氯化锂阻断大鼠海马注射溶血磷脂酸诱导的神经元Tau蛋白磷酸化

目的:探讨氯化锂(LiCl)对溶血磷脂酸(LPA)在大鼠体内引起海马神经细胞tau蛋白磷酸化水平的影响。方法:将54只SD大鼠分为LPA实验组9只,LiCl+LPA实验组27只(低、中、高量LiCl组各9只),实验对照组9只,对照组9只,采用腹腔注射LiCl,脑立体定位仪技术将LPA、PBS缓冲液注射入大鼠海马,各实验组大鼠分别于注射LPA后12,24,48 h后处死,对照组大鼠未做任何处理直接处死,采用免疫组化方法测定海马锥体细胞中ser202位点磷酸化tau蛋白(PS202-tau)的表达。结果:LiCl+LPA实验组Tau蛋白磷酸化的水平均低于相同时间点处死的LPA实验组(P<0.05),且LiCl浓度越高,Tau蛋白磷酸化的水平越低。结论:LiCl能抑制LPA引起的大鼠海马神经细胞的Tau蛋白磷酸化。     

氯化锂阻断大鼠海马注射溶血磷脂酸诱导的神经元Tau蛋白磷酸化

目的：探讨氯化锂（LiCl）对溶血磷脂酸（LPA）在大鼠体内引起海马神经细胞tau蛋白磷酸化水平的影响。方法：将54只SD大鼠分为LPA实验组9只,LiCl＋LPA实验组27只（低、中、高量LiCl组各9只）,实验对照组9只,对照组9只,采用腹腔注射LiCl,脑立体定位仪技术将LPA、PBS缓冲液注射入大鼠海马,各实验组大鼠分别于注射LPA后12,24,48 h后处死,对照组大鼠未做任何处理直接处死,采用免疫组化方法测定海马锥体细胞中ser202位点磷酸化tau蛋白（PS202-tau）的表达。结果：LiCl＋LPA实验组Tau蛋白磷酸化的水平均低于相同时间点处死的LPA实验组（P〈0.05）,且LiCl浓度越高,Tau蛋白磷酸化的水平越低。结论：LiCl能抑制LPA引起的大鼠海马神经细胞的Tau蛋白磷酸化。     

c-fos，bax和p53的反义寡聚核苷酸（ASOs）对溶血磷脂酸所致的培养小鼠大脑皮层神经元凋亡的影响

溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)在高浓度时(>50 μmol/L)显示出对培养大脑皮层神经元致凋亡特性.本研究旨在初步分析溶血磷脂酸致凋亡过程中对相关基因表达的依赖性,在研究中结合琼脂糖电泳,HO33342染色和TUNEL技术观察c-fos,bax和p53三种反义寡聚核苷酸对溶血磷脂酸致培养大脑皮层神经元致凋亡的影响.结果显示结合c-fos, bax和p53三种反义寡聚核苷酸均表现出对溶血磷脂酸致凋亡的神经保护作用.溶血磷脂酸的致凋亡过程为c-fos,bax和p53基因依赖性,不同于b淀粉样蛋白片段31-35的致凋亡特性.     

不同浓度丙泊酚对缺氧海马神经元凋亡的影响

目的:探讨不同浓度丙泊酚预处理对缺氧海马神经元凋亡的影响。方法:体外培养8～10天的海马神经元,随机分成四组:缺氧组;低浓度丙泊酚(5μg/ml);中浓度丙泊酚(10μg/ml);高浓度丙泊酚(20μg/ml)。测定MTT,流式细胞仪测定细胞凋亡比例。结果:与缺氧组比较,丙泊酚预处理能增加神经细胞的增殖力,减少神经元的凋亡比例。中浓度丙泊酚组此作用最强。结论:丙泊酚预处理可以增加神经细胞的增殖力,减少神经元的凋亡比例。该作用具有剂量相关性,适中浓度(10μg/ml)的丙泊酚此作用最强。     

刺五加多糖对H2O2诱导海马神经元凋亡及凋亡基因的影响

目的 观察刺五加多糖（Acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS）对H2O2诱导大鼠海马神经元凋亡及凋亡基因的影响,并探讨其可能机制。 方法 运用海马神经细胞原代培养技术,采用H2O2诱导建立细胞凋亡模型。观察细胞形态学变化; TUNEL法检测H2O2诱导大鼠海马神经元凋亡;免疫组化法检测细胞中P53蛋白表达。结果 形态学观察显示：与模型组比较,ASPS组细胞损伤程度明显减轻; TUNEL 法显示ASPS预处理组细胞阳性率明显高于模型组细胞;ASPS组P53表达量较低。结论 ASPS 能够提高海马神经细胞的抗凋亡能力并下调P53基因表达。     

尼氟灭酸对氯化钴诱导海马神经元凋亡的抑制作用

目的:探讨尼氟灭酸(NFA)对氯化钴(CoCl₂)诱导的海马神经元凋亡的抑制作用,阐明其可能的机制。方法:原代培养乳鼠海马细胞,并在倒置显微镜下观察海马细胞的形态变化。将海马神经元随机分为对照组(含1%血清培养液)、CoCl₂损伤组(含200 μmol·L^-1NFA等体积培养液)和不同浓度NFA组(在CoCl₂损伤组基础上加入20、40、80 μmol·L^-1 NFA)。MTT法检测各组海马神经元的存活率,流式细胞术分析海马神经元调亡率, ELISA法检测神经元培养液上清中相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和缺氧相关蛋白低氧诱导因子(HIF-1α)的表达水平。结果:海马神经元在培养7 d后形态规则,突触相互交织形成网络。MTT检测,与对照组比较,CoCl₂损伤组神经元存活率明显降低(P<0.01);与CoCl₂损伤组比较,20、40和80 μmol·L^-1NFA组神经元存活率升高(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,CoCl₂损伤组神经元早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率升高(P<0.05或P<0.01);与CoCl₂损伤组比较,20、40和80 μmol·L^-1NFA组神经元早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率下降 (P<0.05或P<0.01)。ELISA法检测,与对照组比较,CoCl₂损伤组神经元培养液上清中HIF-1α、caspase-3 和Bax表达水平升高(P<0.01);与CoCl₂损伤组比较,20和40 μmol·L^-1 NFA组神经元培养上清中HIF-1α、caspace-3 和Bax表达水平下降,Bcl-2表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:NFA可以降低CoCl₂对海马神经元的缺氧损伤作用,其机制与抑制HIF-1α的表达、下调Bax/Bcl-2及抑制神经元凋亡有关联。     

苦参素对脂多糖诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的 探讨苦参素(OMT)对脂多糖(LPS)诱导的海马神经元凋亡的影响及其可能机制。 方法 根据海马神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放率选择OMT的浓度进行实验分组。分为7组:正常对照组;脂多糖组;阿司匹林+脂多糖组;苦参素组;苦参素低剂量+脂多糖组;苦参素中剂量+脂多糖组;苦参素高剂量+脂多糖组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫荧光观察NF-κB/P65核易位情况;酶联免疫吸附(ELISA)技术测定海马神经元培养上清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。 结果 LPS组海马神经元凋亡率显著高于正常对照组(P<0.01),OMT预处理可以显著减少LPS刺激引起的海马神经元凋亡率(P<0.05)。LPS可以促进海马神经元NF-κB/P65由胞浆转位到胞核,提高海马神经元培养上清中TNF-α和IL-1β水平;而OMT预处理能显著减少LPS对海马神经元NF-κB/P65核易位作用及降低TNF-α和IL-1β的水平(P<0.05)。 结论 LPS诱导海马神经元NF-κB/P65核易位,导致炎症因子TNF-α和IL-1β的含量增加;OMT预处理可以抑制海马神经元NF-κB/P65核易位,减少TNF-α和IL-1β的分泌,从而抑制海马神经元的凋亡。      

TRPC离子通道参与硝普钠诱导海马神经元凋亡

目的 探讨TRPC离子通道在一氧化氮供体硝普钠(SNP)诱导原代培养海马神经元凋亡中的作用.方法 原代培养的海马神经元作为空白对照组,实验组分为3组,分别为原代培养神经元中加入SNP;SNP TRPC通道阻断剂组;SNP TRPC通道激活剂组.细胞处理24 h后MTT比色法检测各组细胞存活率,Hoechest33342荧光染色观察细胞凋亡.结果 SNP处理24h,神经元存活率为67.4％;与空白对照组有显著差异(P<0.05),SNP TRPC阻断剂组神经元存活率分别为102％、92.7％,与SNP组有显著差异(P<0.05);而SNP TRPC激活剂组神经元存活率为56.9％.与SNP组有统计学差异(P<0.05);单纯给予TRPC阻断剂或激动剂对神经元存活率无明显影响.荧光显微镜下观察.空白对照组神经元胞核均匀蓝染;SNP处理组胞核明显固缩、凝聚,可见凋亡小体;SNP TRPC激动剂组可见大量凋亡细胞;而SNP TRPC阻断剂组胞核均匀蓝染.结论 TRPC离子通道参与SNP诱导海马神经元凋亡.     

溶血磷脂酸对在体海马星形胶质细胞增殖的影响

目的 探讨溶血磷脂酸(LPA)对在体海马星形胶质细胞(AST)的影响.方法 在立体定向仪下向大鼠海马CA1区注射50μm LPA,在不同时间点(10 rnin、30 min、60 min、1d、3d、5d、7d、14d、21 d),采用免疫荧光标记法检测注射部位胶原纤维酸性蛋白(GFAP)含量并使用激光共聚焦扫描查看GFAP的分布情况.结果 LPA注射后,GFAP阳性细胞数显著增加,与PBS对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),并随时间延长,GFAP荧光强度逐渐增加,呈时间依赖性,至LPA注射后3周仍可见增加.结论 LPA可以促进大鼠海马AST增殖,时间至少可以持续3周.     

TRPC通道调节PUMA的表达参与NO诱导海马神经元凋亡的研究

目的探讨TRPC离子通道通过p53通路参与一氧化氮供体硝普钠(SNP)诱导的原代培养海马神经元凋亡。方法原代培养的海马神经元,经RT-PCR检测TRPC1-6的表达;给予SNP处理后,通过Real-time RT-PCR检测p53下游靶基因Bax、Apaf-1、PUMA和Survivin的表达;给予TRPC通道阻断剂和激活剂,检测其是否影响SNP诱导的p53下游靶基因表达。结果 TRPC在原代培养海马神经元上广泛表达。SNP处理神经元4、8、24h后,p53下游靶基因Bax、Apaf-1和Survivin表达无明显变化(P0.05)。而PUMA则在3个时间点分别增加至1.94、1.86和1.90倍,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。TRPC通道阻断剂2-APB,可降低SNP诱导的PUMA上调(1.91vs1.12)(P0.01)。结论 TRPC通道可以通过调节PUMA的表达参与SNP诱导的原代培养海马神经元凋亡。     

星状神经节阻滞对体外循环大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:观察星状神经节阻滞(SGB)对体外循环(CPB)下大鼠海马神经元凋亡的影响.方法:将40只SD大鼠随机分为4组,即假手术组(S组)、SGB组、CPB组、SGB+CPB组,于CPB后2h处死大鼠,取大脑组织和海马组织.苏木精—伊红(HE)染色检查海马神经元损伤情况;TUNEL法检测海马组织细胞凋亡;免疫组化法检测B...     

氯胺酮对离体海马神经元生存及凋亡的影响

目的:探究不同浓度氯胺酮对离体原代海马神经元生存活力和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:取原代培养7d的海马神经元随机分为6组,分别给予0μM、0.1μM、1μM、10μM、100μM、1 000μM不同浓度的氯胺酮干预。采用MTT法检测各组神经元的存活率,AnnexinV/PI双染色法检测凋亡率,Western blot分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达量的变化。结果:与对照组相比,1μM、10μM和100μM组神经元存活率升高,凋亡率降低,Bcl-2蛋白的表达量升高,Bax蛋白表达量下降;而1 000μM组神经元存活率降低,凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高。结论:氯胺酮对离体海马神经元的存活及凋亡的影响具有双向调节作用,低浓度的氯胺酮能够抑制神经元凋亡,提高细胞存活率;高浓度氯胺酮则促进神经元凋亡,降低存活率,可能是通过调节Bcl-2、Bax蛋白的表达起作用的。     

氯通道阻断剂对NMDA诱导培养海马神经元凋亡的保护作用

NMDA受体的激活在缺血性脑损伤神经元死亡中起重要作用。本研究利用NMDA诱导大鼠培养海马神经元凋亡．模拟建立缺血性脑损伤的细胞模型,观察了3种氯通道阻断剂对神经元凋亡的保护作用。离体培养12d的SD大鼠海马神经元．在NMDA处理前和处理后使用氯通道阻断剂,对神经元的存活率影响不同,仅NMDA处理前给药才有保护作用。SITS对NMDA诱导神经元凋亡的保护作用最强并有浓度依赖性．D1DS次之,NPPB没有明显的保护作用。结果表明．SITS和D1DS可阻断NMDA的毒性效应．作用机制可能与NMDA的效应和氯通道活动均被阻断有关。     

阿魏酸钠对一氧化碳供体硝普钠诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的 探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对NO供体硝普钠(SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡的影响.方法 采用MTT比色分析测细胞存活率,Hoechst 33258荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法 检测凋亡.结果 不同剂量SF(10～160 μmol/mL)预处理海马神经元6h可剂量依赖地对抗SNP引起的神经元凋亡,提高神经元的存活率;减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象;DNA凝胶电泳图谱未见典型的"梯子状"改变.结论 SF对NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡具有明显的保护作用.     

信号分子溶血磷脂酸及其对胰岛素分泌的调节作用

溶血磷脂酸(LPA)是具有广泛生物学效应的脂类信号分子,主要由细胞内的磷脂酶A2和细胞外的一种分泌性溶血磷脂酶D,Autotaxin分别水解磷脂酸和溶血磷脂酰胆碱生成.LPA通过特异的受体(LPAR1～LPAR6)发挥作用,并参与胰岛素分泌的调节.笔者综述了LPA信号分子及其对胰岛素分泌的调节作用的研究进展.     

溶血磷脂酸对卒中的预警作用

目的：探讨溶血磷脂酸（LPA）对卒中的预警作用。方法：比较短暂性脑缺血发作（TIA）组、急性脑梗死组、慢性脑供血不足组及正常体检组血浆中的LPA水平,分析血浆中的LPA水平与TIA组、急性脑梗死组、慢性脑供血不足组及正常体检组的临床特征关系。结果：TIA组及急性脑梗死组血浆中的LPA水平显著高于慢性脑供血不足组及正常体检组;TIA组、急性脑梗死组、慢性脑供血不足组及正常体检组中有房颤的患者LPA水平显著高于非房颤的患者;LPA水平升高的急性脑梗死患者更易发展为进展性脑梗死;急性脑梗死组中LPA水平影响患者出院时病情。结论：LPA预警TIA及急性脑梗死是切实可行的;房颤患者LPA是升高的;LPA可作为进展性脑梗死的预警因子;急性脑梗死预后与LPA水平有关。     

溶血磷脂酸对宫颈癌细胞形态学影响的体外研究

目的观察溶血磷脂酸对宫颈癌细胞株Siha生长及细胞形态的影响。方法①体外培养人宫颈癌细胞株Siha,以终浓度为1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L的溶血磷脂酸和终浓度为5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的多西环素分别干预,并设不加任何药物作为空白对照组。各组均干预72h后进行过碘酸雪夫反应(PAS)染色,用倒置显微镜观察各组宫颈癌细胞的生长及形态变化。②体外培养Siha细胞,用终浓度为10μmol/L的溶血磷脂酸和终浓度为40mg/L的多西环素干预,72h后固定过夜,电镜扫描。结果①溶血磷脂酸组Siha细胞随着溶血磷脂酸浓度升高,癌细胞数量明显增多,细胞异形性及可塑性增加;多西环素处理组随着多西环素浓度增加,细胞数量明显减少,细胞核固缩、碎裂,细胞破坏。②电镜下可见经溶血磷脂酸干预后Siha细胞表面出现大量分泌颗粒,细胞变形伸出细长突起相互连接。多西环素组干预者则细胞数量减少,形态轮廓不清晰,细胞皱缩变形,核碎裂,细胞溶解。结论溶血磷脂酸促进宫颈癌细胞株Siha生长增殖并改变Siha细胞形态,而多西环素则具有相反的抑制作用。     

BDNF对非心源性缺血性脑卒中大鼠海马神经元细胞凋亡的影响

目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对非心源性缺血性脑卒中大鼠海马神经元细胞凋亡的影响及作用机制。方法 45只大鼠留取10只为假手术组,35只建立非心源性缺血性脑卒中模型,建模成功31只,随机分为模型组10只、空载组10只、BDNF组11只。空载组、BDNF组分别向蛛网膜下腔注入含有pGenesiI-1-NC、pGenesiI-1-BDNF脂质体质粒复合物,模型组和假手术组注入0.9%氯化钠溶液。5 天后观察大鼠学习和记忆能力、海马组织病理形态变化及海马神经元细胞凋亡情况;检测海马组织中BDNF、酪氨酸受体激酶B(TrkB)、磷脂酰肌醇3激酶(PI₃K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)mRNA及蛋白表达、p-AKT/AKT表达变化。结果 HE染色显示模型组、空载组神经元排列紊乱,出现变性神经元;BDNF组神经元损伤轻微。与假手术组比较,模型组、空载组、BDNF组水迷宫实验逃避潜伏期、目标象限停留时间均缩短,穿越平台次数均减少,海马神经元凋亡率均升高,海马组织中BDNF、TrkB、PI₃K mRNA及蛋白相对表达量,p-AKT/AKT均降低(P＜0.05);与模型组、空载组比较,BDNF组水迷宫实验逃避潜伏期、目标象限停留时间延长,穿越平台次数增加,海马神经元凋亡率降低,海马组织中BDNF、TrkB、PI₃K mRNA及蛋白相对表达量、p-AKT/AKT升高(P＜0.05)。结论 上调BDNF表达可减少非心源性缺血性脑卒中大鼠海马神经元细胞凋亡,其机制可能是通过激活PI₃K/AKT信号通路发挥保护作用。     

BDNF/TrkB通路对硫化氢减轻同型半胱氨酸诱导大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探讨BDNF 受体酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)通路对硫化氢(H2S)减轻同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠海马神经元凋亡的影响。 方法 将雄性SD大鼠随机分为六组,分别为对照组、损伤组(Hcy,0.6 μmol)、损伤+保护组[Hcy(0.6 μmol)+NaHS(100 μmol/kg)]、对照+保护组[正常+NaHS(100 μmol/kg)]及抑制保护组[Hcy(0.6 μmol)+NaHS(100 μmol/kg)+BDNF/TrkB的特异性抑制剂K252a(1 μg/d)]、对照+抑制组(正常+K252a 1 μg/d),每组8只;Tunel染色法分析大鼠海马CA1区神经元的凋亡情况,蛋白质印迹法(Western blot)分析Caspase-3、Bcl-2在海马中的表达。 结果 与损伤组比较,损伤+保护组大鼠海马CA1区神经元着色细胞数减少,着色变浅,凋亡百分率明显降低(P<0.01),并且Caspase-3蛋白相对表达量明显降低,而Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.01);与损伤+保护组比较,抑制保护组大鼠海马CA1区神经细胞凋亡率明显增高(P<0.01),Caspase-3蛋白相对表达水平升高,而Bcl-2蛋白相对表达水平降低(P<0.01)。 结论 BDNF/TrkB通路参与硫化氢减轻同型半胱氨酸诱导的大鼠海马神经元凋亡。     

溶血磷脂酸对体外血脑屏障模型通透性的影响

目的 探讨溶血磷脂酸(LPA)对血脑屏障通透性影响及其可能机制.方法 将体外建立的血脑屏障模型随机分为空白对照组、LPA组和蛋白激酶C抑制剂(Ro31-8220)+LPA组.γ计数仪检测模型对125I-BSA的通过率;流式细胞仪检测PKC-α表达阳性的微血管内皮细胞(BMEC)比例;类鬼笔环肽染色观察BMEC的F-肌动蛋白变化;电子显微镜观察血脑屏障-紧密连接(BBB-TJ)改变;Western印迹法检测BBB-TJ内闭合蛋白5表达.结果 LPA组125I-BSA通过率(364 cmp±15cmp)和PKC-α阳性细胞率(77%±7%)均高于空白对照组和Ro31-8220+LPA组(184 cmp±10 cmp、223 cmp±9 cmp,42%±4%、52%±3%,均P＜0.01);闭合蛋白5表达则低于空白对照组和Ro31-8220+LPA组(0.353±0.04、1.00±0.03、0.574±0.07,均P＜0.01),同时LPA使BBB-TJ开放、F-肌动蛋白重组.结论 LPA可促使BBB-TJ开放,增加血脑屏障通透性,其机制可能与PKC-α信号途径激活进而促使闭合蛋白5表达下调以及F-肌动蛋白重组有关.