EGCG活化线粒体途径诱导人胃癌细胞凋亡

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过活化线粒体途径诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的作用机制.方法 MTT法检测EGCG对BGC823细胞生长的影响;PI染色流式细胞术(FCM)分析测定细胞凋亡率;细胞线粒体跨膜电位(△(Ψ)m)用荧光染料罗丹明123染色FCM分析测定;Westem blot检测线粒体凋亡信号传导通路相关蛋白的表达.结果 EGCG对BGC823细胞生长有显著抑制作用,呈时间和剂量依赖性.EGCG以剂量依赖方式诱导BGC823细胞凋亡.EGCG(20μg/mL、40 μg/mL、80μg/mL)作用48 h后,BGC823细胞中△(Ψ)m降低,细胞色素c(Cyt c)释放增加,caspase-9蛋白表达增加,呈剂量依赖性.结论 EGCG通过活化线粒体信号传导途径诱导BGC823细胞凋亡.     

Survivin在威灵仙多糖诱导人胃癌BGC－823细胞凋亡中的基因表达

目的：研究威灵仙多糖诱导人胃癌BGC－823细胞凋亡的作用及其机制。方法：应用荧光显微镜观察不同浓度威灵仙多糖诱导BGC－823细胞凋亡的作用,应用RT－PCR技术检测Survivin表达量的变化。结果：威灵仙多糖具有诱导BGC－823细胞凋亡的作用,降低Survivin基因的表达。结论：威灵仙多糖促进BGC－823细胞凋亡,其机制可能与抑制Survivin基因表达有关。     

熊果酸抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导凋亡

目的:探讨熊果酸对人胃癌细胞BGC823的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法:运用MTT法检测细胞的增殖;Hoechest33258荧光染色观察DNA片段化;流式细胞术分析细胞周期和凋亡率;Westernblot检测BGC823细胞内细胞色素C(cytochromeC,cytC)、survivin、caspase3的表达。结果:熊果酸对BGC823细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈浓度和时间依赖性,作用24h的IC50为43.10μmol·L-1;在熊果酸作用下BGC823细胞呈凋亡征象;G1期细胞数减少,细胞主要阻滞在S期;同时cytC释放和caspase3酶原活化增加,survivin表达降低。结论:熊果酸能够在体外抑制人胃癌细胞BGC823增殖并诱导其凋亡,而促进cytC释放增加,下调survivin表达,继而引起caspase3的活化可能是其作用机制之一。     

细胞黏附肽抑制人胃癌细胞BGC823生长及诱导其凋亡作用

目的:　研究细胞黏附肽（RGD）对人胃癌BGC823细胞生长增殖的影响,探讨RGD诱导BGC823细胞凋亡的作用。方法:　将体外培养的 BGC823细胞分为12.5、25.0、50.0、100.0 mg·L^-1RGD处理组和对照组,RGD处理BGC823细胞24、48、和72 h后,MTT法检测不同浓度RGD作用不同时间对BGC823细胞生长增殖的抑制作用,分别利用光镜、透射电镜、免疫组织化学法、流式细胞术和凋亡细胞的DNA片段方法观察凋亡细胞的形态学变化以及定性、定量检测细胞凋亡。结果:　MTT检测,RGD各剂量组在作用24、48和72 h时, BGC823细胞的抑制率均高于对照组（P<0.01）,且随着RGD浓度增加BGC823细胞的抑制率增加;50.0 mg·L^-1　RGD处理BGC823细胞48 h后,光镜下显示,细胞体积变小,胞核深染,胞浆发红,出现很多的凋亡细胞;透射电镜显示,细胞表面微绒毛消失,异染色质趋边凝聚、聚集在核膜上,形成新月形帽状结构,甚至核膜消失,细胞核碎裂,可见凋亡小体。流式细胞术检测,BGC823细胞发生凋亡,且凋亡峰随着浓度的增加而增高;电泳结果显示,BGC823细胞内的DNA片段断裂为大小不等的小片段,呈现出很清晰的梯状降解条带;免疫组织化学染色结果显示,50.0 mg·L^-1RGD处理BGC823细胞48 h后 Survivin的表达量较对照组明显减少,经图像分析检测,实验组平均灰度值
高于对照组(P< 0.01）,提示实验组细胞发生凋亡。结论: RGD通过诱导BGC823细胞凋亡抑制肿瘤细胞的增殖,其RGD诱导BGC823细胞凋亡的作用机制可能通过线粒体引发这一途径。     

白头翁诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的研究中药白头翁对诱导胃癌BGC823细胞株凋亡过程的影响作用,探讨白头翁抗肿瘤的可能机制。方法以体外培养的胃癌BGC823细胞株为研究对象,MTI＇法检测不同浓度白头翁对BGC823细胞活性的影响,采用流式细胞术检测不同浓度白头翁作用胃癌BGC823细胞24h后细胞凋亡率。结果白头翁对BGC823细胞活性的抑制呈浓度依赖性,白头翁抑制BGC823细胞增殖可能由于其诱导胃癌细胞凋亡所致。结论白头翁能诱导胃癌BGC823细胞株发生细胞凋亡,有望成为胃癌的辅助治疗药物。     

蛋白酶体抑制剂DCI对胃癌细胞增殖的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂3,4-二氯异香豆素（DCI）对人胃癌细胞系BGC823体外增殖和凋亡的影响。方法：将DCI加入BGC823胃癌细胞,采用MTT法检测细胞的生长抑制效应,Annexin Ⅴ/PI法及电镜观察DCI对细胞凋亡的诱导作用。结果：DCI可明显抑制BGC823细胞体外增殖,随着DIC浓度的增加和处理时间的延长,细胞凋亡率增加;流式细胞术显示DCI可诱导胃癌细胞早期凋亡,细胞被阻滞在G1期;电镜观察发现,经DCI处理后的部分细胞具有凋亡细胞的典型形态特征。结论：DCI可抑制人胃癌BGC823细胞增殖并促进其凋亡。     

白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的观察白屈菜红碱(che lerythrine)对人胃癌BGC 823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法通过M TT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果M TT实验显示白屈菜红碱抑制BGC 823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期。结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC 823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性。     

斑蝥酸钠诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的实验研究

目的观察斑蝥酸钠体外对人胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法应用MTT法及流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠对人胃癌BGC823细胞的生长和凋亡的影响。结果不同剂量斑蝥酸钠作用24 h均可使人胃癌BGC823细胞生长明显抑制(P<0.01),并出现典型的凋亡峰,细胞增殖阻滞于G1期。结论斑蝥酸钠对人胃癌BGC823细胞生长有抑制作用,可诱导胃癌细胞凋亡。      

白藜芦醇诱导胃癌BGC⁃823细胞凋亡的分子机制

目的：探究白藜芦醇对人胃癌细胞BGC823的作用及其分子机制。方法：采用MTT法检测白藜芦醇对BGC823细胞增殖的影响;流式细胞术测定白藜芦醇对BGC823细胞凋亡、活性氧水平和线粒体膜电位的影响;Western blot法检测白藜芦醇对BGC823细胞cleaved caspase?3和cleaved caspase?9蛋白表达的影响。结果：MTT结果显示白藜芦醇对胃癌BGC823细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈时间和剂量依赖关系;31.25~500.00 μmol/L白藜芦醇作用24 h和48 h可诱导BGC823细胞凋亡,500 μmol/L作用24 h和48 h,细胞凋亡率分别达（40.42±2.64）%和（75.02±2.36）%。流式细胞术结果显示白藜芦醇作用24 h后可使BGC823细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）增多;与对照组相比,62.50~500.00 μmol/L白藜芦醇作用细胞24 h后,细胞出现了显著的线粒体膜电位降低（P < 0.05）;Western blot结果显示白藜芦醇以浓度依赖方式上调cleaved caspase?9和cleaved caspase?3的表达。结论：白藜芦醇可以显著诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡与ROS增多、线粒体膜电位降低和调节cleaved caspase?9和cleaved caspase?3的表达有关。     

环孢素A对人胃癌BGC823细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究环孢素A(CsA)对人胃癌BGC823细胞的生长增殖以及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度CsA处理24、48、72 h后对BGC823细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期、活性氧(ROS)含量及细胞线粒体膜电位(△Ψm)改变;Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.结果 CsA在5～20 μmol/L浓度范围内和24 ～ 72 h时间范围对BGC823细胞增殖有显著抑制作用,与药物剂量、作用时间呈现量效和时效的依赖性;FCM结果显示CsA浓度依耐性使细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比差异有统计学意义(F=33.45,P＜0.05,P＜0.01);细胞凋亡率随CsA作用浓度增加而增加;5～ 20μmol/L CsA浓度范围细胞内ROS含量显著增加(F =46.17,P＜0.01),细胞线粒体膜电位明显降低.结论 CsA对BGC823细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞生长周期、细胞内ROS含量增加以及线粒体膜电位下降相关.     

白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法 采用细胞形态学观察、Annxin-V和PI细胞染色和流式细胞仪检测，观察白藜芦醇(0．1、0．2、0．5 mmol／L)对脱落培养胃癌细胞BGC823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用。结果 倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生长，0．1mmol／L白藜芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团；流式细胞仪检测和Annxin-V和PI细胞染色表明0．5mmol／L白藜芦醇可分别阻滞脱落培养的BGc823、sGc7901和HGc27细胞于G0／G1、S、G2／M期，并可诱导这3株胃癌细胞发生脱落凋亡，其中自藜芦醇诱导HGC27细胞脱落凋亡比例达19．3％，远高于其他两株胃癌细胞。结论自藜芦醇可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。     

小半夏加茯苓醇提物对HepG2、BGC823线粒体凋亡途径的影响

目的 探讨小半夏加茯苓醇提物对人肝癌细胞HepG2和人胃腺癌细胞BGC823增殖抑制作用及线粒体凋亡途径的影响.方法 运用CCK-8法检测HepG2、BGC823的增殖抑制情况,计算生长抑制率及半数抑制浓度;运用流式细胞术和实时荧光定量PCR检测HepG2、BGC823的线粒体跨膜电位和bax、cjun基因的表达情况.结果 小半夏加茯苓醇提物对HepG2、BGC823均有显著的抑制作用(P＜0.01),其半数抑制浓度分别为(781.50±13.00) μg/mL和(560.05±10.06)μg/mL;与空白对照组比,试验组HepG2的荧光强度升高(P＜0.05),试验组BGC823的荧光强度显著升高(P＜0.01);HepG2、BGC823试验组的bax、cjun基因的相对表达量与空白对照组比较,均显著升高(P＜0.01).结论 小半夏加茯苓醇提物诱导HepG2、BGC823凋亡的机制可能与激活线粒体途径有关.     

鹅去氧胆酸诱导HCT-116细胞凋亡及其作用机制研究

目的 研究鹅去氧胆酸(CDCA)对结肠癌细胞HCT-116的影响,并探讨其作用机制.方法 采用体外细胞培养、四甲基偶氮唑蓝(MTT法)、苏木素-伊红染色(HssssE染色)、吉姆萨染色(Giemsa染色)、吖啶橙/溴化乙锭染色(AO/EB染色)和流式细胞术检测经CDCA诱导处理对结肠癌HCT-116细胞的存活率、形态学变化、细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡率的影响.结果 试验结果表明,CDCA作用于结肠癌细胞HCT-116细胞株48 h的半抑制浓度为0.304 mmol/L.0.800 mmol/L CDCA处理48 h后细胞抑制率达88.4％,且表现出细胞体积缩小、细胞核固缩和染色质凝聚等凋亡特征性的形态学改变.流式细胞仪检测结果显示,经CDCA诱导处理后,细胞株细胞周期被阻滞于G2/M期,线粒体膜电位降低,0.400 mmol/L CDCA处理48 h后HCT-116细胞凋亡率达54.5％.结论 CDCA对人结肠癌HCT116细胞株的抑制作用与其剂量有依赖性,并可能通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞HCT-116细胞株凋亡.     

靶向EGFR基因RNA干扰对胃癌细胞BGC823细胞增殖和凋亡的影响

目的利用R NA干扰技术下调表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,观察其对胃癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法将细胞分为3组,空白对照组、空载体组和实验组(转染EGFRshRNA组)。构建针对EGFR基因的s和R NA真核表达载体,转染入胃癌BGC823细胞中,运用R T-PCR和Western blot检测EGFR在mRNA和蛋白水平的变化;WST-1法检测细胞增殖的影响:Hoechst33258染色观察细胞核形态学变化。实验重复3次。结果成功构建表达质粒pGenSil-EGFR并转染BGC823细胞,shRNA下调EGFR的表达后,与空白对照组相比EGFR在mR NA和蛋白水平的表达均下降,抑制率分别为58.6%和75.2%。shR NA转染24、48、72 h,WST-1法检测胃癌细胞BGC823的增殖情况,与空白对照组相比,24 h后三组差异不明显(F=0.326,P>0.05),48 h及72 h后,细胞增殖明显下降(F=68.25及274.45,P<0.001),有统计学意义。EGFR shR NA作用BGC823细胞72 h后,经Hoechst33258染色发现,实验组细胞核染色质边集,出现凋亡小体。结论靶向EGFR基因RNA干扰能够阻抑胃癌细胞BGC823细胞的EGFR表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,EGFR基因有望成为胃癌基因治疗靶点。     

丁酸钠对胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制

目的:观察丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系BGC823的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率。结果:不同浓度NaB处理胃癌细胞BGC82324~96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度(P<0.01)及时间(P<0.05)依赖性;1.0,3.0,5.0mmol/L NaB处理72h后,BGC823细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:NaB对胃癌细胞系BGC823具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

DADS诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其与$mac和survivin表达的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导胃癌BGC823细胞凋亡及其机制。方法实验分DADS处理组和DADS未处理组．进行体外细胞培养,通过MTr法检测DADS对胃癌BGC823细胞生长的影响、通过流式细胞术检测细胞周期的分布、通过免疫组化检测smac和survivin蛋白的表达。结果MTT实验显示DADS作用于BGC823细胞后,细胞生长抑制率呈时间、浓度依赖性增高,流式细胞术显示DADS明显将细胞周期阻滞于G2/M期,且呈浓度、时间依赖性。免疫细胞化学显示处理组较未处理组snlae表达明显增加,而survivin蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论DADS可体外抑制人胃癌BGC823细胞增殖,使该细胞阻滞于G2／M期,其机制可能与上调smac及下调survivin的表达有关。     

下调CDH17基因对cisplatin耐药性人胃癌BGC823细胞裸鼠移植瘤模型的影响

目的 研究下调 CDH17 基因对cisplatin耐药的人胃癌 BGC823 细胞裸鼠移植瘤模型的影响,从体内实验研究治疗胃癌新的治疗手段.方法 以人胃癌BGC823细胞为研究材料,建立人胃癌BGC823细胞裸鼠移植瘤模型.同时,构建干扰质粒从基因和蛋白水平对CDH17进行干扰,成功构建慢病毒载体.将细胞分为三组,分别是WT对照组,siNC阴性对照组,siCDH17干扰组.通过 TUNEL方法和Annexin V/PI双染色法检测各组细胞的凋亡水平.结果 Real-time PCR和蛋白免疫印迹实验证实成功构建了CDH17的干扰表达载体.TUNEL检测实验表明下调CDH17基因可以促进对cisplatin耐药的人胃癌BGC823细胞裸鼠移植瘤模型细胞凋亡.Annexin V/PI双染色检测siCDH17干扰组细胞早期凋亡率远高于WT对照组和siNC阴性对照组的细胞.结论 下调CDH17基因可以促进cisplatin耐药性人胃癌BGC823细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖而达到治疗胃癌的目的.     

Src在胃癌腹腔转移多细胞团簇抗失巢凋亡中的作用

目的 探讨Src蛋白对体外三维培养的胃癌多细胞团簇(multicellular aggregates,MCAs)增殖及凋亡的影响.方法 体外三维培养人胃腺癌细胞BGC823和MKN45成MCAs,Western blot检测MCAs和单层贴壁培养的胃癌细胞中Src蛋白表达情况.siRNA法干扰Src表达,转染胃癌细胞后检测其对胃癌细胞BGC823和MKN45 MCAs形态学的影响.分别采用CCK-8和流式细胞术检测干扰Src表达对胃癌BGC823和MKN45 MCAs细胞活力和细胞凋亡率的影响.结果 利用BGC823和MKN5成功建立胃癌MCAs体外三维培养模型,Westem blot检测结果表明,与对照组比较,MCAs中Src的表达水平明显高于单层贴壁培养的胃癌细胞[BGC823:(0.615 ±0.068)vs(0.219 ±0.017),P＜0.01;MKN45:(0.657 ±0.087) vs (0.420 ±0.015),P＜0.05].干扰胃癌细胞BGC823和MKN45 Src表达,可以显著降低MCAs形成能力,并明显影响MCAs活力.流式细胞术检测结果表明,干扰Src表达可以显著诱导MCAs发生凋亡[BGC823:(9.456±0.209)vs(3.026±0.201),P＜0.01;MKN45:(9.356 ±0.416) vs(2.541 ±0.251),P＜0.05].结论 Src是胃癌MCAs抗失巢凋亡的关键分子,抑制Src表达可以显著抑制胃癌BGC823 MCAs和MKN45 MCAs形成,影响胃癌MCAs增殖,并诱导胃癌MCAs凋亡.     

人参皂甙肠道代谢物CompoundK对人胃癌细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

目的观察人参皂甙肠道代谢物CompoundK（CK）对人胃癌细胞BGC823细胞增殖、凋亡的影响。方法实验分组：对照组（PBS溶液）,实验组（浓度分别为2．5、5、7．5、10μmol／L）。噻唑蓝（MTT）比色法分别检测CK作用于细胞后其活力及生长抑制率;流式细胞术检测CK作用后细胞周期时相、凋亡率;免疫印迹法（Westernblot）检测凋亡相关蛋白的表达。结果5μmol／LCK作用细胞48h时,细胞生长周期阻滞于G2／M期,细胞凋亡率为（21．17±3．16）％;Westernblot检测显示Bcl-2,Bid蛋白表达随着药物浓度的增加而减少,Fas和Fas—L蛋白表达量却没有明显变化。结论CK是通过线粒体介导的凋亡通路途径来诱导人胃癌细胞发生凋亡的。     

不同pH值条件下多柔比星对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 探讨在不同pH值培养条件下多柔比星(doxorubicin,ADM)对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡能力的影响及初步机制研究。 方法 采用细胞活性测定试剂盒(CCK-8)法检测不同pH值培养条件下多柔比星对胃癌细胞BGC823增殖活性的影响;应用Annexin V/PI双染法,在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态,用流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测p-AKT、BCL-2和NF-κB基因在胃癌细胞中的表达。 结果 ①ADM对胃癌BGC823细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)值为5.277 μg/mL,考虑化疗药物毒性及后续实验,ADM剂量选择该细胞株IC₅₀值1/4的浓度(即1.319 μg/mL)用于进行后续实验;②随着pH值升高,ADM对BGC823细胞增殖活性的抑制作用增强,当pH达到7.4时,抑制增殖作用最明显;③随着pH值升高,ADM对BGC823细胞凋亡水平明显增加,当pH达到7.4时,促凋亡作用最明显,再提高pH浓度,促凋亡作用能力不明显;④不同pH(pH 6.8～7.6)环境下,ADM处理后,随着pH升高,BCL-2、NF-κB和p-AKT基因表达水平明显降低。 结论 升高细胞外pH值能明显提高ADM对BGC823细胞抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的能力,这种与pH值相关的ADM抗肿瘤效果可能是通过抑制AKT的磷酸化,阻止NF-κB、Bcl-2等抗凋亡基因表达来实现的。