代谢产物鉴定及汉黄芩素与汉黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸苷的同时测定:小鼠肝脏的分布研究(英文)

汉黄芩素具有体内外抗肿瘤活性及良好的安全性。本文采用高效液相色谱串联质谱法研究了小鼠静脉注射汉黄芩素后肝脏中的代谢产物,鉴定了五个主要的代谢产物。建立了小鼠肝脏中汉黄芩素及其代谢产物汉黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸苷的同时测定方法。肝匀浆经醋酸乙酯提取,在C₁₈色谱柱上,采用甲醇-10 mm醋酸铵（80:20,v/v）为流动相,质谱检测采用负离子选择反应监测模式。肝组织中汉黄芩素与汉黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸苷在0.2-40μg/g范围内呈良好线性关系,方法学评价表明本法适用于动物静脉注射汉黄芩素后体内的组织分布研究。     

大鼠肝肠不同微粒体药物代谢酶对黄芩素葡糖醛酸酸化代谢物的影响研究

目的:探讨肝肠器官对黄芩素代谢的影响。方法:采用体外微粒体药物代谢酶孵育法,在不同孵育时间和不同浓度下,运用高效液相色谱(HPLC)法测定黄芩素及其葡糖醛酸酸化代谢物的含量。探讨大鼠肝肠不同微粒体对黄芩素葡糖醛酸酸化代谢产物生成速率的影响。结果:不同微粒体药物代谢酶对黄芩素均有代谢作用,且随孵育时间延长代谢作用增加,呈较好的时间和剂量依赖关系,其中十二指肠微粒体代谢作用最强,肝脏代谢作用最弱。结论:黄芩素在肝肠器官有较强的代谢,主要代谢部位是肠道。     

白及有效成分Militarine在肝微粒体中的体外代谢途径及其酶促动力学特征

目的:研究白及有效成分Militarine在肝微粒体中的体外代谢途径及其酶促反应动力学特征。方法:建立大鼠和人肝微粒体体外孵育体系,对Militarine进行体外孵育反应;采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术,结合UNIFI数据库并参考文献对其代谢产物进行结构鉴定。同时,以葛根素为内标,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用技术对Militarine在大鼠肝微粒体中的代谢转化量进行定量分析,通过GraphPad Prism 5.0软件拟合代谢转化曲线,并计算在有/无还原性辅酶Ⅱ(NADPH)参与的反应条件下的Militarine酶促动力学参数[最大清除速率(v_(max))、米氏常数(k_m)、固有清除率(CL_(int))]。结果:Militarine在大鼠和人肝微粒体中孵育后,生成了1个化学式为C_(21)H_(29)O_(11)的化合物,推测其为Militarine的酯键水解代谢产物。酶促动力学研究显示,有/无NADPH参与的Militarine酶促反应的v_(max)分别为1.955、2.129 nmol/(h·mg),k_m分别为8.601、9.854 nmol/mL,CL_(int)分别为0.227 3、0.216 1 mL/(h·mg),两者无明显差异。结论:Militarine在肝微粒体中的主要代谢途径为C1或C4位酯键的水解;其代谢不依赖于由NADPH启动反应的细胞色素P_(450)酶代谢途径。     

乌头碱在豚鼠和小鼠肝微粒体细胞色素氧化酶中的代谢作用研究

目的:研究乌头碱(AC)在豚鼠和小鼠体外肝微粒体中代谢产物的差异。方法:优化2个种属肝微粒体与AC的P450反应体系,应用高效液相色谱-高分辨质谱联用(HPLC-HRMS)和超高相液相色谱-多级质谱(UPLC-MS/MS)法测定AC在2种肝微粒体中的细胞色素氧化酶(CYP)代谢产物。结果:AC在2种肝微粒体中均代谢产生8种代谢产物,其中6种为CYP代谢产物;脱甲基、脱乙基、脱氢和氧化反应是其主要代谢特征。结论:乌头碱在豚鼠和小鼠体外肝微粒体中的CYP主要代谢途径相同。     

倒千里光碱的反应性代谢产物与RNA形成双分子嘌呤共价结合物

目的 研究吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids, PAs)中倒千里光碱(retrorsine, RTS)的反应性代谢产物在体外和体内与RNA的相互作用。方法 通过液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)分析合成反应、肝微粒体孵育和给药RTS的小鼠中腺苷和鸟苷与RTS的反应性代谢产物形成的加合物。结果 在体外合成反应液,肝脏微粒体孵育液和给药RTS的小鼠肝脏组织中检测到了RTS的反应性代谢产物与腺苷和鸟苷形成的双分子嘌呤加合物,体内观察到的所有加合物的生成量呈剂量依赖性,并在给药后2 h达到峰值。结论 首次发现RTS的反应性代谢产物与RNA反应形成RNA双分子加合物,可能是RTS导致肝毒性的重要原因之一。     

黄芩素在正常及早期肝纤维化模型小鼠体外肝、肠微粒体中Ⅱ相代谢差异

目的考察肝纤维化模型小鼠肝、肠微粒体对黄芩素体外葡萄糖醛酸化代谢影响和酶促反应动力学研究。方法小鼠每周3次灌胃20%CCl4油溶液,持续6周,检测血清肝功能指标ALT和AST,ELISA试剂盒检测血清中HA,天狼猩红染色和免疫组化染色α-SMA评估肝纤维化模型。检测正常和肝纤维小鼠肠道内容物β-葡萄糖醛酸苷酶活性,同时建立小鼠肝、肠微粒体孵育体系对黄芩素葡萄糖醛酸化反应的酶促反应动力学进行研究,评估其代谢动力学类型,并对比在正常和肝纤维化模型中最大反应速率(Vmax)和米氏常数(Km)。结果经过6周CCl4诱导后,模型组的血清、病理和免疫组化检测结果显示肝纤维化模型复制成功。体外实验结果显示,黄芩素在小鼠肝微粒体中的代谢方式符合米氏方程,而在肠微粒体中属于底物抑制型。与正常组相比,黄芩素在肝纤维化后的肝微粒体中的代谢速率要显著提高(P<0.01),而在肠微粒体中则相反,但差异无统计学意义,同时发现肝纤维化后肠道菌群中的β-葡萄糖醛酸苷酶活性要显著高于正常组(P<0.01)。结论肝纤维化状态对葡萄糖醛酸苷转移酶等Ⅱ相代谢酶的活性带来显著的改变,这值得我们关注肝纤维化疾病状态下药物的代谢特征和临床疗效,促进安全合理用药。     

奥美拉唑在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学研究

目的研究奥美拉唑在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学。方法采用高效液相色谱法测定奥美拉唑在体外代谢系统中的产物5’-羟基奥美拉唑,并用Eadie-Hofstee作图法分析数据,计算酶促反应动力学参数最大反应速率(Vmax)、米氏常数(Km)。结果在体外代谢系统中,奥美拉唑生成5’-羟基奥美拉唑的Vmax为2010nmol/(min.mgprotein)、Km为50.3μmol/L。结论本分析方法符合方法学验证的要求,体外代谢常数准确,可满足奥美拉唑体外代谢的研究。     

基于UPLC-Q-exactive orbitrap-MS法的新型合成大麻素4CN-MDMB-BUTINACA体外代谢研究

为研究新型合成大麻素3,3-二甲基-2-[1-(4-氰基丁基)吲唑-3-甲酰氨基]丁酸甲酯(4CN-MDMB-BUTINACA)的体外代谢产物,本研究通过体外人肝微粒体孵育模型,采用高效液相色谱串联Q exactive质谱检测合成大麻素原形药及其代谢产物。肝微粒体实验发现4CN-MDMB-BUTINACA通过羟基化、酯水解、酯水解加羟基化、戊烷氧化为戊酸反应代谢物和酯水解加戊烷氧化为戊酸反应代谢物等代谢途径共产生7种代谢产物。本研究解析了合成大麻素体外代谢途径及其代谢产物,其中羟基化反应代谢产物(M1-a)、酯水解反应代谢产物(M2)以及戊烷氧化为戊酸反应代谢物(M4)为潜在的代谢标志物。研究结果为合成大麻素4CN-MDMB-BUTINACA的司法鉴定和吸食认定提供技术支撑。     

复方双黄连与黄芩单方中黄芩苷在大鼠肠道菌群中代谢的比较

目的:比较黄芩单味药材提取物和复方双黄连在肠内菌群中代谢的差异.方法:利用离体实验考察黄芩苷在模拟肠道环境下的代谢产物,并通过给大鼠灌胃给药考察实际肠道内的代谢,运用高效液相色谱法和液质联用技术检测和鉴定单方和复方中黄芩苷的代谢情况.结果:单方及复方中黄芩苷在模拟肠道环境下和大鼠肠道内均代谢为黄芩素,体外消除速率常数k分别为0.062 1和0.069 4h-1,t1/2分别为11.2和9.99h,方差分析后进行双单侧检验,F分别为0.21和0.15,小于理论值5.12(P＞0.05).结论:单复方中黄芩苷的体外肠菌代谢差异无显著性,但体内代谢产物存在差别.     

黄芩透过人胎盘屏障体外模型药物成分研究

目的研究黄芩透过人胎盘屏障药物成分。方法用尤斯灌流室技术建立人胎盘屏障体外模型,预平衡30 min后,于母体池加入10 mg·mL-1黄芩溶液,分别于5~240 min内在胎儿池取样,用高效液相色谱技术分析样品中所含药物成分。色谱柱:Agilent Zorbax-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水(梯度洗脱),内标为葛根素,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为278 nm,柱温20℃,进样量为5μL。结果从5 min开始,黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素即可透过人胎盘屏障;黄芩素和千层纸素A从20 min开始才透过胎盘屏障;30 min后检测到的11种药物成分均可透过胎盘屏障,且在后续取样时间点未见新的物质生成。结论黄芩中的5种黄酮类成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A)均可透过人胎盘屏障体外模型。