神经嵴细胞和胰岛因子1阳性细胞与小鼠胚胎心流出道发育的关系

目的 探讨迁移中的细胞视黄酸结合蛋白1(CRABP1)阳性神经嵴细胞、胰岛因子1(ISL-1)、阳性心肌前体细胞与小鼠胚胎心流出道发育的关系.方法 36只胚龄8.5～13d小鼠胚胎心连续石蜡切片,选用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗转录因子ISL-1、抗CRABP1和抗磷酸化组蛋白H3(PHH3)抗体,进行免疫组织化学及免疫荧光染色.结果 胚龄8.5～10d,ISL-1阳性心肌前体细胞相继出现在心背系膜、原始咽两侧、头面部、鳃弓核心间充质和心包腔背侧壁间充质,构成心管流出道发育的第二生心区.胚龄11～13d,ISL-1阳性细胞在咽前方聚集,形成特征性锥体形结构,并向升主动脉、肺动脉干及主肺动脉隔延伸.胚龄9d前,神经嵴细胞散在分布于ISL-1阳性细胞之间,流出道远侧端可见少量CRABP1和ISL-1双阳性细胞.胚龄10d,CRABP1阳性神经嵴细胞分布在ISL-1阳性鳃弓核心间充质周围.随着发育,弓动脉等处的神经嵴细胞逐渐失去CRABP1表达,开始表达α-SMA.结论 ISL-1阳性第二生心区是动态结构,胚龄8.5～10d时,在神经嵴细胞配合下,向心管动脉端添加心肌细胞;胚龄11d后,开始向平滑肌方向分化,参与升主动脉、肺动脉干和主肺动脉隔的发育.     

胰岛素增强子结合蛋白1在小鼠胚胎心的时空分布

目的 观察转录因子胰岛素增强子结合蛋白1（ISL1）在小鼠胚胎心的表达与心、第二生心区及前肠内胚层的发育。 方法 胚龄8～13d小鼠胚胎心共18个,连续石蜡切片,用抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗ISL1、抗增殖细胞核抗原（PCNA）和抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体进行免疫组织化学染色、免疫荧光染色和Western blotting检测。 结果 胚龄9d,ISL1阳性心前体细胞进入流出道远端。胚龄10d,ISL1阳性细胞延伸入流出道近端及静脉窦心肌。胚龄11～12d,心内ISL1表达量逐渐增多并达高峰,动脉端ISL1阳性细胞分布于流出道远端壁、心包内主肺动脉壁及主肺动脉隔,静脉端ISL1阳性细胞主要限于窦房结和静脉瓣。动脉端前肠内胚层细胞索增至最长,周围前生心区ISL1阳性细胞密度也达高峰,并且明显多于后生心区。胚龄13d,心内及第二生心区ISL1阳性细胞显著减少,内胚层细胞索趋于消失。 结论 ISL1阳性细胞在小鼠胚胎心的表达主要集中在胚龄9～13d,其表达模式与第二生心区及前肠内胚层的发育密切相关。     

小鼠胚胎心脏流出道嵴的发育

目的探讨小鼠胚胎心脏流出道嵴内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞的来源及流出道嵴融合时间充质细胞超微结构的变化。方法用抗α-SMA、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)单克隆抗体、PlexinA2探针,对胚龄10～14d小鼠胚胎心脏切片进行免疫组织化学和原位杂交染色;透射电镜观察胚龄12.5d时小鼠心流出道嵴的融合过程。结果胚龄10～11d,小鼠神经管及其周围、动脉囊和弓动脉壁可见PlexinA2阳性细胞,并沿动脉囊壁迁入流出道嵴内,部分细胞同时表达α-SMA。胚龄12d,PlexinA2阳性细胞分布在脊神经节、咽前间充质、主肺动脉隔以及主、肺动脉壁。主肺动脉隔显α-SMA强阳性,但动脉壁仅见少量α-SMA阳性细胞。胚龄12.5d,流出道嵴内致密间充质细胞团形成并开始融合,PlexinA2表达较弱,α-SMA表达呈强阳性。在流出道嵴融合开始后,嵴表面的内皮细胞带形成继而断裂消失,由含微丝少、排列稀疏的间充质细胞取代。两侧致密细胞团逐渐靠拢、融合。有的间充质细胞内含较多线粒体和微丝,细胞之间形成细胞连接点;有的间充质细胞含微丝少,细胞膜间断融合。结论流出道心内膜垫内α-SMA阳性间充质细胞来自神经嵴;内皮细胞-间充质细胞转化可能参与了流出道嵴融合;致密细胞团内间充质细胞富含微丝束和细胞连接点或发生细胞膜融合有助于流出道嵴的融合。     

神经嵴细胞和胰岛因子-1阳性细胞与小鼠胚胎心动脉端的发育

目的:探讨神经嵴细胞和胰岛因子-1(ISL-1)阳性细胞与小鼠胚胎心动脉端发育的关系.方法:胚龄8～12 d小鼠胚胎心连续石蜡切片,进行免疫组织化学检测.结果:α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、心肌肌球蛋白重链(MHC)、转录因子ISL-1、激活蛋白-2α(AP-2α)的表达胚龄8d,AP-2α阳性神经嵴细胞主要表达于神经褶外胚层.胚龄9～11 d,AP-2α阳性神经嵴细胞在前肠两侧沿弓动脉逐渐迁移至流出道头端心内膜垫,并形成主肺动脉隔雏形.胚龄8～10 d,ISL-1阳性细胞分布于前肠及神经沟两侧中胚层,构成第2生心区,向流出道添加心肌细胞.胚龄10～11 d,ISL-1阳性细胞在前肠腹侧正中间充质中聚集、与AP-2α阳性细胞共同参与主肺动脉隔形成.心包腔背侧脏壁中胚层及鳃弓核心间充质的ISL-1阳性细胞与流出道α-SMA或MHC阳性心肌相延续.胚龄12d,主肺动脉隔及流出道心内膜垫失去AP-2α及ISL-1阳性表达,转变为α-SMA阳性表达结构.结论:AP-2α阳性心神经嵴细胞和第2生心区来源的ISL-1阳性心前体细胞共同参与了小鼠心动脉端的形态发生.胚龄8～10 d,ISL-1阳性细胞分化为流出道心肌细胞.胚龄10～12 d,ISL-1阳性心前体细胞与AP-2α阳性细胞共同参与了主肺动脉隔的形成和流出道的分隔.     

骨形态发生蛋白-2在小鼠胚胎心流出道发育中的作用

目的 探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在小鼠胚胎心流出道发育过程中的作用。 方法 对胚龄9d(E9) ～E15（各胚龄取3～7只）小鼠心连续石蜡切片,用抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)抗体、抗胰岛素增强子结合蛋白(ISL-1)抗体、抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体、抗BMP-2抗体进行免疫组织化学染色。结果 E9,流出道心胶质内无细胞,心肌增殖活性低,BMP-2弱表达于流出道心肌、心内膜及心包腔背侧壁。E9～11,流出道增长,心包腔背侧壁ISL-1阳性细胞至流出道远端分化为心肌细胞后增殖逐渐减弱。E10～11,流出道嵴内间充质细胞逐渐增加,可见BMP-2、PCNA阳性细胞;流出道BMP-2表达逐渐增强达高峰,向两端延伸逐渐减弱,动脉端可及心包反折处。E12,流出道缩短,BMP-2表达减弱。E13～15,流出道隔逐渐肌化,BMP-2在心脏近大血管部心肌呈较弱表达。E10～13,流出道远段心肌呈低增殖活性,近段及右心室心肌增殖成小梁致右心室形成及扩大。结论 BMP-2诱导第二生心区(SHF)细胞分化为心肌细胞添加至心动脉端,参与心流出道嵴的发育。BMP-2抑制流出道心肌增殖,流出道近段BMP 2表达减弱重启了心肌细胞增殖,致右心室形成及流出道缩短。低水平的BMP 2可能诱导流出道隔间充质细胞向心肌分化。     

小鼠胚胎脊髓Draxin蛋白表达水平的动态变化研究

目的:探讨正常小鼠胚胎脊髓不同发育时期背侧抑制性轴突导向蛋白(Draxin)的表达部位和表达水平的动态变化过程。方法:应用免疫组织化学、Western Blot观察不同发育阶段胎鼠脊髓内Draxin的分布及表达变化特点;应用体外培养结合免疫荧光双染标记,观察不同类型神经细胞内Draxin的表达情况。结果:免疫组织化学染色结果显示,不同发育时期胎鼠脊髓内部及其周边组织内,Draxin的表达呈现明显的动态变化趋势; Western Blot检测结果显示,E11. 5开始Draxin表达量逐渐增加,至E14. 5达到高峰,此后下降并逐渐消失;体外培养结合免疫荧光双标的结果显示,部分Tuj-1阳性的未成熟神经元、Nestin阳性的神经干细胞以及GFAP阳性的星形胶质细胞均表达Draxin。结论:Draxin在胎鼠脊髓发育过程中的表达,具有明显的动态变化趋势,多种类型的神经元和星形胶质细胞表达Draxin。     

音猬因子与胰岛素增强子结合蛋白在小鼠胚胎呼吸系统的早期表达

目的 探讨音猬因子信号通路成员与胰岛素增强子结合蛋白在呼吸系统的早期表达与其发育的联系。方法 胚龄9.0～13d小鼠胚胎呼吸系统各年龄段不小于3个,连续石蜡切片,用抗音猬因子(Shh)、抗patched1(Ptcl)、抗smoothened(Smo)、抗胰岛素增强子结合蛋白(ISL1)和抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体进行免疫组织化学染色。结果 胚龄10d,Shh表达在前肠内胚层腹侧壁。胚龄11～12d,Ptc1表达在气管、支气管和肺内分支上皮。胚龄13d,Ptc1只表达在肺内分支上皮。胚龄9d,ISL1表达在前肠内胚层腹侧壁。胚龄10～12d,ISL1表达在前肠（气管）腹侧壁和支气管侧壁上皮及邻近的间充质内。胚龄13d,ISL1表达减弱,始终未见在肺内有阳性表达。胎龄12～13d,与气管后壁、支气管内侧壁上皮Ptc1表达减弱处相邻的间充质出现α-SMA阳性平滑肌细胞,其与对侧间充质ISL1阳性细胞的分布呈背-腹侧或内-外侧模式。气管腹侧及肺芽外侧间充质中可见ISL1与Smo共表达细胞。 结论 ISL1在气管及肺芽的发育中可能与Shh信号系统协同发挥作用。     

小鼠胚胎心流出道的形态发生与呼吸内胚层发育耦联

目的 探讨小鼠胚胎心发育过程中前肠呼吸内胚层与第一生心区和第二生心区及胚胎心流出道的形态发生关系。方法 胚龄7.5～13d小鼠胚胎心各3个,连续石蜡切片,用抗胰岛素增强子结合蛋白1（ISL-1）、抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗Nkx2.5和抗增殖细胞核抗原（PCNA）抗体进行免疫组织化学或免疫荧光染色。结果 胚胎发育7.5d,ISL-1在生心板心肌前体细胞表达并与发育中的第二生心区ISL-1阳性细胞连续。胚胎发育第10～13天, 可见ISL-1强阳性的前肠腹侧呼吸内胚层细胞增生,排列不规则,     

小鼠1-细胞胚胎体外培养条件的研究

目的　检验培养基（Ｗｈｉｔｔｅｎ、ＣＺＢ、ＳＯＭ 和ＫＳＯＭ）、培养器皿（进口、国产新旧平皿）与配制培养基的水质对小鼠胚胎体外发育的影响。　方法　采用微滴培养法培养昆明种小白鼠１－细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例为判断培养效果的标准。　结果　Ｗｈｉｔｔｅｎ、ＣＺＢ、ＳＯＭ 和ＫＳＯＭ 培养基中２－细胞发育率分别为１００％ 、１００％ 、１００％ 和９８．６％ ,而囊胚发育率却分别为０％ 、７８．３％ 、４．８％ 和９．５％ ;用三蒸水、五蒸水和去离子水配制的ＣＺＢ培养基,培养囊胚发育率分别为４０．８％ 、５４．１％ 和５２．４％ ;国产和进口新平皿的囊胚发育率分别为６８．０％ 和７２．２％ ;国产和进口旧平皿的培养囊胚发育率为２７．２％ 和４６．１％ 。　结论　昆明小白鼠早期胚胎存在体外发育阻断现象;ＣＺＢ培养基培养昆明小白鼠早期胚胎效果最好;用三蒸水、五蒸水和去离子水配制的ＣＺＢ培养基培养结果无显著差别;进口和国产新平皿的培养效果相近,但再次使用时培养效果显著下降。     

胚胎神经干细胞分化为神经丝蛋白阳性神经元的实验

神经干细胞(neural stem cell,NSC)可以为神经退行性疾病提供取之不尽、用之不竭的细胞供体,在不同的环境条件下可以分化为神经元及神经胶质细胞并表达不同的标志蛋白。神经丝蛋白(neurofilament protein,NFIP)特异性地分布于神经元胞体及突起中,是轴突成熟的标志之一。但是,WFP蛋白在胚胎神经干细胞分化过程中的表达还不清楚。     

Importance of spondin 1 and cellular retinoic acid binding protein 1 in the clinical diagnosis of ovarian cancer

Background: Diagnosis of ovarian cancer is often delayed because of subtle symptoms and a lack of a specific, sensitive test useful for the general population. The majority of cases are diagnosed at late stages, after the tumor has metastasized and implanted on many other abdominal organs and cavity surfaces. A paucity of prognostic markers makes it difficult to define which tumors will act aggressively and shorten survival. Hence, it is imperative to have new screening tests for diagnosis of ovarian cancer at earlier stages, prior to metastatic progression. Diagnosis at these early stages will dramatically increase the overall survival of women with ovarian cancer. Material and Methods: Based on previously published literature on proposed molecular cell markers in ovarian carcinoma, we sought to validate the overexpression of two genes (cellular retinoic acid Binding Protein, CRABP-1, and spondin 1) through immunohistochemistry. Results: We verified the overexpression of spondin 1 in ovarian cancer. Expression of cellular retinoic acid Binding Protein, CRABP-1 in whole ovarian cancer tissue sections was higher than in the TMA tissue cores. Conclusion: Our results thus demonstrate that spondin 1 is a useful marker for ovarian cancer; additionally, the high percentages of tumors that are positive for spondin 1 make it an ideal target for therapy. CRABP-1 was not expressed at high levels in any subtype of ovarian cancer, making it a poor marker.     

全反式维甲酸通过DOK1/PPARγ信号通路抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及可能机制。方法:MCF-7细胞培养于含10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素的DMEM培养液,蛋白免疫印迹检测蛋白质的表达,MTT法和溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法测定细胞增殖,TUNEL法测定细胞凋亡,携带目标基因shRNA的慢病毒用于沉默目标基因,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性采用商品化的试剂盒测定。结果:ATRA处理可抑制MCF-7细胞的增殖,促进其凋亡;同时,ATRA以时间依赖方式刺激停靠蛋白1(DOK1)的表达。沉默DOK1可降低ATRA对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。此外,DOK1基因沉默可抑制PPARγ的表达和活性。而PPARγ选择性抑制剂GW9662可减轻ATRA对MCF-7细胞增殖的抑制和对细胞凋亡的促进作用。结论:ATRA通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡而抑制MCF-7细胞的生存,这一作用经DOK1激活的PPARγ介导。     

Specific binding of polypyrimidine tract binding protein and hnRNP A1 to HIV-1 CRS elements

The human immunodeficiency virus (HIV) Rev and human T-cell leukemia virus (HTLV) Rex proteins regulate viral RNA processing. Both proteins act to overcome the block to viral structural gene expression, at least in part, by reversing the inhibitory effect of intronic RNA sequences, termed cis-acting repressive (CRS) sequences. Using HTLV type II (HTLV-II) as a model, we recently showed that the function of a 5 long terminal repeat (LTR) CRS correlates with in vitro binding by both polypyrimidine tract binding (PTB) protein (also known as hnRNP I) and hnRNP A1 to CRS RNA (1,2). Using radioimmunoprecipitation of proteins ultraviolet (UV) crosslinked to each HIV CRS RNA with monoclonal anti-hnRNP antibodies, we now demonstrate that hnRNP I and hnRNP A1 bind to two different HIV-1 CRS RNAs. In addition, we show that hnRNP I and hnRNP A1 binding to HIV-1 CRS RNAs can be specifically competed by HTLV-II CRS RNAs using electrophoretic mobility shift assay (EMSA)/UV crosslinking assays. Binding by both hnRNP I and hnRNP A1 to HIV-1 and HTLV-II CRS RNAs suggests a role for these proteins in CRS function that may be influenced by the Rev and Rex proteins, respectively.     

小鼠胚胎呼吸内胚层形态发生与咽前间充质发育及流出道分隔的关系

目的 探讨呼吸内胚层与咽前间充质细胞发育的关系及对小鼠胚胎心流出道分隔的影响。方法 45只胚龄8~13d小鼠胚胎心连续石蜡切片,用抗胰岛因子1（ISL-1）、抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗音猬因子（音速波状蛋白, Shh）、抗patched（Ptc1）、抗patched 2（Ptc2）、抗smoothened（Smo）及抗心肌肌球蛋白重链（MHC）抗体进行免疫组织化学及免疫荧光染色。 结果 胚龄8～9d,ISL-1阳性细胞分布在心包腔背侧壁及前肠两侧间充质,并延伸至原始心管动脉端,心管心肌显较强的Ptc1和Ptc2阳性表达。胚龄10~13d,呼吸内胚层向腹侧延伸,Ptc1和Ptc2呈较强表达,ISL-1阳性咽前间充质细胞围绕呼吸内胚层形成对称的特征性锥体形结构,经动脉囊背侧壁伸入动脉囊腔,形成主肺动脉隔。胚龄12d,主肺动脉隔ISL-1阳性表达基本消失,大部分细胞转变为α-SMA阳性细胞。 结论 呼吸内胚层的分化发育与咽前ISL-1阳性间充质细胞的发育聚集密切耦联。发育中的呼吸内胚层可能作为组织中心,通过Shh信号通路对ISL-1阳性细胞的聚集提供位置信息。呼吸内胚层的正常腹侧延伸不但可诱导ISL 1阳性细胞的正常迁移和流出道的正常分隔,对流出道的正常形态发生及有效的肺循环建立起重要作用。     

Smad7和组蛋白去乙酰化酶1在小鼠马兜铃酸肾病中的表达

目的 探讨Smad7、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在小鼠马兜铃酸肾病(AAN)中的表达及两者在马兜铃酸肾病发生、发展中的作用.方法 将32只体重(20±2)g 的SPF(无菌)雄性昆明小鼠随机分为4组,其中3组为实验组,灌胃给予不同剂量的马兜铃酸(AA)Ⅰ,分别为4 mg/(kg·d)、8 mg/(kg·d)、16mg/(kg·d).另设对照组,PBS灌胃.应用免疫组织化学、免疫印迹法及RT-PCR技术,检测AAN小鼠和正常对照组中Smad7和HDAC1的表达情况.结果 HDAC1阳性着色主要分布于细胞核上,且在AAN中的表达强度明显高于正常对照组.免疫印迹法检测和RT-PCR提示,Smad7在AAN中的表达低于对照组,而HDAC1的表达显著高于对照组.结论 在AAN中Smad7低表达以及HDAC1高表达,提示Smad7和HDAC1可能在AAN的发生、发展中起重要作用.     

Dishevelled2 和Vangl2表达与过量维甲酸致昆明小鼠神经管畸形的相关性

目的 探讨Dishevelled2和Vangl 2蛋白与过量维甲酸致昆明小鼠神经管畸形发生的关系。 方法 50只昆明孕小鼠随机分为对照组和实验组。孕775d时,实验组一次性胃饲30mg/kg致畸量维甲酸（RA）,对照组胃饲等量溶剂,服药后4h、18h、42h、66h及90h分别取胚胎,常规石蜡切片,采用原位杂交和免疫组织化学技术,分别检测胚胎神经管组织中Dishevelled2蛋白和Vangl2 mRNA及蛋白的表达水平变化。 结果 两种蛋白均存在于对照组及实验组不同发育阶段的小鼠神经管上皮,且两者的表达变化趋势有所不同。与对照组相比,实验组Dishevelled2蛋白在RA处理18h、42h时表达水平明显降低(P≤0.05),66h时表达升高(P≤0.05),90h时两组表达水平无明显差异;Vangl2 mRNA在灌服RA 4h、18h时表达水平明显低于对照组(P≤0.05),42h时两组表达水平无明显差异,66h时表达显著高于对照组(P≤0.05)。Vangl2蛋白在RA处理18h、42h时表达显著降低(P≤0.05),66h时两组表达水平无明显差异,90h时表达显著高于对照组(P≤0.05)。 结论 过量RA可能通过调节Dishevelled2和Vangl2表达干扰正常胚胎神经管的闭合过程。