Rho激酶在缺氧性肺动脉平滑肌细胞中的表达

目的：探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及其中Rho激酶表达的影响。方法：分别在常氧和缺氧12、24和48h条件下体外培养大鼠PASMC，应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术测定细胞周期，同时用蛋白印迹杂交（Western blot）检测Rho激酶的表达情况。结果：PASMC比色吸光度A值缺氧12h增大，24h最高，48h下降但仍高于常氧对照组；流式细胞术分析细胞周期，G2／M期细胞缺氧组均显著高于常氧组；Western blot结果分析各缺氧组Rho激酶表达明显高于常氧组。结论：缺氧诱导PASMC增殖，促使细胞进入有丝分裂期，同时，Rho激酶表达的增强可能是缺氧诱导PASMC增殖的重要机制之一。     

奥曲肽-对MCF-7人乳腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的：研究生长抑素类似物奥曲肽（OCT）对乳腺癌细胞生长及凋亡的影响。方法：将OCT作用于体外培养的雌激素受体（ER）阳性人乳腺癌细胞株MCF－7,应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞术测定细胞周期分布和凋亡率,光镜、电镜观察细胞形态和超微结构。结果：OCT可抑制MCF－7细胞生长、抑制细胞周期,并可诱导细胞凋亡。结论：OCT对人乳腺癌细胞增殖具有抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

缺氧条件下沉默解聚素-金属蛋白酶17基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的  探讨在缺氧条件下靶向针对解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）基因的短发夹RNA（shRNA）对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用机制。方法  针对ADAM17基因设计具有特异性ADAM17-shRNA,经电穿孔转染MCF-7细胞。依据细胞培养条件（常氧和缺氧）和细胞转染因素（空白PBS、转染无义序列ADAM17-shNC、转染ADAM17-shRNA）,实验分为常氧对照组、常氧shNC组、常氧shRNA组、缺氧对照组、缺氧shNC组和缺氧shRNA组。通过充入1%氧O2、5%二氧化碳CO2和94%氮N2的混合气体培养箱模拟缺氧环境,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、iCELLigence系统、流式细胞仪检测MCF-7细胞的ADAM1基因的表达水平、细胞生长曲线、增殖活性和细胞周期。结果  靶向针对ADAM17基因的ADAM17-shRNA在缺氧条件下可以有效沉默人乳腺癌MCF-7细胞ADAM17基因的表达（缺氧shRNA组2-△△CT=0.55±0.16）。从而导致MCF-7细胞生长速度减慢,细胞增殖能力降低,细胞周期延缓。结论  ADAM17 shRNA和缺氧存在协同作用,共同抑制肿瘤细胞的增殖。

     

二氯化钴所致缺氧对A549细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:探讨CoCl2作用不同时间所致缺氧对体外培养的人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:对肺腺癌细胞A549分别进行常氧和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTT法检测CoCl2作用不同时间所致缺氧对A549细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法测定缺氧不同时间HIF-1αmRNA表达水平的变化。AnnexinV-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测CoCl2作用不同时间缺氧肿瘤细胞凋亡情况。结果:CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间依赖性抑制作用。常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1αmRNA的表达,随着CoCl2作用时间的延长,HIF-1αmRNA水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、CoCl2作用4、12、24、48 h组细胞凋亡率分别为(0.60±0.10)%、(1.10±0.10)%、(8.63±0.75)%、(12.80±0.85)%和(19.33±0.80)%。结论:CoCl2对A549细胞具有上调HIF-1αmRNA表达作用,可抑制细胞的增殖和一定的凋亡诱导作用,这些说明HIF-1α可能在肺癌的发展中扮演着重要的作用。     

BM11对依托泊苷抑制乳腺癌细胞MCF7增殖的影响

目的 观察BMI1对依托泊苷（ETOP）抑制体外培养的乳腺癌细胞增殖的影响及机制。方法 选择对数生长的乳腺癌细胞MCF7,分为空白对照组、实验组（加ETOP）。采用MTT法检测细胞活性,流式细胞术（FCM）测定各组MCF7肿瘤细胞凋亡率及细胞周期变化;应用免疫组化检测MCF7 BMI1蛋白和ATM蛋白表达的变化。结果 与对照组相比,实验组对乳腺癌细胞的增殖具有明显的抑制作用（P＜0.01）。细胞周期分析显示,实验组使乳腺癌细胞的S期细胞比例减小（P=0.018）,G1期细胞比例增大（P=0.021）。ETOP能够降低BMI1蛋白表达（P=0.008）,增加ATM蛋白的表达（P＜0.01）。结论 ETOP能明显抑制乳腺癌细胞的增殖,其机制可能与细胞周期发生停滞及其下调BMI1蛋白和增加ATM蛋白的表达而诱导细胞凋亡有关。     

BMI1对依托泊苷抑制乳腺癌细胞MCF7增殖的影响

目的观察BMI1对依托泊苷(ETOP)抑制体外培养的乳腺癌细胞增殖的影响及机制。方法选择对数生长的乳腺癌细胞MCF7,分为空白对照组、实验组(加ETOP)。采用MTT法检测细胞活性,流式细胞术(FCM)测定各组MCF7肿瘤细胞凋亡率及细胞周期变化;应用免疫组化检测MCF7 BMI1蛋白和ATM蛋白表达的变化。结果与对照组相比,实验组对乳腺癌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P0.01)。细胞周期分析显示,实验组使乳腺癌细胞的S期细胞比例减小(P=0.018),G1期细胞比例增大(P=0.021)。ETOP能够降低BMI1蛋白表达(P=0.008),增加ATM蛋白的表达(P0.01)。结论 ETOP能明显抑制乳腺癌细胞的增殖,其机制可能与细胞周期发生停滞及其下调BMI1蛋白和增加ATM蛋白的表达而诱导细胞凋亡有关。     

间歇性缺氧通过内质网途径诱导滋养层细胞凋亡

目的 分析间歇性缺氧对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)内质网应激及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 选用人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo),间歇性缺氧-24 h组和间歇性缺氧-48 h组分别进行24 h和48 h的间歇性缺氧处理,空白对照组始终置于常氧中培养。观察间歇性缺氧对细胞凋亡与增殖,以及内质网应激相关分子、细胞凋亡相关蛋白、细胞周期相关蛋白和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。结果 与空白对照组比较,间歇性缺氧组CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、X-盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA和蛋白表达水平显著增加,早期凋亡率显著增加,Caspase-3蛋白、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)mRNA和蛋白表达水平显著增加,HIF-1αmRNA和蛋白表达水平显著增加,并随缺氧时间延长而增加(P<0.05);与空白对照组比较,间歇性缺氧可显著抑制HTR8/SVneo细胞增殖,并随缺氧时间延长而细胞活力降低(P<0.05);与空白对照组比较,间歇性缺氧组细胞周期蛋白D1(C...     

TG2对缺氧条件下骨肉瘤MG－63细胞凋亡的影响

目的：探讨TG2对缺氧型骨肉瘤MG－63细胞凋亡的影响。方法构建骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,共分为4组,单纯缺氧组：细胞培养在缺氧培养箱中;常氧组：细胞培养在常规氧浓度下;TG2 siRNA缺氧组：细胞先转染TG2 siRNA,接着培养于缺氧培养箱中;对照siRNA缺氧组：细胞先转染对照siRNA,接着培养于缺氧培养箱中。各组骨肉瘤MG－63细胞培养6、12、24、48和72 h,观察在缺氧培养条件下TG2对骨肉瘤MG－63细胞caspase－3表达和活性的影响,细胞浆和细胞核中细胞色素C含量的变化和细胞凋亡情况。 TG2活性使用微量滴定板法检测,TG2的mRNA转录水平使用qPCR检测,并采用免疫印迹（western blot）检测胞浆和胞核内caspase－3、TG2以及细胞色素C表达和分布情况;采用免疫组化（ SP法）分析细胞内TG2蛋白的分布情况,细胞凋亡率通过流式细胞仪检测。结果与常氧组比较,对照siRNA缺氧组和单纯缺氧组的TG2 mRNA、蛋白表达以及活性均显著提高（P＜0.01）,在不同时间点差异有统计学意义;但caspase－3活性并未显著提高。然而胞浆内细胞色素C蛋白以及caspase－3的表达显著提高,细胞凋亡率轻度提高。与对照siRNA缺氧组比较,TG2 siRNA缺氧组的胞浆内细胞色素C蛋白表达水平以及caspase－3的活性显著改善（P＜0.01）,细胞凋亡率也相应提高（P＜0.01）。结论缺氧环境下,MG－63骨肉瘤细胞的TG2 mRNA、蛋白表达以及活性水平均显著上升,并随缺氧时间延长而逐步升高。 TG2可以阻止细胞核内细胞色素C向胞浆释放,进而抑制caspase－3的表达及活性,降低肿瘤细胞的凋亡率。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌细胞 MCF-7生物学特性的影响

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（nordihydroguaiaretic acid,NDGA）对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的生物学特性的影响。方法：MTT法绘制细胞生长曲线及检测细胞存活率、倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果：NDGA对乳腺癌细胞MCF-7生长增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖效应,阻滞细胞周期于S期,诱导细胞凋亡形成,使细胞表面超微结构发生改变。结论：NDGA能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

丹参注射液对细胞基底样乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的:探讨丹参注射液对细胞基底样乳腺癌(basal-like)MDA-MB-231细胞增殖凋亡的影响。方法:实验分为对照组和5个不同剂量的丹参注射液组。MTT法检测增殖,流式细胞仪分析细胞周期,PI染色检测凋亡。结果:丹参注射液作用于MDA-MB-231细胞24 h,随着药物剂量的下降,其作用由促进增殖过渡为对增殖无影响再到抑制增殖,48 h、72 h分别表现出抑制增殖和促进增殖的作用。高、中剂量组诱导细胞凋亡;中低剂量组降低MDA-MB-231细胞G0/G1期DNA含量,增加S、G2-M期细胞DNA含量,可能促进了有丝分裂。结论:丹参注射液对basal-like型乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响与药物剂量相关,有时间依赖性。丹参诱导了MDA-MB-231细胞的凋亡,可能是P53基因调节的。     

靶向survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞系survivin mRNA及紫杉醇药物敏感性的影响

目的探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸（ASODN）对MCF 7细胞的增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。 方法采用脂质体介导survivin ASODN转染MCF-7乳腺癌细胞系,RT-PCR检测survivin mRNA的表达,MTT法检测细胞增殖能力及对药物的敏感性,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。 结果survivin ASODN可有效下调survivin表达水平,抑制细胞的生长,并呈时间剂量依赖关系;流式细胞术示,24h反义转染组细胞周期被阻滞于G₂/M期,细胞凋亡率增加到15.23%。 紫杉醇作用早期（6h）,survivin mRNA 表达增高,利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡,增加肿瘤耐药机会;反义转染组中细胞早期survivin mRNA表达上调受到抑制,对药物的敏感性增加。 结论survivin基因ASODN转染细胞后,下调survivin的表达,细胞凋亡增加,提高了对药物的敏感性。     

S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF7细胞生长的研究

目的探讨S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDC shRNA表达载体(pGPU6 SAMDC)转染乳腺癌MCF 7细胞,采用RT PCR和Western blot技术分别检测SAMDC mRNA和蛋白质表达水平;细胞增殖实验（CCK 8法）和细胞周期分析评价SAMDC基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖的影响,肿瘤侵袭实验观察SAMDC基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7侵袭活性的影响。结果SAMDC shRNA表达载体转染后,MCF 7细胞SAMDC mRNA水平下调43.8％,蛋白表达水平下降66.5％;MCF 7细胞的增殖活性和侵袭能力均受到明显抑制,细胞增殖活性下降37%,细胞周期分析G1期细胞增加。结论SAMDC基因沉默可通过延长细胞周期的G1期而抑制乳腺癌MCF7细胞的增殖,并能降低癌细胞侵袭活性,提示SAMDC可作为乳腺癌基因治疗的靶分子。     

不同浓度葡萄糖对MG63细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察不同浓度葡萄糖和高糖波动对具有人成骨细胞表型特征的MG63细胞增殖?细胞周期及凋亡的影响,探讨糖尿病性骨质疏松症的发病机制?方法:用不同浓度葡萄糖(5.5?33.3和5.5?33.3 mmol/L交替)分别刺激培养的MG63细胞24 h,MTT比色分析法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率?结果:①高糖及高糖波动可抑制MG63细胞的增殖,与高糖组相比,高糖波动组的抑制效应更加明显;②高糖及高糖波动可阻滞MG63细胞周期,使G1期细胞比例增加,S期比例减少,诱导细胞凋亡?高糖波动组作用更加明显?结论:高糖波动可抑制成骨细胞增殖,阻滞其细胞周期,诱导细胞凋亡?推测高糖波动可能通过对成骨细胞增殖及细胞周期?细胞凋亡的影响而参与糖尿病性骨质疏松症的发生发展     

氧化槐果碱对人结肠腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：观察氧化槐果碱（OSC）对人结肠腺癌细胞株 SW480的增殖抑制及诱导凋亡的作用,探讨其作用机制。方法体外培养 SW480细胞,使用 OSC（作用浓度分别为0.5～2 mg／mL）和阳性对照药5－氟尿嘧啶（作用浓度10μg／mL）作用于细胞12～48 h;采用 MTT 法测定 SW480细胞增殖情况,荧光双染观察细胞形态变化,计数凋亡细胞所占比例,流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率,Real －time PCR 检测凋亡基因 Caspase －3和 Bcl －2的表达。结果MTT 结果显示,各浓度 OSC 对体外培养的 SW480细胞增殖具有明显抑制作用,该作用呈一定的时间和剂量依赖性;OSC 作用后细胞的体积变小变圆,核变形、皱缩,凋亡细胞所占比例显著增加;流式细胞仪分析结果表明,随着 OSC 作用时间的延长,G0／G1期细胞比例增加,同时 S 期细胞比例也相应增加;凋亡基因 Caspase －3 mRNA 表达上调,Bcl －2 mRNA 表达下调。结论OSC 可抑制体外培养的 SW480细胞生长增殖,其作用机制与阻滞细胞周期进程、诱导细胞凋亡有关。     

不同浓度辣椒素对缺氧复氧后A549细胞凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨不同浓度辣椒素对A549细胞缺氧复氧后增殖活力和凋亡率的影响。方法 将培养的A549细胞随机分为7组：正常培养组（control组）;缺氧36h复氧24h组（HR组）,用5种不同浓度（0.25μM组,2.5μM,25μM,250μM,2500μM）辣椒素处理后缺氧复氧组（cap0.25+HR组、cap2.5+HR组、cap25+HR组、cap250+HR组、cap2500+HR组）。除了control组,各组A549细胞于含有1%O2 、94%N2、5%CO2的培养箱中培养36h,然后置于普通培养箱中复氧培养24h,建立细胞缺氧复氧模型,辣椒素处理组根据各种浓度在缺氧前给予辣椒素。使用CCK8试剂盒检测细胞增殖活力。收集control组、HR组、cap25+HR组、cap250+HR组细胞,用Annexin V FITC/PI染色,流式细胞仪检测凋亡率。结果 与HR组比较,cap2.5+HR组、cap25+HR组、cap250+HR组细胞增殖活力增加（P＜0.05）,cap2500+HR组细胞增殖活力降低（P＜0.05）。与HR组比较,缺氧前给予辣椒素的A549细胞缺氧复氧后凋亡率降低（P＜0.05）,高浓度（250μM）保护作用更明显。结论 一定浓度范围内辣椒素可提高缺氧复氧A549细胞增殖活力,并抑制其凋亡。     

异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达的影响。方法:取新生2~3 dW istar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组,乳剂对照组,缺氧4 h后复氧12h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组,加异丙酚250μmol/L缺氧4 h后复氧12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组。分别于各时间点检测每组细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达变化。结果:与正常对照组比较,缺氧复氧组细胞随着时间延长凋亡不断增加,Bc l-2蛋白24 h时间点表达最高,随后逐渐降低,Bax蛋白24 h表达低,随着时间延长不断增加,72 h时间点最高,Bc l-2/Bax蛋白比值于24 h、48 h和72 h时间点分别为1.4、0.8和0.6。与缺氧复氧组比较,异丙酚处理组凋亡明显减少,Bax蛋白表达降低,Bc l-2蛋白24 h内表达升高达峰值,此后有所降低但仍维持较高水平,且Bc l-2蛋白表达持续高于Bax蛋白,Bc l-2/Bax蛋白比值保持在1.6~1.8之间。结论:异丙酚可抑制缺氧复氧后海马反应性星形胶质细胞表达Bc l-2和Bax蛋白的动态变化,使Bc l-2/Bax蛋白比值持续保持较高水平而发挥良好的保护作用。     

茶多酚对缺氧诱导的胆管癌细胞QBC939增殖及凋亡的影响与机制

目的 建立缺氧模型,观察EGCG对缺氧诱导的QBC939胆管癌细胞增殖、凋亡与转移的影响及其与VEGF表达的关系.方法 QBC939低氧培养,MTT观察EGCG对缺氧诱导的胆管癌细胞增殖的影响,过河实验观察EGCG对缺氧诱导的胆管癌细胞迁移的影响,用流式细胞术观察缺氧对细胞周期和细胞凋亡率的影响,利用ELISA观察缺氧诱导对胆管癌细胞VEGF表达的影响.结果 EGCG呈浓度和时间依赖性抑制缺氧诱导的胆管癌增殖;缺氧胆管癌细胞过河时间为(15.2±0.94)h,较常氧组(23.1±2.14)h显著缩短,EGCG(40、80和160μmol/L)使缺氧胆管癌细胞过河时间显著延长[(24.1±2.34)、(36.7±3.27)和(47.8±3.04)h];缺氧胆管癌细胞经EGCG(40、80和160μmol/L)处理后,G1期细胞和凋亡率显著增加,同时伴有S期和G2期细胞减少;缺氧诱导组VEGF表达量为(2 515.2±190.1)Pg/mL,EGCG(40、80和160μ mol/L)处理组,VEGF合成显著下降[(2 419.8±231.7)、(1 736.7±203.2)和(935.7±125.4)Pg/mL].结论 EGCG可抑制胆管癌细胞的增殖与迁移,其机制与下调VEGF表达有关.     

细胞内Ca2+在HMG-CoA还原酶抑制剂抑制MCF-7细胞增殖中的作用

目的：探讨HMG－CoA还原酶抑制剂洛伐他汀（LOV）对人乳腺癌MCF－7细胞增殖功能和细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i）变化的影响。方法：4、8、16μmol/L　LOV处理MCF－7细胞1－3d后，MTT比色法检测细胞增殖功能，流式细胞仪测定细胞周期相的分布及凋亡率，激光共聚焦显微技术观察细胞[Ca^2 ]i变化以及RT－PCR方法分析LOV对MCF－7细胞质膜钙泵PMCA1 mRNA表达的影响。结果：LOV对MCF－7细胞增殖有明显的抑制作用，并使细胞的生长阻滞于G0/G1期，该作用存在一定的剂量和时间关系，但其诱导MCF－7细胞凋亡的作用不明显；同时LOV可持续升高MCF－7细胞[Ca^2 ]i，但对MCF－7细胞质膜钙泵PMCA1 mRNA表达无明显影响。结论：LOV导致的[Ca^2 ]i持续升高可能与LOV影响MCF－7质膜PMCA1功能有关；[Ca^2 ]i的升高及相关信号通路的变化可能参与了LOV对MCF－7细胞增殖抑制作用的调控。     

三苯氧胺与阿霉素联合应用对乳腺癌MCF-7细胞生长与凋亡的影响

目的：探讨三苯氧胺（tamoxifen,TAM)和阿霉素(adriamycin，ADM)联合应用对乳腺癌细胞MCF—7(ER )生长和凋亡的影响。方法：分别或联合应用不同浓度的TAM、ADM作用于MCF—7细胞，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，应用流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率。结果：TAM与ADM均可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡。TAM可造成MCF—7细胞G0／G1期阻滞，且呈时间、剂量依赖性；ADM可造成G2／M期细胞增高；两者联用时MCF—7细胞的生长抑制率、凋亡率无明显增加，G0／G1期细胞增高。结论：TAM与ADM可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡，两者联合应用不能增强作用效果，无协同作用。     

白凤菜总黄酮对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡影响

目的 观察白凤菜总黄酮(TFG)对多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响。方法 MTT实验检测U266细胞增殖;倒置显微镜及荧光显微镜分别观察U266细胞经TFG处理24 h后细胞形态及凋亡的变化;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 TFG明显抑制U266细胞的增殖,P<0.05,且呈浓度和时间依赖性;100 μg /mLTFG作用组的U266细胞凋亡明显增加;TFG使U266细胞周期阻滞于S期。结论 TFG可抑制U266细胞增殖,可能同细胞周期的捕获和细胞凋亡的诱导相关。