广西百色地区结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征分析

目的分析百色地区结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法收集128例结核病患者痰液标本,采用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测利福平耐药性,PCR技术检测耐药结核分枝杆菌rpoB基因序列并测序分析利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。结果分离培养获得98例MTB,98例MTB出现36株利福平耐药,耐药率为36.73%,36株耐利福平菌株中有27株rpoB基因发生突变,基因突变率为75.00%,其中516位点突变率为3.70%(1/27),531位点突变率为59.26%(16/27),526位点突变率为29.63%(8/27),533位点突变率为7.41%(2/27)。突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB533。结论百色地区耐利福平结核分枝杆菌耐药性产生的主要分子机制是因为rpoB的基因发生突变。     

痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因的快速检测及利福平耐药机制研究

目的快速检测痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因，了解利福平耐药的分予机制。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物．用PCR方法从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增rpoB基因片段，对扩增获得的rpoB基因片段进行序列测定，比较分析耐多药、全耐、单耐利福平、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间的基因序列差异。结果于6h内从耐药肺结核痰中快速检测到rpoB举因。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测有rpoB基因点突变，突变位点主要为531、516或526常见密码子，且绝大多数为单碱基突变，发现1例MDR-TB出现479位和531位密码子同时突变。敏感株和标准株无基因突变。结论PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分枝杆菌rpoB基岗及其突变，结核分枝杆菌埘利福平的耐药性与rpoB基因点突变有关。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度的相关性

目的 研究结核分枝杆菌，rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度强弱之间的关系。方法应用绝对浓度法测定58株结核分枝杆菌对4种－线抗结核药物的药敏特性，对耐利福平结核分枝杆菌的耐药谱进行分析。同时对含有核心突变区的结核分枝杆菌，rpoB基因片段进行PCR扩增和DNA测序，分析rpoB基因突变与多重耐药的关系，以及突变位点和突变性质与利福平耐药强弱的相关性。结果58株结核分枝杆菌中，利福平耐药株36株，敏感株22株。36株耐药株均存在，rpoB基因突变，其中88．9％(32／36)至少对利福平和异烟肼同时耐药。90．O％的利福平高度耐药株(18/20)与rpoB基因531位和526位密码子突变相关。密码子531位和526位各有1株双碱基突变，且均为多重耐药株。结论结核分枝杆菌，rpoB基因突变所致的利福平耐药株大部分对异烟肼耐药，因此单独检测rpoB基因突变即可初步筛选多重耐药的结核分枝杆菌；而rpoB基因的突变位点与利福平耐药程度之间具有一定的相关性。     

结核分枝杆菌耐利福平株rpoB基因突变的研究

目的了解遵义地区结核分枝杆菌耐利福平临床分离株rpoB基因突变特点.方法采用比例法对肺结核患者痰标本分离的127株结核分枝杆菌进行药物敏感性试验,并对结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因包括耐药决定区81个碱基在内的412bp片段进行PCR扩增及序列测定.结果127株结核分枝杆菌临床分离株中49株对利福平耐药,78株对利福平敏感.49株耐利福平临床分离株中,31株rpoB基因存在突变(63.3%),突变位点为531、526和516等;511位点CTG→CAG(Leu→Pro)为新的突变位点;4株双位点联合突变,其中2例为新的联合突变:GAC516GGC,ATC572CTC和CTG511CAG,CAC526AAC.结论结核分枝杆菌耐利福平与rpoB基因突变相关,且存在地区差异.     

耐利福平结核分支杆菌rp0B基因突变位点的分析

目的研究上海地区耐利福平结核分支杆菌rpoB基因的突变特点,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义.方法对58株结核分支杆菌rpoB基因片段(约213bp)进行PCR扩增,其中包括核心突变区的69个碱基,并对PCR产物进行DNA测序.其中耐药株36株,敏感株22株.结果所有58株中,36株耐药株均存在rpoB基因突变,氨基酸突变率531位为47.2%,526位为25.0%,22株敏感株均无突变.结论rpoB基因核心突变区发生突变是结核分支杆菌对利福平耐药的主要原因,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点.     

河南省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征

目的:分析河南省耐多药(MDR)结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法:收集150株MDR结核分枝杆菌,应用PCR扩增利福平耐药相关基因rpoB编码区全长并测序,以结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA序列为参比序列,分析菌株的突变特征。结果:MDR菌株rpoB基因编码区存在突变者占97.2%(140/144),突变在利福平耐药决定区(RRDR)内者占96.5%(139/144),RRDR内和RRDR外同时存在突变者占99.3%(139/140);突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB516。发现未被记录的15个突变位点和4个突变类型,其中rpoB1284位点突变可能是多态性位点,与利福平耐药无关。结论:检测河南地区结核分枝杆菌rpoB基因RRDR内位点的突变可预测MDR结核分枝杆菌的耐药性。     

某地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变特征分析

目的了解深圳地区结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼的耐药相关基因的突变特点。方法 60株结核分枝杆菌临床分离株通过全自动快速分枝杆菌培养鉴定系统(BACTEC-MGIT960)进行鉴定和药敏分析。在这60株菌株中,针对包括利福平耐药决定区(RRDR)在内的rpoB基因和异烟肼耐药相关位点katG315、inhA-15、kasA269、kasA312进行PCR扩增,并将扩增产物T-A克隆后进行测序。结果在60株结核分枝杆菌临床分离株中,检出利福平耐药株45株,敏感株15株;异烟肼耐药株41株,敏感株19株;利福平和异烟肼同时耐药的有14株。在45株利福平耐药株中,rpoB基因RRDR突变发生率为91.1%(41/45),共检测到12种突变形式,主要突变位点在531、526、516、533,以Ser531Leu突变最常见,占rpoB发生基因突变株的51.2%(21/45)。在41株异烟肼耐药株中,katG315位点有29株发生突变,包括28株katG315(AGC-ACC)和1株katG315(AGC-AAC)突变,突变发生率为70.7%(29/41);inhA-15位点有9株发生突变,均为(C-T)突变,突变发生率为21.95%(9/41)。kasA基因未发现常见突变形式。结论深圳地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变位点与国内外研究基本一致,但各位点频率有所不同。     

肺结核患者结核分枝杆菌利福平基因突变特征及耐药情况

目的 探讨肺结核患者当中的结核分枝杆菌利福平基因发生突变的特征,同时分析其耐药情况,为耐药结核病的预防和治疗提供科学依据。 方法 选取2016年6月—2018年12月杭州师范大学附属医院收治的肺结核患者532例,依据其痰液中的结核分枝杆菌耐药性分为耐药株(218株)及敏感株(314株)。测定2组菌株的rpoB基因序列及最低抑菌浓度(MIC)值水平。 结果 218株耐药菌株中180株为单重突变耐药菌株,rpoB基因结构分析发现,发生比率最高的突变密码子分别为526位(13.2%)、531位(74.4%)。206株(94.5%)耐药菌株出现至少1个突变位点,且均位于耐利福平决定区(RRDR),12株(5.5%)耐药菌株突变位点在RRDR之外。有4株耐药菌株在RRDR之内发生同义突变,4株耐药菌株在RRDR之外发生同义突变。H37Rv密码子未发生任何突变。有8株敏感菌株发生同义突变在RRDR之外。单重突变菌株的RIF平均MIC值水平为(47.34±2.04)μg/mL,显著低于多种突变菌株平均MIC值水平[(118.24±3.95)μg/mL,t=107.636,P<0.001]。526单密码子平均MIC值水平与531单密码子突变菌株的MIC值水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。多重密码子突变菌株的MIC值水平为(116.03±5.06)μg/mL高于单重密码子平均MIC值水平[(47.08±1.31)μg/mL,t=85.530,P<0.001]。 结论 利福平耐药性机制可能与rpoB基因的起始端531位、526位等突变相关,rpoB基因序列可用于预测结核分枝杆菌中的利福平耐药情况及表型。      

耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变位点的分析

目的 研究上海地区耐利福平结核分支杆菌ropB基因的突变特点,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义。方法 对58株结核分支杆菌rpoB基因片段（约213bp)进行PCR扩增,其中包括核心突变区的69个碱基,并对PCR产物进行DNA测序。其中耐药株36株,敏感株22株。结果 所有58例中,36株耐药株均存在rpoB基因突变,氨基酸突变率531位为47．2％,526位为25．0％,22株敏感株均无突变。结论 rpoB基因核心突变区发生突变是结核分支杆菌对利福平耐药的主要原因,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

浙江省耐药结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变特点研究

目的 了解浙江省耐异烟肼、利福平、乙胺丁醇结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变特点.方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv为对照,应用聚合酶链反应--单链构象多态性(PCR-SSCP)技术、聚合酶链反应--直接测序(PCR-DS)技术检测100株耐药结核分枝杆菌临床分离株katG、rpoB、embB基因.结果 经PCR-DS检测katG基因突变率达54.8%,以Ser315Thr突变最常见(40.3%);在耐利福平菌株中,rpoB基因突变率达88.9%,以526、531位氨基酸改变最常见,总突变率达77.8%(63/81);在耐乙胺丁醇菌株中,embB基因突变率达60%,以Met306VaI改变最常见(28.9%).结论 PCR-SSCP技术操作简单、检测快速,可作为临床耐药检测的辅助手段;浙江省结核菌耐药基因突变位点同国内研究基本一致,各位点突变形式所占比例有自身特点.     

结核分支杆菌耐利福平耐药基因检测研究

目的评价应用DNA序列分析方法和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值.方法采用DNA序列分析法和PCR-SSCP法对80株结核分支杆菌临床分离株(其中药物敏感株32株,耐RFP或含耐RFP耐多药株48株)rpoB基因核心区域的突变情况进行检测.结果以结核分支杆菌H37RV为对照,所有32株药物敏感株的rPOB基因均无突变.用DNA序列分析方法检测48株耐药株中44株发生突变,敏感性为91.7%(44/48),其中最常见的突变位点是531位丝氨酸和526位组氨酸.PCR-SSCP检测48株耐RFP分离株中,45株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为93.1%(45/48).结论DNA序列分析可指导临床用药,PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFP耐药性.     

Molecular Characterization of Drug-Resistant Beijing Family Isolates of Mycobacterium Tuberculosis from Tianjin,China

Objective Tuberculosis remains a severe public health issue, and the Beijing family of mycobacterium tuberculosis （M. tuberculosis） is widespread in East Asia, especially in some areas in China, like Beijing and Tianjin. This study aimed at determining the mutation patterns of drug-resistant Beijing strains of M. tuberculosis isolated from Tianjin, China. Methods A total of 822 M. tuberculosis isolates were screened for drug resistance by an absolute concentration method and the genotype was identified by PCR. 169 drug-resistant isolates of the Beijing family were analyzed for the potential mutations in the rpoB, katG, inhA promoter region and in rpsL, rrs and embB genes, which are associated with resistance to rifampin （RFP）, isoniazid （INH）, streptomycin （SM） and ethambutol （EMB） respectively by PCR and DNA sequencing. Results Fifty-eight out of 63 RFP-resistant isolates were found to carry the mutations within the 81-bp RFP resistance determining region （RRDR） of the rpoB gene and the most frequent mutations occurred at codon 531 （44.4%）, 526 （28.6%）, and 516 （7.9%） respectively. 16 mutation pattems affecting 12 different codons around the RRDR of rpoB were found. Of 116 INH-resistant isolates, 56 （48.3%） had the mutation of katG 315 （AGC→ACC） （Ser→Thr）, 3 （2.6%） carried S315N （AGC→AAC） and 27 （16.0%） had the mutation of inhA-15A→T. 84 out of 122 SM-resistant isolates （68.9%） displayed mutations at the codons 43 or 88 with AAG→AGG （Lys→Arg） of the rpsL gene and 22 （18.0%） with the mutations at positions 513A→C, 516C→T or 905 A→G in the rrs gene. Of 34 EMB-resistant isolates, 6 had mutation with M306V （ATG→GTG）, 3 with M306I （ATG→ATT）, 1 with M306I （ATG→ATA）, 1 with D328Y （GAT→TAT）, 1 with V348L （GTC→CTC）, and 1 with G406S （GGC→AGC） in the embB gene. Conelusion These novel findings extended our understanding of resistance-related mutations in the Beijing strains of M. tuberculosis and may provide a scientific basis for development of new strategies for diagnosis and control of tuberculosis in China and other countries where Beijing strains are prevalent.     

Molecular mechanisms of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis clinical isolates

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（Ｍ）ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ,ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｔｈｅβｓｕｂｕｎｉｔｏｆＲＮＡｐｏｌ...     

Rapid Detection of rpoB Gene Mutations in Rif-resistant M.tuberculosis Isolates by Obligonucleotide Microarray

Objective To detect the specific mutations in rpoB gene of Mycobacterium tuberculosis by oligonucleotide microarray.Methods Four wild-type and 8 mutant probes were used to detect rifampin resistant strains.Target DNA of M.tuberculosis was amplified by PCR,hybridized and scanned.Direct sequencing was performed to verify the results of oligonuclcotide microarray.Results of the 102 rifampin-resistant strains 98 (96.1%) had mutations in the rpoB genes. Conclusion Oligonucleotide microarray with mutation-specific probes is a reliable and useful tool for the rapid and accurate diagnosis of rifampin resistance in M.tuberculosis isolates.     

结核杆菌对利福平耐药的分子机理的研究

目的：研究本地区临床分离的结核杆菌利福平(RFP)耐药表型与rpoB基因突变的关系。方法：应用全自动DNA测序仪对1株RFP敏感株和2株RFP耐药株的rpoB基因的突变集中区域进行了测序分析。结果gRFP敏感株证实无rpoB基因突变，而2株RFP耐药株均发生rpoB基因的碱基置换突变，1株为Leu511→Val，Ser53l→Leu;另一株为Ser5l2→Gly。结论：高度保守的rpoB基因突变导致所编码的氨基酸改变是RFP耐药的分子基础。     

结核分支杆菌rpoB基因套式PCR在利福平耐药和结核病辅助诊断中的应用

目的 分析耐利福平的结核分支杆菌(Mtb)rpoB基因突变状况。方法 对38株耐利福平Mtb菌株的rpoB基因突变高频区域进行套式PCR扩增，并进一步全自动测序。结果 38株耐利福平Mtb中有36株存在突变(包含5个密码子11种形式的突变)，突变率94．7％。结论 Mtb xpoB基因的突变与利福平耐药高度关联，rpoB基因套式PCR及测序能快速、正确鉴别耐利福平菌株。