼠胃粘膜胃螺旋样菌感染的防治作用

采用综合法复制了大鼠胃癌前期病变模型，并观察了大鼠胃粘膜胃螺旋样菌的感染情况及中药消痞灵冲剂对其防治作用的影响。结果显示：模型组和自然恢复组大鼠胃螺旋样菌感染数量明显高于正常对照组，大、中、小３个剂量的消痞灵冲剂对其感染有明显的抑制作用。表明：胃螺旋样菌感染参与了大鼠胃癌前期病变的发生和发展，对胃螺旋样菌的抑制作用可能是消痞灵冲剂发挥防治作用的机制之一。     

蛋白激酶C在糖尿病周围神经病变中的表达及中药干预的实验研究

目的　蛋白激酶C(PKC)与糖尿病(DM)及其并发症的关系已成为研究的焦点,本实验检测了DM大鼠坐骨神经及腓肠肌PKC -beta表达及活性变化,探讨PKC在糖尿病周围神经病变(DPN)发病中的作用,并观察中药对其影响。方法　利用(γ -32P)ATP底物磷酸化方法检测实验对照组、中药组DM大鼠及正常组大鼠坐骨神经及腓肠肌的胞浆、胞膜PKC-beta活性,并行免疫印迹分析PKC- beta在神经肌肉组织中的表达。结果　实验 2个月,两组DM大鼠坐骨神经及腓肠肌的胞浆、胞膜PKC beta活性与正常组大鼠比较均增高,实验对照组增高明显,中药组稍高于正常组。PKC- beta表达与活性测定结果相一致。结果提示实验对照组坐骨神经及腓肠肌部位PKC- beta表达明显增加,活性明显增高,而中药组接近正常组。结论　实验性 2个月DM大鼠周围神经病变中的PKC- beta表达及活性明显增加,本中药复方对其有一定抑制作用。     

DEN诱发大鼠肝癌模型的实验病理研究

目的：建立DEN肝癌模型并初步动态观察大鼠肝癌发生的病理形态演变过程。方法：用2‰DEN溶液灌喂诱发Wistar大鼠肝癌，病理常规HE染色动态观察。结果：病理学检查证实DEN成功诱发肝癌，诱癌率为87．17％（34／39），大鼠肝癌癌变过程大致经过肝细胞损伤期、肝细胞增生硬化期和肝细胞癌变期等三个时期，具有与人体肝癌相似的病变过程及病理学变化特征。结论：该肝癌模型可作为研究人类肝癌的一种理想的动物模型。     

门静脉化学栓塞治疗肝癌的实验研究

目的：应用大鼠单叶肝癌模型，研究门静脉支化学栓塞对肝癌的治疗作用。方法：经大鼠门静脉种植腹水肝癌细胞，制作大鼠单叶肝癌模型，开腹向门静脉支内注入新开发的化学栓塞物质。术后观察大鼠生存天数、体内化疗药浓度及肝功能变化，并进行了组织学观察。结果：栓塞后的肝癌大鼠生存天数较不栓塞大鼠明显延长，化疗药选择地集聚于癌灶内，肝功能损伤轻微。组织学观察到确切的门静脉支栓塞及癌灶周边部的部分坏死效果。结论：门静脉支化学栓塞对肝癌有确切的治疗作用，可以进一步在临床上开展     

祛瘀化痰汤对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白表达、分布的影响的实验研究

目的 :观察、研究祛瘀化痰汤对肝纤维化大鼠肝组织α—平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)表达、分布的影响 ,以进一步探讨其防治大鼠肝纤维化的作用机制。方法 :实验动物分组为 :正常对照组 ;中药预防组 ;模型对照组 ;中药治疗组 ;模型自然恢复组。采用四氯化碳 (CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型 ,以免疫组织化学染色法观察各组大鼠肝组织α -SMA表达、分布情况。结果 :中药祛瘀化痰汤能显著减少中药预防组及中药治疗组大鼠肝组织α -SMA表达、分布 ,中药预防组及中药治疗组大鼠肝组织α -SMA表达、分布分别较模型对照组及模型自然恢复组明显减少 ,染色明显减淡 ,中药预防组与模型对照组、中药治疗组与模型自然恢复组之间比较 ,肝组织α -SMA表达、分布半定量分析及评分均存在显著性差异。结论 :祛瘀化痰汤能够通过抑制大鼠肝星状细胞的活化增殖 ,进而抑制胶原纤维合成而达到较显著的抗大鼠肝纤维化作用。     

SRB法检测大鼠原发肝癌细胞、骨髓间充质干细胞和HepG2细胞的抗肿瘤药物敏感差异

目的:应用SRB法探讨不同药物对骨髓间充质于细胞(MSCs)、肝癌细胞(HC)和HepG2细胞的药敏差异.方法:雌性清洁级SD大鼠20只,应用二乙基亚硝胺饲喂法建立大鼠原发性肝癌模型,选取诱癌成功大鼠8只分别原代培养HC与MSCs,同时培养HepG2细胞系细胞,SRB法进行药物敏感实验,观察药物敏感性的差异.结果:对阿霉素、顺铂、洛拉曲克的敏感度从高到低依次为HepG2细胞,HC,MSCs.而丝裂霉素药敏显示,3种细胞药物敏感度从高到低依次为HepG2,MSCs,HC.结论:HC药敏实验与HepG2细胞和MSCs存在一定异同.     

鼠肝细胞癌变发生过程中热休克蛋白gp96及其基因的动态表达

目的:探讨肝细胞癌变过程中热休克蛋白(HSP)gp96及基因的动态表达与变化。方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA,0.05%)喂饲SD大鼠诱发肝癌,观察肝病理组织学(HE染色)和总RNA的改变,以巢式逆转录酶链反应扩增gp96基因片段;以免疫组化分析肝细胞癌变过程中gp96的动态表达。结果:SD鼠在喂饲2-FAA后,在诱癌早期肝细胞发生颗粒样变性,中期出现不典型增生,后期见大量癌巢结节。癌变过程中肝组织gp96-mRNA表达明显增加,且显著高于对照组肝组织(P<0.01);正常肝gp96蛋白表达较少,肝细胞癌变过程中gp96表达呈显著的梯度增加。结论:gp96参与肝细胞的癌变过程,癌变初期的过度表达有助于肝癌的早期诊断。     

血管内皮生长因子动态表达及干预对肝细胞癌变的影响

目的 动态观察癌变过程中血管内皮生长因子(VEGF)改变及表达干预对肝细胞癌(HCC)发生的影响.方法 将SD鼠数字随机分为诱癌组、诱癌干预组和对照组,前两组以含2-乙酰氨基芴(0.05%)的颗粒饲料喂饲诱发肝癌,诱癌干预组同时以沙利度胺(100 mg/kg体重)灌胃.分期、分批处死实验鼠与对照鼠,以病理学、免疫组化、Western印迹及ELISA分析VEGF表达及相互关系.结果 诱癌后肝细胞出现颗粒样变性、不典型增生及HCC的变化;阳性VEGF呈棕黄色颗粒,存在胞质,偶见于胞核;VEGF表达率和VEGF/β-肌动蛋白比率分别为:对照组25%和0.16±0.02、肝细胞变性组88.9%和0.29±0.04、癌前病变组100%和0.52±0.03及癌变组100%和0.84±0.02;VEGF表达随组织学改变呈梯度增加,癌变组明显高于对照组和肝细胞变性组(P<0.05);肝组织与血VEGF动态改变呈显著正相关(r=0.785,t=8.00,P=0.000);干预组VEGF表达及肝癌发生率均显著低于诱癌组.结论 VEGF异常与肝癌发生发展有关,抑制肝VEGF表达、可推迟肝细胞癌变的发生.     

实验性鼠肝癌癌变过程中GPDAⅡ的表达

目的：探讨肝癌特异性GPDA的来源及其发生本质。方法：化学致癌剂－2－FAA诱发SD大鼠肝癌,聚丙烯酰胺凝胶阶段梯度电泳分离GPDA同工酶Ⅱ区带（后文中简称GPDAⅡ）,动态观察鼠肝癌癌变过程中血清、肝组织GPDAⅡ的变化。结果：癌前病变鼠肝组织及血清中GPDAⅡ的阳性率分别为69．2％和23．1％,癌变时肝组织及血清中GPDAⅡ的阳性率分别升至100％和61．5％,对照组和细胞变性组肝组织和血清中GPDAⅡ全部阴性。结论：癌前病变时肝细胞开始合成GPDAⅡ,随着癌变发展,GPDAⅡ的合成、释放均增加、血中阳性率上升。     

三种功效的中药方剂阻断大鼠肝癌前病变

目的：研究功效不同的３种方药对二乙基亚胺胺（ＤＥＮ）致大鼠肝癌前病变艇。方法：建立Ｓｏｌｔ－Ｆａｒｂｅｒ二步有短期动物模型,用９８１２０８冲剂、三石猫胶囊和复方丹参注射液３种中药进行干预,光镜及电镜下观察肝组织、细胞形态学变化;组织 色比较ｒ－谷氨酰转肽酶（ＧＧＴ）变灶的个数及面积,结果：３种 均可减轻ＤＥＮ致大鼠肝脏细胞毒性损害,抑制癌前变异细胞的增生;对肝癌前ＧＧＴ阳性灶的个数／ｃｍ＾２和面积     

二乙基亚硝胺诱导建立Apc基因突变大鼠与F344大鼠肝癌模型的比较

目的 采用二乙基亚硝胺(DEN)在F344大鼠、Kyoto Apc Delta(KAD)大鼠体内诱发制备肝癌模型,并比较其优劣.方法 KAD大鼠25只,随机法分组,阴性对照组(5只)给予正常饮水;DEN造模组(20只)前5周饮水中添加40 μg/mL DEN,6～20周给予正常饮水;定期解剖大鼠,肉眼观察肝脏病变并取病变组织及癌旁组织制作病理切片.25只F344大鼠采用相同方法进行实验.结果 F344大鼠和KAD大鼠均可成功诱发肝癌,且肝癌发生病理过程与人类相似.造模16周时KAD大鼠就可见灰白色病灶点,3/4大鼠成瘤,平均病灶数为1.00士0.82个;造模20周时,KAD大鼠全部(4/4)成瘤,病灶数为3.50±1.29个;而F344大鼠迟至20周时才可观察到类似病灶,3/4大鼠成瘤,病灶数为1.25±0.96个.KAD大鼠的诱导成瘤性显著高于亲代F344大鼠(P＜0.05).结论 与亲代F344大鼠相比,抑癌基因Apc突变的KAD大鼠经DEN诱导更易发生肝癌,且该模型具有肝癌诱发时间短、相同诱导时间肝癌发生率高、诱发病灶数多等优点,是化学诱发制备肝癌动物模型的良好模式动物.     

大鼠肝癌细胞表面特标记与成瘤能力有关

目的:研究大鼠肝癌细胞表面标记特征与成瘤能力关系. 方法:二乙基亚硝胺为诱癌剂制造大鼠肝癌模型,分离培养肿瘤细胞,按照卵圆细胞表面标记(CD34,c-Kit,Thy-1,AFP,CK7,CK8,CK14,CK18,CK19和GGT)分选肿瘤细胞,比较各个表面标记阳性肿瘤细胞亚群与阴性肿瘤细胞亚群移植裸鼠后成瘤能力差异,并且对数稀释成瘤能力强的细胞亚群,分析低密度下强成瘤能力细胞亚群与相应阴性细胞亚群成瘤差异. 结果: CD34,Thy-1,CK7,CK8,AFP和GGT等6个标记的阳性与阴性肿瘤细胞移植裸鼠后,成瘤能力差异显著(P<0.05或0.01);1/100～1/10细胞密度的CK7阴性与AFP阳性细胞亚群成瘤能力仍然比其对应细胞亚群为高. 结论:大鼠原发性肝癌肿瘤细胞中存在成瘤能力差异巨大的肿瘤细胞亚群. CK7(-)和AFP( ),可能是大鼠肝癌干细胞的部分表面标记特征.     

p53基因变异在F344大鼠肝癌发生过程中的作用

目的 :研究 p5 3基因在肝癌发生过程中的作用。方法 :纯系 F344大鼠经 0 .0 6% 3′-甲基 -4-二甲胺基偶氮苯饲喂 6、1 2和 2 4周致癌。激光显微切取肝脏癌前病变和癌灶 ( LCM样品 ) ,进行p5 3基因的 PCR- SSCP分析和直接测序。结果 :2 5 %癌前病变 LCM样品及 45 .8%癌 LCM样品分别在外显子 6/7或 (和 ) 8呈现 PCR- SSCP电泳带移动率改变 ( P>0 .0 5 )。 2 0 .5 %癌前病变 LCM样品在外显子 6/7或 (和 ) 8发生了错义突变 ,显著低于癌灶样品 ( 62 .5 % ,P<0 .0 1 )。在较晚的癌前病变和癌灶细胞核中发现变异的 p5 3蛋白。结论 :p5 3基因突变始发于肝脏化学性癌发生早期的癌前病变 ,提示突变导致 p5 3基因的失活是肝癌发生的重要原因     

抗坏血酸促进三氧化二砷诱导的肝癌细胞毒性及其相关机制研究

目的：探讨抗干血酸(AA)对三氧化二砷(AT)诱导人肝癌细胞凋亡的协同效应，为改善三氧化二砷临床治疗人肝癌细胞提供理论基础。方法：体外培养人肝癌细胞株BEL-7402，用MTT和免疫印迹的方法分别评价AT和(或)AA对其生长抑制和胞内两个信号分子的影响。结果：微摩尔剂量的AT能抑制人肝癌细胞BEL-7402的异常生长，通过caspase-3的激活诱导其凋亡，并激活了ERKs信号蛋白，其作用有明显的剂量依赖性。AA对BEL-7402无明显的作用，但能有效的通过caspase-3而不是ERKs的激活促进AT对肝癌细胞的凋亡效应。结论：ERKs和caspase-3信号蛋白可能分别参与了砷剂诱导的人肝癌细胞促分化和凋亡效应，AT和AA对肝癌细胞的作用有协同性，他们通过caaspase-3而不是ERKs的激活进一步抑制了肝癌的生长。诱导其凋亡。