PTEN/MMAC1基因改变与胶质细胞瘤生物学特征相关性研究

目的探讨胶质瘤PTEN/MMAC1基因突变及缺失与肿瘤分型、病理分级和肿瘤生长部位、患者年龄、性别的关系.方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性电泳分析(PCR-SSCP)结合银染技术、双重PCR技术检测80例胶质瘤PTEN/MMAC1基因九个外显子点突变与基因缺失情况.结果 80例胶质瘤分别有15例(18.75%)和27例(33.75%)PTEN/MMAC1基因点突变和基因缺失,且PTEN/MMAC1基因失活与胶质瘤病理分级明显相关(P<0.05),其中低分化胶质瘤(Ⅲ～Ⅳ级)突变率(31.30%)和缺失率(60%)明显高于高分化(Ⅰ～Ⅱ级)胶质瘤(P<0.05).其中,少突胶质细胞瘤仅有1例PTEN/MMAC1基因缺失(7.70%).星形细胞瘤PTEN/MMAC1基因第5外显子、第6外显子和第8外显子是胶质瘤PTEN/MMAC1基因易突变区.PTEN/MMAC1基因失活与患者性别、年龄及肿瘤生长部位无相关性.结论人胶质瘤PTEN/MMAC1基因与病理分级关系密切,不同起源的胶质瘤PTEN/MMAC1基因改变差异明显.     

PTEN基因变异与人脑胶质瘤预后的关系研究

目的探讨PTEN基因变异与人脑胶质瘤病理级别、生存期及病人年龄、性别、肿瘤生长部位的关系。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性电泳分析（PCR-SSCP）结合银染技术和双重PCR技术．检测80例胶质瘤PTEN基因9个外显子点突变与基因缺失情况。结果15例（18．8％）发生基因点突变。27例（33．8％）存在基因缺失。PTEN基因失活与星形细胞瘤病理分级显著性相关（P〈0．05）。其中高度恶性胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）的突变率（31．3％）和缺失率（52．1％）明显高于低度恶性者（Ⅰ～Ⅱ级）（P〈0．05）；与病人性别、年龄及肿瘤生长部位无关。PTEN基因第5、6和8外显子是胶质瘤病人的热点基因突变区。PTEN基因失活的胶质瘤病人生存期明显低于基因正常者。结论人脑胶质瘤PTEN基因与病理分级和生存期关系密切。可作为一项独立的预后指标。     

EGFL7和PTEN在人脑胶质瘤中的表达

目的探讨表皮生长因子样结构7基因(EGFL7)、第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)在脑胶质瘤中的表达和相互关系。方法应用免疫组化方法检测56例脑胶质瘤和8例脑外伤内减压脑组织中EGFL7和PTEN的表达。结果 EGFL7蛋白在脑胶质瘤组织和正常脑组织中的阳性表达率差异有显著统计学意义(P<0.01);高度恶性胶质瘤组阳性表达率明显高于低度恶性胶质瘤组(P<0.01)。PTEN蛋白在脑胶质瘤组织和正常脑组织中的阳性表达率差异有显著统计学意义(P<0.01);随着胶质瘤恶性程度的增加,PTEN蛋白的表达相应降低(P<0.01)。EGFL7与PTEN在各级胶质瘤组织的表达呈负相关(r=-0.382,P<0.01)。结论 EGFL7基因可能直接参与了胶质瘤的发生、侵袭过程;PTEN基因突变或丢失、灭活导致PTEN蛋白表达的缺失或减弱在胶质瘤的发生、侵袭发展过程中起重要作用;EGFL7表达与PTEN表达具有明显的负相关性,EGFL7高表达与PTEN表达下降在胶质瘤的浸润发展过程起协同作用。     

脑胶质瘤P53基因及其表达蛋白研究进展

P53肿瘤抑制基因的缺失、点突变是迄今发现的胶质瘤最常见的分子生物学改变。近来的研究表明,星形细胞瘤P53基因突变率较其它类型的胶质瘤高,胶质瘤P53基因突变多分布于第4—8外显子上,以错义突变为主,常常合并另一等位基因杂合性丢失。P53基因的缺失、突变和胶质瘤的病理级别、增殖能力有关。免疫组化研究显示,恶性胶质瘤常常存在P53蛋白过度表达。本文就此方面的进展及面临的问题作一概述。     

脑胶质瘤中c—myc基因扩增,H—ras及p53基因突变

研究脑胶质瘤中癌基因c-myc的扩增、H-ras的突变及抑癌基因p53的5～8外显子的突变情况以及与胶质瘤的恶性程度的关系.采用差异性PCR(DPCR)及PCR-SSCP、PCR-RFLP等方法检测22例脑胶质瘤的基因突变情况.22例脑胶质瘤中c-myc扩增率为63.6%(14/22),H-ras的突变率为36.4%(8/22),p53的突变率45.5%(10/22).提示:癌基因c-myc的扩增及抑癌基因p53的突变与脑胶质瘤的恶性程度有关(P<0.05),而癌基因H-ras的突变则与脑胶质瘤的发生有关,与脑胶质瘤的恶性程度无关(P>0.05).各类型脑胶质瘤基因突变未发现不同(P>0.05),可能与标本量少有关.     

人脑肿瘤已糖激酶的活性测定

测定10例良性胶质瘤、18例恶性胶质瘤、12例良性脑膜瘤和1例恶性脑膜瘤的溶解性和总体己糖激酶(Hexokinase,HK)活性,以18例正常脑组织作对照.结果表明:良性与恶性脑瘤的HK活性明显低于正常脑组织(P<0.01).良性脑瘤的总体HK活性明显低于恶性脑瘤(P<0.05),脑膜瘤的HK活性明显低于良性及恶性胶质瘤(P<0.05,P相似文献   

B细胞易位基因1在脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的探讨B细胞易位基因1(BTG1)和人10号染色体磷酸酶张力蛋白样同源物(PTEN)在脑胶质瘤组织中的表达及其与肿瘤分级的关系和意义。方法采用免疫组织化学染色(EnVision法)分别检测80例脑胶质瘤及25例正常脑组织中BTG1和PTEN的表达,并采用Western blot检测随机抽取的4例脑胶质瘤及4例正常脑组织中二者的表达。结果 BTG1在胶质瘤和正常脑组织中的阳性表达率分别为73.8%、96.0%,PTEN在脑胶质瘤的表达率分别为77.5%、100%,差异均具有统计学意义(P0.05);二者的表达与世界卫生组织(WHO)胶质瘤组织学分级呈负相关(P0.05),但与患者性别及肿瘤直径无关(P0.05)。结论 BTG1和PTEN在胶质瘤的发生及发展过程中起重要作用,二者表达检测可为肿瘤的组织学分级提供参考,也提示BTG1和PTEN作为新型抑癌基因可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

脑胶质瘤中p16基因缺失的研究及意义

目的研究胶质瘤的发生,演化及预后与p16基因的关系.方法采用聚合酶链反应体外扩增DNA(PCR法)对45例石蜡标本中p16基因进行了检测.结果Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤中p16基因缺失率(65%)高于Ⅰ-Ⅱ级(20%),p＜0.01,缺失率随组织学分级的升高而升高.结论胶质瘤发生,演化及恶性程度可能与p16基因缺失有关.     

IDH1基因突变对胶质瘤诊断及预后意义

目的通过对幕上胶质瘤细胞IDH1基因突变检测,研究IDH1基因突变对胶质瘤临床诊断及预后的意义。方法提取315例幕上胶质瘤(WHOⅠ级3例、Ⅱ级95例、Ⅲ级37例、Ⅳ级180例)患者手术切除标本IDH1基因DNA,经聚合酶链反应扩增后直接测序,同时对患者年龄、性别、肿瘤生长部位、切除范围、Karnofsky生活质量评分和生存时间等进行多因素分析,了解IDH1基因突变对患者预后的影响。结果经对315例胶质瘤标本测序共发现112例发生IDH1基因突变,突变率约为35.56%,均为R132H型突变。不同病理分级胶质瘤基因突变率分别为WHOⅡ级72.63%(69/95)、Ⅲ级24.32%(9/37)、Ⅳ级18.89%(34/180),不同级别突变率比较差异具有统计学意义(均P=0.000);WHOⅣ级胶质瘤发生突变的患者中18例为原发性、16例为继发性胶质母细胞瘤,突变率分别为11.39%(18/158)和72.73%(16/22),后者显著高于前者且差异有统计学意义(χ2=23.654,P=0.001)。生存分析显示,IDH1基因突变对患者预后有显著影响。结论 WHOⅡ～Ⅳ级胶质瘤均可发生IDH1基因突变,其中以WHOⅡ级和Ⅳ级中的继发性胶质母细胞瘤基因突变率较高。IDH1基因突变对患者生存时间有明显影响,发生IDH1突变者预后良好,提示IDH1基因突变对胶质瘤患者诊断及预后有重要临床预测价值。     

PTEN 和钙粘素在胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨PTEN和钙粘素(E-cadherin, E-cd)在胶质瘤中的表达及意义.方法采用免疫组化方法检测50例胶质瘤和9例正常脑组织中的PTEN和E-cd蛋白的表达.结果 PTEN 和E-cd 在正常脑组织中的阳性表达率均为100%;PTEN 在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为80%、52%,组织学分级之间有显著差异(P＜0.05),与对照组之间有显著差异(P＜0.05);E-cd 在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为40%、24%,组织学分级之间无显著差异(P＞0.05),与对照组之间有显著差异(P＜0.05);PTEN 和E-cd表达在胶质瘤中呈正相关(P＜0.05).结论 PTEN 和E-cd 均在与胶质瘤的发生发展中起重要作用,且有可能与胶质瘤的侵袭性行为有关.     

Analysis of p53 gene mutations in low- and high-grade astrocytomas by polymerase chain reaction-assisted single-strand conformation polymorphism and immunohistochemistry

Using polymerase chain reaction-assisted single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) and immunohistochemical analyses, mutations in the p53 tumor suppressor gene were examined in 19 low-and high-grade gliomas. By PCR-SSCP and nucleotide analyses, p53 gene mutation was seen in 7 gliomas. Out of the 7 mutations, 3 were located at the CpG site of the previously proposed hot-spot codons 248 and 273, 2 were at codons 171 and 214 and the other 2 were in intron 5, 1 at the splice acceptor site and the other in the vicinity of the splice donor site. The latter 4 mutations have not, or only rarely, been observed in gliomas or in other tumors. However, their effect on the structural and functional alteration of the p53 protein was suggested by positive intranuclear p53 immunostaining in neoplastic cells in 3 mutations including the 1 at the splice acceptor site. In connection with glioma grading, the p53 gene mutation was shown to have occurred in both low- and high-grade gliomas, often in most of the neoplastic cells, as suggested by lack of distinct normal bands and ladders in SSCP and direct sequencing, respectively. The absence of recurrence and malignant transformation over a considerably long postoperative time in our low-grade glioma cases suggested that the p53 gene mutation might not be sufficient for the progression from low- to high-grade gliomas. The frequency of detection of mutation was 7/19(37%) by PCR-SSCP, 8/19(42%) by immunohistochemistry and 10/19(53%) by both methods. The results of PCR-SSCP and immunohistochemistry were consistent in 14 cases(73.7%), but not in 5 cases(26.3%). Thus, the use of both methods was recommended to survey the occurrence of p53 gene mutation more accurately.Supported in part by the Fujisawa Foundation     

抑癌基因PTEN与胶质瘤细胞侵袭和迁移的体外实验研究

目的:研究抑癌基因PTEN对脑胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法:用PTEN表达型质粒转染大鼠C6胶质瘤细胞,利用Matrigel体外侵袭实验和细胞迁移运动实验进行细胞侵袭和迁移的研究。结果:转染PTEN的大鼠C6胶质瘤细胞侵袭与迁移能力均明显下降。结论:PTEN在体外可以有效的抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移过程,其具体机制还有待进一步探讨。     

脑胶质瘤中ppENK基因启动子区的甲基化状态研究

目的 检测脑胶质瘤组织中候选抑癌基因ppENK基因启动子区的甲基化状态,探讨ppENK基因启动子的异常甲基化水平在脑胶质瘤发生发展中的作用以及与临床病理资料之间的关系.方法 采用巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction nPCR)方法和亚硫酸氢盐修饰后测序法(Bisulfite sequence polymerase chain reaction BSP),检测32例脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中ppENK基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果 脑胶质瘤组织中ppENK基因启动子甲基化率为40.6％(13/32),明显高于正常脑组织中ppENK基因启动子甲基化率0％(0/10),两者差异存在统计学意义(P=0.015).在低级别(Ⅰ-Ⅱ级)组和高级别(Ⅲ- Ⅳ级)组脑胶质瘤中ppENK基因启动子甲基化率分别为21.1％(4/19)和69.2％ (9/13),通过分析表明两者差异存在统计学意义(P=0.006).结论 ppENK基因启动子的CpG岛在脑胶质瘤中存在高甲基化现象,可能与胶质瘤发生有关.ppENK基因启动子的甲基化状态与胶质瘤病理分级有关,与年龄、性别、病理分型无关.     

一家系二例Menkes病患儿ATP7A基因研究

目的 分析一家系中2例Menkes病(MD)患儿及家系成员的ATP7A基因突变情况及遗传特征. 方法 采集2例MD患儿及家系成员、正常对照儿童的外周静脉血,提取基因组DNA,PCR法扩增ATP7A基因的23个外显子及其与内含子的连接区,纯化后测序,检测基因突变情况,异常者采用荧光定量PCR进行验证. 结果 2例患儿ATP7A基因存在第2～12外显子大片段缺失,患儿外祖母、母亲、姨母的第2～12外显子缺失,为表型正常的携带者. 结论 患者如出现ATP7A基因第2～12外显子大片段缺失则可以明确诊断为Menkes病.     

DMD/BMD基因缺失的检测及其临床分析

目的:了解Duchenne/Becker型肌营养不良症(DMD/BMD)致病基因缺失的分布及其与临床病情的关系。方法:应用9对引物多重聚合酶链反应(mPCR)技术对42例DMD/BMD患者进行致病基因检测。结果:21例患者(50.0%)被检出外显子缺失,缺失片段长度各异,其中16例(76.2%)累及中央缺失热区,5例(23.8%)位于5端缺失热区,尤以48号外显子缺失频率最高。结论:多重PCR技术是检测DMD/BMD致病基因缺失的有效方法,该病病情轻重可能与外显子缺失的数量和长度不呈平行关系,而是与缺失类型有关,并受到个体差异的影响。     

胶质瘤中Axin基因点突变检测及表达研究

目的 检测胶质瘤中Axin基因的点突变及其表达情况，初步探讨Axin与胶质瘤发生的关系。方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR—SSCP)技术及DNA测序方法检测Axin基因外显子8，9及10在28例胶质瘤中的突变情况；同时对上述胶质瘤及正常脑组织进行免疫组化染色。结果 在28例胶质瘤组织中Axin的第10个外显子共有6例样本(21．4％)3处发生了错义突变；3例3处发生了同义突变；28例胶质瘤中8例(28．6％)Axin表达阳性，正常脑组织中神经元表达阳性，神经胶质细胞表达阴性，检测到突变的样本中1例表达阳性。结论 Axin基因的点突变可能参与胶质瘤的发生。     

Absence of hereditary mutations in exons 5 through 9 of the p53 gene and exon 24 of the neurofibromin gene in families with glioma

Inherited mutations of the p53 and neurofibromin genes are thought to cause two distinct neoplastic disorders in which gliomas occur, the Li-Fraumeni syndrome and neurofibromatosis type 1. We investigated the possibility that inherited mutations in specific regions of these genes also contributed to the clustering of gliomas in otherwise normal families. Twenty-six members of 16 families with glioma were screened for germline mutations of exons 5 through 9 of the p53 gene and exon 24 of the neurofibromin gene using a polymerase chain reaction–single-strand conformation polymorphism method. No germline mutations were found, suggesting that the genetic basis of familial glioma is distinct from that of gliomas occurring in the Li-Fraumeni syndrome, and that inherited mutations of the catalytic domain of neurofibromin do not predispose affected glioma families to these tumors.     

Smad2基因在人脑胶质瘤的表达及其临床意义

目的 探讨Smad2基因在人脑胶质瘤组织中的表达情况,与细胞增殖指数Ki-67及患者生存期的关系.方法 对80例人脑胶质瘤组织标本,用免疫组化SP法检测Smad2、Ki -67的蛋白表达,逆转录聚合酶链反应法( RT - PCR)测定Smad2 mRNA的转录水平.Smad2蛋白表达情况与患者生存期的关系用Kaplan -Meier生存曲线表示,并采用log - rank方法分析.结果 (1) Smad2蛋白在高级别胶质瘤(Ⅲ级和Ⅳ级)中表达水平较低级别胶质瘤(Ⅱ级)明显增高(P ＜0.001).(2)Smad2 mRNA在高级别胶质瘤(Ⅲ级和Ⅳ级)中转录水平较低级别胶质瘤(Ⅱ级)增高(P＜0.05).(3)Smad2蛋白阳性表达与Ki -67阳性表达呈正相关(r=0.812,P＜0.001).(4)将所有患者分为Smad2高表达组和低表达组,两组间生存率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Smad2的转录和蛋白表达水平在恶性胶质瘤中显著增高,检测Smad2表达水平有利于脑胶质瘤的恶性程度判断及对患者预后的评估.     

富亮氨酸胶质瘤失活基因在胶质瘤中的表达

目的 探讨胶质瘤组织富亮氨酸胶质瘤失活基因1(LGI1)mRNA的表达及与细胞增殖活性之间的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法对30例脑胶质瘤组织、2例脑膜瘤、2例瘤旁及2例颅脑损伤内减压脑组织标本进行半定量检测,同时采用S-P免疫组化法检测Ki-67标记指数.结果 脑胶质瘤组的LGI1 mRNA表达水平低于正常脑组织和脑膜瘤(P＜0.05).脑胶质瘤中,WHO Ⅳ级的胶质瘤LGll mRNA表达低于WHOⅡ级和Ⅲ级胶质瘤(P＜0.05),与Ki-67标记指数呈负相关关系(r=-0.621,P＜0.01).结论 LGI1基因的表达与Ki-67标记指数呈负相关,提示LGI1与胶质瘤的发生关系密切.