商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞ERK1/2-AP-1通路活化的影响

目的 观察商陆皂苷甲(EsA)含药血清对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖及其对IL-1β诱导rGMC的ERK1/2-AP-1通路活化的影响.方法 用不同剂量EsA(5、10、20、40 mg/kg)将SD大鼠灌胃后获取含药血清,并设对照组(0.5％羧甲基纤维素钠灌胃);用上述各组浓度的EsA含药血清处理rGMC,并设对照组血清组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组EsA含药血清对rGMC增殖的影响;将rGMC分为空白对照组、IL-1β单独作用组、IL-1ββ+ EsA双重作用组、IL-1β+U016双重作用组、IL-1β+U0126+EsA共同作用组,同步化后培养48 h,Western Blot法检测p-ERK1/2、AP-1的表达并成像分析.结果 EsA(5～10 mg/kg)含药血清抑制了细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01);ILqβ组促进了rGMC的p-ERK1/2、AP-1表达(P＜0.05),IL-1β+EsA组、IL-1β+ U0126组,IL-1β+U0126+EsA组作用rGMC后,其p-ERK1/2、AP-1表达均降低(P＜0.05).结论 EsA含药血清(5～10 mg/kg)显著抑制了rGMC的增殖;EsA通过下调p-ERK1/2、AP-1表达,抑制了IL-1β诱导的rGMC增殖,EsA作用于ERK1/2-AP-1通路是其抑制rGMC增殖的机制之一.     

商陆皂苷甲对白细胞介素1β诱导的肾小球系膜细胞增殖及Caspase-3的影响

目的观察商陆皂苷甲（EsA）对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（rGMC）增殖及Caspase-3表达的影响,探讨EsA治疗狼疮性肾炎等系膜细胞增殖性肾小球肾炎的可能机制。方法MTT法检测不同浓度的EsA对rGMC增殖的影响;蛋白质印迹法检测Caspase-3的表达,并成像分析。结果观察剂量中EsA对rGMC没有明显的细胞毒作用,EsA作用rGMC48h后抑制细胞增殖的有效浓度为2．5～5．0mg／L（P〈0.05或P〈0．01）;IL-1β促进了rGMC的Caspase-3的表达（P〈0．01）,与IL-1β组比较,EsA＋IL-1β组对rGMCC的Caspase-3的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在体外EsA（2．5～5mg／L）可显著抑制rGMC的增殖,GMC可能是EsA的作用靶细胞;但其促凋亡作用不明显。     

MAPK 通路蛋白在百草枯中毒致急性肺损伤大鼠肺组织中的表达及意义

目的：观察MAPK通路蛋白在百草枯中毒致急性肺损伤大鼠肺组织中的表达并探讨其意义。方法36只SD雄性大鼠随机平均分成两组：PQ组予腹腔注射20 mg／kg百草枯,对照组予腹腔注射生理盐水1 mL。在注射百草枯后8 h、1 d和3 d时,收集血清和肺组织标本。分别使用生化法检测血清中超氧化物歧化酶（ SOD）活性和丙二醛（ MDA）含量,采用ELISA方法检测血清中白细胞介素－1β（ IL－1β）和肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）含量,利用血气分析仪检测大鼠动脉血氧分压（ PaO2）,行组织切片HE染色进行肺损伤评分,利用Western blot方法检测肺组织中p－p38MAPK、p－JNK、p－ERK1／2蛋白表达水平。结果百草枯中毒后,与对照组比较,PQ组大鼠血清中SOD活性降低（P＜0.05）,MDA、IL－1β和TNF－α含量明显增加（P＜0.05）;PaO2逐渐下降（P＜0.05）,肺损伤评分时间依赖性增加（P＜0.05）;肺组织中p－p38MAPK、p－JNK、p－ERK1／2表达量均明显上调（P＜0.05）。结论百草枯产生氧自由基,可以激活包括 p38MAPK、JNK、ERK1／2在内的MAPK通路,导致急性肺损伤发生发展。     

商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞增殖及CDK2、P27的影响

目的观察商陆皂苷甲(EsA)对白细胞介素(IL)-1β诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖和细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK2)及其抑制蛋白(P27)表达的影响。方法噻唑蓝(MTT)法检测EsA对rGMC增殖与毒性的影响;碘化丙啶(PI)染色法,流式细胞仪检测细胞周期;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测CDK2、P27的表达。结果观察剂量中EsA对rG-MC没有细胞毒作用,EsA(2.5～5.0mg/L)作用rGMC 48h后明显抑制其增殖;IL-1β减少了rGMC的G1期细胞数并增加了S期的细胞数,促进了rGMC的CDK2的表达,抑制了P27的表达;EsA增加了IL-1β诱导的rGMC的G1期的细胞数并减少了S期的细胞数,抑制了IL-1β诱导的rGMC的CDK2的表达,并促进了P27的表达。结论 rGMC可能是EsA的作用靶细胞,EsA通过抑制CDK2及激活P27的表达抑制了IL-1β诱导的rGMC的增殖,阻滞了细胞周期的进程。     

抵抗素调节人冠状动脉内皮细胞MMP-9表达机制探讨

目的：探讨抵抗素调节冠状动脉内皮细胞中基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMP）－9的表达及其机制。方法：用含1%胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）的DMEM/F12培养基培养人冠状动脉内皮细胞（human coronary artery endothelial cells,HCAECs）16 h（血清饥饿培养）,之后随机分为6组：（1）空白对照（Con）组：无抵抗素干预;（2）Res20组：抵抗素20 ng/ml干预;（3）Res40组：抵抗素40 ng/ml干预;（4）Res100组：抵抗素100 ng/ml干预;（5）Res40+U0126组：细胞中加入细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）抑制剂U0126（20 mmol/L）预处理1 h,再加入抵抗素40 ng/ml干预;（6）U0126组：细胞中仅加入ERK抑制剂U0126（20 mmol/L）,细胞各组干预24 h后,用RT-PCR法检测MMP-9和蛋白酶抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP）－1 mRNA表达,ELISA法检测MMP-9和TIMP-1蛋白水平,Western blot检测HCAECs p-ERK1/2及ERK1/2的蛋白表达。结果：3种浓度抵抗素干预HCAECs 24 h后,MMP-9 mRNA与蛋白水平均较空白组明显升高（P＜0.05）;TIMP-1 mRNA与蛋白水平均较空白组明显降低（P＜0.05）。40 ng/ml抵抗素干预组加入ERK抑制剂U0126后,MMP-9 mRNA与蛋白水平明显下降（P＜0.05）,TIMP-1 mRNA与蛋白无明显变化。与Con组、U0126组及Res40+U0126组相比,Res40组p-ERK1/2蛋白表达明显增高（P＜0.05）。结论：抵抗素可诱导HCAECs MMP-9的生成,可能通过下调TIMP-1的表达及激活ERK通路参与这一过程。     

PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究

目的：研究血小板源性生长因子（PDGF）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型,原代分离培养ASMC,设未干预组（A组）、ERK阻断剂组（B组）、PDGF组（C组）和PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。A组不加干预;B组又分为B1、B2、B3、B4组,分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126;C组又分为C1、C2、C3、C4组,分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF- BB;D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF- BB。以RT- PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达,免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT- PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组（均P＜0.01）,U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化,C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（均P＜0.01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF- BB存在明显的浓度依赖关系,D组与A组比较无统计学差异（P＞0.05）。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）;B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组,同时C4组显著高于B4组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程,PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。     

乳腺癌根治术患者术后不同镇痛方式对细胞免疫功能及炎症介质的影响

目的：观察乳腺癌根治术患者围术期应用地佐辛或芬太尼镇痛对术后细胞免疫及炎症介质的影响。方法将24例择期行乳腺癌根治术患者随机分为D组和F组,每组12例。采用气管插管全身麻醉,D组麻醉诱导时静脉注射地佐辛0.2 mg／kg,术毕前20 min静脉注射地佐辛2.5 mg;F组麻醉诱导时静脉注射芬太尼3μg／kg,术毕前20 min静脉注射芬太尼50μg。术后48 h采用地佐辛40 mg（ D组）或芬太尼0.8 mg（ F组）行静脉自控镇痛（ PCIA）。两组患者术后1、4、8、12、24、48 h记录VAS评分,分别于麻醉前（ T0）、术毕（ T1）、术后1 d （T2）、术后3 d（T3）、术后7 d（T4）采集静脉血,采用流式细胞仪检测外周T淋巴细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋水平以及CD4＋／CD8＋比值）和NK细胞水平;采用酶联免疫吸附法（ ELISA）检测血清IL－2和IL－10浓度。结果术后4、8、12、24 h VAS评分D组低于F组（P＜0.05）,与T0相比,两组T1、T2时点CD3＋、CD4＋水平以及CD4＋／CD8＋比值和NK细胞水平明显降低（ P＜0.05）;组间比较,D组T1、T2时点CD3＋、CD4＋水平以及CD4＋／CD8＋比值和NK细胞水平明显高于F组（P＜0.05）。与T0比较,F组T1、T2时血清IL－2浓度降低,T2时血清IL－10浓度升高（P＜0.05）,D组T2时血清IL－2浓度降低（P＜0.05）;组间比较,D组T1、T2时血清IL－2浓度明显高于F组（P＜0.05）,D组T2时血清IL－10浓度明显低于F组（P＜0.05）。结论围术期地佐辛应用乳腺癌根治术患者镇痛可以改善术后细胞免疫功能。     

熊果酸治疗急性胰腺炎大鼠的效果及作用机制

【摘要】目的 探讨熊果酸(UA)对急性胰腺炎(AP)大鼠的治疗作用以及可能的作用机制。方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、急性胰腺炎组（AP组）和熊果酸组（UA组）,每组10只。除假手术组外,其余两组采用逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠（1 mL/ kg）诱导大鼠AP模型,假手术组注射等量生理盐水,造模30 min后,UA组给予熊果酸150 mg/kg灌胃,其余两组灌等体积蒸馏水,灌胃12 h后处死大鼠,收集胰腺和血清。酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中白介素1β（IL 1β）、白介素6（IL 6）、肿瘤坏死因子α（TNF α）含量,全自动生化分析仪测定血清中淀粉酶含量,HE和TUNEL染色观察胰腺病理和凋亡情况,蛋白免疫印迹实验检测胰腺Bcl 2、Bax、cleaved caspase3、p38MAPK、p p38MAPK表达情况,实时荧光定量PCR检测p38MAPK mRNA表达水平。结果 与AP组相比,UA组血清淀粉酶、TNF α、IL 1β、IL 6水平显著下降（P＜001）,胰腺病理情况好转,凋亡细胞减少,Bax/Bcl 2、p p38MAPK/ p38MAPK比值和cleaved caspase3表达量显著降低（P＜001）。结论 熊果酸能降低血清炎性因子和淀粉酶水平,改善胰腺病理损伤和凋亡,其作用机制可能与抑制p38MAPK活性有关。     

从诱导树突状细胞成熟角度探讨枸杞多糖联合CXC趋化因子配体10抗癌作用机制

【目的】检测外周血诱导树突状细胞（dendritic cells, DC）功能成熟的关键性细胞因子水平变化以及肿瘤组织S－100蛋白表达情况,探讨枸杞多糖（LBP）单用或联合CXC趋化因子配体10（CXCL10）对DC功能成熟潜在的影响,进一步揭示LBP抗实验性肝癌的作用机制。【方法】建立H22荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、 LBP （50 mg／kg灌胃）组、 LBP ＋CXCL10（50 mg／kg灌胃＋15μg／kg右胁皮下注射）组、 CXCL10（15μg／kg右胁皮下注射）组、5-氟尿嘧啶（5－FU,12 mg／kg腹腔注射）组,每组12只。每天给药1次,连续2周后眼球取血,分离小鼠肿瘤、脾脏、胸腺,计算肿瘤抑制率、脾脏指数及胸腺指数。采用荧光定量PCR技术检测外周血白细胞介素－12（IL-12）及肿瘤坏死因子－α（TNF－α） mRNA表达,免疫组织化学法检测S－100蛋白在肿瘤间质浸润DC的表达。【结果】与模型组比较, LBP组及LBP＋CXCL10组对肿瘤生长具有明显的抑制作用,肿瘤抑制率分别达到55．90％、50．91％,且能显著提高外周血IL-12、 TNF－αmRNA表达, IL－12表达分别上调了2．94、3．39倍, TNF－α分别上调1．55、4．74倍,差异均有统计学意义（P＜0．05或P＜0．01）;免疫组织化学检查结果显示LBP组及LBP＋CXCL10组S－100＋DC数量显著高于模型组（P＜0．05）。【结论】 LBP及LBP＋CXCL10具明显的抗实验性肝癌作用,其作用机制与诱导DC功能成熟的关键性细胞因子IL－12、 TNF－α分泌,增加肿瘤微环境的DC数量有关。     

TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响研究

目的：探究TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响,进一步揭示哮喘的发病机制。方法建立大鼠慢性哮喘模型,原代分离培养大鼠ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、TGF-β1组和TGF-β1＋PD-98059组,以CCK-8法检测细胞增殖,Western blot法检测caveolin-1和p- ERK1/2蛋白表达。结果 TGF-β1组细胞增殖较正常组和哮喘组明显（均P＜0.01）;TGF-β1＋PD-98059组细胞增殖较TGF-β1组减低,但较哮喘组仍明显（均P＜0.05）。TGF-β1组p- ERK1/2表达量较正常组和哮喘组增加;TGF-β1＋PD-98059组p- ERK1/2表达量较TGF-β1组减少,但较哮喘组表达量仍有所增加（均P＜0.05）。TGF-β1组caveolin-1表达量较正常组和哮喘组减少（均P＜0.05）;TGF-β1＋PD-98059组caveolin-1表达量较TGF-β1组增加（P＜0.05）。结论 TGF-β1可以下调caveolin-1蛋白的表达量,激活ERK通路,从而促进哮喘大鼠ASMC的增殖,引起气道重塑。     

Th17细胞及其相关因子 IL －17和 IL －6在再生障碍性贫血患者中的表达及意义

目的：观察Th17细胞及其相关因子白细胞介素（ IL）－17、IL－6在再生障碍性贫血（ AA）患者中的表达,并探讨其临床意义。方法50例AA患者分为急性再生障碍性贫血（AAA）组（n＝24）和慢性再生障碍性贫血（CAA）组（n＝26）,选择同期25例门诊健康体检者作为对照组。采用流式细胞术检测各组PBMCs Th17／CD4＋细胞比例,采用ELISA法检测各组血清IL－17和IL－6表达水平,并分析血清IL－17、IL－6表达水平与Th17细胞的相关性。结果 AAA组及CAA组患者PBMCs的Th17／CD4＋细胞比例均明显高于对照组（P＜0.05）,而AAA组与CAA组Th17／CD4＋细胞比例比较差异无统计学意义（P＞0.05）;AAA组及CAA组患者血清IL－17和IL－6表达水平均明显高于对照组（P＜0.05）,而AAA组与CAA组血清IL－17和IL－6表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）;AA患者PBMCs Th17细胞比例与血清IL－17、IL－6表达水平呈正相关（r1＝0.714,r2＝0.675,P＜0.05）。结论 Th17细胞及其相关因子IL－17和IL－6在CAA和AAA免疫发病机制中均占有重要地位。     

L-瓜氨酸预处理对大鼠缺血／再灌注损伤肾的功能及蛋白表达影响

目的研究L-瓜氨酸对大鼠缺血／再灌注（ischemia—reperfusion,I／R）损伤肾组织的保护作用机制。方法18只雄性SD大鼠分为假手术组（Sham组）、模型组（I／R组）和L-瓜氨酸组（L—Cit组）,每组6只。采用夹闭双肾动脉45min后再灌注制备肾L／R损伤模型。L—Cit组于造模前连续7天灌胃给予L-瓜氨酸600mg／kg。于再灌注3h活体摘取双肾,并行腹主动脉穿刺抽血2ml。检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮,Western blot检测肾组织ERK1／2、p38MAPK和Akt的磷酸化表达。结果与Sham组相比,I／R组大鼠血清肌酐、尿素氮水平升高,肾组织ERK1／2和Akt的磷酸化表达明显降低,p38MAPK的磷酸化表达明显增高;L—Cit组与I／R组相比,ERK1／2和Akt的磷酸化表达明显增高,而p38MAPK的磷酸化表达明显降低,血清尿素氮、肌酐水平明显降低。结论L-瓜氨酸可能通过激活ERK1／2和Akt信号通路、抑制p38MAPK信号来保护大鼠肾缺血／再灌注损伤。     

羟氯喹促进ERK1/2磷酸化减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的: 探讨羟氯喹（hydroxychloroquine,HCQ）对大鼠脑缺血再灌注损伤（ischemia/reperfusion,I/R）的影响。方法: 采用随机数字表法将健康雄性SD大鼠72只分为6组：对照组、缺血再灌注组（I/R组）、低剂量羟氯喹预处理组（HCQ250组）、中剂量羟氯喹预处理组（HCQ500组）、高剂量羟氯喹预处理组（HCQ1000组）和细胞外信号调节激酶1/2（extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2）抑制剂U0126预处理组（U0126组）,每组均为12只。采用线栓法行短暂性大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）建立大鼠缺血性脑卒中模型。I/R组行MCAO后2 h再灌注,HCQ250组、HCQ500组、HCQ1000组和U0126组分别在MCAO前72 h、48 h和24 h经侧脑室注射8 μL 250、500、1 000和1 000 μmol/L HCQ,其中U0126组在每次注射1 000 μmol/L HCQ后12 h再经侧脑室注射8 μL 1 000 μmol/L U0126;对照组不栓塞大脑中动脉,其余处理同I/R组。再灌注6 h时将每组一半大鼠断头取脑,采用蛋白质印迹法检测缺血半暗带脑组织ERK1/2、p ERK1/2、抗凋亡因子Bcl 2和促凋亡因子cleaved caspase 3、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）、磷酸化CREB（p CREB）、蛋白激酶B（Akt）和磷酸化Akt（p Akt）的表达;再灌注24 h时采用神经功能缺陷评分量表检测剩余大鼠的神经功能,再断头取脑后采用2% TTC染色测量脑梗死体积。结果： 与对照组比较,其余5组神经功能缺陷评分显著降低,脑梗死体积明显增大,p ERK1/2、cleaved caspase 3、p CREB和p Akt表达显著增高,Bcl 2表达降明显低（P均<0.05）;与I/R组比较,HCQ250组、HCQ500组、HCQ1000组神经功能缺陷评分明显升高,脑梗死体积显著减少,p ERK1/2、Bcl 2、p CREB、p Akt表达明显增高,cleaved caspase 3表达降低明显（P均<0.05）;与HCQ1000组比较,U0126组神经功能缺陷评分明显降低,脑梗死体积显著增大,p ERK1/2、Bcl 2、p CREB和p Akt表达降低显著,cleaved caspase 3表达明显增高（P均<0.05）。 结论： 羟氯喹可能通过CREB/Akt信号通路促进p ERK1/2表达,参与大鼠脑缺血再灌注损伤时的内源性保护机制。     

清热除痹汤含药血清对尿酸钠结晶刺激下THP－1细胞活性及分泌白细胞介素－1β的影响

目的探讨清热除痹汤含药血清对尿酸钠结晶刺激下THP－1细胞的增殖活性及分泌白细胞介素－1β（IL－1β）功能的影响。方法体外培养人单核细胞THP－1细胞,分为5组,空白血清组,模型对照组,中药血清高、中、低浓度组（浓度分别为体积分数20％、10％、5％）,除空白血清组外,其他各组均加入浓度为500 mg／L的尿酸钠结晶,于培养0、12、24、48 h时间点采用四甲基偶氮唑盐比色（MTS）法检测细胞的增殖活性,培养48 h后采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞上清液IL－1β含量。结果各组THP－1细胞活性均随着时间的延长而增加,模型对照组各时间点细胞活性均较空白血清组显著增高（P＜0．05或P＜0．01）,48 h模型对照组的IL－1β水平较空白血清组显著增高（P＜0．01）。12、24 h中药血清各浓度组,48 h中药血清高、中浓度组细胞活性均较模型对照组显著下降（P＜0．05或P＜0．01）,48 h中药血清各浓度组IL－1β水平均较模型对照组显著下降（P＜0．01）。结论清热除痹汤含药血清对尿酸钠结晶刺激下THP－1细胞的活性有抑制作用,机制与其可抑制IL－1分泌有关。     

雌二醇通过ERβ调控ERK磷酸化影响细胞增殖和凋亡

目的 探究雌二醇（E2）结合其重组人雌激素受体β（ESR2）对C28I2细胞增殖和凋亡的效应。方法 PCR扩增ESR2序列并构建腺病毒重组质粒pAd-ESR2,在HEK293细胞中包装重组腺病毒Ad-ESR2。用Ad-ESR2和ESR2-siRNA处理人正常软骨细胞C28I2,分别设置对照组（C28I2+DMSO）、E2组（C28I2+E2）、Ad-ESR2组（C28I2+DMSO+ Ad-ESR2）、E2+Ad-GFP组（C28I2+ E2+Ad-GFP）、E2+Ad-ESR2组（C28I2+E2+Ad-ESR2）、E2+sicontrol组（C28I2转染sicontrol+E2）、E2+ESR2-si1组（C28I2转染ESR2-si1+E2）、E2+ESR2-si3组（C28I2转染ESR2-si3+E2）。免疫印迹测定ER Stress和细胞凋亡相关蛋白表达,qRT-PCR检测增殖相关标志基因的表达,借助EdU试剂盒和流式细胞术测定细胞增殖和凋亡情况。使用ERK通路抑制剂U0126分别设定E2 组、E2+U0126组（C28I2+E2+U0126）、E2+Ad-ESR2组、E2+Ad-ESR2+U0126组（C28I2+E2+Ad-ESR2+U0126）。通过免疫印迹实验探究C28I2细胞中E2通过ERβ调控ERK信号通路影响ER stress和凋亡。结果 成功构建过表达腺病毒Ad-ESR2和靶向ESR2的siRNA;过表达Ad-ESR2能够促进E2处理后IRE1α[1.20±0.06 vs 0.95±0.05,P<0.05]、PERK[1.29±0.04 vs 1.03±0.02,P< 0.05]和XBP1s[1.17±0.03 vs 0.82±0.02,P<0.05]的表达,促进凋亡Cleaved Caspase12（P<0.05）、抑制增殖相关标志基因PCNA（P<0.05）、CyclinB1（P<0.05）、CyclinD1（P<0.05）的表达,且ERK磷酸化激活降低（P<0.05）;转染ESR2-siRNA后,细胞的内质网应激相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达降低,与细胞增殖相关的基因被上调,且细胞内pERK/ERK比值相对增加。经特异性ERK通路抑制剂U0126处理后,雌二醇结合ERβ促进的内质网应激蛋白及细胞凋亡蛋白的表达被拮抗。结论 雌二醇靶向ERβ通过激活ERK通路磷酸化调控内质网应激及凋亡,进而抑制软骨细胞增殖。     

跳台实验训练后 FMR1基因敲除小鼠学习记忆与细胞外信号调节激酶1／2的关系

目的：探讨跳台实验训练后FMR1基因敲除（ KO）小鼠学习记忆与海马CA1、CA3区细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）信号通路的关系。方法将20只4周龄FVB近交系KO及20只野生型（WT）小鼠分为KO组和WT组。利用跳台实验观察各组小鼠被动学习记忆能力,并通过Western blot检测海马CA1、CA3区ERK1／2及p－ERK1／2的表达。结果跳台实验第1天KO组的潜伏期较WT组短,错误次数较WT组多。跳台实验第2天KO组的潜伏期较WT组短,错误次数较WT组多。 Western blot结果显示跳台后KO组海马组织CA1区p－ERK1／2表达增加,与WT组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）;跳台后KO组海马CA3区p－ERK1／2表达虽有增加,但与WT组比较,差异无统计学意义;跳台后KO组海马组织CA1及CA3区ERK1／2的表达与WT组比较差异无统计学意义。跳台后KO组和WT组ERK1／2及p－ERK1／2的表达与跳台前比较差异无统计学意义。结论 FMR1基因敲除小鼠学习记忆障碍与海马p －ERK1／2的异常表达有关。     

阻滞ERK1/2通路对大鼠弥漫性脑损伤组织c-fos基因表达的影响

目的 研究大鼠弥漫性脑损伤（DBI）后细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）通路特异性阻断剂U0126对c-fos基因表达的影响。方法 按Marmarou方法制作大鼠DBI模型，尾静脉注射U0126。Western blot法检测脑组织磷酸化ERK1／2（pERK1／2）的表达，RT-PCR法检测c-fos mRNA的表达，免疫组织化学法检测pERK1／2和c-fos蛋白在损伤脑组织中的分布。结果 DBI后脑组织中pERK1／2表达增高，5min达峰值，并持续高水平表达至72h。c-fos与pERK1／2变化趋势相似，但峰值出现较晚。注射U0126后，pERK1／2表达受抑制，c-fos mRNA表达减少（P〈0．05），c-fos阳性细胞平均灰度值升高（P〈0．05）。结论大鼠DBI后ERK1／2通路被过度和持久激活，阻滞ERK1／2活化可以下调c-fos基因的表达。     

骨碎补总黄酮在肿瘤坏死因子α介导下对成骨细胞凋亡的影响

目的：通过观察骨碎补总黄酮在肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）介导下对成骨细胞增殖和凋亡的影响,探讨其防治类风湿关节炎骨质疏松症的作用机制。方法：20只雌性Wistar大鼠,随机分为空白对照组（蒸馏水灌胃）和骨碎补总黄酮组（强骨胶囊灌胃）制备血清。骨碎补总黄酮组大鼠每日强骨胶囊给药剂量为75mg,每日给药2次,2mL/次,连续给药3d,末次给药1h后,心脏采血收集血清备用。细胞实验分为4组：空白血清组、骨碎补总黄酮含药血清组、空白血清＋TNF-α组和骨碎补总黄酮含药血清＋TNF-α组。应用噻唑基四唑法测定成骨细胞的增殖,流式细胞仪测定成骨细胞的凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应法测定Bcl-2和Bax mRNA表达量。结果：与对照血清相比,骨碎补总黄酮含药血清在TNF-α介导下能够促进成骨细胞增殖（P〈0.05）;减少成骨细胞的凋亡（P〈0.05）,增加Bcl-2/Bax比值。结论：骨碎补总黄酮含药血清在TNF-α介导的炎症环境下能够促进成骨细胞增殖,减少成骨细胞凋亡,可能是通过调节Bcl-2/Bax mRNA比例来实现的。     

慢性压迫损伤性神经病理性疼痛大鼠模型中脊髓背角ERK、CREB、BDNF表达的变化

目的通过建立慢性神经结扎性损伤（CCI）大鼠模型,揭示在神经病理性疼痛发生、发展过程中细胞外调节蛋白激酶（ERK）、环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）、脑源性神经营养因子（BDNF）表达的变化。方法将21只大鼠随机双盲分为模型组、假手术组、U0126组,每组各7只,模型组及U0126组建立CCI模型,假手术组暴露坐骨神经不做结扎,3组均进行鞘内置管,U0126组鞘内注射阻断剂U012610滋g/次,连续3d;模型组造模成功后、假手术组术后予0.9%氯化钠溶液0.12ml/kg灌胃至术后14d。对各组大鼠分别于术前、术后1、7、14d进行热痛觉过敏行为测试和机械刺激测试,采用Westernblot法检测模型大鼠脊髓背角ERK、CREB、BDNF的表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠术后热板及机械缩足反射阈值明显降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。CCI导致大鼠脊髓背角内胞浆与胞核内ERK、CREB、BDNF水平均增加,差异均有统计学意义（均P＜0.01）。ERK阻滞剂U0126组能明显升高大鼠术后热板及机械痛敏阈值（P＜0.05）,U0126组导致大鼠脊髓背角内胞质与胞核内CREB、BDNF水平均明显降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论CCI模型导致痛觉过敏,U0126可以减轻CCI大鼠的疼痛。ERK-CREB磷酸化的通路参与BDNF对于背根神经节的神经元的保护和修复过程。     

TGF －β1／Smad3对辐射所致鼻咽癌细胞凋亡及细胞周期分布的影响

目的：探讨TGF－β1／Smad3在辐射所致鼻咽癌细胞CNE－2凋亡中的作用及其机制。方法 CNE－2细胞分为6 Gy照射组、TGF－β1＋6 Gy照射组以及对照组,免疫荧光方法检测γH2AX焦点形成试验,流式细胞仪检测凋亡细胞及细胞周期分布,MTS法检测细胞生长生长活力,绘制生长曲线并计算生长增殖率。 Western blot 检测P－ATM、pCHK1、pCHK2、CDC25A、p－Smad3、Smad3、P15和CDK4蛋白表达水平。结果照射组及TGF－β1＋6 Gy照射组凋亡细胞数明显增多,细胞核体积缩小,可见浓染致密的γH2AX表达。 TGF－β1＋6 Gy 照射组的γH2AX表达相对于对照组与6 Gy照射组明显增加。6 Gy照射组和TGF－β1＋6 Gy照射组的G2／M期细胞比例均明显高于对照组（P＜0.05）。 TGF－β1＋6 Gy照射组与6 Gy照射组相比,S期明显增加（P＜0.05）。 TGF－β1＋6 Gy照射组和6 Gy照射组的凋亡及坏死细胞比对照组的明显增加,差异有统计学意义（ P＜0.01）。 TGF－β1＋6 Gy照射组的凋亡和坏死细胞比例明显比6 Gy照射组增加,差异有统计学意义（ t P＜0.05）。对照组、6 Gy照射组和TGF－β1＋6 Gy组的CNE－2细胞克隆形成率分别为0.60、0.03和0.01,与对照组相比,6 Gy照射组和TGF－β1＋6 Gy照射组的细胞克隆形成明显减少,差异有统计学意义（ P＜0.01）。与6 Gy照射组相比,TGF－β1＋6 Gy照射组的细胞形成率减少,差异有统计学意义（ P＜0.01）。 Western blot 结果显示TGF－β1处理组相对于单独6 Gy照射组,p－ATM、p－CHK1、p－CHK2、P15、p－Smad3、CDC25A及CDK4表达下调,Smad3表达无明显变化。结论 TGF－β1可增加照射所致鼻咽癌细胞的凋亡,可能与增加S期细胞比例以及抑制Smad3磷酸化同时促进ATM磷酸化有关。