锌转运体8对结肠癌奥沙利铂耐药的影响

目的：筛选结肠癌中奥沙利铂耐药相关基因,并验证其对奥沙利铂治疗结肠癌疗效的影响。方法：从NCBI-GEO数据库下载并综合分析数据集GSE42387,筛选奥沙利铂耐药相关基因;通过Ualcan和GEPIA数据库检测耐药相关基因在结肠癌中的表达和对预后的影响;转染siRNA-ZIP8干扰结肠癌细胞SW620中锌转运体8（zinc transporter 8,ZIP8）表达;CCK-8实验检测ZIP8表达降低后奥沙利铂对结肠癌细胞增殖抑制的影响;流式细胞术检测ZIP8表达降低后奥沙利铂对结肠癌细胞凋亡的影响;对化疗前结肠癌组织标本进行免疫组织化学染色,评估ZIP8与化疗效果的关系。结果：筛选出ZIP8、NUPR1、SLC43A1 和TEME73共4个耐药相关基因;ZIP8在结肠癌组织中高表达（P < 0.05）,且与患者预后相关（P=0.005）;在相同药物浓度下, siZIP8组细胞的增殖抑制率明显高于siNC组（P < 0.05）,siZIP8组中奥沙利铂诱导的细胞凋亡率显著高于siNC组（P < 0.05）; ZIP8低表达的患者有更长的总生存期（P=0.001）和无病生存期（P < 0.001）。结论：ZIP8促进了结肠癌患者的奥沙利铂耐药性,可作为预测患者化疗预后的指标之一。     

肿瘤干细胞在人结肠癌细胞株HT29耐奥沙利铂中的作用探讨

目的探讨肿瘤干细胞（cancer stem cell,CSC）在人结肠癌细胞株HT29对奥沙利铂（L-OHP）产生获得性耐药中的作用。方法采用浓度递增法诱导产生人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HT29/L-OHP。采用As2O3逆转HT29/L-OHP的耐药性。采用MTT法检测As2O3逆转前后HT29/L-OHP的增殖能力和对L-OHP的敏感性。采用实时荧光定量PCR检测As2O3逆转前后HT29/L-OHP中Sox-2、miR-200c和let-7的表达。结果①在L-OHP（12μmol/L）的作用下,HT29/L-OHP的增殖能力显著高于HT29（P〈0.01）,但是同未经L-OHP作用的HT29相比差异无统计学意义（P〉0.05）。HT29和HT29/L-OHP对L-OHP的IC50分别为12.1μmol/L和138.4μmol/L,耐药指数为11.44。②0.20 mg/L的As2O3预处理后,降低了HT29/L-OHP对L-OHP的耐药性,逆转倍数为3.76,相对逆转效率为80.4%。③相对于HT29,HT29/L-OHP中Sox-2的表达显著增加[（0.072±0.038）比（0.019±0.010）]（P〈0.01）,而miR-200c和let-7的表达显著下降[（0.262±0.136）比（0.726±0.289）,（0.213±0.145）比（0.642±0.268）]（P〈0.05）。④As2O3处理后,相对于未处理前,HT29/L-OHP中Sox-2的表达显著降低[（0.032±0.012）比（0.072±0.038）]（P〈0.05）,而miR-200c和let-7的表达显著升高[分别为（0.367±0.256）比（0.262±0.136）,（0.3869±0.253）比（0.213±0.145）]（P〈0.05）。结论 CSC有可能是人结肠癌细胞株HT29产生L-OHP耐药的机制之一。     

靶向Twist基因逆转卵巢癌耐药细胞化疗敏感性的研究

目的 探讨载体表达的小干扰RNA(siRNA)影响卵巢癌耐药细胞株Twist基因的表达、促进凋亡并逆转其阿霉素耐药的可行性.方法 体外构建Twist小发卡状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入SKOV3/ADM细胞.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Twist mRNA的表达;使用免疫细胞化学法(ICC)检测Twist蛋白的表达;使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定各组细胞对阿霉素的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测其对卵巢癌细胞凋亡的影响.结果 Twist shRNA转染组细胞Twist mRNA 的表达与其他两组相比明显减弱,Twist蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义(P<0.01);阿霉素敏感性比正常对照组提高了约2.5倍;流式细胞仪显示阿霉素作用24 h后,特异性转染组细胞周期分布发生明显改变,G0/G1期细胞比例增多,而S期细胞比例减少,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 针对TWIST合成的siRNA能够有效地抑制TWIST mRNA和蛋白的表达,促进卵巢癌耐药细胞凋亡并能恢复其对阿霉素的敏感性.应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性.     

Twist在子宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨转录因子Twist在人正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、子宫颈鳞癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法分别对26例正常宫颈组织、92例宫颈上皮内瘤变和43例子宫颈鳞癌中Twist蛋白的表达情况进行检测。结果Twist蛋白在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、子宫颈鳞癌中的阳性表达率比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Twist的异常表达与子宫颈鳞癌的发生发展有相关性,Twist可能参与了子宫颈鳞癌浸润转移的过程。     

巨噬细胞在结肠癌CT-26细胞获得性5-FU耐药中的作用

目的 探讨巨噬细胞在结肠癌CT26细胞对5-FU产生获得性耐药过程中的作用及其机制.方法 分别用正常培养基(NM)、巨噬细胞培养上清(CM)及预先用低剂量5-FU处理过的巨噬细胞培养上清[CM(5-FU)]处理CT-26细胞,并给予10μmol/L 5-FU处理,用CCK-8检测各组细胞增殖情况,PI/Annexin-V流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及Western blot检测各组细胞凋亡信号通路.建立CT26小鼠皮下移植瘤模型,应用上述条件培养基处理联合5-FU化疗,动态观察移植瘤生长情况.结果 检测细胞凋亡情况发现,5-FU处理组CT26细胞的凋亡细胞百分比显著高于对照组(P＜0.05);Western blot检测结果显示5-FU处理组凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及P-JNK的表达较对照组显著上调(P＜0.05);Western blot检测结果及结肠癌CT26细胞小鼠移植瘤模型发现P-JNK抑制剂可显著抑制由5-FU诱导的CT26细胞Caspase-3凋亡信号通路的激活;CCK-8检测结果及小鼠移植瘤模型中均发现CM(5-FU)能够显著降低CT26细胞对5-FU的化疗敏感性;细胞凋亡检测及Western blot检测结果发现CM(5-FU)可抑制由5-FU诱导的P-JNK/Caspase-3凋亡信号通路的激活.结论 5-FU可激活结肠癌CT-26细胞的P-JNK依赖的Caspase-3凋亡信号通路以发挥抗癌作用;5-FU诱导的巨噬细胞可导致结肠癌CT26细胞产生5-FU获得性耐药,其机制可能是5-FU诱导的巨噬细胞上清可拮抗CT-26细胞中5-FU激活的P-JNK/Caspase-3凋亡信号.     

Twist1在食管癌中的表达及其临床意义研究

目的 研究Twist1在食管鳞状细胞癌中的表达情况,探讨其在食管癌演变的过程中的作用及临床意义.方法 用Western blot和免疫组织化学法检测正常食管组织、食管癌旁组织(距癌组织2 cm内组织)、食管鳞癌组织中Twist1的表达情况并阐明其与性别、年龄、肿瘤位置、细胞分化程度、临床分期、T分期以及有无淋巴结转移等的关系.结果 Twist1在食管鳞癌组织中阳性表达率(74.7％)明显高于癌旁组织(49.3％)和正常食管组织(38.4％),差异有统计学意义(P =0.000).食管鳞状细胞癌中Twist1的阳性表达率在不同细胞分化程度、临床分期、T分期组间差异有统计学意义(P＜0.05),在不同性别、年龄、肿瘤部位、有无淋巴结转移组间差异无统计学意义.正常食管组织组、癌旁组织组、食管鳞癌组织组间Twist1的相对表达量差异有统计学意义(F=6.263,P=0.002).结论 Twist1可能参与了食管鳞状细胞癌的发生、发展及恶性转化过程,检测Twist1有助于食管鳞癌的诊断、判断其恶性程度.     

胃结肠癌多耐药基因与临床相关性研究

肿瘤细胞对化疗药物产生多耐药性，（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇ ｒｅ－ｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）是化疗失败的重要原因，而引起ＭＤＲ的因素很多，但其中多耐药基因（ＭＤＲ１基因或ｍｄｒ１基因）的过度表达是引起ＭＤＲ的主要机制［１］。现将ｍｄｒｌ基因与胃结肠癌耐药相关的机制及其临床研究的现状综述如下。１ＭＤＲ１基因的检测方法 ｍｄｒｌ基因在ＲＮＡ水平上检测方法有原位杂交、Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ印迹、点要交、ｓ１核酸酶试验、ＲＮａｓｅ保护性试验等，这些方法操作复杂，敏感性较差，因而受到了极大的限制，而ＲＴ－ＰＣ…     

Twist基因在口腔鳞状细胞癌中的研究进展

Twist是一个进化上高度保守的II类碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子,它影响细胞的凋亡、参与上皮-间质转转化(EMT)、对肿瘤的侵袭转移和耐药有重要的影响.口腔鳞状细胞癌(OSCC)是最常见的口腔恶性肿瘤,术后复发和转移导致口腔鳞状细胞癌患者预后较差.根据Twist基因在口腔鳞状细胞癌发生发展过程中的作用,从肿瘤干细胞、上皮间质转化、肿瘤耐药和肿瘤的侵袭转移等方面作一综述,为今后口腔鳞状细胞癌的诊断、治疗与科学研究提供新的方向与指导.     

姜黄素对结肠癌细胞化疗耐药的抑制作用研究

目的:探讨姜黄素对耐5氟尿嘧啶和奥沙利铂的结肠癌细胞的抑制作用.方法:大剂量冲击方法联合剂量梯度法建立结肠癌耐5氟尿嘧啶和奥沙利铂的细胞,Real-time PCR方法检测耐药细胞的干性基因表达情况,MTT方法检测姜黄素对耐药细胞的增殖抑制作用.结果:成功建立结肠癌耐5氟尿嘧啶和奥沙利铂细胞,其干细胞相关基因如CD13...     

Twist在宫颈鳞癌中的表达及其与临床生物学行为的关系

目的探讨转录因子Twist在人宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤样变(CIN)和正常宫颈上皮组织中的表达及临床病理意义。方法收集宫颈鳞癌标本(宫颈鳞癌组,n=61)、CINⅠ期标本(CINⅠ期组,n=22)、CINⅡ～Ⅲ期标本(CINⅡ～Ⅲ期组,n=44)以及正常宫颈组织标本(正常对照组,n=22),采用免疫组织化学方法检测宫颈组织中Twist蛋白的表达情况,并分析其与宫颈鳞癌临床生物学行为的关系。结果正常对照组、CINⅠ期组、CINⅡ～Ⅲ期组和宫颈鳞癌组的Twist蛋白阳性率呈逐渐上升趋势,分别为0、40.90%、68.18%和70.49%;CINⅠ期组、CINⅡ～Ⅲ期组和宫颈鳞癌组的Twist蛋白阳性率与正常对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01);在CINⅠ期组、CINⅡ～Ⅲ期组及宫颈鳞癌组间比较,Twist蛋白阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结合临床病理分析,在宫颈鳞癌组中,不同年龄、FIGO临床分期及有无淋巴血管间隙浸润的患者间比较,Twist蛋白阳性率差异均无统计学意义(P>0.05);Twist蛋白在低分化和未分化肿瘤中的阳性率(94.44%)明显高于高、中分化肿瘤(60.47%),差异有统...     

结肠癌HT29多细胞球的培养及其结构与生物学特性的观察

目的 建立结肠癌体外三维细胞培养模型HT29多细胞球,鉴定并检测其基本生物学特性.方法 琼脂糖抑制细胞贴壁、水平回旋振荡法培养HT29多细胞球;扫描电镜、HE染色、免疫组化检测多细胞球的组织病理学性质;透射电镜检测细胞超微结构;Cell counting kit-8检测药物敏感性.结果 成功培养由细胞相互黏附形成的多层细胞构成的结肠癌多细胞球模型;多细胞球内细胞接触广泛而紧密,可见大量细胞连接;多细胞球局部可见腺腔样结构,细胞角蛋白表达强弱与腺腔样结构有关;多细胞球药物敏感性显性降低,在500μg/L奥沙利铂处理48 h条件下,单层细胞生存分数为(9.3±2.0)%,而多细胞球则为(42.9±4.0)%,二者相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功建立了结肠癌多细胞球模型,此模型是研究体内无血管的微小结肠癌及结肠癌无血管区的较理想模型.     

结肠癌 KRAS 蛋白磷酸化与化疗抵抗的相关性研究

目的：结肠癌是最常见的恶性肿瘤,表皮生长因子受体是结肠癌治疗的靶点。然而耐药性一直是治疗结肠癌的难点。为了减少耐药事件的发生,针对个体化的基因检测将为解决耐药性提供新方案。方法：收集52例晚期结肠癌临床标本和资料,免疫染色检测了5-FU 治疗对抗和不对抗患者中,磷酸化 KRAS 表达情况。结果：在5-FU 治疗对抗组,磷酸化 KRAS 表达明显高于正常对照组和不对抗组,具有统计学差异。结论：磷酸化 KRAS 表达情况将为晚期结肠癌个体化化疗提供参考。     

参麦注射液协同奥沙利铂抗结肠肿瘤作用

[目的]通过观察参麦注射液联合奥沙利铂对结肠癌LOVO细胞裸鼠移植瘤的影响探究参麦注射液与奥沙利铂合用增效减毒的作用机制。[方法]制备裸鼠LOVO细胞移植瘤体内模型,设立生理盐水组(n=8)、奥沙利铂组(8 mg/kg,n=8)、联合治疗组(奥沙利铂8 mg/kg;参麦注射液10 mg/g,n=8)及参麦组(参麦注射液10 mg/g,n=8),通过腹腔注射途径给药,自给药之日起每隔1日记录肿瘤体积并绘制生长曲线。给药14 d后观察奥沙利铂对移植瘤体抑瘤率的影响:处死小鼠后留取血样;摘取脾组织称质量以计算脾指数;摘取肿瘤组织并应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)及血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的表达。[结果]参麦注射液与奥沙利铂联合用药抑瘤率为49%,联合用药组抑制肿瘤生长的作用显著且对荷瘤鼠血液及肝肾无明显毒性;联合用药组可显著降低b-FGF的表达,并降低肿瘤组织的微血管密度(MVD)。[结论]参麦注射液能减轻奥沙利铂对小鼠免疫器官与肝功能的影响,并增强奥沙利铂抗结肠恶性肿瘤的作用,其机制可能与抑制b-FGF介导的血管生成信号通路相关。     

葡萄糖转运蛋白1抑制剂在结肠癌细胞奥沙利铂耐药中的作用

目的 探讨葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)抑制剂在结肠癌细胞奥沙利铂耐药中的作用。方法 将HT29细胞分为L-OHP敏感组及耐药组,其中敏感组分为0μM、4μM、8μM、16μM、32μM、64μM L-OHP组,耐药组分为0μM、16μM、32μM、64μM L-OHP组。采用实时聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法测定耐药及敏感结肠癌细胞系葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)基因表达水平。用MTT法测定耐药及敏感结肠癌细胞系细胞活力。结果 低毒浓度的L-OHP处理可诱导结肠癌细胞系GLUT-1表达。与L-OHP敏感细胞系细胞相比,L-OHP耐药细胞系细胞GLUT-1表达上调。WZB117对GLUT1的抑制显著提高了L-OHP耐药细胞对药物的敏感性。结论 结肠癌细胞对L-OHP的耐药可能与GLUT1表达上调有关。GLUT1特异性抑制剂可以逆转结肠癌细胞对L-OHP的抵抗。GLUT1可能是未来抗癌药物发展的一个潜在目标。     

Twist基因对结肠癌细胞系侵袭转移能力影响的体外研究

目的 :探讨Twist基因在SW480、HCT116和HT29结肠癌细胞系上皮-间质转化（EMT）中的作用,明确其对恶性肿瘤侵袭转移能力的影响。方法:利用重组质粒pTracer-CMV/BSD-Twist 和pGenesil1.2-Twist-shRNA转染SW480、HT29和HCT116;流式细胞术检测转染率;Real time-PCR和Western blot检测Twist,E-cadherin和Vimentin转录及蛋白表达水平;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:转染高表达Twist质粒后,各结肠癌细胞系中Twist和Vimentin表达水平显著升高（P<0.05）,E-cadherin显著降低（P<0.05）;转染低表达Twist质粒后,SW480和HT29中各指标均无显著变化（P>0.05）,HCT116中Twist 和Vimentin表达水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin无显著变化（P>0.05）;Transwell实验表明抑制HCT116细胞系Twist表达后,其侵袭和迁移能力明显减弱（P<0.01）。结论:上调Twist表达可以促进EMT;抑制HCT116 中Twist表达能减弱结肠癌细胞的侵袭和转移能力。     

沉默孕烷X受体增强结肠癌LS174T细胞对奥沙利铂敏感性的影响

目的观察沉默孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达对结肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响,初步探讨其可能机制。方法构建PXR基因的siRNA质粒表达载体,转染结肠癌LS17T细胞,并建立稳定表达细胞,用RT-PCR和Western blot方法检测特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)和多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance-asso-ciate protein 3,MRP3)表达,MTT方法检测奥沙利铂化疗敏感性。结果成功建立PXR敲低细胞克隆PXRi 1#、PXRi 2#;在PXRi 1#和PXRi 2#细胞克隆中,MRP3 mRNA及蛋白表达明显下降,SP1表达也下降;与PXRi control相比,细胞克隆PXRi 1#、PXRi 2#奥沙利铂的IC50值均显著降低[(4.83±0.22)、(4.75±0.19)vs(9.44±0.37),P<0.05]。结论 PXR表达沉默可增强结肠癌LS174T细胞对奥沙利铂化疗敏感性,这可能与PXR沉默后,SP1、MRP3表达下调相关。     

胃泌素拮抗剂和活化T淋巴细胞联合应用对结肠癌细胞的杀伤作用

目的:探讨联合应用胃泌素拮抗剂和CD28/CD80单克隆抗体共刺激活化的健康人外周血T淋巴细胞(PBLs)在体外对结肠癌细胞株HT-29的杀伤作用.方法:分离与体外培养外周血PBLs,并用CD28/CD80共刺激活化PBLs;用含活化的PBLs和(或)胃泌素拮抗剂CI-988的RPMI 1640培养基培养HT-29细胞.MTT法检测2者对HT-29细胞的杀伤率,并用电镜观察效应细胞杀伤结肠癌细胞株HT-29的超微结构及HT-29细胞的凋亡情况.结果:胃泌素拮抗剂与活化PBLs合用,对结肠癌细胞株HT-29的杀伤率((95.81±1.99)%)大于单用胃泌素拮抗剂((66.36±1.31)%)(P＜0.05).电镜结果显示,效应细胞作用12 h肿瘤细胞就发生部分坏死,部分肿瘤细胞可见凋亡.结论:联合应用活化的PBLs和胃泌素拮抗剂CI-988可以提高对结肠癌细胞株HT-29 杀伤作用.活化的淋巴细胞杀伤结肠癌细胞可能是通过诱导肿瘤细胞坏死及凋亡2条途径来实现.     

氟尿嘧啶联合渥曼青霉素对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨氟尿嘧啶(Fu)联合渥曼青霉素(wortmannin)对人野生型及突变型p53结肠癌细胞株（HCT-116和SW-480）增殖和凋亡的影响,阐明p53对人结肠癌细胞增殖和凋亡的作用。方法：将处于对数生长期的 HCT-116和SW-480人结肠癌细胞株分为空白对照组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合渥曼青霉素组和氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及p53抑制剂（PFT-α）组,分别给予氟尿嘧啶、渥曼青霉素及PFT-α,采用噻唑盐比色法(MTT)、Annexin V-FITC流式细胞术（FCM）检测各组细胞12、24和48 h的存活率和细胞凋亡率。结果：与氟尿嘧啶组比较,渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组HCT-116和SW-480细胞存活率显著降低（P<0.05）,并随时间延长而逐渐降低;流式细胞术（FCM）检测,各组细胞凋亡率随时间的延长而增高（P<0.05）;与渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组比较,氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及PFT-α组HCT-116细胞存活率及细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）,而SW-480细胞48 h的存活率显著降低（P<0.05）,凋亡率显著增高（P<0.05）。结论：渥曼青霉素能显著增强氟尿嘧啶对人结肠癌细胞增殖的抑制作用并促进结肠癌细胞凋亡;抑制p53表达能进一步增强渥曼青霉素联合氟尿嘧啶对p53突变型SW-480细胞增殖的抑制作用并促进细胞凋亡。
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