重组人红细胞生成素对新型支气管肺发育不良早产鼠模型血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察重组人红细胞生成素(rhEPO)对新型支气管肺发育不良(BPD)早产鼠模型肺组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达的影响.方法 60只定期受孕SD大鼠于孕第15天孕囊内注射脂多糖(LPS)或磷酸盐缓冲液(PBS),孕第21天剖宫娩出早产鼠,早产鼠于生后6h内分为5组:PBS+空气组、PBS+高氧组、LPS+高氧组、PBS+高氧+rhE-PO组、LPS+高氧+rhEPO组.rhEPO(1 200 IU/kg)干预组于高氧暴露6h后开始第1次背部皮下注射,隔天1次,共7次.分别在高氧暴露第1、7、14天处死早产鼠,观察各组生存率、体质量、肺质量并计算肺质量/体质量比值,观察肺组织病理变化,采用蛋白质印迹法(Western blot)和反转录PCR(RT-PCR)法检测肺组织VEGF蛋白及mRNA表达水平.结果 与PBS+空气组比较,经高氧干预后早产鼠生存率降低、体质量减轻、肺质量增加,病理损伤加重,肺组织VEGF蛋白及mRNA表达水平降低,并且以LPS+高氧组更明显(P＜0.05),肺质量/体质量比值增加(P＞0.05);rhEPO干预后上述指标得到相应改善(P＜0.05).结论 rhEPO可能通过参与调解VEGF相关通路,对BPD模型早产鼠起到一定的干预和治疗作用,提高了生存率.     

重组促红细胞生成素防治支气管肺发育不良的临床应用研究

目的观察研究应用重组促红细胞生成素对支气管肺发育不良的防治效果。方法选取2014-08—2015-11间于深圳市龙岗区妇幼保健院新生儿科的胎龄低于32周、需机械通气的早产儿90例进行分组,随机划分为对照组(常规治疗)和观察组(重组促红细胞生成素治疗)各45例,对比两组的临床效果。结果观察组出现支气管肺发育不良患者的比例为6.67%,显著低于对照组水平(χ~2=5.95,P<0.05);观察组的呼吸机治疗时间和住院时间分别为(4.95±2.74)d、(31.57±5.94)d,与对照组相比均有明显缩短(t=12.28,13.43,P<0.05)。结论重组促红细胞生成素对于支气管肺发育不良的防治效果显著,可缩短住院时间和通气时间,促进患儿自身呼吸功能的恢复,安全可靠。     

转化生长因子-β1在中浓度氧致新生鼠支气管肺发育不良模型中的作用

目的：探讨中浓度氧（60%O2）暴露对新生小鼠发育的影响及损伤,并观察转化生长因子-β1（TGF-β1）在新生鼠慢性肺部疾病支气管肺发育不良（BPD）肺损伤中的作用。方法：30只新生雌性KM小鼠,随机分为实验组和对照组,每组15只。对照组置于空气中（FiO20.21）;实验组置于封闭氧箱中（FiO20.6）,制备中浓度氧致新生雌性小鼠BPD模型,记录吸氧后2 d、7 d、14 d、21 d、28 d小鼠体重,应用HE染色观察不同时间点HE染色肺组织病理改变,免疫组化技术观察TGF-β1蛋白表达水平。结果：实验组小鼠体重吸氧7 d后明显降低,HE染色下正常肺泡结构消失、肺泡融合、肺泡间隔增厚。高氧暴露72 h后,TGF-β1的表达升高,随着吸氧时间的增长TGF-β1的表达逐渐升高。结论：持续较高浓度吸氧可致新生雌性小鼠生长障碍和肺泡化阻滞,出现类似人类支气管肺发育不良的肺部改变。TGF-β1在肺纤维化的发生和持续过程中均发挥重要作用。     

促红细胞生成素通过降低TSP-1和TGF-β表达对脊髓损伤保护作用的研究

Background Erythropoietin (EPO) functions as a tissue-protective cytokine in addition to its crucial hormonal role in red cell production and neuron protection. This study was designed to determine the erythropoietin neuron protection on experimental spinal cord trauma injury (SCI) rats by exploring the level of thrombospondin-1(TSP-1) and transforming growth factor-β (TGF-β) in the development of rats’ spinal cord injury (SCI) model. Methods Sixty Sprague–Dawley (SD) rats were divided into three groups at random (the sham operation control group, SCI group and erythropoietin treatment group). Using a weight-drop contusion SCI model in SCI group and erythropoietin treatment group, then rats were sacrificed at 24 h and 7d. BBB scores were checked as locomotor function. Pathological changes were also explored by H-E staining. The expression of TSP-1 and TGF-β were determined by immunohistochemistry staining analysis and Western Blot analysis respectively. Results Slighter locomotor dysfunction and more quickly recovered as their higher BBB scores were found in erythropoietin treatment group than that in SCI group (P < 0.01). Pathological observation also showed progressive disruption of the dorsal white and few neurons regeneration in SCI rats. TSP-1 and TGF-β expression increased at 24 h and 7 d after SCI in the injured segment. We observed TSP-1 and TGF-β expression was higher in the SCI group than in erythropoietin treatment group. Samples of spinal cord from the animals demonstrated a TSP-1 optical density of 112.2 ± 6.8 and TSP-1 positive cells were 5.7 ± 1.3 respectively. After injury, TSP-1 optical density and cell number increased to 287.2 ± 14.3 and 23.2 ± 2.6/mm2 at 24 h, 232.1 ± 13.2 and 15.2 ± 2.3/mm2 at 7 d. As to EPO treatment rats, the TSP-1 optical density and cell number decreased to 213.1 ± 11.6 and 11.9 ± 1.6/mm2 at 24 h, 189.9 ± 10.5 and 9.3 ± 1.5/mm2 at 7 d while comparing to the SCI rats (P < 0.01). TGF-β immunohistochemistry staining we couldn’t found it in sham-operated group rats. In SCI rats, optical density and positive neuron number were 291.4 ± 15.2 and 28.8 ± 4.9/mm2 at 24 h, 259.1 ± 12.3 and 23.9 ± 4.1/mm2 at 7 d, and also decreased in EPO treatment rats with 222.8 ± 11.9 and 13.7 ± 2.1/mm2 at 24 h, 196.5 ± 9.7 and 8.7 ± 2.2/mm2 at 7 d (P < 0.01). Conclusion Elevating expression of TSP-1 and TGF-β can be found in the injured segment of the spinal cord at 24h and 7d after injury, erythropoietin treatment effectively prevents pathological alterations from severer spinal cord injury via reduction the expression of TSP-1 and TGF-β.     

支气管肺发育不良新生兔肺组织中转化生长因子β1的表达

目的:探讨高浓度氧并机械通气致新生兔支气管肺发育不良(BPD)中肺组织转化生长因子β1 (TGF-β1) mRNA及蛋白表达的变化.方法:120只新生兔随机分为4组,每组30只.A组给予高吸气峰压(2.45 kPa)机械通气,B组给予中吸气峰压(1.77 kPa)机械通气,C组给予低吸气峰压(0.98 kPa)机械通气,机械通气中均吸入高浓度氧(体积分数90%).A、B、C组各分为3个亚组,每个亚组10只,通气时间分别为1 h、3 h、6 h,正常对照组(D组)不做任何处理.通气结束,颈动脉放血处死动物.分别应用RT-PCR及免疫组织化学方法测定肺组织TGF-β1 mRNA 及蛋白的表达.结果:高浓度氧并机械通气处理后,TGF-β1蛋白表达3 h增加,6 h达高峰,肺组织TGF-β1 mRNA 1 h增加,3 h达高峰, A组增加较B组、C组明显,均高于D组(P<0.05).结论:高浓度氧并机械通气诱发的BPD中存在TGF-β1的过度表达,其机制可能与抑制肺泡的发育成熟有关.     

重组人促红细胞生成素对血透患者肝炎发生率的影响

本组报告重组人促红细胞生成素 (ｒＨｕＥ ＰＯ)治疗对长期维持性血透病人丙型肝炎发生率的影响 ,结果如下。1　临床资料1 1　 1 995年 6月～ 1 999年 1 2月我院行长期维持性血液透析前无肝炎病史的患者 46例。男 35例 ,女 1 1例。平均年龄 48± 1 6岁。透析时间 3 8± 1 3年。每周透析 1 0～ 1 5小时。血透机型号 :Ｇａｍｂｏ 95 0 ,Ｂａｘｔｅｒ 5 5 0透析器 :亚太铜仿膜、醋酸纤维膜。透析器为 1次性或复用 2～ 4次。透析管路及穿刺针多次复用。透析液 :碳酸盐。严格透析室消毒与管理。1 2　 46例患者随机分为 (1 )ｒＨｕＥＰＯ治疗组…     

脂氧素A4调控转化生长因子-β1干预小鼠支气管肺发育不良的机制研究

探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)对新生小鼠高氧诱导所致的支气管发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的保护作用及可能机制?方法:利用高氧损伤诱导BPD动物模型,将新生C57BL/6J小鼠随机分成:空气对照组?模型组?LXA4干预组?转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)中和抗体(1D11)干预组,记录仔鼠体重和生存情况,HE染色观察出生后肺组织病理改变,qPCR法检测肺纤维化指标及转化生长因子-βⅠ型受体(transforming growth factor-β receptor 1,TGF-βR1)和转化生长因子-βⅡ型受体(transforming growth factor-β receptor 2,TGF-βR2)的表达水平?结果:①模型组新生小鼠较空气对照组体重减低且活力差?②肺组织大体标本观察:与空气对照组相比,各组小鼠肺体积减小,色泽暗淡?与空气对照组(d13)相比,LXA4干预组和1D11干预组小鼠肺外观与之相仿?③HE染色:除空气对照组外,各组肺组织均产生类似BPD的病理损伤?较模型组(d13)相比,LXA4干预组与1D11干预组的肺泡结构趋于正常化?④qPCR:与空气对照组相比,各组肺纤维化指标:纤维连接蛋白?平滑肌肌动蛋白-α?弹性蛋白?肌腱蛋白C?组织金属蛋白抑制剂-1及TGF-βR1?TGF-βR2的表达量均增加(P < 0.05)?与空气对照组相比,各组基质金属蛋白酶1相对表达量减少(P < 0.05);其中与模型组相比,LXA4干预组和1D11干预组基质金属蛋白酶1表达量上调(P < 0.05),且LXA4干预组上调更为显著(P < 0.05)?与空气组对照比较,模型组?LXA4干预组和1D11干预组Ⅰ型胶原表达量增高(P < 0.05);其中与模型组相比,LXA4干预组和1D11干预组Ⅰ型胶原表达减少(P < 0.05)?结论:LXA4可能是通过抑制TGF-β1信号通路下调肺纤维化相关因子,实现对高氧诱导BPD的保护作用?     

红细胞生成素对白蛋白诱导HK-2细胞转分化中TGFβ1/ILK通路的调控作用

目的 研究TGFβ1/ILK(转化生长因子-β1/整合素连接激酶)通路在人白蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化过程中的作用,探讨红细胞生成素(EPO)是否通过抑制TGFβ1/ILK通路而产生保护效应.方法 体外培养HK-2细胞,RT-PCR法检测TGF β1、ILK mRNA的表达;细胞免疫荧光法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(0-SMA)的蛋白表达;ELISA法检测纤连蛋白(FN)的蛋白表达.结果 白蛋白诱导组TGFβ 1、ILK mRNA较空白对照组显著升高,EPO干预组TGFβ1、ILKmRNA显著下调;白蛋白诱导组E-cadherin的蛋白表达较空白对照组下降,α-SMA、FN的蛋白表达上升,而在EPO干预组及TGFβ1拮抗剂组E-cadherin的蛋白表达较白蛋白诱导组显著上调,α-SMA、FN的蛋白表达显著下调,且与EPO的浓度有关;Person直线相关分析显示白蛋白诱导组及EPO干预组TGFβ1mRNA与ILK mRNA呈正相关.结论 TGFβ1/ILK通路参与了白蛋白诱导的HK 2细胞转分化过程,EPO通过抑制TGFβ1/ILK通路而抑制转分化过程,产生肾保护效应.     

重组人促红细胞生成素对慢性肾衰病人营养状况的影响

目的 :探讨重组人促红细胞生成素对慢性肾衰病人营养状况的影响。方法 :测定用药与未用药患者血中的视黄醇结合蛋白、前白蛋白和转铁蛋白浓度。结果 :慢性肾衰患者血中三种蛋白浓度明显低于正常 ,用药明显高于未用药患者 ,血中三种蛋白浓度与血红蛋白呈正相关关系。结论 :重组人促红细胞生成素可改善病人的营养状况。     

rhEPO对新型BPD模型肺组织BCL-2和Caspase-9表达的影响及意义

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶 B(PI3K/AKT)通路在重组人促红细胞生成素( rhEPO)保护新型支气管肺发育不良( BPD)中的作用。方法40只定期受孕的SD大鼠,于孕第15天孕囊内注射脂多糖( LPS)或磷酸盐缓冲液( PBS ),新生大鼠分为4组：对照组、高氧组、rhEPO 组、rhEPO+LY294002组。采用Western blot法和RT-PCR法检测肺组织中BCL-2和Caspase-9蛋白及mRNA表达。结果高氧组、rhEPO+LY294002组新生大鼠肺组织BCL-2蛋白及mRNA表达减少, Caspase-9蛋白及 mRNA 表达明显增加;rhEPO组BCL-2蛋白及mRNA表达增加, Caspase-9蛋白及mRNA表达减少;于高氧暴露第1、7、14天各组间的差异均有统计学意义( P<0．05)。结论宫内炎性暴露联合生后高氧可导致肺细胞凋亡增加,rhEPO可能通过减少肺细胞凋亡,对新型 BPD 起一定的保护作用,其机制可能与 PI3K/AKT信号转导通路有关。     

重组人促红细胞生成素在COS-7细胞内表达的研究

目的：研究不同真核载体对人促红细胞生成素ｃＤＮＡ的表达效率。方法：人促红细胞生成素ｃＤＮＡ分别用真核表达载体ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＩ、ｐＡｄＣＩ进行重组，脂质体法转化ＣＯＳ ７细胞，以ＴＦ １细胞检测ＥＰＯ的表达活性。结果：感染ｐｃＤＮＡ３ ＥＰＯ，ｐｃＤＩ ＥＰＯ，和ｐＡｄＣＩ ＥＰＯ的ＣＯＳ ７细胞培养上清中人促红细胞生成素活性分别为０５×１０２，１５×１０３和２２×１０２。结论：已构建成可表达具生物活性的重组人促红细胞生成素的真核表达克隆，嵌合内含子序列可增强人促红细胞生成素ＣＤＮＡ的表达效率     

重组人促红细胞生成素对急性高眼压兔眼视网膜缺氧诱导因子1α表达的影响

目的 观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对急性高眼压兔跟视网膜缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,探讨国产rhEPO保护视网膜神经功能的机制.方法 在设立正常对照、模犁对照的情况下,日本大耳白兔皮下注射国产rhEPO,分别于缺血再灌注(生理盐水前房灌注法造成急性高眼压)后第1、3、7、14天免疫组化法观察视网膜HIF-1α基因表达.结果 正常兔眼视网膜无HIF-1α表达.模型组兔眼视网膜HIF-1α表达阳性细胞数较正常对照组明显增加(P<0.01),EPO组兔眼视网膜HIF-1α表达阳性细胞数变化与模型组相似,但较模型组显著减少(P<0.01).结论 国产rhEPO能够下调视网膜HIF-1α的表达.下调视网膜HIF-1α的表达可能是rhEPO对视网膜缺血冉灌注损伤的保护机制之一.     

重组人促红细胞生成素对脑出血患者神经元再生的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对脑出血患者神经元再生的影响.方法 将41例脑出血患者随机分为两组,对照组和治疗组均给予脑出血的常规处理,在此基础上治疗组每例患者给予rhEPO 5 000 U,经腰椎穿刺鞘内注入,分别于第1、4、7、10、14、17、21天给予1次.两组患者分别于鞘内注药的第1、4、7、10、14、17、21天,采集清晨空腹肘静脉血3 ml(生化管),室温放置待凝固后,以3 000 r/min离心10 min,分离血清,置于-20 ℃冰箱保存待测血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),并采用欧洲卒中量表(ESS)评定患者的神经功能变化.结果 治疗的第1、4天两组患者的血清VEGF、bFGF水平间差异均无统计学意义(P＞0.05),而治疗的第7、10、14、17、21天两组患者的血清VEGF、bFGF水平间差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗的第1、4、7天两组患者的ESS评分间差异无统计学意义(P＞0.05),而治疗的第10、14、17、21天两组患者的ESS评分间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 通过腰椎穿刺注入rhEPO能促进脑出血患者的神经元再生,改善神经功能.     

促红细胞生成素对长期血透患者细胞免疫功能的影响

目的观察重组人促红细胞生成素（rHuEPO）对长期血液透析患者细胞免疫功能的影响。方法60例患者分为血透及重组人促红细胞生成素治疗组和单纯血透治疗组,分别进行外周血树突状细胞计数、T细胞亚群测定,观察其水平的变化。结果长期血透患者外周血树突状细胞计数及CD4／CD8比值明显低于正常组（P〈0．01）,重组人促红细胞生成素治疗能提高长期血透患者外周血树突状细胞数目及CD4／CD8比值。结论单纯血透治疗不能改善患者的细胞免疫功能,联合rHuEPO治疗能改善长期血透患者的细胞免疫功能,减少感染发生率,提高生存质量。     

重组人促红细胞生成素对3T3-L1脂肪细胞促红细胞生成素受体表达及下游信号通路的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素( rHuEPO)对正常和胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞促红细胞生成素受体(EPOR)表达及其下游信号通路的调控作用.方法 以1μmoL/L地塞米松诱导建立3T3-L1脂肪细胞胰岛索抵抗模型(模型组),以分化成熟的正常3T3-L1脂肪细胞作为对照组.采用细胞免疫荧光法和Western blotting法检测细胞EPOR的蛋白表达,采用Real-TimePCR技术检测细胞EPOR mRNA的表达.分别以rHuEPO、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂(LY294002)及信号转导和转录激活因子5( STAT5)抑制剂对模型组和对照组细胞进行干预,采用Western blotting法检测不同药物干预对EPOR蛋白的表达及其下游分子丝(苏)氨酸蛋白激酶( Akt)和STAT5磷酸化水平(p-Akt和p-STAT5蛋白的表达)的影响.结果 与对照组比较,模型组EPOR蛋白和mRNA的表达均显著下调(P＜0.05).干预实验结果显示:与相应对照组或模型组比较,rHuEPO+对照组或模型组EPOR、p-Akt和p-STAT5蛋白的相对表达量均显著上调(P＜0.05);与相应rHuEPO+对照组或模型组比较,rHuEPO+LY29400或STAT5阻断剂+对照组或模型组的p-Akt和p-STAT5蛋白的相对表达量显著下调(P＜0.05).结论 正常3T3 -L1脂肪细胞上存在EPOR,胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞EPOR蛋白和mRNA的表达下调,rHuEPO可通过EPOR介导激活PDK-Akt和JAK2 -STAT5信号通路.     

TGF-β1在高氧致慢性肺疾病早产鼠模型中的表达及意义

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)基因及蛋白在高氧致早产鼠慢性肺疾病(CLD)中表达及意义.方法:建立高氧诱导早产鼠CLD模型,60只早产鼠被随机分为实验组及对照组,分别应用免疫组化及RT-PCR技术测定肺组织TGF-β1mRNA及蛋白表达.结果:实验组肺组织TGF-β1mRNA水平3 d增加,14 d达高峰,21 d仍高于对照组.实验组TGF-β1蛋白表达水平7 d增加,21 d达高峰.结论:TGF-β1的过度表达可能在高氧诱导CLD的肺发育障碍及间质纤维化中发挥重要作用.