用ELISA检测流行性出血热特异性免疫复合物的初步研究

为检测流行性出血热特异性循环免疫复合物,建立了抗原特异性双抗体夹心ELISA技术。以兔抗EHF IgG包被反应板,使待检标本内循环免疫复合物通过暴露的EHF病毒抗原位点而被结合到固相上,再以辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG进行示踪,从而检出EHF’特异性循环免疫复合物。在228份EHF患者血清中,用胶因素ELISA检出非特异性循环免疫复合物183份,抗原特异性ELISA检出特异性循环免疫复合物188份。本方法特异性强,重复性及稳定性较好,可应用于临床检测。     

三种免疫学方法在EHF早期诊断中的比较

<正> 本文比较了捕获ELISA(Mac·ELISA)和2-ME·HI法检测流行性出血热(EHF)特异性IgM抗体的敏感性和特异性,并与经典法IFAT检测IgG作对照,结果报告如下: 材料和方法 一、临床诊断为EHF急性期住院病人66例,其中取得双份以上血清的34例,计97份血清,EHF     

用HRP——抗IgM法快速诊断流行性出血热

本文报道用流行性出血热(EHF)病毒抗原片,以酶标抗人IgMu链单克隆抗体染色法(简称HRP-抗IgM)检测患者血清中的IgM抗体,从而对EHF进行早期诊断。为确证本方法的可靠性,同时与间接免疫荧光IgG法(IFA-IgG)进行了比较.经阻断试验和2-巯基乙醇耐性试验证明,HRP-抗IgM检出的抗体系EHF特异性抗体.用双盲法检测了51份血清,结果全部符合。实验结果表明,HRP-抗IgM特异性强.敏感性高,用普通显微镜便可观察,结果清晰.4小时内可获得诊断结果,可以用作早期诊断.     

流行性出血热病毒抗体致敏重氮化聚苯乙烯胶乳的制备及应用

将流行性出血热(EHF)病毒抗体,与带有功能团的重氮化聚苯乙烯胶乳通过共价键结合,并用这种致敏胶乳建立的反应胶乳凝集实验.检测EHF患者急性期血清中的抗原.本文检测了70例临床怀疑为EHF的患者血清.用本法查出49例阳性.10日后经IF法查IgG4倍增长者46例,阳性复合率93.8%;在23例阴性标本中.10日后经IF法查IgG增长水平,21例无4倍增长.阴性复合率91.3%,总复合率为92.5%.     

免疫酶斑点法在流行性出血热患者血清学诊断及分型中的应用

<正> 近年来,随着流行性出血热(EHF)病原学研究的进展,其特异性实验诊断方法亦逐渐增多,目前常用免疫荧光技术检测IgG抗体,此法虽具有特异性、敏感性较高的特点,但要求一定的仪器设备,尚不能普及与推广。     

流行性出血热患者淋巴细胞酸性酯酶活性测定

<正> 我们用酸性非特异性酯酶(简称ANAE)染色对流行性出血热(简称EHF)患者的淋巴细胞进行染色观察,发现EHF病初4日内ANAE活性就已明显低于正常人,对EHF的早期诊断具有一定的参考价值。本文报告了64例EHF患者淋巴细胞ANAE活性的首次检测结果,并同时对其中的44例     

N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶在流行性出血热各期中的研究

目的和方法 :为探讨各期流行性出血热 (EHF)病人尿N -乙酰 - β -D氨基葡萄糖苷 (NAG)酶的改变及其与EHF病程的相互关系。采用比色法对 86例EHF患者尿NAG酶活性指数进行测定。结果 :除恢复期外 ,各期EHF病人尿的NAG酶活性指数均明显高于对照组 (P <0 0 1) ,并以休克期、少尿期、多尿期最显著 (P <0 0 1)。结论 :尿NAG酶活性指数与EHF患者肾损伤程度呈显著正相关 (r=0 89,P <0 0 1) ,其检测有助于EHF的早期诊断、疗效评估和预后判断。N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶在流行性出血热各期中的研究@郭丽曼$佳木斯大学附属第一医院…     

固相红细胞吸附试验测定iRNA诱生抗体活性的实验研究

在研究抗流行性出血热病毒免疫核糖核酸(EHFV-iRNA)传递体液免疫中,作者建立了检测EHFV-iRNA致敏小白鼠特异性IgM和IgG抗体的固相红细胞吸附试验(SPAEC)。该方法简便、快速、特异、敏感,在检测iENA诱导正常小鼠产生抗体实验研究中,结果满意。本研究工作为测定低水平抗体提供了新的试验手段。     

流行性出血热患者尿中α_1-m、A1b RIA的临床价值

采用放射免疫分析法(RIA)测定了流行性出血热(简称EHF)患者尿液中α_1-微球蛋白(α_1-m)、尿白蛋白(Alb)含量,旨在探讨尿液中α_1-m、Alb浓度与EHF各期肾功能损害程度的关系,现报告如下.材料和方法一、检测对象:(一)患者组为本院传染科住院病人,经EHF抗体检查(免疫荧光法)为阳性者,共47例(男29例,女18例),其年龄14～52岁,平均32.5岁.根据病程分为发热期、低血压期及少尿期(此二期常分期不明显,故分为一组),多尿期和恢复期.     

流行性出血热患者尿中α1-m、Alb RIA的临床价值

采用放射免疫分析法(RIA)测定了流行性出血热(简称EHF)患者尿液中α1-微球蛋白(α1-m)，尿白蛋白(Alb)含量，旨在探讨尿液中α1-m，Alb浓度与EHF各期肾功能损害程度的关系，现报告如下。     

用免疫转印技术检测流行性出血热病人特异性抗体的探讨

采用免疫转印技术检测了147份临床诊断为EHF病人血清中的特异性IgG抗体,结果133份血清可检出针对分子量在68和66kd左右两种病毒多肽的抗体,检出率为90.4％,略高于免疫荧光试验(88.4％),两种抗特异性多肽抗体的几何平均滴度分别为荧光法的4倍和2.1倍。本法具有特异性强、敏感性高和重复性较好等特点,并能检出针对不同抗原亚基成份的抗体,可作为EHF特异性诊断的方法之一。     

EHF疫苗不同途径免疫后血清及黏膜抗体应答情况

目的探讨EHF疫苗经不同剂量和途径免疫后血清IgG及黏膜IgA产生情况,以探讨合适的免疫剂量和接种途径。方法以不同剂量EHF双价灭活疫苗分别经皮下和灌胃免疫小鼠,共3次（第0、5、10天）,末次接种后5d收集血清和小肠冲洗液,用间接免疫荧光法（IFA）检测血清EHF IgG抗体和小肠冲洗液IgA抗体。结果皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,灌胃免疫未见抗体产生,1．4 TCID50的EHF疫苗剂量在皮下注射组血清IgG和小肠冲洗液IgA有100％阳性率。结论EHF疫苗皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,1．4 TCID50的剂量为较佳剂量。     

流行性出血热IgM抗体检测(抗体捕捉ELISA法)

本文报道应用IgM-抗体捕捉酶联免疫吸附法(IgM antibody-capture ELISA,或称反向间接酶联免疫吸附法,Reverse indirect ELISA)检测流行性出血热(Epidemic hemorrhagic fever,EHF)患者血清特异性IgM抗体的结果。该方法能特异、敏感地测出EHF患者发病第2天的血清IgM抗体,阳性率为87.5(7/8),第4病日阳性率达95％(57/60),而病程第7天的38例患者血清全部阳性。15例非EHF发热病人及10例正常人血清无1例阳性,并经2-MB试验与加热试验证明了其特异性。另外,研究表明,对于类风湿因子(RF)干扰所致假阳性反应,本实验所采用的阴性抗原平行对照设计能成功地予以校正而排除。     

流行性出血热病毒核蛋白的血凝位点研究

流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）Ａ９株鼠脑抗原，经Ａ３５ＭｃＡｂ偶联于Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ制备的免疫吸附柱进行亲和层析纯化，并用高压液相色谱（ＨＰＬＣ）进一步纯化，获得了高纯度的病毒核衣壳蛋白（ＮＰ），其分子量为５００００，经不同特性的ＭｃＡｂ和ＥＨＦ患者血清通过间接ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定，证实为ＥＨＦ病毒特异性的ＮＰ，且具有血凝活性。将ＨＰＬＣ纯化的ＮＰ免疫小鼠后，可诱导产生特异性血凝抑制抗体，但无中和抗体产生，由此证实ＥＨＦ病毒（Ａ９株）ＮＰ具有构型依赖性血凝活性结合位点。     

流行性出血热特异性循环免疫复合物的动态观察和分析

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测了８８例流行性出血热患者２２８份血清中特异性循环免疫复合物，并与胶固素－ＥＬＩＳＡ检测循环免疫复合物的结果进行了比较。结果表明，胶固素－ＥＬＩＳＡ检出循环免疫复合物１８３份（８０．２６％），抗原特异性ＥＬＩＳＡ检出ＩｇＧ型循环免疫复合物１８８份（８２．４５％），ＩｇＭ循环免疫复合物２０５份（８９．９１％），ＩｇＡ型循环免疫复合物１４７份（６４．４７％）。在各类特异性循环免疫复合物中，ＩｇＭ型在各病期检出率最高，ＩｇＧ型次之，ＩｇＡ型最低。在发病初期，各类特异性循环免疫复合物检出率均较高，极期达高峰，随病情缓解而渐降低。对特异性循环免疫复合物检出率与流行性出血热患者病情程度相关性的观察表明，轻型患者检出率较中，重型患者为低，而中、重型间检出率差别不明显。此外，轻型患者特异性循环免疫复合物动态变化明显，极期达高峰后很快下降，而中、重型患者检出率下降趋势较缓慢。上述结果直接证实了流行性出血热循环免疫复合物的形成是特异性病毒抗原刺激机体免疫应答的结果，并构成了流行性出血热免疫发病机制中的重要环节。     

流行性出血热病人血清和肾组织中存在IgE型免疫复合物

本文应用ELISA(双抗体夹心)法检测了EHF病人血清中IgE及其IgE型免疫复合物;应用免疫酶纽化法检测EHF尸体肾脏沉积的IgE型免疫复合物。结果发现各病日组病人血清中IgE和[gE型免疫复合物的含量显著地高于正常人。IgE水平以3～5病日者为最高,IgE型免疫复合物以6～10病日最高。EHF尸体肾脏组织中有IgE型免疫物沉积。这说明EHF病人血中有IgE型免疫复合物形成,可随血流沉积于肾组织,参与EHF中、晚期发病过程。     

流行性出血热病人IgE与IgE－CIC产生动态及影响CIC沉积和排除的因素

应用双抗体夹心法和ＰＥＧ沉淀－ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法分别检测了ＥＨＦ病人血清中ＩｇＥ和ＩｇＥ－ＣＩＣ产生的动态水平。检测结果发现ＩｇＥ水平于发病３～５天达高峰ＩｇＥ－ＣＩＣ于发病６～１０天达高峰，此时机体ＲＢＣ排除ＣＩＣ及补体溶解ＩＣ活性（ＣＲＡ）功能低下，随着排除ＣＣ功能的恢复，ＣＩＣ减少。如往病人血清中加入含补体血清时，ＣＩＣ被溶解，ＣＩＣ水平下降，提示给病人输注大量新鲜含补体血浆可达治疗的目的。     

免疫酶斑点法检测汉坦病毒抗原的研究

目的 建立一种新的诊断肾综合征出血热(HFRS)的实验手段。方法 采用R22株、陈株和湖北株3种汉坦病毒接种家兔，制备兔抗汉坦病毒多克隆抗体(抗HTV-IgG)。然后采用混合的3种抗体进行免疫酶斑点法实验(IEDA)，检测患者血清和尿液中的汉坦病毒抗原。同时采用间接免疫荧光法(IFA)检测患者血清中抗汉坦病毒-IgM作对照。结果 经用相关分析，IEDA与IFA检测的结果高度相关。血中汉坦病毒抗原检出率为73．68％，尿中为65．00％。发病5d内，血中检出率为94．34％，尿中检出率为83．33％。5病日内的早期诊断率前者明显高于后者。结论 IEDA与IFA相比，阳性率比后者有较大提高，特别是5病日内的早期阳性率的提高明显，值得用于临床HFRS的早期诊断。     

Comparison of an established antibody sandwich method with an inhibition method of Histoplasma capsulatum antigen detection

The Histoplasma antigen immunoassay utilizes an antibody sandwich method that provides a rapid and reliable means of diagnosing the more severe forms of histoplasmosis. Inhibition assays have been developed for antigen detection and offer at least one potential advantage, namely, reduced antibody requirements. We have developed an inhibition assay using the polyclonal antibody employed in our standard sandwich assay. Urine and serum specimens from patients with culture-proven histoplasmosis and controls were tested using both methods. The two methods had similar sensitivities for detection of antigen in urine (antibody sandwich = 92.5% versus inhibition = 87.5%, P = 0.500) and serum (82.5% versus 80.0%, P = 1. 000). With serum, the specificities of both methods were similar (antibody sandwich assay = 95.0% versus inhibition assay = 92.5%, P = 1.000), and with urine, the specificity of the antibody sandwich method was superior (97.5% versus 80.0%, P = 0.039). While the overall reproducibility of both methods was excellent (with urine, antibody sandwich assay intraclass correlation coefficient = 0.9975 and with serum = 0.9949; correlation coefficient of the inhibition assay with urine = 0.9736 and with serum = 0.9850), that of the inhibition method was only fair to poor for the controls: urine = -0. 0152, serum = 0.5595. Reproducibility was good for the controls using the sandwich method: urine = 0.7717, serum = 0.9470. Cross-reactivity was observed in specimens from patients infected with Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, and Penicillium marneffei. In conclusion, the decreased specificity and inferior reproducibility with control specimens suggest that the inhibition assay has poorer precision toward the lower end of the detection range.