miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响

miRNA-21是miRNA家族中十分重要的一个基因,在多种恶性肿瘤中高表达。研究表明,miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控可影响相关靶点的表达情况,因此,miRNA-21可能为非小细胞肺癌临床诊断和疾病治疗提供新靶标。本文对miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响作一综述。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的恶性肿瘤,每年有超过100万人死于肺癌。PI3K/Akt通路在肿瘤治疗方面已经有了比较广泛的研究,活化受体酪氨酸激酶和它们下游信号递质的研究也已经为肺癌的治疗打开了一个非常有前景的领域。由于PI3K/Akt通路在下游多点活化受体酪氨酸激酶,因此被广泛地研究并开发新的抗肿瘤制剂。mTOR已经被确定是PI3K/Akt的下游靶点。雷帕霉素及其衍生物具有高度选择性,mTOR的抑制剂对于多种肿瘤的治疗效果已取得了很好的研究结果。在此我们将对肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号通路的分子基础做一综述,并进一步讨论有关肺癌的多靶点治疗策略。     

PI3K/Akt信号通路及PTEN与糖尿病肾病研究进展

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病发展过程中最常见的微血管病变,也是糖尿病严重的慢性并发症之一,其最终导致的终末期肾功能衰竭(ESRD)是糖尿病高病死率的主要原因,严重威胁着人类的健康[1-2].DN的致病因素复杂多变,具体的分子机制尚不明确.近年来,国内外学者认为,DN的发生发展与PI3K/Akt的过度激活关系密切.PI3K/Akt信号转导通路在细胞生长、增殖、凋亡、分化及葡萄糖代谢过程中发挥重要作用[3],它受到上游多种分子的调节以维持细胞和生命的稳态,例如胰岛素、生长因子的正向调节及PTEN的负向调节[4-5].     

PI3K/Akt信号通路介导的细胞凋亡机制研究进展

PI3K/Akt信号通路是参与细胞增殖调控的重要 通路之一[1],既有抗凋亡作用又有促凋亡作用 ,以抗 细胞凋亡为主。研究证实AKT的活化与许多人类疾 病如癌症、白血病、糖尿病、精神分裂等密切相关[2]。 现在就PI3K/Akt信号通路对凋亡作用综述如下。     

miR-16-5p靶向PTEN/PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌细胞活性和迁移能力的影响

目的 探讨AS-miR-16-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞活性和迁移能力的影响及潜在的作用机制.方法 将NSCLC A549细胞分为3组,分别为Black组、miR-NC组和AS-miR-16-5p组.miR-NC组和AS-miR-16-5p组分别转染阴性对照miRNA(miR-NC)及AS-miR-1...     

Torin2对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的影响

目的 观察Torin2对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的影响,初步探讨其作用机制.方法 实验分为空白对照组、阴性对照组和Torin2加药组,CCK-8检测Torin2对各组A549细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞的凋亡及周期;Transwell检测细胞的迁移;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 Torin2对A549细胞的增殖具有显著抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,IC50为214.96 nmol/L;流式细胞仪检测对照组、加药组200 nmol/L和400 nmol/L细胞凋亡率分别为(4.51±1.32)％、(9.56±2.34)％、(16.40 ±3.57)％;各加药组凋亡率明显高于对照组(P＜0.05),且加药组与对照组比较:G1期细胞比例显著增多(P＜0.05),S期显著减少(P＜0.05).Transwell实验结果显示加药组(200 nmol/L和400 nmol/L)的A549细胞迁移能力较对照组显著下降.Western blot结果显示A549细胞经Torin2加药处理后,p-Akt473、p-4EBP1、Cyclin D1蛋白表达明显降低,Caspase 9蛋白酶切片段表达显著增加.结论 Torin2可以抑制A549细胞增殖,引起细胞周期G1/S期阻滞,抑制细胞迁移,促进细胞凋亡,其机制可能与Torin2抑制了PI3K/Akt/mTOR信号通路以及周期相关蛋白Cyclin D1的表达有关.     

苦参碱通过PTEN/PI3K/Akt通路调控非小细胞肺癌上皮间质转化并影响细胞迁移和侵袭

目的 探讨苦参碱对非小细胞肺癌的影响及其对肿瘤生长、转移和侵袭的作用机制。方法 使用1.0mg/ml浓度的苦参碱体外处理A549和H1650,MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI染色用于细胞凋亡的检测,Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;构建非小细胞肺癌小鼠皮下移植瘤模型,连续用苦参碱处理一段时间后,测量肿块直径和重量并观察形态;蛋白免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白、EMT相关蛋白和PTEN/PI₃K/Akt通路相关蛋白表达水平。结果 苦参碱处理后,人肺癌细胞活性显著降低,细胞凋亡被促进,并且其作用效果呈浓度依赖性;同时,苦参碱减弱了细胞迁移和侵袭能力;EMT相关蛋白E-cadherin表达显著上调,vimentin、N-cadherin和Snail表达下调,EMT过程被抑制。PTEN/PI₃K/Akt通路中,相关蛋白PTEN表达增多,p-Akt表达下调。在体内实验研究中,肿瘤变小,说明苦参碱能够抑制体内肿瘤生长,并且通过影响上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程影响肿瘤转移。结论 苦参碱不仅能够影响肿瘤细胞生长,而且能够调控非小细胞肺癌EMT过程,进而影响细胞迁移和侵袭,这种调控作用依赖于PTEN/PI₃K/Akt通路。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的恶性肿瘤，每年有超过100万人死于肺癌。P13K／Akt通路在肿瘤治疗方面已经有了比较广泛的研究，活化受体酪氨酸激酶和它们下游信号递质的研究也已经为肺癌的治疗打开了一个非常有前号的领域。由于P13K／Akt通路在下游多点活化受体酪氨酸激酶，因此被广泛地研究并开发新的抗肿瘤制剂。mTOR已经被确定是P13K／Akt的下游靶点。雷帕霉素及其衍生物具有高度选择性，mTOR的抑制剂对于多种肿瘤的治疗效果已取得了很好的研究结果。在此我们将对肺癌中P13K／Akt／mTOR信号通路的分子基础做一综述，并进一步讨论有关肺癌的多靶点治疗策略。     

miR-21通过激活PI3K/Akt信号通路对缺氧诱导的大鼠心肌细胞活性的作用机制

目的 探讨miRNA-21通过调节磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对缺氧诱导的大鼠心肌细胞活性的作用机制.方法 正常心肌细胞为A组,缺氧心肌细胞分别分为B组,C组(缺氧心肌细胞转染miRNA-21mimics)及D组(缺氧心肌细胞转染miRNA-21 inhibitor),PCR检测4组细...     

大黄酸对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制

目的：探讨大黄酸对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并阐明其机制。方法：将NSCLC A549细胞分为对照组和低、中及高剂量大黄酸组,采用不含大黄酸的培养基和含有质量浓度为5、10和20 μmol·L^-1大黄酸的培养基分别培养细胞24、48和72 h。采用MTT法检测各组A549细胞增殖率,流式细胞术检测A549细胞凋亡率以及不同细胞周期A549细胞百分比,Western blotting法检测各组A549细胞中半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶9（Caspase-9）、细胞色素C（Cyt-C）和凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达水平,划痕实验和Transwell实验检测各组A549细胞迁移和侵袭能力。结果：大黄酸处理24h后,与对照组比较,低、中和高剂量大黄酸组A549细胞增殖率明显降低（P<0.05）,细胞迁移距离明显减少,侵袭细胞数量明显减少;中和高剂量大黄酸组A549细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;高剂量大黄酸组G₁期细胞百分比明显降低（P<0.05）。大黄酸处理48 h后,与对照组比较,中和高剂量大黄酸组A549细胞中Caspase-3、Caspase-9、Cyt-C和AIF蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：大黄酸可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与上调Caspase-3、Caspase-9、Cyt-C和AIF蛋白表达有关。     

circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。 方法采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。 结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P＜0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P＜0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P＜0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P＜0.05)。 结论抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。     

miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制

研究miR-30a-5p 对非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应（real time-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别测定两组泛素蛋白连接酶（UBE3C）mRNA 和蛋白质表达水平。结果培养48 h后,miR-30a-5p 组相对活细胞百分比低于对照组[（203.7±16.8）% vs（330.4±20.7）%（p =0.000）];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比（258±30.2）%,对照组相对活细胞百分比（403.4±28.4）%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组（p =0.001）。细胞划痕实验示：miR-30a-5p组划痕愈合率为（23.2±2.7）%,对照组划痕愈合率为（89.2±4.8）%,miR-30a-5p 组划痕愈合率低于对照组（p =0.000）。real time-PCR显示,miR-30a-5p 组UBE3C mRNA 表达水平为（0.15±0.02）,对照组UBE3C mRNA 表达水平为（1.03±0.09）,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组（p =0.000）;Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C 蛋白表达水平为（1.57±0.26）,对照组UBE3C 蛋白表达水平为（5.32±0.42）,miR-30a-5p 组UBE3C 蛋白表达水平低于对照组（p =0.000）。结论miR-30a-5p抑制NSCLC 增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。     

MicroRNA-433在非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移中的作用

目的 研究microRNA-433（miR-433）对人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖及迁移的作用。方法 采用实时聚合酶链反应（real-time PCR）检测miR-433在A549、NCI-H1299、NCI-H358以及人肺成纤维细胞系HFL1中的表达。不同浓度miR-433?mimic转染A549细胞,选取最佳浓度进行后续实验;MTT法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞迁移情况;双荧光素酶报告基因法检测miR-433与p21活化激酶4（PAK4）的靶向关系;Western blotting检测PAK4、单丝氨酸蛋白激酶1（LIMK1）、磷酸化单丝氨酸蛋白激酶1（p-LIMK1）、丝切蛋白（Cofilin）和磷酸化丝切蛋白（p-Cofilin）的表达。结果 与HFL1比较,miR-433 在3种NSCLC中的表达均降低。过表达miR-433 48?h后,A549细胞增殖和迁移能力降低,差异有统计学意义（P?< 0.05）。双荧光素酶报告基因法证明PAK4为miR-433的靶向调节基因,且PAK4在3种NSCLC中的表达均上升。过表达miR-433后细胞中PAK4、p-LIMK1、p-Cofilin的表达均降低,与mimic control组比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。结论 miR-433能通过靶向下调PAK4的表达,抑制LIMK1/cofilin信号通路,抑制A549细胞的增殖及迁移。     

紫草素诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其机制的研究

目的 研究紫草素(shikonin, SK)诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制。方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌A549细胞后,CCK-8法检测细胞的增殖情况;DAPI荧光染色法和FCM检测细胞凋亡;Western blotting检测紫草素处理48h后Bax、Bcl-2、p-Akt、p-ERK1/2的蛋白水平。结果 紫草素显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖活性(P<0.05),诱导细胞凋亡,与空白对照组比较,紫草素处理组Bax表达上调(P<0.05),Bcl-2、p-Akt、P-ERK1/2表达下调(P<0.05)。结论 紫草素可以显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径,PI3K/Akt信号通路和ERK 1/2信号通路有关。     

紫草素对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的观察紫草素抑制人肺腺癌A549细胞的增殖及其机制。方法用不同浓度紫草素处理A549细胞,CCK-8方法检测紫草素对A549细胞生长增殖的抑制作用;细胞周期检测试剂盒测定细胞周期的变化;Western blot法检测磷酸化Akt蛋白（pAkt）的表达。结果紫草素能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖;诱导A549细胞凋亡;阻滞细胞G1期向S期的发展。pAkt蛋白表达量在紫草素处理48 h后明显减少。结论紫草素可以抑制肺腺癌A549细胞的增殖,诱导凋亡,机制可能与紫草素抑制PI3K/Akt信号途径有关。     

奥曲肽对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用

目的:探讨奥曲肽对于人肺癌细胞株A549生长的抑制作用.方法:以体外培养的人肺癌细胞株A549为靶细胞,运用四氮唑盐法(MTT法)观察奥曲肽作用48 h后对于人肺癌细胞株生长的影响.以流式细胞仪分析其对细胞周期的影响.结果:MTT法结果显示奥曲肽作用48 h可抑制A549的生长, 并呈剂量依赖性, IC50=1.62 mg/L.流式细胞仪测定结果显示:G0/G1期细胞比例增加,G2/M期细胞比例减少,且奥曲肽质量浓度增高到1.60 mg/L以上时,G2/M期比例均降为0,细胞周期直接阻滞在G0/G1期,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:奥曲肽可抑制体外培养的人肺癌细胞株A549增殖,机制可能是将肺癌细胞阻滞于G0/G1期.     

KIAA1456靶向调控Runx1抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭

目的探讨KIAA1456靶向调控Runx1对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响。方法采用免疫组织化学法检测91例肺癌及癌旁组织中KIAA1456表达情况,分析KIAA1456与肺癌患者临床病理特征的相关性,并进行Kaplan-Meier生存分析。用Lipofectamine法将miR-NC KIAA1456 RNAi和pCDNA3.0-HA-KIAA1456质粒转染A549细胞,MTT法和Transwell法检测细胞增殖和侵袭能力,Western blotting法检测细胞KIAA1456、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达。结果KIAA1456在肺癌组织中的高表达率明显低于癌旁组织(P＜0.05);KIAA1456在不同淋巴结转移、TNM分期分层间表达有差异(P＜0.05)。KIAA1456高表达肺癌患者5年总生存率高于KIAA1456低表达者(P＜0.05)。与阴性对照组比较,KIAA1456 RNAi组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达均增加,KIAA1456表达降低;KIAA1456质粒组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1和MMP-9表达均降低,KIAA1456和Runx1表达增加(P＜0.05)。结论KIAA1456可作为肺癌的抑癌基因,通过靶向调控Runx1表达,抑制A549细胞增殖和侵袭。     

Human decorin regulates proliferation and migration of human lung cancer A549 cells

Background Decorin is a small leucine-rich proteoglycan and it plays an important role in regulation of cell growth and migration in various tumor cell lines. Decorin was found down-regulated in non-small cell lung cancer tissue and may be involved in regulation of lung cancer development. Methods In this study, lentivirus-mediated RNA interference and over expression were employed to change the expression levels of decorJn Jn lung cancer A549 cells. We tested the cell cycle of A549 cells and the expression of transforming growth factor （TGF）-[31, cyclin D1, epidermal growth factor receptor （EGFR）, P53, and P21. Results We found that up-regulation of decorin could inhibit proliferation, block cell cycle at G1 and decrease invasive activity of A549 cells. Moreover, we also show that up-regulation of decorin induced significant decreases of TGF-131, cyclin D1 expression, phosphorylation of EGFR, and increases of P53 and P21 expression. Opposite results were observed in A549 cells with down-regulation of decorin. Conclusion Our results suggest that decorin is a key regulator involved in proliferation and migration ofA549 cells.