活性氧调控可溶性环氧化物水解酶表达增高在门静脉高压症大鼠体内的实验研究

目的 明确活性氧（reactive oxygen species,ROS）是否可在肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境中调控可溶性环氧化物水解酶（soluble epoxide hydrolase,sEH）表达,验证sEH对这一疾病模型肠系膜血管中肌源性反应的影响。方法 利用多道生物分析仪分别测定正常对照组大鼠、实验对照组大鼠（四氯化碳处理）及NAPDH抑制剂夹竹桃麻素（apocynin,Apo）干预的处理组大鼠门静脉压力;免疫印迹分析3组大鼠肠系膜动脉组织sEH、ROCK及p-moesin蛋白表达水平的变化;血管灌流系统测定各组大鼠肠系膜动脉血管的肌源性反应。多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 （1）正常对照组、实验对照组和Apo处理组大鼠平均门静脉压力分别为（6.5±0.9）mmHg（1 mm Hg=0．133 kPa）、（15.9± 1.6）mmHg和（10.6±1.2）mm Hg,肝硬化门静脉高压症大鼠经Apo处理后,门静脉压力显著降低（P＜0.05）。 （2）与正常对照组比较,实验对照组大鼠肠系膜组织sEH蛋白表达水平明显增高（P＜0.05）,p-moesin表达显著降低（P＜0.01）,但Apo处理组sEH蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,p-moesin表达回复,但仍与正常对照组存在显著差异（P＜0.05）。（3）肌源性收缩在实验对照组大鼠显著降低（P＜0.05）,经过Apo干预后,肌源性收缩改善,血管恢复收缩活性。结论 四氯化碳致肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境sEH表达增高,与活性氧含量相关。使用NAPDH特异性抑制剂去除活性氧后,sEH表达减低,血管肌源性反应恢复,提示在肝硬化门静脉高压症中限制sEH作用可作为缓解氧化应激外的另一治疗方向。     

蛋白激酶B参与门静脉高压症高动力循环的研究

目的 探讨蛋白激酶B （AKT）与肝硬化门静脉高压症（portal hypertension,PHT）高动力循环的关系,特别是AKT与肝门静脉高压症内脏血管收缩反应性降低的关系.方法 将SD大鼠随机分为4组：正常对照组（N组,n=7）、四氯化碳诱导的肝硬化门静脉高压组（PHT组,n=7）,经AKT特异性阻滞剂LY294002处理的门静脉高压组（LY组,n=7）和注射二甲基亚枫（DMOS）的门静脉高压组（DMOS组,n=7）,分别测量门静脉压力（portal vein pressure,PP）,离体肠系膜分支动脉对缩血管物质去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）的反应性,应用LY294002对离体微动脉收缩反应性的影响以及肠系膜动脉内皮细胞内AKT、内皮一氧化氮合酶（eNOS）的蛋白表达变化.结果 ①与N组相比,PHT组PP明显增高（P＜0.01）,应用LY294002后,PP无明显降低（P＞0.05）;②PHT组肠系膜微动脉对NE的反应性较N组明显降低（P＜0.01）,LY294002可改善这种低反应性（P＜ 0.01）;③AKT在PHT肠系膜动脉内皮中的表达明显上调（P＜0.05）,eNOS的表达PHT组和N组无明显差别（P＞ 0.05）,但p-eNOS的表达在PHT组动脉内皮中明显增高（P＜ 0.05）.结论 肝硬化门静脉高压症的内脏动脉中,AKT的表达上调,通过促进eNOS的活化和降低血管收缩反应性,参与内脏高动力循环的形成.     

过氧化氢在肝硬化门静脉高压症内脏高动力循环中的作用

目的 探讨过氧化氢（H2O2）在门静脉高压症内脏高动力循环形成中的作用.方法 雄性SD大鼠皮下注射四氯化碳（CCl4）制备肝硬化门静脉高压症（PHT）模型.PHT组大鼠制备完成后随机分为2个亚组：聚乙二醇-过氧化氢酶（PEG-catalase）处理组（PHT＋PEG组）和生理盐水（NS）处理组（PHT＋NS组）,分别用PEG或NS腹腔内注射10 u/ （g·d）,共14 d.测定大鼠门静脉压力（PP）、肠系膜微动脉对去甲肾上腺素（NE）的反应性、肠系膜动脉内H2O2含量.结果 （1） PHT组PP明显高于非PHT组,PEG对PHT组PP并无明显改善（P＞ 0.05）;（2） PHT组肠系膜微动脉对NE的反应性明显低于非PHT组,血管收缩率50％时NE的浓度EC50明显升高（P＜0.01）,PEG能部分改善这种低反应性（P＜ 0.01）;（3） PHT组肠系膜动脉内H2O2明显升高,PEG能使其减少.结论 肝硬化PHT中过度生成的H2O2可通过降低肠系膜动脉对ME的反应性参与高动力循环的形成.     

门静脉高压症患者门脉系血流动力学变化的研究

目的：研究肝硬化门静脉高压症患者门静脉系血流动力学变化。方法：应用多普勒超声检测了２０例健康成人和３４例肝硬化门静脉高压症患者门静脉系血流量参数。结果：门同压组肠系膜上静脉血流量与脾静脉血流量之和大于正常对照组的门静脉血流量：在门脉高压组，门静脉血流量约减少４２．８％，冠状静脉分流约５８．５％。结论：肝硬化门静脉高压症中存在内脏高血流动力学。此外，经胃冠状静脉分流量的大小可大致判断门静脉高压的程度     

雌激素改善肝硬化门静脉高压症大鼠全身和内脏高动力循环

目的 探讨雌激素（E2）对四氯化碳（CCl4）诱导的肝硬化门静脉高压症（PHT）大鼠全身和内脏高动力循环的影响。方法 Spargue-Dawley雌性大鼠32只,随机分成4组：假手术组、去势+PHT、去势+PHT+E2组、去势+PHT+E2+ICI组。皮下注射CCl4诱导肝硬化PHT,并给予E2和（或）ICI182,780治疗。B超和压力测定测量各组大鼠全身和门静脉血流动力学指标。结果 去势+PHT大鼠较假手术大鼠平均动脉压降低,心率减慢,门静脉压力升高,门静脉血流量和血流指数增加,外周和内脏血管阻力减小。卵巢切除PHT大鼠在用雌激素治疗后门静脉压力降低,外周血管阻力和内脏动脉阻力增加。但用ICI182,780拮抗雌激素作用后,全身和内脏高动力循环再次加重。结论 雌激素能降低CCl4诱导的肝硬化PHT大鼠的门静脉压力、门静脉血流量,增加外周和内脏血管阻力,改善全身和内脏高动力循环。     

过氧化氢在门静脉高压症大鼠侧支循环建立中的作用

目的探讨过氧化氢(H2O2)对胆总管结扎诱导的肝硬化门静脉高压症(PHT)大鼠门体侧支循环形成的影响机制。方法胆总管结扎诱导的肝硬化PHT大鼠和假手术组大鼠每天一次腹腔分别注射浓度为10 000 U/kg聚乙二醇过氧化氢酶(PEG-catalase)或生理盐水,共8 d。测定大鼠肠系膜组织H2O2含量,利用彩色微球技术测定门体分流率及相应血流动力学指标。检测大鼠肠系膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)及VEGF受体-2(VEGFR-2)蛋白含量。结果肝硬化PHT组大鼠门静脉压力、肠系膜组织H2O2水平及门体分流程度明显高于对照组大鼠。PEG-catalase处理使PHT大鼠门体分流率明显下降,VEGF及VEGFR-2蛋白水平明显降低,内脏高血流动力循环得到明显改善。结论 H2O2在肝硬化PHT内脏高动力循环形成过程中发挥重要作用,这和VEGF介导的血管增生有关。     

一氧化氮降低肝硬化门静脉高压症血管收缩反应性的实验研究

目的 探讨NO在肝硬化门静脉高压症血管收缩反应中发挥作用的机制,特别是NO与RhoA/ROCK通路间的相互作用机制.方法 分别测定正常大鼠(正常对照组,5只)、CCl4诱导的肝硬化门静脉高压症大鼠(实验对照组,6只)和经L-NAME处理的门静脉高压症大鼠(L-NAME处理组,6只)外周血和肠系膜动脉NO含量;利用血管灌流系统测定上述3组大鼠肠系膜微动脉对去甲肾上腺素的反应;Westernblot分别检测3组大鼠肠系膜动脉NO-cGMP-PKG通路和RhoA/ROCK相关蛋白表达水平的变化.多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,肠系膜微动脉对去甲肾上腺素反应性的变化通过量-效曲线表示,运用非线性回归法,计算出EC50值.结果 (1)正常对照组、实验对照组和L-NAME处理组大鼠平均门静脉压力分别为(6.2±0.9)mm Hg(1mm Hg =0.133 kPa)、(13.9±1.7)mm Hg和(16.6±1.3)mm Hg,3组比较,差异有统计学意义(F=94.4,P＜0.05).(2)正常对照组、实验对照组和L-NAME处理组大鼠平均血清NO浓度分别为(43±5)μmol/L、(82±16) μmol/L和(45±9)μmol/L,3组比较,差异有统计学意义(F =24.77,P＜0.05);L-NAME处理组大鼠平均NO浓度明显低于实验对照组(P＜0.05).(3)正常对照组、实验对照组和L-NAME处理组大鼠肠系膜动脉平均NO含量分别为(236±41) μmol/g、(407±82) μmol/g和(216 ±42) μmol/g,3组比较,差异有统计学意义(F =20.29,P＜0.05);L-NAME处理组大鼠肠系膜动脉平均NO含量明显低于实验对照组(P＜0.05).(4)与实验对照组大鼠比较,L-NAME处理组大鼠的离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素剂量反应曲线左移,但未达到正常对照组大鼠反应曲线水平,正常对照组、实验对照组和L-NAME处理组大鼠EC50分别为6.458×10-7 mol、9.546×10-7 mol和7.494×10-7 mol,L-NAME处理组与其余两组比较,差异有统计学意义(=2.726,3.112,P＜0.05).(5)与正常对照组比较,实验对照组大鼠肠系膜动脉eNOS蛋白和p-VASP蛋白表达水平明显增高(P＜0.05),但L-NAME处理组eNOS和p-VASP蛋白表达水平显著降低,但仍高于正常对照组(P＜0.05).3组大鼠肠系膜动脉PKG-1、ROCK-1和p-moesin蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05).(6)去甲肾上腺素刺激后,正常对照组和L-NAME处理组大鼠肠系膜动脉ROCK-1的活性显著上升,而实验对照组无变化.结论 CCl4致肝硬化门静脉高压症大鼠肠系膜动脉NO含量增高,影响缩血管物质诱导ROCK激活;L-NAME降低肠系膜动脉壁内NO的含量,改善了RhoA/ROCK信号通路传递障碍,促使缩血管物质诱导ROCK激活,但不影响ROCK蛋白表达水平的变化.     

内皮素在肝外型门静脉高压症发病机制中的作用

目的 探讨内皮素在门静脉高压症发病机制中的作用及其可能的机制。方法 参照Benoit方法建立大鼠门静脉高压症模型,应用放射免疫学方法分别测定门静脉高压症组、正常对照组和假手术组大鼠血浆及肝组织中ET－1的含量,并观察ET－1和ETA受体拮抗剂对门静脉高压症大鼠FPP以及体外培养的门静脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和蛋白质合成的影响。结果 ①门静脉高压症大鼠血浆和肝组织ET－1含量显著高于正常对照组和假手术组（P＜0．01）;②静脉注ET－1可以显著提高门静脉高压症大鼠的自由门静脉压（P＝0．002）,静注ETA受体拮抗剂则可以显著降低门静脉高压症大鼠的FPP（P＝0．047）;③ET－1可以显著剂量依赖性地促进门静静脉VSMC对^3H-TdR和^3H-Leu的掺入,这种作用可以被ETA受体拮抗剂所抑制。结论 ①ET－1可以通过ETA受体介民垢缩血管作用,增加肝内门静脉系统血流阻力的功能性部分;②ET－1可以显著促进体外培养的大鼠门静脉血管平滑肌细胞的增殖和蛋白质合成,参与门静脉系统的血管增生－血管重构,并影响门静脉系统血流阻力的器质性部分;③门静脉高压症大鼠体内ET－1的过量表达通过影响门静脉系统血流阻力的功能性部分和器质性部分,在门静脉高压症的发病机理中具有重要作用。     

门静脉高压症手术后门静脉血栓形成的原因

目的 探讨肝硬化门静脉高压症脾切除术后门静脉血栓形成的原因.方法 回顾分析我院2010年2月至2013年2月132例因肝硬化门静脉高压症行脾切除患者的临床资料,包括对年龄、性别、肝功能、血小板、门静脉血流流速的变化等相关指标监测分析.结果 门静脉高压症患者术后门静脉血栓形成率为17.4％ （23/132）,与无血栓组比较,血栓组患者术中门静脉血流速度显著下降（P＜0.05）,年龄、性别、肝功能、血小板等指标差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 门静脉血流速度降低可能是门体断流术后门静脉血栓形成的主要影响因素.     

肝硬化,门静脉狭窄大鼠胃粘膜屏障功能异常的研究

为观察门静脉高压时胃粘膜的屏障功能，研究设计肝硬化和肝外门静脉狭窄两组门静脉高压动物模型，观察其胃粘膜屏障功能的变化并与正常对照组对比研究。结果显示：门静脉高压大鼠内脏血流量明显增加，而胃粘膜实际处于局部缺血状态；胃壁结合粘液量（ＧＰ）和胃粘膜ＰＧＥ２含量较对照组显著降低，尤以肝硬化门静脉高压大鼠为甚；胃基础泌酸量（ＢＡＳ）三组间无差异，而门静脉高压大鼠Ｈ＋返流量（Ｈ＋ＢＤ）明显高于对照组，以肝硬化大鼠最为显著。结果表明：门静脉高压性胃病（ＰＨＧ）的发生与胃粘膜屏障功能严重削弱有关；而非“高酸”所致；肝功能受损参与胃粘膜病变的发生。     

门静脉高压症apelin/APJ信号活化的实验研究

目的:探讨apelin/APJ信号在门静脉高压症的激活状态以及门静脉高压症的过程是否有apelin/APJ信号的活化,并提出其可能的机制。方法:采用部分门静脉结扎(partial portal vein ligation,PPVL)及胆道结扎离断(bile duct ligation,BDL)两种方法制备SD大鼠不同特点的门静脉高压症模型。通过大体观察、血流动力学、病理学及免疫组织化学评估门静脉压力和apelin/APJ信号在肠系膜的激活。结果:两种模型组大鼠门静脉压力均比相应假手术组高。两种模型肠系膜血管新生明显,其侧支循环大量开放。BDL组和PPVL组大鼠肠系膜组织APJ和apelin蛋白与各自假手术组相比均有升高。结论:apelin/APJ信号可能在门静脉高压症形成过程中有重要作用。     

Influence of portal hypertension on secretion of gastric mucus in rats.

OBJECTIVE: To assess the effect of portal hypertension on gastric adherent and soluble mucus in rats. DESIGN: Experimental study. SETTING: Teaching hospital, Taiwan. MATERIAL: 30 male Wistar rats. INTERVENTIONS: Portal hypertension was induced experimentally by partial ligation of the portal vein in 20 male Wistar rats: ten rats were examined after 4 weeks and the remaining 10 after 8. Another group of 10 rats (controls) had sham operations. MAIN OUTCOME MEASURES: Portal pressure, the severity of gross gastric mucosal lesions, and measurement of gastric adherent and soluble mucus. RESULTS: The portal pressure and the gross mucosal damage differed significantly between the experimental and the control groups (p < 0.01). There was significantly less gastric adherent mucus in the two experimental groups than in the control group (p = 0.002 and <0.001, respectively), whereas there was no significant differences in the amount of gastric soluble mucus (p = 0.5 and 0.1, respectively). The reduction in the gastric adherent mucus was closely related to the increase in portal pressure (p < 0.001) and the severity of portal hypertension-induced gastropathy (p < 0.001). CONCLUSIONS: Gastric adherent mucus may have an important role in the pathogenesis of portal hypertensive gastropathy, and its protective capacity is reduced by portal hypertension, as indicated by the decrease in gastric adherent mucus.     

The portal hypertensive gastric mucosa: histologic, ultrastructural, and functional analysis after aspirin-induced damage

We assessed macroscopic, histologic, ultrastructural, and functional features of aspirin-induced gastric mucosal injury in portal hypertensive and sham-operated rats. Portal hypertension was produced by staged portal vein ligation. Four hours after intragastric acidified aspirin administration, intraluminal pH in portal hypertensive rats was 6.6 +/- 0.2 and 4.3 +/- 0.5 in sham-operated controls (p less than 0.01). Gross mucosal damage was significantly greater in portal hypertensive rats compared with controls (18 +/- 2 versus 7 +/- 1% of total mucosal area). Histologic deep necrosis involved 22 +/- 2% of mucosal section lengths in portal hypertensive rats compared with 7 +/- 1% in sham-operated rats (p less than 0.01). In portal hypertensive rats, histologic and ultrastructural evaluation demonstrated capillary endothelial abnormalities, arterialization of submucosal veins, and markedly greater severity of microvascular damage than in sham-operated controls. Neutralized aspirin (pH, 7.0) did not produce any significant damage detectable grossly, histologically, or by transmission electron microscopy in portal hypertensive rats. We conclude that acid-dependent aspirin-induced gastric mucosal damage is significantly increased in portal hypertension.     

A Novel Method of Determining Portal Systemic Shunting using Biodegradable TC Labelled Albumin Microspheres

Portal systemic shunting (PSS) and portal pressure were measured in control rats and in animals with portal hypertension induced by partial portal vein ligation (PPVL). The portal pressure in rats with partial portal vein ligation (13.4 +/- 0.5 mm.Hg.) was significantly higher (p < 0.005) than in the control group (9.6 +/- 0.6 mm.Hg.). Portal systemic shunting measured by consecutive injections of radiolabelled methylene diphosphonate (MDP), a non-diffusable marker and albumin microspheres directly into the splenic pulp was significantly increased (P < 0.005) in the portal hypertensive animals (30.8 +/- 2.5%) compared to sham operated rats (2.6 +/- 1.5%). Similarly, in portal hypertensive rats portal systemic shunting measured by intrasplenic injections of radiolabelled cobalt microspheres (37.1 +/- 3.9%) was significantly greater (p < 0.005) than in control animals. There was a good correlation and agreement (r = 00.97) between the two methods of measuring portal systemic shunting. However because the (99)Tc(m)-albumin microspheres are biodegradable the method allows portal systemic shunting to be measured in man. Furthermore since the computer adjusts the baseline to zero after each determination of portal systemic shunting the methodology allows repeated measurements to be made.     

抑制一氧化氮生物合成对门脉高压鼠血流动力学的影响

研究一氧化氮(NO)在门脉高压高血流动力学中的作用。方法:用SD大鼠制备肝内型(IHPH)、肝前型门脉高压(PHPH)和门腔分流(PCS)3组模型,并以正常鼠作为对照组。每一组实验动物再分成3个亚组:NO生物合成抑制剂L-NMMA组、L-NMMA NO生物合成底物L-精氨酸组以及生理盐水安慰组。血流动力学研究用放射性微球注射技术。结果:IHPH、PHPH和PCS鼠均具有心输出量和内脏血流量增加,平均动脉压、周围血管总阻力和内脏血管阻力降低等高血流动力学特征。L-NMMA能逆转门脉高压鼠和门腔分流鼠的高血流动力学状态,使之恢复至正常鼠的基础水平,但并未达到正常鼠用L-NMMA后的水平。如先给予L-精氨酸,则使L-NMMA对门脉高压鼠和门腔分流鼠的心血管作用消失。结论:门静脉高压症中NO过多产生是高动力循环重要的、但并不是唯一的介质。     

门脉高压大鼠胃粘膜屏障功能的实验研究

为探讨门脉高压性胃病的发病机理，将Ｗｉｓｔａｒ大鼠４２只随机分为肝硬变组（ＬＣ组，ｎ＝１５）、门静脉狭窄组（ＰＶＳ组，ｎ＝１５）和假手术组（ＳＯ组，ｎ＝１２），以观察其血流动力学指标、胃壁结合粘液（ＧＰ）、胃粘膜内源性前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）水平、胃基础泌酸量（ＢＡＳ）以及Ｈ＋返渗量（Ｈ＋ＢＤ）。结果：ＬＣ组及ＰＶＳ组大鼠内脏血流量较ＳＯ组明显增加（Ｐ＜０．００１），但胃粘膜却处于缺血状态；其ＧＰ和ＰＧＥ２含量也较ＳＯ组显著下降（Ｐ＜０．０１），其中ＬＣ组又较ＰＶＳ组更低（Ｐ＜０．０５）；ＢＡＳ３组间无差异，但ＬＣ组及ＰＶＳ组大鼠之Ｈ＋ＢＤ明显高于ＳＯ组（Ｐ＜０．００１），且以ＬＣ组最为显著。本实验结果提示：门静脉高压大鼠胃粘膜屏障功能遭到严重破坏，尤以肝硬变大鼠为甚；门脉高压性胃病的发生与胃粘膜屏障功能削弱有关；肝功能受损参与胃粘膜病变的发生。